Name: measuring mitochondrial substrate flux in recombinant perfringolysin o-permeabilized cells
Uploaded: 2021-08-13T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Mitochondrial Substrate Flux in Recombinant Perfringolysin O-Permeabilized Cells at JoVE.com

يشكر المؤلفون موظفي قسم علم وظائف الأعضاء في كلية الطب في هراديك كرالوفي وقسم الفيزيولوجيا المرضية في الكلية الثالثة للطب على المساعدة في إعداد المواد الكيميائية والعينات. وقد تم دعم هذا العمل من قبل جامعة تشارلز برامج المنح PROGRES Q40/02، منحة وزارة الصحة التشيكية NU21-01-00259، منحة مؤسسة العلوم التشيكية 18-10144 ومشروع INOMED CZ.02.1.01/0.0/0.0/18_069/0010046 بتمويل من وزارة التعليم والشباب والرياضة في الجمهورية التشيكية والاتحاد الأوروبي.

1. قبل يوم واحد من الفحص
<ol><li>إعداد الكواشف والركائز.<ol>
<li>محلول المقايسة الميتوكوندريا (MAS): إعداد حلول المخزون لجميع الكواشف كما هو موضح في الجدول 1. تدفئة مخزونات مانيتول و السكروز إلى 37 درجة مئوية لتذوب تماما. تخلط الكواشف لإعداد ماس 2x، ثم تسخين الخليط إلى 37 درجة مئوية. ضبط درجة ا...

<ol>
	<li>Gerencser, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+microplate-based+respirometry+with+correction+for+oxygen+diffusion.">Quantitative microplate-based respirometry with correction for oxygen diffusion.</a> Analytical Chemistry. 81 (16), 6868-6878 (2009).</li><li>Murphy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+function,+biology,+and+role+in+disease:+A+scientific+statement+from+the+American+Heart+Association.">Mitochondrial function, biology, and role in disease: A scientific statement from the American Heart Association.</a> Circulation Research. 118 (12), 1960-1991 (2016).</li><li>Owen, O. E., Kalhan, S. C., Hanson, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+key+role+of+anaplerosis+and+cataplerosis+for+citric+acid+cycle+function.">The key role of anaplerosis and cataplerosis for citric acid cycle function.</a> Journal of Biological Chemistry. 277 (34), 30409-30412 (2002).</li><li>Nicholls, D. G., Ferguson, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Bioenergetics 3. , (2002).</li><li>Brand, M. D., Nicholls, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+mitochondrial+dysfunction+in+cells.">Assessing mitochondrial dysfunction in cells.</a> Biochemical Journal. 435 (2), 297-312 (2011).</li><li>Sta&#328;kov&#225;, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+mitochondrial+substrate+flux+in+a+mouse+model+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">Adaptation of mitochondrial substrate flux in a mouse model of nonalcoholic fatty liver disease.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (3), 1101 (2020).</li><li>Salabei, J. K., Gibb, A. A., Hill, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+measurement+of+respiratory+activity+in+permeabilized+cells+using+extracellular+flux+analysis.">Comprehensive measurement of respiratory activity in permeabilized cells using extracellular flux analysis.</a> Nature Protocols. 9 (2), 421-438 (2014).</li><li>Divakaruni, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thiazolidinediones+are+acute,+specific+inhibitors+of+the+mitochondrial+pyruvate+carrier.">Thiazolidinediones are acute, specific inhibitors of the mitochondrial pyruvate carrier.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (14), 5422-5427 (2011).</li><li>Divakaruni, A. S., Rogers, G. W., Murphy, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+mitochondrial+function+in+permeabilized+cells+using+the+seahorse+XF+analyzer+or+a+Clark-type+oxygen+electrode.">Measuring mitochondrial function in permeabilized cells using the seahorse XF analyzer or a Clark-type oxygen electrode.</a> Current Protocols in Toxicology. 60, 1-16 (2014).</li><li>Elkalaf, M., T&#367;ma, P., Weiszenstein, M., Pol&#225;k, J., Trnka, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+probe+Methyltriphenylphosphonium+(TPMP)+inhibits+the+Krebs+cycle+enzyme+2-Oxoglutarate+dehydrogenase.">Mitochondrial probe Methyltriphenylphosphonium (TPMP) inhibits the Krebs cycle enzyme 2-Oxoglutarate dehydrogenase.</a> PLoS One. 11 (8), 0161413 (2016).</li><li>Rogers, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+throughput+microplate+respiratory+measurements+using+minimal+quantities+of+isolated+mitochondria.">High throughput microplate respiratory measurements using minimal quantities of isolated mitochondria.</a> PLoS One. 6 (7), 21746 (2011).</li></ol>

هذا البروتوكول هو تعديلللدراسات المنشورة سابقا7و8و9و10 ودليل مستخدم المنتج. على النقيض من بروتوكول الشركة المصنعة، يستخدم 2x ماس بدلا من ماس 3x، منذ 2× ماس هو أسهل لتذوب ولا تشكل هطول الأمطار بعد التجمد. المجمدة 2x MAS aliquots يم...

وقد أحدثت ثورة في قياس التنفس القائم على الصفائح الدقيقة أبحاث الميتوكوندريا من خلال تمكين دراسة التنفس الخلوي لحجم عينة صغيرة1. ويعتبر التنفس الخلوي عموما كمؤشر على وظيفة الميتوكوندريا أو "خلل وظيفي", على الرغم من حقيقة أن مجموعة الميتوكوندريا من الوظائف يمتد إلى ما بعد إنتاج الطاقة2. في الظروف الهوائية، الميتوكوندريا استخراج الطاقة المخزنة في ركائز مختلفة عن طريق كسر وتحويل هذه الركائز إلى وسيطة الأيض التي يمكن أن تغذي دورة حمض الستريك3 (الشكل 1). التدفق المستمر للركائز ضروري لتدفق دورة حمض الستريك لتوليد الطاقة العالية "المتبرعين بالإلكترون"، والتي توفر الإلكترونات إلى سلسلة نقل الإلكترون التي تولد تدرج البروتون عبر غشاء الميتوكوندريا الداخلي، مما يتيح ATP-synthase إلى فوسفوريلات ADP إلى ATP4. لذلك ، يجب أن يتضمن التصميم التجريبي لاحساس تنفس الميتوكوندريا طبيعة العينة (الخلايا السليمة ، والخلايا permeabilized ، أو الميتوكوندريا المعزولة) وركائز الميتوكوندريا.
تحتفظ الخلايا بتخزين الركائز الأصلية5، وتأكسد الميتوكوندريا عدة أنواع من الركائز في وقت واحد6، مما يعقد تفسير النتائج التي تم الحصول عليها من التجارب التي أجريت على خلايا سليمة. نهج مشترك للتحقيق في قدرة الميتوكوندريا لأكسدة ركيزة مختارة هو عزل الميتوكوندريا أو permeabilize الخلايا التحقيق5. على الرغم من أن الميتوكوندريا المعزولة مثالية للدراسات الكمية ، إلا أن عملية العزل شاقة. ويواجه صعوبات تقنية مثل الحاجة إلى حجم عينة كبيرة، ونقاء الغلة، وإعادة إنتاج تقنية5. الخلايا Permeabilized تقدم حلا لعيوب عزل الميتوكوندريا; ومع ذلك، فإن عوامل البيرمابيلينج الروتينية لطبيعة المنظفات ليست محددة وقد تلحق الضرر بالأغشية الميتوكوندريا5.
تم تقديم perfringolysin O المؤتلف (rPFO) كعامل انتقائي لغشاء البلازما permeabilizing7، وتم استخدامه بنجاح في تركيبة مع محلل تدفق خارج الخلية في العديد من الدراسات7و8و9و10. لقد قمنا بتعديل بروتوكول باستخدام rPFO لفحص تدفق الركيزة الميتوكوندريا باستخدام محلل التدفق خارج الخلية XFe96. في هذا البروتوكول، تتم مقارنة أربعة مسارات أكسدة ركائز مختلفة في اثنين من الأنماط الظاهرية الخلوية مع وجود تكرارات كافية والتحكم المناسب لكل مادة تم اختبارها.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adinosine 5&#8242; -diphosphate monopotassium salt dihydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A5285</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antimycin A</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A8674</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A3803</td>
			<td>store at 2 - 8 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone</td>
			<td>Merck</td>
			<td>C2920</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Merck</td>
			<td>D8418</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Mannitol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>63559</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate buffered saline</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N&#8242;,N&#8242;-tetraacetic acid</td>
			<td>Merck</td>
			<td>03777</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Merck</td>
			<td>H7523</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L(-)Malic acid disodium salt</td>
			<td>Merck</td>
			<td>M9138</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamic acid sodium salt hydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>G5889</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnissium chloride hexahydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>M2670</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligomycin</td>
			<td>Merck</td>
			<td>O4876</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palmitoyl-DL-carnitine chloride</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P4509</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hydroxide</td>
			<td>Merck</td>
			<td>484016</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P5655</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotenone</td>
			<td>Merck</td>
			<td>R8875</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse Wave Desktop Software</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td></td>
			<td>Download from www.agilent.com</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 Analyzer</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 FluxPak</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>102416-100</td>
			<td>XFe96 sensor cartridges and XF96 cell culture microplates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P2256</td>
			<td>store at 2 - 8 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium succinate dibasic hexahydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>S2378</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Merck</td>
			<td>S7903</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water</td>
			<td>Merck</td>
			<td>W3500</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF calibrant</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>100840-000</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF Plasma membrane permeabilizer</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>102504-100</td>
			<td>Recombinant perfringolysin O (rPFO) - Aliquot and store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring mitochondrial substrate flux in recombinant perfringolysin o-permeabilized cells

تدفق الركيزة الميتوكوندريا هو سمة مميزة لكل نوع من أنواع الخلايا، وتشارك التغيرات في مكوناته مثل الناقلين، والقنوات، أو الإنزيمات في مسببات الأمراض من عدة أمراض. يمكن دراسة تدفق الركيزة الميتوكوندريا باستخدام الخلايا السليمة، والخلايا permeabilized، أو الميتوكوندريا المعزولة. التحقيق في الخلايا سليمة يواجه العديد من المشاكل بسبب الأكسدة في وقت واحد من الركائز المختلفة. الى جانب ذلك ، تحتوي عدة أنواع من الخلايا على مخازن داخلية من الركائز المختلفة التي تعقد تفسير النتائج. طرق مثل عزل الميتوكوندريا أو استخدام عوامل البيرميلينج ليست قابلة للاستنساخ بسهولة. عزل الميتوكوندريا النقية مع الأغشية سليمة بكميات كافية من عينات صغيرة إشكالية. استخدام permeabilizers غير انتقائية يسبب درجات مختلفة من تلف غشاء الميتوكوندريا لا مفر منه. تم تقديم perfringolysin O المؤتلف (rPFO) كمطهر أكثر ملاءمة ، وذلك بفضل قدرته على اختراق غشاء البلازما بشكل انتقائي دون التأثير على سلامة الميتوكوندريا. عندما تستخدم في تركيبة مع قياس التنفس microplate، فإنه يسمح اختبار تدفق العديد من الركائز الميتوكوندريا مع ما يكفي من يكرر داخل تجربة واحدة أثناء استخدام الحد الأدنى من عدد الخلايا. في هذا العمل، يصف البروتوكول طريقة لمقارنة تدفق الركيزة الميتوكوندريا من اثنين من الأنماط الظاهرية الخلوية المختلفة أو الأنماط الجينية ويمكن تخصيصها لاختبار ركائز الميتوكوندريا المختلفة أو مثبطات.

ابدأ بتطبيع النتائج إلى القياس الثاني للتنفس الأساسي لإظهار القيم كنسبة مئوية لمعدل استهلاك الأكسجين (OCR٪). تظهر نتائج الفحص في الشكل 5والشكل 6 والشكل 7 والشكل 8. من المهم تعيين الآبار الخلفية المناسبة لكل م...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Mitochondrial Substrate Flux in Recombinant Perfringolysin O-Permeabilized Cells at JoVE.com

Measuring Mitochondrial Substrate Flux in Recombinant Perfringolysin O-Permeabilized Cells

في هذا العمل، ونحن نصف بروتوكول معدل لاختبار تدفق الركيزة التنفسية الميتوكوندريا باستخدام perfringolysin O المؤتلف في تركيبة مع قياس التنفس القائم على الصفائح الدقيقة. مع هذا البروتوكول، نظهر كيف يؤثر الميتفورمين على تنفس الميتوكوندريا لخطين مختلفين للخلايا السرطانية.

قياس تدفق الركيزة الميتوكوندريا في الخلايا المتالفة Perfringolysin O-Permeabilized

Mitochondrial substrate flux is a distinguishing characteristic of each cell type, and changes in its components such as transporters, channels, or ...

لأنه يختبر تدفق الركيزة الميتوكوندريا التي يمكن أن تتأثر مع أمراض مختلفة أو العلاجات. على سبيل المثال، اليوم سوف نستخدمها للكشف عن استجابة الخلايا السرطانية لعلاج الميتفورمين. فإنه يتطلب الحد الأدنى من عدد الخلايا في حين وجود تكرارات كافية والسيطرة المناسبة لكل مادة متميزة.محلل هو للاستخدام البحثي فقط. هذه التقنية يمكن تحديد الأخطاء في التمثيل الغذائي الميتوكوندريا ويمكن استخدامها لتقييم المحاربين المخدرات التي تؤثر على الميتوكوندريا. إثبات الإجراء سيكون كارولينا Vaneckova طالب جامعي وفني البحوث من مختبري.لبدء البذور A549 الخلايا في كثافة 20،000 الخلايا لكل بئر في الأعمدة، واثنين إلى 11 من حصان البحر XF 96 خلية الثقافة لوحة صغيرة. ترك العمودين الأول والثاني عشر فارغين كالآبار الخلفية. ملء الآبار الفارغة مع حجم متساو من المتوسط ثقافة الخلية، ثم احتضان الخلايا في 37 درجة مئوية في حاضنة مرطب مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمرفق الخلية.بعد ثلاث إلى أربع ساعات، إضافة 100 ميكرولتر من الخلايا ثقافة المتوسطة في ويلز. علاج أعمدة المجموعة التجريبية من سبعة إلى 11 مع واحد ميتفورمين ملليمولار ومجموعة التحكم مع حجم متساو من الماء المقطر العقيم، ثم العودة لوحة إلى الحاضنة. لترطيب أجهزة الاستشعار، ماصة 200 ميكرولتر من المياه العقيمة لكل بئر في لوحة المرافق.ثم أعد خرطوشة المستشعر بعناية أثناء غمر المستشعر في الماء. احتضان خرطوشة في حاضنة خالية من ثاني أكسيد الكربون في 37 درجة مئوية حتى اليوم التالي. قم بتشغيل محلل وحدة التحكم.بدء تشغيل برنامج التحكم في الأجهزة والحصول على البيانات، وتصميم بروتوكول الفحص كما هو موضح في المخطوطة النصية. في إطار تعريفات المجموعة، قم بإنشاء أربع استراتيجيات للحقن حيث يختلف المنفذ A وفقا للركيزة المحقونة واسم الاستراتيجيات بعد الركائز أو الاختصارات. تعيين أوليغومايسين إلى ميناء B، FCCP إلى ميناء C و Rotenone Antimycin خليط إلى ميناء D.Create وتسمية ثماني مجموعات، تحت خريطة لوحة، تعيين مجموعات إلى ويلز المقابلة.ثم حفظ البروتوكول كقالب جاهز للاستخدام. اترك مفتاح المحول للسماح لاستقرار درجة الحرارة بين عشية وضحاها. في اليوم التالي، تجاهل المياه من لوحة المرافق وإضافة 200 ميكرولتر من calibrant قبل الحارة لكل بئر في لوحة المرافق.أعد الخرطوشة إلى حاضنة خالية من ثاني أكسيد الكربون حتى وقت الفحص. الحفاظ على مصدر للرطوبة داخل الحاضنة وإيقاف أو تقليل سرعة المروحة إلى أدنى حد ممكن، لتجنب التبخر السريع للخلاب. إعداد خمسة ملليلتر من حل العمل من الركائز ومثبطات مع ما قبل تسخينها مرتين محلول المقايسة الميتوكوندريا، 5٪ BSA والمياه العقيمة كما هو موضح في مخطوطة النص.بعد ذلك، قم بتحميل منافذ الحقن بالركيزة والمثبطات كما هو موضح في المخطوطة الضريبية. للمعايرة تحت علامة التبويب اختبار التشغيل، انقر على تشغيل البدء لبدء الفحص. أدخل خرطوشة الرقابة المحملة وانتظر اكتمال المعايرة.إعداد 20 ملليلتر من المتوسطة المقايسة، عن طريق خلط مرتين محلول المقايسة الميتوكوندريا، والمياه العقيمة و 5٪ BSA في أنبوب 50 ملليلتر. إضافة اثنين من microliters من 10 ميكرومولار المؤتلف perfringolysin O، لتحقيق تركيز واحد نانومولار. وإعادة تعليق الخليط مع pipetting لطيف، وتجنب اهتزاز ودوامة.احتضان الأنبوب في 37 درجة مئوية حتى الاستخدام. استخدام ماصة متعددة القنوات لغسل الخلايا والآبار فارغة فارغة مرتين، وذلك باستخدام الكالسيوم قبل الدافئة والمغنيسيوم مجانا حل برنامج تلفزيوني. تجاهل برنامج تلفزيوني وإضافة 180 ميكرولتر من المتوسط المقايسة قبل تسخينها لبيرمابيليز الخلية.مباشرة بعد permeabilization استبدال لوحة فائدة من خرطوشة الاستشعار معايرة مع لوحة الخلية التي تحتوي على الخلايا permeabilized وبدء القياس. كان لدى مجموعة العلاج معدل أعلى من التنفس المستحث بالنجدة. كانت استجابة خلايا A549 لعلاج الميتفورمين أعلى من Hep G2. بالنسبة للتنفس المستحث بيروفات، أظهرت خلايا A549 زيادة في التعريفي مقارنة بخلايا Hep G2 بين خمس إلى 15 دقيقة.تم الحصول على نتائج مماثلة للغلوتامات مالات التنفس الناجم عن والتنفس المستحث بالميتويلاكرنيتين. لتحقيق التركيز الصحيح للركيزة ومثبطات. يجب تحميل وحدة التخزين الصحيحة في المنفذ الأيمن.عندما يتم تحديد تغيير في مسار التمثيل الغذائي لركيزة معينة ، سيكون من الضروري تقييم وظيفة الإنزيمات والنقل المشاركين في هذا المسار.

Research

JoVE Journal

Biology

A Method For Production of Recombinant mCD1d Protein in Insect Cells.

وهناك طريقة للحصول على إنتاج بروتين المؤتلف mCD1d في خلايا الحشرات.

CD1 proteins constitute a third class of antigen-presenting molecules. They are cell surface glycoproteins, expressed as approximately 50-kDa glycosylated ...

Probing for Mitochondrial Complex Activity in Human Embryonic Stem Cells

سبر للنشاط مجمع الميتوكوندريا في خلايا المنشأ الجنينية البشرية

Mitochondria are cytoplasmic organelles that have a primary role in cellular metabolism and homeostasis, regulation of the cell signaling network, and ...

Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

قياس الاستجابة التغذية الناجم عن الجلوتاثيون في حيدرة

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. ...

High-resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Permeabilized and Intact Cells

عالية الدقة قياس التنفس لتقييم وظيفة الميتوكوندريا في Permeabilized وخلايا سليمة

A high-resolution oxygraph is a device for measuring cellular oxygen consumption in a closed-chamber system with very high resolution and sensitivity in ...

Simultaneous Measurement of Mitochondrial Calcium and Mitochondrial Membrane Potential in Live Cells by Fluorescent Microscopy

قياس وقت واحد من الميتوكوندريا الكالسيوم والميتوكوندريا غشاء المحتملة في الخلايا الحية التي كتبها نيون الميكروسكوب

Apart from their essential role in generating ATP, mitochondria also act as local calcium (Ca2+) buffers to tightly regulate intracellular Ca2+ ...

Assessing Autophagic Flux by Measuring LC3, p62, and LAMP1 Co-localization Using Multispectral Imaging Flow Cytometry

تقييم التمويه الذاتي عن طريق قياس LC3، p62، و LAMP1 المشاركة في التعريب باستخدام قياس التدفق المتعدد الأطياف الخلوي

Autophagy is a catabolic pathway in which normal or dysfunctional cellular components that accumulate during growth and differentiation are degraded via ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

واجهة المستخدم الرسومية لتتبع بمساعدة برنامج تركيز البروتين في النتوءات الخلوية الديناميكية

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Transient Expression and Cellular Localization of Recombinant Proteins in Cultured Insect Cells

التعبير عابرة والخلوية توطين البروتينات المؤتلف في الخلايا مثقف الحشرات

Heterologous protein expression systems are used for the production of recombinant proteins, the interpretation of cellular trafficking/localization, and ...

Measurement of Energy Metabolism in Explanted Retinal Tissue Using Extracellular Flux Analysis

قياس استقلاب الطاقة في اكسبلانتيد نسيج الشبكية باستخدام تحليل الجريان خارج الخلية

High acuity vision is a heavily energy-consuming process, and the retina has developed several unique adaptations to precisely meet such demands while ...