Name: measuring mitochondrial substrate flux in recombinant perfringolysin o-permeabilized cells
Uploaded: 2021-08-13T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Mitochondrial Substrate Flux in Recombinant Perfringolysin O-Permeabilized Cells at JoVE.com

De auteurs bedanken de medewerkers van de afdeling Fysiologie van de faculteit Geneeskunde in Hradec Králové en de afdeling Pathofysiologie van de Derde Faculteit Geneeskunde voor de hulp bij de voorbereiding van chemicaliën en monsters. Dit werk werd ondersteund door Charles University subsidieprogramma's PROGRES Q40/02, Tsjechische ministerie van Volksgezondheid subsidie NU21-01-00259, Tsjechische wetenschap stichting subsidie 18-10144 en INOMED project CZ.02.1.01/0.0/0.0/18_069/0010046 gefinancierd door het ministerie van Onderwijs, Jeugd en Sport van de Tsjechische Republiek en door de Europese Unie.

1. Een dag voor de test
<ol><li>Bereiding van reagentia en substraten.<ol>
<li>Mitochondriale assayoplossing (MAS): Bereid stamoplossingen van alle reagentia zoals beschreven in tabel 1. Verwarm de voorraden mannitol en sucrose tot 37 °C om volledig op te lossen. Meng de reagentia om 2x MAS te bereiden en verwarm het mengsel tot 37 °C. Stel de pH met 5N KOH in op 7,4 (~ 7 ml) en voeg vervolgens water toe om het volume op 1 l te brengen. Filter-steriliseer en bewaar de aliquots bij -20 °C tot de mee...

<ol>
	<li>Gerencser, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+microplate-based+respirometry+with+correction+for+oxygen+diffusion.">Quantitative microplate-based respirometry with correction for oxygen diffusion.</a> Analytical Chemistry. 81 (16), 6868-6878 (2009).</li><li>Murphy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+function,+biology,+and+role+in+disease:+A+scientific+statement+from+the+American+Heart+Association.">Mitochondrial function, biology, and role in disease: A scientific statement from the American Heart Association.</a> Circulation Research. 118 (12), 1960-1991 (2016).</li><li>Owen, O. E., Kalhan, S. C., Hanson, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+key+role+of+anaplerosis+and+cataplerosis+for+citric+acid+cycle+function.">The key role of anaplerosis and cataplerosis for citric acid cycle function.</a> Journal of Biological Chemistry. 277 (34), 30409-30412 (2002).</li><li>Nicholls, D. G., Ferguson, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Bioenergetics 3. , (2002).</li><li>Brand, M. D., Nicholls, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+mitochondrial+dysfunction+in+cells.">Assessing mitochondrial dysfunction in cells.</a> Biochemical Journal. 435 (2), 297-312 (2011).</li><li>Sta&#328;kov&#225;, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+mitochondrial+substrate+flux+in+a+mouse+model+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">Adaptation of mitochondrial substrate flux in a mouse model of nonalcoholic fatty liver disease.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (3), 1101 (2020).</li><li>Salabei, J. K., Gibb, A. A., Hill, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+measurement+of+respiratory+activity+in+permeabilized+cells+using+extracellular+flux+analysis.">Comprehensive measurement of respiratory activity in permeabilized cells using extracellular flux analysis.</a> Nature Protocols. 9 (2), 421-438 (2014).</li><li>Divakaruni, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thiazolidinediones+are+acute,+specific+inhibitors+of+the+mitochondrial+pyruvate+carrier.">Thiazolidinediones are acute, specific inhibitors of the mitochondrial pyruvate carrier.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (14), 5422-5427 (2011).</li><li>Divakaruni, A. S., Rogers, G. W., Murphy, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+mitochondrial+function+in+permeabilized+cells+using+the+seahorse+XF+analyzer+or+a+Clark-type+oxygen+electrode.">Measuring mitochondrial function in permeabilized cells using the seahorse XF analyzer or a Clark-type oxygen electrode.</a> Current Protocols in Toxicology. 60, 1-16 (2014).</li><li>Elkalaf, M., T&#367;ma, P., Weiszenstein, M., Pol&#225;k, J., Trnka, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+probe+Methyltriphenylphosphonium+(TPMP)+inhibits+the+Krebs+cycle+enzyme+2-Oxoglutarate+dehydrogenase.">Mitochondrial probe Methyltriphenylphosphonium (TPMP) inhibits the Krebs cycle enzyme 2-Oxoglutarate dehydrogenase.</a> PLoS One. 11 (8), 0161413 (2016).</li><li>Rogers, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+throughput+microplate+respiratory+measurements+using+minimal+quantities+of+isolated+mitochondria.">High throughput microplate respiratory measurements using minimal quantities of isolated mitochondria.</a> PLoS One. 6 (7), 21746 (2011).</li></ol>

Dit protocol is een wijziging van eerder gepubliceerde studies7,8,9,10 en de gebruikershandleiding van het product. In tegenstelling tot het protocol van de fabrikant wordt 2x MAS gebruikt in plaats van 3x MAS, omdat 2× MAS gemakkelijker op te lossen is en geen neerslag vormt na bevriezing. Bevroren 2x MAS aliquots kunnen tot zes maanden worden bewaard en laten consistente resultaten zien. Een...

Microplate-gebaseerde respirometrie heeft een revolutie teweeggebracht in mitochondriaal onderzoek door de studie van cellulaire ademhaling van een kleine steekproefgrootte mogelijk te maken1. Cellulaire ademhaling wordt over het algemeen beschouwd als een indicator van mitochondriale functie of 'disfunctie', ondanks het feit dat het mitochondriale scala aan functies verder reikt danenergieproductie 2. In aerobe omstandigheden extraheren mitochondriën de energie die is opgeslagen in verschillende substraten door deze substraten af te breken en om te zetten in metabole tussenproducten die de citroenzuurcyclus kunnen voeden3 (Figuur 1). De continue flux van substraten is essentieel voor de stroom van de citroenzuurcyclus om hoogenergetische 'elektronendonoren' te genereren, die elektronen leveren aan de elektronentransportketen die een protongradiënt over het binnenste mitochondriale membraan genereert, waardoor ATP-synthase ADP tot ATP kan fosforyleren4. Daarom moet een experimenteel ontwerp om mitochondriale ademhaling te testen de monsternatuur (intacte cellen, gepermeabiliseerde cellen of geïsoleerde mitochondriën) en mitochondriale substraten omvatten.
Cellen houden een opslag van inheemse substraten5, en mitochondriën oxideren verschillende soorten substraten tegelijkertijd6, wat de interpretatie van resultaten verkregen uit experimenten uitgevoerd op intacte cellen bemoeilijkt. Een veel voorkomende aanpak om mitochondriaal vermogen om een geselecteerd substraat te oxideren te onderzoeken, is om mitochondriën te isoleren of de onderzochte cellen te permeabiliseren5. Hoewel geïsoleerde mitochondriën ideaal zijn voor kwantitatieve studies, is het isolatieproces arbeidsintensief. Het wordt geconfronteerd met technische problemen zoals de noodzaak van een grote steekproefomvang, zuiverheid van de opbrengst en reproduceerbaarheid van de techniek5. Gepermeabiliseerde cellen bieden een oplossing voor de nadelen van mitochondriale isolatie; routinematige permeabiliseermiddelen van detergent aard zijn echter niet specifiek en kunnen mitochondriale membranen beschadigen5.
Recombinant perfringolysine O (rPFO) werd aangeboden als een selectief plasmamembraanpermeabiliserend middel7en werd met succes gebruikt in combinatie met een extracellulaire fluxanalysator in verschillende studies7,8,9,10. We hebben een protocol aangepast met behulp van rPFO om mitochondriale substraatflux te screenen met behulp van XFe96 extracellulaire fluxanalysator. In dit protocol worden vier verschillende substraatoxiderende routes in twee cellulaire fenotypen vergeleken met voldoende replicaties en de juiste controle voor elk getest materiaal.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adinosine 5&#8242; -diphosphate monopotassium salt dihydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A5285</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antimycin A</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A8674</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A3803</td>
			<td>store at 2 - 8 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone</td>
			<td>Merck</td>
			<td>C2920</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Merck</td>
			<td>D8418</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Mannitol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>63559</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate buffered saline</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N&#8242;,N&#8242;-tetraacetic acid</td>
			<td>Merck</td>
			<td>03777</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Merck</td>
			<td>H7523</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L(-)Malic acid disodium salt</td>
			<td>Merck</td>
			<td>M9138</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamic acid sodium salt hydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>G5889</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnissium chloride hexahydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>M2670</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligomycin</td>
			<td>Merck</td>
			<td>O4876</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palmitoyl-DL-carnitine chloride</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P4509</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hydroxide</td>
			<td>Merck</td>
			<td>484016</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P5655</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotenone</td>
			<td>Merck</td>
			<td>R8875</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse Wave Desktop Software</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td></td>
			<td>Download from www.agilent.com</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 Analyzer</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 FluxPak</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>102416-100</td>
			<td>XFe96 sensor cartridges and XF96 cell culture microplates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P2256</td>
			<td>store at 2 - 8 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium succinate dibasic hexahydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>S2378</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Merck</td>
			<td>S7903</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water</td>
			<td>Merck</td>
			<td>W3500</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF calibrant</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>100840-000</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF Plasma membrane permeabilizer</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>102504-100</td>
			<td>Recombinant perfringolysin O (rPFO) - Aliquot and store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring mitochondrial substrate flux in recombinant perfringolysin o-permeabilized cells

Mitochondriale substraatflux is een onderscheidend kenmerk van elk celtype en veranderingen in de componenten ervan, zoals transporters, kanalen of enzymen, zijn betrokken bij de pathogenese van verschillende ziekten. Mitochondriale substraatflux kan worden bestudeerd met behulp van intacte cellen, gepermeabiliseerde cellen of geïsoleerde mitochondriën. Het onderzoeken van intacte cellen stuit op verschillende problemen als gevolg van gelijktijdige oxidatie van verschillende substraten. Bovendien bevatten verschillende celtypen interne opslagplaatsen van verschillende substraten die de interpretatie van resultaten bemoeilijken. Methoden zoals mitochondriale isolatie of het gebruik van permeabiliseermiddelen zijn niet gemakkelijk reproduceerbaar. Het isoleren van zuivere mitochondriën met intacte membranen in voldoende hoeveelheden uit kleine monsters is problematisch. Het gebruik van niet-selectieve permeabilizers veroorzaakt verschillende gradaties van onvermijdelijke mitochondriale membraanschade. Recombinant perfringolysine O (rPFO) werd aangeboden als een meer geschikte permeabilisator, dankzij het vermogen om selectief het plasmamembraan te permeabiliseren zonder de mitochondriale integriteit te beïnvloeden. Bij gebruik in combinatie met microplaat respirometrie maakt het het mogelijk om de flux van verschillende mitochondriale substraten te testen met voldoende replicaties binnen één experiment terwijl een minimaal aantal cellen wordt gebruikt. In dit werk beschrijft het protocol een methode om mitochondriale substraatflux van twee verschillende cellulaire fenotypes of genotypen te vergelijken en kan worden aangepast om verschillende mitochondriale substraten of remmers te testen.

Begin met het normaliseren van de resultaten naar de tweede meting van de basisademhaling om waarden weer te geven als zuurstofverbruikspercentage (OCR%). De resultaten van de test zijn weergegeven in figuur 5, figuur 6,figuur 7 en figuur 8. Het is belangrijk om de juiste achtergrondputten voor elke groep toe te wijzen en de achtergrondputten van andere groepen te inact...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Mitochondrial Substrate Flux in Recombinant Perfringolysin O-Permeabilized Cells at JoVE.com

Measuring Mitochondrial Substrate Flux in Recombinant Perfringolysin O-Permeabilized Cells

In dit werk beschrijven we een aangepast protocol om mitochondriale respiratoire substraatflux te testen met behulp van recombinant perfringolysine O in combinatie met respirometrie op basis van microplaten. Met dit protocol laten we zien hoe metformine de mitochondriale ademhaling van twee verschillende tumorcellijnen beïnvloedt.

Meten van mitochondriale substraatflux in recombinante perfringolysine O-permeabiliseerde cellen

Mitochondrial substrate flux is a distinguishing characteristic of each cell type, and changes in its components such as transporters, channels, or ...

Omdat het mitochondriale substraatflux test die kan worden beïnvloed door verschillende pathologieën of behandelingen. Vandaag zullen we het bijvoorbeeld gebruiken om de reactie van kankercellen op de behandeling met metformine te onthullen. Het vereist een minimaal aantal cellen, terwijl het voldoende replicaties en passende controle voor elk afzonderlijk materiaal heeft.De analyzer is alleen voor onderzoeksdoeleinden. Deze techniek kan fouten in het mitochondriale metabolisme identificeren en kan worden gebruikt om krijgersgeneesmiddelen te evalueren die mitochondriën beïnvloeden. Karolina Vaneckova, een studente en onderzoekstechnicus van mijn laboratorium, demonstreert de procedure.Om te beginnen zaad A549 cellen met een dichtheid van 20.000 cellen per put in kolommen, twee tot 11 van een zeepaardje XF 96 celkweek microplaat. Kolommen één en 12 leeg laten als achtergrondputten. Vul de lege putten met een gelijk volume van het celkweekmedium en incubeer vervolgens de cellen bij 37 graden Celsius in een bevochtigde incubator met 5% koolstofdioxide voor celaanhechting.Voeg na drie tot vier uur 100 microliter celkweekmedium toe in de Wells. Behandel de experimentele groep kolommen zeven tot en met 11 met één millimolaire metformine en de controlegroep met een gelijk volume steriel gedestilleerd water en breng de plaat vervolgens terug naar de incubator. Voor het hydrateren van de sensoren pipetteer je 200 microliter steriel water per put in de gebruiksplaat.Breng vervolgens de sensorcartridge voorzichtig terug terwijl u de sensor onderdompelt in water. Incubeer de patroon in een kooldioxidevrije incubator bij 37 graden Celsius tot de volgende dag. Schakel de analyzer en de besturingseenheid in.Start de software voor instrumentbesturing en gegevensverzameling en ontwerp het testprotocol zoals beschreven in het tekstmanuscript. Maak volgens groepsdefinities vier injectiestrategieën waarbij poort A verschilt afhankelijk van het geïnjecteerde substraat en noem de strategieën naar de substraten of afkortingen. Wijs Oligomycine toe aan poort B, FCCP aan poort C en Rotenone Antimycine A-mengsel aan poort D.Maak en benoem acht groepen, onder de plaatkaart, wijs groepen toe aan de overeenkomstige putten.Sla het protocol vervolgens op als een gebruiksklare sjabloon. Laat de analyzer inschakelen om de temperatuur 's nachts te stabiliseren. Gooi de volgende dag het water van de nutsplaat weg en voeg 200 microliter van de voorverwarmde kalibrant per put toe aan de nutsplaat.Breng de patroon terug naar de kooldioxidevrije incubator tot het moment van de test. Zorg voor een vochtbron in de incubator en schakel de ventilatorsnelheid uit of verlaag deze tot een minimum, om snelle verdamping van het kalibrant te voorkomen. Bereid vijf milliliter van de werkoplossing van de substraten en remmers met voorverwarmde tweemaal mitochondriale assay-oplossing, 5% BSA en steriel water zoals beschreven in het tekstmanuscript.Laad vervolgens de injectorpoorten met substraat en remmers zoals beschreven in het belastinghandschrift. Voor kalibratie onder het tabblad run assay, klik op de start run om de assay te starten. Plaats de geladen censorcartridge en wacht tot de kalibratie is voltooid.Bereid een testmedium van 20 milliliter door twee keer mitochondriale assay-oplossing, steriel water en 5% BSA in een buis van 50 milliliter te mengen. Voeg twee microliter van 10 micromolair recombinant perfringolysine O toe om een concentratie van één nanomolair te bereiken. En suspensie het mengsel opnieuw met zacht pipetteren, waardoor schudden en vortexing worden vermeden.Incubeer de buis bij 37 graden Celsius tot gebruik. Gebruik een meerkanaalspipet om de cellen en de lege putten twee keer te wassen, met behulp van een voorverwarmde calcium- en magnesiumvrije PBS-oplossing. Gooi de PBS weg en voeg 180 microliter van het voorverwarmde testmedium toe voor celpermeabilisatie.Vervang onmiddellijk na permeabilisatie de gebruiksplaat van de gekalibreerde sensorcartridge door de celplaat met gepermeabiliseerde cellen en start de meting. De behandelingsgroep had een hogere snelheid van door succinaat geïnduceerde ademhaling. De respons van A549-cellen op behandeling met metformine was hoger dan hep G2. Voor de door pyruvaatmalaat geïnduceerde ademhaling vertoonden A549-cellen een verhoogde inductie in vergelijking met Hep G2-cellen tussen vijf en 15 minuten.Vergelijkbare resultaten werden verkregen voor glutamaatmalaat geïnduceerde ademhaling en palmitoylcarnitine malaat geïnduceerde ademhaling. Om de juiste concentratie van substraat en remmers te bereiken. Het juiste volume moet in de juiste poort worden geladen.Wanneer een verandering in een metabole route van een bepaald substraat wordt vastgesteld, zal het nodig zijn om de functie van de enzymen en transporters die bij die route betrokken zijn, te beoordelen.

Research

JoVE Journal

Biology

A Method For Production of Recombinant mCD1d Protein in Insect Cells.

Een methode voor de productie van recombinante eiwitten mCD1d in insectencellen.

CD1 proteins constitute a third class of antigen-presenting molecules. They are cell surface glycoproteins, expressed as approximately 50-kDa glycosylated ...

Probing for Mitochondrial Complex Activity in Human Embryonic Stem Cells

Peilen naar Mitochondriale complexe activiteit in menselijke embryonale stamcellen

Mitochondria are cytoplasmic organelles that have a primary role in cellular metabolism and homeostasis, regulation of the cell signaling network, and ...

Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

Meten-Glutathion geïnduceerde Feeding Response in Hydra

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. ...

High-resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Permeabilized and Intact Cells

High-resolution respirometrietest aan mitochondriale functie beoordelen in gepermeabiliseerde en intacte cellen

A high-resolution oxygraph is a device for measuring cellular oxygen consumption in a closed-chamber system with very high resolution and sensitivity in ...

Simultaneous Measurement of Mitochondrial Calcium and Mitochondrial Membrane Potential in Live Cells by Fluorescent Microscopy

Gelijktijdige meting van mitochondriale calcium en mitochondriale membraan potentieel in levende cellen door fluorescentie microscopie

Apart from their essential role in generating ATP, mitochondria also act as local calcium (Ca2+) buffers to tightly regulate intracellular Ca2+ ...

Assessing Autophagic Flux by Measuring LC3, p62, and LAMP1 Co-localization Using Multispectral Imaging Flow Cytometry

Autofagische Flux beoordelen door LC3-, P62- en LAMP1-co-lokalisatie met behulp van Multispectrale Imaging Flow Cytometry

Autophagy is a catabolic pathway in which normal or dysfunctional cellular components that accumulate during growth and differentiation are degraded via ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

Een grafische gebruikersinterface voor software-assisted tracking van eiwitconcentratie in dynamische cellulaire protrusies

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Transient Expression and Cellular Localization of Recombinant Proteins in Cultured Insect Cells

Transiënte expressie en cellulaire lokalisatie van recombinante eiwitten in gekweekte insectencellen

Heterologous protein expression systems are used for the production of recombinant proteins, the interpretation of cellular trafficking/localization, and ...

Measurement of Energy Metabolism in Explanted Retinal Tissue Using Extracellular Flux Analysis

Meting van de energie-stofwisseling in transplanteren retinale weefsel met behulp van extracellulaire Flux-analyse

High acuity vision is a heavily energy-consuming process, and the retina has developed several unique adaptations to precisely meet such demands while ...