Name: measuring mitochondrial substrate flux in recombinant perfringolysin o-permeabilized cells
Uploaded: 2021-08-13T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Mitochondrial Substrate Flux in Recombinant Perfringolysin O-Permeabilized Cells at JoVE.com

המחברים מודים לחברי הצוות של המחלקה לפיזיולוגיה בפקולטה לרפואה בחרדק קרלובה ולמחלקה לפתופיזיולוגיה בפקולטה השלישית לרפואה על העזרה בהכנת כימיקלים ודגימות. עבודה זו נתמכה על ידי תוכניות המענקים של אוניברסיטת צ'ארלס PROGRES Q40/02, משרד הבריאות הצ'כי מענק NU21-01-00259, קרן המדע הצ'כית מענק 18-10144 ופרויקט INOMED CZ.02.1.01/0.0/0.0/18_069/0010046 במימון משרד החינוך, הנוער והספורט של צ'כיה ועל ידי האיחוד האירופי.

1. יום אחד לפני ההסתה
<ol><li>הכנת ריאגנטים ומצעים.<ol>
<li>פתרון בדיקת מיטוכונדריאלי (MAS): הכן פתרונות מלאי של כל הריאגנטים כמתואר בטבלה 1. מחממים את המניות של מניטול סוכרוז ל 37 °C (50 °F) להתמוסס לחלוטין. מערבבים את הריאגנטים כדי להכין 2x MAS, ולאחר מכן לחמם את התערובת ל 37 °C (50 °F). התאימו את ה-pH ע...

<ol>
	<li>Gerencser, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+microplate-based+respirometry+with+correction+for+oxygen+diffusion.">Quantitative microplate-based respirometry with correction for oxygen diffusion.</a> Analytical Chemistry. 81 (16), 6868-6878 (2009).</li><li>Murphy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+function,+biology,+and+role+in+disease:+A+scientific+statement+from+the+American+Heart+Association.">Mitochondrial function, biology, and role in disease: A scientific statement from the American Heart Association.</a> Circulation Research. 118 (12), 1960-1991 (2016).</li><li>Owen, O. E., Kalhan, S. C., Hanson, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+key+role+of+anaplerosis+and+cataplerosis+for+citric+acid+cycle+function.">The key role of anaplerosis and cataplerosis for citric acid cycle function.</a> Journal of Biological Chemistry. 277 (34), 30409-30412 (2002).</li><li>Nicholls, D. G., Ferguson, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Bioenergetics 3. , (2002).</li><li>Brand, M. D., Nicholls, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+mitochondrial+dysfunction+in+cells.">Assessing mitochondrial dysfunction in cells.</a> Biochemical Journal. 435 (2), 297-312 (2011).</li><li>Sta&#328;kov&#225;, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+mitochondrial+substrate+flux+in+a+mouse+model+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">Adaptation of mitochondrial substrate flux in a mouse model of nonalcoholic fatty liver disease.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (3), 1101 (2020).</li><li>Salabei, J. K., Gibb, A. A., Hill, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+measurement+of+respiratory+activity+in+permeabilized+cells+using+extracellular+flux+analysis.">Comprehensive measurement of respiratory activity in permeabilized cells using extracellular flux analysis.</a> Nature Protocols. 9 (2), 421-438 (2014).</li><li>Divakaruni, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thiazolidinediones+are+acute,+specific+inhibitors+of+the+mitochondrial+pyruvate+carrier.">Thiazolidinediones are acute, specific inhibitors of the mitochondrial pyruvate carrier.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (14), 5422-5427 (2011).</li><li>Divakaruni, A. S., Rogers, G. W., Murphy, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+mitochondrial+function+in+permeabilized+cells+using+the+seahorse+XF+analyzer+or+a+Clark-type+oxygen+electrode.">Measuring mitochondrial function in permeabilized cells using the seahorse XF analyzer or a Clark-type oxygen electrode.</a> Current Protocols in Toxicology. 60, 1-16 (2014).</li><li>Elkalaf, M., T&#367;ma, P., Weiszenstein, M., Pol&#225;k, J., Trnka, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+probe+Methyltriphenylphosphonium+(TPMP)+inhibits+the+Krebs+cycle+enzyme+2-Oxoglutarate+dehydrogenase.">Mitochondrial probe Methyltriphenylphosphonium (TPMP) inhibits the Krebs cycle enzyme 2-Oxoglutarate dehydrogenase.</a> PLoS One. 11 (8), 0161413 (2016).</li><li>Rogers, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+throughput+microplate+respiratory+measurements+using+minimal+quantities+of+isolated+mitochondria.">High throughput microplate respiratory measurements using minimal quantities of isolated mitochondria.</a> PLoS One. 6 (7), 21746 (2011).</li></ol>

פרוטוקול זה הוא שינוי של מחקרים שפורסמו בעבר7,8,9,10 ואת מדריך המשתמש במוצר. בניגוד לפרוטוקול היצרן, 2x MAS משמש במקום 3x MAS, שכן 2× MAS קל יותר להתמוסס ואינו יוצר משקעים לאחר הקפאה. ניתן לאחסן עד שישה חודשים ולהראות תוצאות עקביות...

ספירומטריה מבוססת מיקרופלסטיק חוללה מהפכה במחקר המיטוכונדריאלי בכך שאפשרה את חקר הנשימה התאית בגודל מדגם קטן1. נשימה תאית נחשבת בדרך כלל כאינדיקטור לתפקוד מיטוכונדריאלי או "תפקוד לקוי", למרות העובדה כי טווח הפונקציות המיטוכונדריאלי משתרע מעבר לייצוראנרגיה 2. בתנאים אירוביים, המיטוכונדריה מחלצים את האנרגיה המאוחסנת במצעים שונים על ידי פירוק והמרת מצעים אלה למתווכים מטבוליים שיכולים לתדלק את מחזור חומצת לימון3 (איור 1). השטף המתמשך של המצעים חיוני לזרימה של מחזור חומצת לימון כדי ליצור אנרגיה גבוהה 'תורמי אלקטרונים', אשר מספקים אלקטרונים לשרשרת הובלת האלקטרונים המייצר שיפוע פרוטונים על פני הממברנה המיטוכונדריאלית הפנימית, ומאפשר ATP-סינתאז לזרחן ADP ל- ATP4. לכן, עיצוב ניסיוני כדי לעצור נשימה מיטוכונדריאלית חייב לכלול את טבע המדגם (תאים שלמים, תאים מחלחלים, או מיטוכונדריה מבודדת) ומצעים מיטוכונדריאליים.
תאים לשמור על מאגר של מצעים ילידים5, ומיטוכונדריה לחמצן כמה סוגים של מצעים בו זמנית6, אשר מסבך את הפרשנות של תוצאות המתקבלות מניסויים שבוצעו על תאים שלמים. גישה נפוצה לחקור את היכולת המיטוכונדריאלית לחמצן מצע נבחר היא לבודד את המיטוכונדריה או לחלחל לתאים הנחקרים5. למרות המיטוכונדריה מבודדת הם אידיאליים עבור מחקרים כמותיים, תהליך הבידוד הוא מייגע. הוא מתמודד עם קשיים טכניים כגון הצורך בגודל מדגם גדול, טוהר התשואה, ושחזור של הטכניקה5. תאים מחלחלים מציעים פתרון לחסרונות של בידוד מיטוכונדריאלי; עם זאת, חומרים מחלחלים שגרתיים של טבע דטרגנט אינם ספציפיים ועלולים לפגוע בממברנות המיטוכונדריאליות5.
רקומביננטי perfringolysin O (rPFO) הוצע כקרום פלזמה סלקטיבי מחלחל סוכן7, והוא שימש בהצלחה בשילוב עם מנתח שטף חוץ תאי במספר מחקרים7,8,9,10. שינינו פרוטוקול באמצעות rPFO כדי לסנן שטף מצע מיטוכונדריאלי באמצעות מנתח שטף חוץ-תאי XFe96. בפרוטוקול זה, ארבעה מסלולים שונים חמצון מצע בשני פנוטיפים הסלולר משווים תוך שיש מספיק שכפולים ואת השליטה הנכונה עבור כל חומר נבדק.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adinosine 5&#8242; -diphosphate monopotassium salt dihydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A5285</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antimycin A</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A8674</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A3803</td>
			<td>store at 2 - 8 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone</td>
			<td>Merck</td>
			<td>C2920</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Merck</td>
			<td>D8418</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Mannitol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>63559</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate buffered saline</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N&#8242;,N&#8242;-tetraacetic acid</td>
			<td>Merck</td>
			<td>03777</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Merck</td>
			<td>H7523</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L(-)Malic acid disodium salt</td>
			<td>Merck</td>
			<td>M9138</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamic acid sodium salt hydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>G5889</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnissium chloride hexahydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>M2670</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligomycin</td>
			<td>Merck</td>
			<td>O4876</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palmitoyl-DL-carnitine chloride</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P4509</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hydroxide</td>
			<td>Merck</td>
			<td>484016</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P5655</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotenone</td>
			<td>Merck</td>
			<td>R8875</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse Wave Desktop Software</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td></td>
			<td>Download from www.agilent.com</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 Analyzer</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 FluxPak</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>102416-100</td>
			<td>XFe96 sensor cartridges and XF96 cell culture microplates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P2256</td>
			<td>store at 2 - 8 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium succinate dibasic hexahydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>S2378</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Merck</td>
			<td>S7903</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water</td>
			<td>Merck</td>
			<td>W3500</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF calibrant</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>100840-000</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF Plasma membrane permeabilizer</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>102504-100</td>
			<td>Recombinant perfringolysin O (rPFO) - Aliquot and store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring mitochondrial substrate flux in recombinant perfringolysin o-permeabilized cells

שטף מצע מיטוכונדריאלי הוא מאפיין בולט של כל סוג תא, ושינויים במרכיביו כגון מובילים, ערוצים או אנזימים מעורבים בפתוגנזה של מספר מחלות. ניתן לחקור שטף מצע מיטוכונדריאלי באמצעות תאים שלמים, תאים מחלחלים או מיטוכונדריה מבודדת. חקירת תאים שלמים נתקלת במספר בעיות עקב חמצון סימולטני של מצעים שונים. חוץ מזה, מספר סוגי תאים מכילים מאגרים פנימיים של מצעים שונים שמסבך את פרשנות התוצאות. שיטות כגון בידוד מיטוכונדריאלי או שימוש בסוכנים מחלחלים אינם ניתנים לשחזור בקלות. בידוד המיטוכונדריה הטהורה עם ממברנות שלמות בכמויות מספיקות מדגימות קטנות הוא בעייתי. שימוש permeabilizers לא סלקטיבי גורם דרגות שונות של נזק ממברנה מיטוכונדריאלית בלתי נמנע. רקומביננטי perfringolysin O (rPFO) הוצע כמו permeabilizer מתאים יותר, הודות ליכולתו באופן סלקטיבי permeabilize קרום פלזמה מבלי להשפיע על שלמות המיטוכונדריה. כאשר נעשה שימוש בשילוב עם respirometry microplate, זה מאפשר בדיקת השטף של כמה מצעים מיטוכונדריאליים עם מספיק שכפולים בתוך ניסוי אחד תוך שימוש במספר מינימלי של תאים. בעבודה זו, הפרוטוקול מתאר שיטה להשוות שטף מצע מיטוכונדריאלי של שני פנוטיפים תאיים שונים או גנוטיפים וניתן להתאים אישית כדי לבדוק מצעים או מעכבים מיטוכונדריאליים שונים.

התחל על ידי נרמול התוצאות למדידה השנייה של נשימה בסיסית כדי להציג ערכים כאחוז צריכת חמצן (OCR%). תוצאות ההסתה מוצגות באיורים 5, איור 6, איור 7 ואיור 8 . חשוב להקצות את בארות הרקע המתאימות לכל קבוצה ולהנטרל את באר...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Mitochondrial Substrate Flux in Recombinant Perfringolysin O-Permeabilized Cells at JoVE.com

Measuring Mitochondrial Substrate Flux in Recombinant Perfringolysin O-Permeabilized Cells

בעבודה זו, אנו מתארים פרוטוקול שונה כדי לבדוק שטף מצע נשימתי מיטוכונדריאלי באמצעות רקומביננטי perfringolysin O בשילוב עם רזפירומטריה מבוססת מיקרופלסטיק. עם פרוטוקול זה, אנו מראים כיצד מטפורמין משפיע על נשימה מיטוכונדריאלית של שני קווי תאים סרטניים שונים.

מדידת שטף מצע מיטוכונדריאלי בתאים פרומינגוליסין O-פרמיבילים

Mitochondrial substrate flux is a distinguishing characteristic of each cell type, and changes in its components such as transporters, channels, or ...

כי זה בודק שטף מצע המיטוכונדריה שיכול להיות מושפע עם פתולוגיות או טיפולים שונים. לדוגמה, היום נשתמש בו כדי לחשוף את תגובת התא הסרטני לטיפול מטפורמין. זה דורש מספר מינימלי של תאים תוך שכפול מספיק ושליטה מתאימה עבור כל חומר נפרד.המנתח מיועד לשימוש מחקרי בלבד. טכניקה זו יכולה לזהות שגיאות בחילוף החומרים המיטוכונדריאלי וניתן להשתמש בה כדי להעריך תרופות ללוחמים המשפיעות על המיטוכונדריה. מי שתדגים את ההליך תהיה קרולינה ואנקובה, סטודנטית לתואר ראשון וטכנאית מחקר מהמעבדה שלי.כדי להתחיל זרע תאי A549 בצפיפות של 20, 000 תאים לבאר בעמודות, שניים עד 11 של סוסון ים XF 96 תא תרבית מיקרו צלחת. השארת עמודות 1 ו- 12 ריקות כמו בארות רקע. מלאו את הבארות הריקות בנפח שווה של המדיום של תרבית התאים, ואז דגגרו את התאים ב-37 מעלות צלזיוס באינקובטור לח עם 5% פחמן דו-חמצני לחיבור תאים.לאחר שלוש עד ארבע שעות, להוסיף 100 microliters של תרבית תאים בינונית בבארות. לטפל בעמודים קבוצתיים ניסיוניים שבע עד 11 עם מטפורמין מילימולרי אחד ואת קבוצת הביקורת עם נפח שווה של מים מזוקקים סטריליים, ולאחר מכן להחזיר את הצלחת לאינקובטור. עבור לחות החיישנים, pipette 200 microliters של מים סטריליים לבאר לתוך צלחת השירות.לאחר מכן החזר בזהירות את מחסנית החיישן תוך כדי טבילת החיישן במים. לדגור את המחסנית באינקובטור ללא פחמן דו חמצני ב 37 מעלות צלזיוס עד למחרת. תדליק את המנתח ואת יחידת הבקרה.הפעל את תוכנת בקרת המכשירים ורכישת הנתונים, ותכנן את פרוטוקול בדיקת ה- assay כמתואר בכתב היד של הטקסט. תחת הגדרות הקבוצה, ליצור ארבע אסטרטגיות הזרקה שבו יציאה A שונה על פי המצע המוזרק שם האסטרטגיות לאחר המצעים או הקיצורים. הקצה אוליגומיצין ליציאה B, FCCP ליציאה C ורוטנון אנטימיצין תערובת ליציאה D.Create ושם שמונה קבוצות, תחת מפת הלוח, להקצות קבוצות לבארות המתאימות.לאחר מכן שמור את הפרוטוקול כתבנית מוכנה לשימוש. השאר את מתג המנתח על כדי לאפשר את הטמפרטורה להתייצב לילה. למחרת, להשליך את המים מצלחת השירות ולהוסיף 200 microliters של calibrant התחמם מראש לכל באר בלוח השירות.החזר את המחסנית לאינקובטור ללא פחמן דו חמצני עד למועד ההסתה. לשמור על מקור לחות בתוך האינקובטור ולכבה או להפחית את מהירות המאוורר למינימום, כדי למנוע אידוי מהיר של הכיול. הכן חמישה מיליליטרים של פתרון העבודה של המצעים והמעכבים עם פתרון בדיקת מיטוכונדריאלי פעמיים מינון מראש, 5% BSA ומים סטריליים כמתואר בכתב היד של הטקסט.לאחר מכן, לטעון את יציאות המזרק עם מצע ומעכבים כמתואר בכתב היד מס. לכיול תחת לשונית הריצה, לחץ על ריצת ההתחלה כדי להתחיל בבדיקה. הכנס את מחסנית הצנזורה הטעונה והמתן להשלמת הכיול.הכן 20 מיליליטר של בינוני אסאי, על ידי ערבוב פעמיים פתרון בדיקת מיטוכונדריאלי, מים סטריליים ו 5% BSA בצינור 50 מיליליטר. הוסף שני מיקרוליטרים של 10 מיקרומולר רקומביננטי perfringolysin O, כדי להשיג ריכוז של ננומולר אחד. ולהשעות מחדש את התערובת עם צינורות עדינים, הימנעות רועדת מערבולת.לדגור על הצינור ב 37 מעלות צלזיוס עד השימוש. השתמש פיפטה רב ערוצית לשטוף את התאים ואת וולס הריק פעמיים, באמצעות סידן מחומם מראש פתרון PBS ללא מגנזיום. השלך את ה- PBS והוסף 180 מיקרוליטרים של מדיום ה- assay התחמם מראש עבור פרמביליזציה של תאים.מיד לאחר permeabilization להחליף את צלחת השירות של מחסנית חיישן מכויל עם צלחת התא המכיל תאים חלחלים ולהתחיל את המדידה. לקבוצת הטיפול היה שיעור גבוה יותר של נשימה תמציתית המושרה. התגובה של תאי A549 לטיפול מטפורמין הייתה גבוהה יותר מאשר Hep G2. עבור הנשימה המושרה פירובט מלאט, תאי A549 הראו אינדוקציה מוגברת לעומת תאי הפ G2 בין חמש ל 15 דקות.תוצאות דומות התקבלו עבור נשימה המושרה גלוטמט malate ו פלמיטוילקרנטין malate המושרה נשימה. כדי להשיג את הריכוז הנכון של מצע ומעכבים. יש לטעון את אמצעי האחסון הנכון ליציאה הימנית.כאשר שינוי במסלול מטבולי של מצע מסוים מזוהה, יהיה צורך להעריך את הפונקציה של האנזימים והמשגרים המעורבים במסלול זה.

Research

JoVE Journal

Biology

A Method For Production of Recombinant mCD1d Protein in Insect Cells.

שיטה לייצור של חלבון רקומביננטי mCD1d בתוך תאים חרקים.

CD1 proteins constitute a third class of antigen-presenting molecules. They are cell surface glycoproteins, expressed as approximately 50-kDa glycosylated ...

Probing for Mitochondrial Complex Activity in Human Embryonic Stem Cells

גשוש עבור פעילות קומפלקס מיטוכונדריאלי של בתאי גזע עובריים אנושיים

Mitochondria are cytoplasmic organelles that have a primary role in cellular metabolism and homeostasis, regulation of the cell signaling network, and ...

Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

מדידת תגובת האכלה מושרה גלוטתיון בהידרה

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. ...

High-resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Permeabilized and Intact Cells

ברזולוציה גבוהה Respirometry להעריך תפקוד מיטוכונדריאלי permeabilized ו תאים שלמים

A high-resolution oxygraph is a device for measuring cellular oxygen consumption in a closed-chamber system with very high resolution and sensitivity in ...

Simultaneous Measurement of Mitochondrial Calcium and Mitochondrial Membrane Potential in Live Cells by Fluorescent Microscopy

מדידה בו זמנית של סידן מיטוכונדריאלי מיטוכונדריאלי ממברנה פוטנציאלית בתאים חיים באמצעות פלורסנט מיקרוסקופית

Apart from their essential role in generating ATP, mitochondria also act as local calcium (Ca2+) buffers to tightly regulate intracellular Ca2+ ...

Assessing Autophagic Flux by Measuring LC3, p62, and LAMP1 Co-localization Using Multispectral Imaging Flow Cytometry

הערכת השטף autofagic ידי מדידת LC3, p62, ו LAMP1 Co-localization באמצעות multispectral הדמיה cytometry

Autophagy is a catabolic pathway in which normal or dysfunctional cellular components that accumulate during growth and differentiation are degraded via ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

ממשק משתמש גרפי למעקב בסיוע תוכנה של ריכוז חלבון בהפרעות ניידות דינמיות

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Transient Expression and Cellular Localization of Recombinant Proteins in Cultured Insect Cells

ביטוי חולף ואת סלולר לוקליזציה של חלבונים רקומביננטי תאים בתרבית חרקים

Heterologous protein expression systems are used for the production of recombinant proteins, the interpretation of cellular trafficking/localization, and ...

Measurement of Energy Metabolism in Explanted Retinal Tissue Using Extracellular Flux Analysis

מדידה של חילוף החומרים האנרגיה ברקמת הרשתית Explanted באמצעות ניתוח השטף חוץ-תאית

High acuity vision is a heavily energy-consuming process, and the retina has developed several unique adaptations to precisely meet such demands while ...