Name: measuring mitochondrial substrate flux in recombinant perfringolysin o-permeabilized cells
Uploaded: 2021-08-13T14:30:00
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저자는 흐라데크 크랄로베의 의학 학부의 생리학과 직원과 화학 물질 및 샘플 준비에 대한 도움을 위한 제 3 학부의 병리학학과에 감사드립니다. 이 작품은 찰스 대학 교부 금교 프로그램 PROGRES Q40/02, 체코 보건부 보조금 NU21-01-00259, 체코 과학 재단 교부 18-10144 및 INOMED 프로젝트 CZ.02.1.01/0.01/0.0/0/0/18_069/0010046 교육부, 청소년 및 유럽 연합 (EU)의 유럽 연합 (EU)에 의해 지원되었다.

1. 분석 하루 전
<ol><li>시약 및 기판의 준비.<ol>
<li>미토콘드리아 분석 용액(MAS): 표 1에설명된 바와 같이 모든 시약의 재고 용액을 준비한다. 매니톨과 자당의 주식을 37°C로 따뜻하게 하여 완전히 녹입니다. 시약을 섞어 2배 MAS를 준비한 다음 혼합물을 37°C로 데우도록 데우게 합니다. 5N KOH를 7.4(~7mL)로 조정한 다음 물을 추가하여 최대 1L. 필터 살균을 하고 측정일까지 -20°C에 알리쿼트...

<ol>
	<li>Gerencser, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+microplate-based+respirometry+with+correction+for+oxygen+diffusion.">Quantitative microplate-based respirometry with correction for oxygen diffusion.</a> Analytical Chemistry. 81 (16), 6868-6878 (2009).</li><li>Murphy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+function,+biology,+and+role+in+disease:+A+scientific+statement+from+the+American+Heart+Association.">Mitochondrial function, biology, and role in disease: A scientific statement from the American Heart Association.</a> Circulation Research. 118 (12), 1960-1991 (2016).</li><li>Owen, O. E., Kalhan, S. C., Hanson, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+key+role+of+anaplerosis+and+cataplerosis+for+citric+acid+cycle+function.">The key role of anaplerosis and cataplerosis for citric acid cycle function.</a> Journal of Biological Chemistry. 277 (34), 30409-30412 (2002).</li><li>Nicholls, D. G., Ferguson, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Bioenergetics 3. , (2002).</li><li>Brand, M. D., Nicholls, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+mitochondrial+dysfunction+in+cells.">Assessing mitochondrial dysfunction in cells.</a> Biochemical Journal. 435 (2), 297-312 (2011).</li><li>Sta&#328;kov&#225;, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+mitochondrial+substrate+flux+in+a+mouse+model+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">Adaptation of mitochondrial substrate flux in a mouse model of nonalcoholic fatty liver disease.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (3), 1101 (2020).</li><li>Salabei, J. K., Gibb, A. A., Hill, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+measurement+of+respiratory+activity+in+permeabilized+cells+using+extracellular+flux+analysis.">Comprehensive measurement of respiratory activity in permeabilized cells using extracellular flux analysis.</a> Nature Protocols. 9 (2), 421-438 (2014).</li><li>Divakaruni, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thiazolidinediones+are+acute,+specific+inhibitors+of+the+mitochondrial+pyruvate+carrier.">Thiazolidinediones are acute, specific inhibitors of the mitochondrial pyruvate carrier.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (14), 5422-5427 (2011).</li><li>Divakaruni, A. S., Rogers, G. W., Murphy, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+mitochondrial+function+in+permeabilized+cells+using+the+seahorse+XF+analyzer+or+a+Clark-type+oxygen+electrode.">Measuring mitochondrial function in permeabilized cells using the seahorse XF analyzer or a Clark-type oxygen electrode.</a> Current Protocols in Toxicology. 60, 1-16 (2014).</li><li>Elkalaf, M., T&#367;ma, P., Weiszenstein, M., Pol&#225;k, J., Trnka, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+probe+Methyltriphenylphosphonium+(TPMP)+inhibits+the+Krebs+cycle+enzyme+2-Oxoglutarate+dehydrogenase.">Mitochondrial probe Methyltriphenylphosphonium (TPMP) inhibits the Krebs cycle enzyme 2-Oxoglutarate dehydrogenase.</a> PLoS One. 11 (8), 0161413 (2016).</li><li>Rogers, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+throughput+microplate+respiratory+measurements+using+minimal+quantities+of+isolated+mitochondria.">High throughput microplate respiratory measurements using minimal quantities of isolated mitochondria.</a> PLoS One. 6 (7), 21746 (2011).</li></ol>

이 프로토콜은 이전에 게시된 연구7,8,9,10 및 제품 사용자 가이드를 수정한 것입니다. 제조업체의 프로토콜과 달리 2x MAS는 2× MAS가 용해하기 쉽고 동결 후 강수량을 형성하지 않기 때문에 3배 MAS 대신 사용됩니다. 냉동 2x MAS 별칭은 최대 6개월까지 저장하여 일관된 결과를 보여줄 수 있습니다. 또 다른 ...

마이크로플레이트 계 호흡학은 작은 샘플 크기1의세포 호흡 연구를 가능하게 함으로써 미토콘드리아 연구에 혁명을 일으켰습니다. 세포 호흡은 일반적으로 미토콘드리아 기능 또는 '기능 장애'의 지표로 간주됩니다, 기능의 미토콘드리아 범위가 에너지 생산을 넘어 확장한다는 사실에도 불구하고2. 호기성 조건에서, 미토콘드리아는 구연산 주기3(도 1)에연료를 공급할 수 있는 대사 중간체로 이러한 기판을 분해하고 변환하여 상이한 기판에 저장된 에너지를 추출한다. 기판의 연속 플럭스는 구연산 주기의 흐름에 필수적으로 높은 에너지 '전자 기증자'를 생성하여 전자를 전자 수송 사슬로 전달하여 내부 미토콘드리아 멤브레인을 가로질러 양성자 그라데이션을 생성하여 ATP-synthase를 ATP4로인계할 수 있게 한다. 따라서 미토콘드리아 호흡을 분석하는 실험적 설계에는 시료 특성(그대로 세포, 과구세포 또는 분리된 미토콘드리아) 및 미토콘드리아 기판을 포함해야 한다.
세포는 토착 기판5의저장을 유지하고, 미토콘드리아는 여러 종류의 기판을 동시에산화6,이는 그대로 세포에 수행 된 실험에서 얻은 결과의 해석을 복잡하게. 선택된 기판을 산화시키는 미토콘드리아 능력을 조사하는 일반적인 접근법은 미토콘드리아를 분리하거나 조사된 세포를 과미로 하는것이다 5. 고립 된 미토콘드리아는 정량적 연구에 이상적이지만 격리 과정은 힘들다. 큰 시료 크기, 수율의 순도 및 기술5의재현성 등의 기술적 어려움에 직면해 있다. 과미성세포는 미토콘드리아 절연의 단점에 대한 용액을 제공한다; 그러나, 세제 성질의 일상적인 충고제는 특이하지 않으며 미토콘드리아 막5를손상시킬 수 있다.
재조합 퍼프렌고리신 O(rPFO)는 선택적 혈장 막 과미경화제7으로제공되었고, 여러 연구에서 세포외 플럭스 분석기와 함께 성공적으로 사용되었다7,8,9,10. XFe96 세포외 플럭스 분석기를 사용하여 미토콘드리아 기질 플럭스를 검사하기 위해 rPFO를 사용하여 프로토콜을 수정했습니다. 이 프로토콜에서, 2개의 세포 표현형에 있는 4개의 다른 기질 산화 통로는 충분한 복제및 각 시험된 물질에 대한 적당한 통제를 가진 동안 비교됩니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adinosine 5&#8242; -diphosphate monopotassium salt dihydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A5285</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antimycin A</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A8674</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A3803</td>
			<td>store at 2 - 8 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone</td>
			<td>Merck</td>
			<td>C2920</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Merck</td>
			<td>D8418</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Mannitol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>63559</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate buffered saline</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N&#8242;,N&#8242;-tetraacetic acid</td>
			<td>Merck</td>
			<td>03777</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Merck</td>
			<td>H7523</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L(-)Malic acid disodium salt</td>
			<td>Merck</td>
			<td>M9138</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamic acid sodium salt hydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>G5889</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnissium chloride hexahydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>M2670</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligomycin</td>
			<td>Merck</td>
			<td>O4876</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palmitoyl-DL-carnitine chloride</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P4509</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hydroxide</td>
			<td>Merck</td>
			<td>484016</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P5655</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotenone</td>
			<td>Merck</td>
			<td>R8875</td>
			<td>store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse Wave Desktop Software</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td></td>
			<td>Download from www.agilent.com</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 Analyzer</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 FluxPak</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>102416-100</td>
			<td>XFe96 sensor cartridges and XF96 cell culture microplates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P2256</td>
			<td>store at 2 - 8 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium succinate dibasic hexahydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>S2378</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Merck</td>
			<td>S7903</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water</td>
			<td>Merck</td>
			<td>W3500</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF calibrant</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>100840-000</td>
			<td>store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF Plasma membrane permeabilizer</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>102504-100</td>
			<td>Recombinant perfringolysin O (rPFO) - Aliquot and store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring mitochondrial substrate flux in recombinant perfringolysin o-permeabilized cells

미토콘드리아 기질 플럭스는 각 세포 유형의 구별되는 특성이며, 수송기, 채널 또는 효소와 같은 성분의 변화는 여러 질병의 발병기전에 관여한다. 미토콘드리아 기질 플루는 그대로 세포, 과밀 세포 또는 분리된 미토콘드리아를 사용하여 연구될 수 있다. 그대로 세포를 조사하는 것은 다른 기판의 동시 산화로 인해 여러 가지 문제가 발생합니다. 게다가, 몇몇 세포 모형은 결과 해석을 복잡하게 하는 다른 기판의 내부 상점을 포함합니다. 미토콘드리아 절연 또는 투과성 제제를 사용하는 것과 같은 방법은 쉽게 재현할 수 없습니다. 작은 견본에서 충분한 양에 있는 그대로 막으로 순수한 미토콘드리아를 격리하는 것은 문제가 됩니다. 비선택적 과미빌라이저를 사용하면 피할 수 없는 미토콘드리아 막 손상의 다양한 정도를 유발합니다. 재조합 퍼프렌고리신 O(rPFO)는 미토콘드리아 무결성에 영향을 미치지 않으면서 플라즈마 멤브레인을 선택적으로 투과화할 수 있는 능력 덕분에 보다 적절한 퍼미알로이저로 제공되었다. 마이크로 플레이트 호흡측정기와 함께 사용하면 최소한의 수의 세포를 사용하는 동안 한 실험 내에서 충분한 복제로 여러 미토콘드리아 기판의 플럭스를 테스트할 수 있습니다. 본 작품에서, 프로토콜은 2개의 상이한 세포 표현형 또는 유전자형의 미토콘드리아 기질 플럭스를 비교하고 각종 미토콘드리아 기판 또는 억제제를 시험하기 위하여 사용자 정의될 수 있는 방법을 기술합니다.

먼저 결과를 기준선 호흡의 두 번째 측정값으로 정상화하여 산소 소비율 비율(OCR%)으로 값을 표시합니다. 분석 결과는 그림 5, 그림 6, 그림 7 및 그림 8에표시됩니다. 각 그룹에 적합한 배경 우물을 할당하고 다른 그룹의 배경 우물을 비활성화하는 것이 중요합니다. ?...

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Measuring Mitochondrial Substrate Flux in Recombinant Perfringolysin O-Permeabilized Cells

이 작품에서는, 우리는 마이크로 플레이트 기지를 둔 호흡측정과 조합하여 재조합 퍼프렌고리신 O를 사용하여 미토콘드리아 호흡 기질 플럭스를 시험하기 위하여 수정된 프로토콜을 기술합니다. 이 프로토콜을 통해 메트포르민이 두 개의 다른 종양 세포주의 미토콘드리아 호흡에 어떻게 영향을 미치는지 보여줍니다.

재조합 퍼프렌고리신 O-퍼메아빌화 세포에서 미토콘드리아 기질 플럭스 측정

Mitochondrial substrate flux is a distinguishing characteristic of each cell type, and changes in its components such as transporters, channels, or ...

그것은 다른 병리 또는 치료에 영향을 받을 수 있는 미토콘드리아 기질 플럭스를 테스트 하기 때문에. 예를 들어, 오늘 우리는 메트포르민 치료에 암 세포 반응을 밝히기 위해 그것을 사용할 것입니다. 그것은 각 별개의 물질에 대한 충분한 복제 및 적절한 제어를 하면서 세포의 최소한의 수를 필요로한다.분석기는 연구용전용입니다. 이 기술은 미토콘드리아 대사의 오류를 식별할 수 있으며 미토콘드리아에 영향을 미치는 전사 약물을 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 절차를 시연하는 것은 카롤리나 바네코바 (Karolina Vaneckova)가 내 실험실에서 학부 학생 및 연구 기술자가 될 것입니다.종자 A549 세포를 기둥당 20, 000 세포의 밀도로 시작하려면, 해마 XF 96 세포 배양 마이크로 플레이트의 2 내지 11. 열 1과 12를 배경 우물로 비워 둡니까. 빈 우물을 세포 배양 배지의 동일한 부피로 채운 다음, 세포 부착을 위한 5%의 이산화탄소로 가습된 인큐베이터에서 37도의 세포배양증을 한다.3~4시간 후에 Wells에 세포 배양 배지 100마이크로리터를 추가합니다. 실험군 컬럼 7내지 11개를 밀리몰러 메트포르민 1개, 대조군으로 처리한 다음, 배관을 배양기로 되돌려 놓는다. 센서에 수분을 공급하기 위해 파이프 200 마이크로리터당 멸균 물을 유틸리티 플레이트에 잘 넣습니다.그런 다음 센서카트리지를 조심스럽게 반환하면서 센서를 물에 담급니다. 다음날까지 이산화탄소 무료 인큐베이터에 카트리지를 증양합니다. 분석기와 제어 장치를 켭채합니다.계측기 제어 및 데이터 수집 소프트웨어를 시작하고 텍스트 원고에 설명된 대로 분석 프로토콜을 디자인합니다. 그룹 정의에 따라, 포트 A가 주입된 기판에 따라 다른 네 가지 사출 전략을 만들고 기판 또는 약어 후 전략의 이름을 지정합니다. 포트 B, FCCP를 포트 C및 로테네 안티마이신 A 혼합물에 할당하여 플레이트 맵 아래에 있는 8개의 그룹을 포트D.Create 및 이름을 지정하여 해당 웰스에 그룹을 할당합니다.그런 다음 템플릿을 사용할 준비가 된 프로토콜을 저장합니다. 온도가 하룻밤 사이에 안정될 수 있도록 분석기 스위치를 켜두십시오. 다음 날, 유틸리티 플레이트에서 물을 버리고 유틸리티 플레이트에 잘 당 미리 따뜻하게 교정의 200 마이크로 리터를 추가합니다.카트리지를 분석 시간까지 이산화탄소 무료 인큐베이터로 되돌려 보입니다. 인큐베이터 내부의 습도원을 유지하고 교정기의 급속한 증발을 피하기 위해 팬 속도를 최소한으로 끄거나 줄입니다. 텍스트 원고에 설명된 바와 같이 기판 및 억제제의 작동 용액 5밀리리터를 미리 따뜻하게 2회 미토콘드리아 분석 용액, 5%BSA 및 멸균물로 준비한다.다음으로, 세무 원고에 설명된 바와 같이 기판 및 억제제로 인젝터 포트를 로드합니다. 실행 분석 탭에서 교정하려면 시작 실행을 클릭하여 분석기를 시작합니다. 로드된 검열 카트리지를 삽입하고 보정이 완료될 때까지 기다립니다.20 밀리리터의 분석 매체를 제조하여 미토콘드리아 분석 용액, 멸균 수및 50 밀리리터 튜브에 5%BSA를 혼합하여 준비합니다. 10 마이크로 몰러 재조합 퍼프렌고리신 O의 두 마이크로 리터를 추가, 하나의 나노 몰러의 농도를 달성하기 위해. 그리고 부드러운 파이펫팅으로 혼합물을 다시 일시 중단하여 흔들림과 소용돌이를 피하십시오.사용 전까지 37°C에서 튜브를 배양합니다. 멀티 채널 파이펫을 사용하여 전온된 칼슘과 마그네슘 프리 PBS 용액을 사용하여 셀과 빈 웰을 두 번 세척할 수 있습니다. PBS를 폐기하고 세포 투과화를 위해 미리 따뜻해진 분석 매체의 180 마이크로리터를 추가합니다.투과화 직후 보정된 센서 카트리지의 유틸리티 플레이트를 과소 세포를 포함하는 세포판으로 교체하고 측정을 시작합니다. 치료 그룹은 간결한 유도 호흡의 더 높은 비율을 가졌다. 메트포르민 치료에 대한 A549 세포의 반응은 Hep G2보다 높았다. 피루바테 말레이트 유도 호흡의 경우, A549 세포는 5 분 에서 15 분 사이에 Hep G2 세포에 비해 증가 된 유도를 보였다.글루타민산염 에 대한 유사한 결과를 얻어내고 호흡과 팔미토일카르니틴 성모 유도 호흡을 유도하였다. 기판과 억제제의 적절한 농도를 달성한다. 올바른 볼륨을 오른쪽 포트에 로드해야 합니다.특정 기판의 대사 경로에 있는 변경이 확인될 때, 그 통로에 관련시키는 효소 및 수송자의 기능을 평가할 필요가 있을 것입니다.

Research

JoVE Journal

Biology

A Method For Production of Recombinant mCD1d Protein in Insect Cells.

곤충 세포에서 재조합 단백질의 생산 mCD1d하는 방법.

CD1 proteins constitute a third class of antigen-presenting molecules. They are cell surface glycoproteins, expressed as approximately 50-kDa glycosylated ...

연구

생물학

Probing for Mitochondrial Complex Activity in Human Embryonic Stem Cells

인간 배아 줄기 세포에서 Mitochondrial 복잡한 활동에 대한 탐색

Mitochondria are cytoplasmic organelles that have a primary role in cellular metabolism and homeostasis, regulation of the cell signaling network, and ...

Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

히드라의 글루타티온 유도 먹이 반응을 측정

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. ...

High-resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Permeabilized and Intact Cells

고해상도 호흡율은 투과성이 그대로 세포에서 미토콘드리아 기능을 평가하는

A high-resolution oxygraph is a device for measuring cellular oxygen consumption in a closed-chamber system with very high resolution and sensitivity in ...

Simultaneous Measurement of Mitochondrial Calcium and Mitochondrial Membrane Potential in Live Cells by Fluorescent Microscopy

형광 현미경으로 살아있는 세포의 잠재적 인 미토콘드리아의 칼슘과 미토콘드리아 막의 동시 측정

Apart from their essential role in generating ATP, mitochondria also act as local calcium (Ca2+) buffers to tightly regulate intracellular Ca2+ ...

Assessing Autophagic Flux by Measuring LC3, p62, and LAMP1 Co-localization Using Multispectral Imaging Flow Cytometry

Multispectral Imaging Flow Cytometry를 사용하여 LC3, p62 및 LAMP1 Co-Localization 측정을 통한 Autophagic Flux 평가

Autophagy is a catabolic pathway in which normal or dysfunctional cellular components that accumulate during growth and differentiation are degraded via ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

동적 세포 돌출부에서 소프트웨어를 이용한 단백질 농도 추적을위한 그래픽 사용자 인터페이스

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Transient Expression and Cellular Localization of Recombinant Proteins in Cultured Insect Cells

배양 된 곤충 세포의 과도 표현 및 재조합 단백질의 세포 현지화

Heterologous protein expression systems are used for the production of recombinant proteins, the interpretation of cellular trafficking/localization, and ...

Measurement of Energy Metabolism in Explanted Retinal Tissue Using Extracellular Flux Analysis

Explanted 망막 조직 세포 외 유출 분석을 사용 하 여 신진 대사 에너지의 측정

High acuity vision is a heavily energy-consuming process, and the retina has developed several unique adaptations to precisely meet such demands while ...