Name: tissue preparation techniques for contrast-enhanced micro computed tomography imaging of large mammalian cardiac models with chronic disease
Uploaded: 2022-02-08T14:00:00
Duration: 12 min 15 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tissue Preparation Techniques for Contrast-Enhanced Micro Computed Tomography Imaging of Large Mammalian Cardiac Models with Chronic Disease at JoVE.com

تلقت هذه الدراسة دعما ماليا من الحكومة الفرنسية كجزء من برنامج "استثمارات المستقبل" الذي تديره الوكالة الوطنية للبحوث (ANR) ، ومرجع المنح ANR-10-IAHU-04 ، ومؤسسة Leducq (شبكة RHYTHM) ، بالإضافة إلى مرجع المنح ANR-17-CE14-0029-01 [UNMASC] ، والتمويل من منطقة الأبحاث الأوروبية في أمراض القلب والأوعية الدموية (ERA-CVD) ، ومرجع المنح H2020-HCO-2015_680969 [MultiFib] والتمويل من المنطقة الفرنسية Nouvelle Aquitaine ، مراجع المنح 2016 - 1R 30113 0000 7550/2016-1R 30113 0000 7553 و ANR-19-ECVD-0006-01.

تم إجراء جميع التجارب وفقا للمبادئ التوجيهية الواردة في التوجيه 2010/63/EU الصادر عن البرلمان الأوروبي بشأن حماية الحيوانات المستخدمة للأغراض العلمية. تمت الموافقة على البروتوكولات الحيوانية من قبل اللجنة الأخلاقية المحلية (CEEA50) في جامعة بوردو. تم الحصول على القلوب من ثلاثة نماذج كبيرة من الثدييات ، بما في ذلك (i) الخنازير البيضاء الكبيرة الصحية (N = 2 ، 2 أشهر من العمر) ؛ (ii) الأغنام (N = 1 ، 2 سنة) مع احتشاء عضلة القلب المستحث13 و (iii) الأغنام (N = 1 ، 7 سنوات) مع الرجفان الأذيني المستحث30.
1. إعداد الحل:
<ol><li>محلول الشلل القلبي: تحضير 3 لتر من الماء المقطر وإضافة كلوريد الصوديوم (110 ملليمتر) ، كلوريد البوتاسيوم (16 ملليمتر) ، بيكربونات الصوديوم (10 ملليمتر) ، D-(+)-الجلوكوز (9 ملليمتر) ، محلول كلوريد الكالسيوم (1.2 ملليمتر) ومحلول كلوريد المغنيسيوم (16 ملليمتر). في النهاية ، أضف 500 ميكرولتر / لتر من الصوديوم الهيبارين. حافظ على هذا الحل عند 4 درجات مئوية.</li>
	<li>محلول ملحي مخزن بالفوسفات - محلول EDTA (PBS-EDTA).<ol>
<li>أولا ، أضف حمض الإيثيلين ديامين رباعي أسيتيك (EDTA) إلى 1 لتر من الماء المقطر للحصول على تركيز نهائي قدره 10 ملليمتر. زيادة والحفاظ على درجة الحموضة محلول من 12 باستخدام محلول هيدروكسيد الصوديوم (1 M) لإذابة EDTA.</li>
		<li>بمجرد إذابة EDTA بالكامل ، اخفض الرقم الهيدروجيني إلى 7.4 باستخدام حمض الهيدروكلوريك. أضف كيسا واحدا من الرقائق المالحة العازلة بالفوسفات للحصول على محلول عند 0.01 M (كلوريد الصوديوم ، 0.138 M ؛ كلوريد البوتاسيوم ، 0.0027 M) والرقم الهيدروجيني 7.4. حافظ على هذا الحل في درجة حرارة الغرفة (RT).</li>
	</ol>
</li>
	<li>محلول عامل تباين الإيثانول - حمض الفوسفوموليبديك (PMA): تحضير 1 لتر من الإيثانول المطلق وإضافة PMA للحصول على محلول عند 1٪ من التركيز. حافظ على هذا الحل في RT.</li>
</ol>2. مصدر الأنسجة
<ol><li>القتل الرحيم للحيوان واستخراج القلب وفقا للمبادئ التوجيهية الأخلاقية المحلية. اغمر القلب بسرعة في محلول شلل القلب البارد وقم بتدليك البطينين بلطف للشطف الأولي.</li>
	<li>تأكد من قطع الشريان الأورطي أسفل قوس الأبهر وربط جانبين من جدار الشرايين باستخدام حاملات الإبرة.</li>
	<li>تعليق القلب بواسطة حاملات الإبر ، أدخل قنية الأبهر في جذر الأبهر ، مع الحرص على عدم الاتصال أو البروز من خلال الصمامات الأبهرية. لف خيطة قياس 0 حول قوس الأبهر على مستوى القنية واربط القنية بإحكام في مكانها.</li>
	<li>باستخدام محاقن 50 مل ، حقن 200 مل من محلول القلب البارد (4 درجات مئوية). إزالة تجمع الدم الزائد في التجاويف عن طريق قلب القلب على جانبه الخلفي لتصريفه عبر الأوردة الرئوية.</li>
	<li>اغمري القلب المغسول واحفظيه في محلول قلبي بارد مخزن على الثلج حتى يصبح جاهزا للتشريح.</li>
</ol>3. إعداد الأنسجة:
<ol><li>قم بإعداد خزان سعة 1 لتر مدعوم ب 80 سم فوق طبق تشريح. قم بإقران أنبوب بلاستيكي حراري بطول 80 سم وقطر داخلي 3.2 مم وقطر خارجي 4.8 مم إلى منفذ تصريف الخزان.</li>
	<li>قم بإصلاح صنبور ثلاثي الاتجاهات على أنابيب الصرف الصحي وقم بإقران أنابيب بلاستيكية حرارية أخرى (20 سم وقطر داخلي 1.6 مم وقطر خارجي 3.2 مم) لكل منفذ حر على الصنبور ثلاثي الاتجاهات. قم بإصلاح الصنابير ثنائية الاتجاه إلى نهايات الرسوم للأنابيب.</li>
	<li>املأ الخزان بمحلول الشلل القلبي المكمل بالهيبارين (2500 وحدة). افتح الصنابير للسماح للمحلول القلبي بتصريف وإزالة جميع فقاعات الهواء ، ثم أغلق الصنابير ثنائية الاتجاه.</li>
	<li>تحضير قنية لأوستيا الشريان التاجي الأيسر والأيمن باستخدام أنابيب البولي تترافلورو إيثيلين (PTFE) (قطر داخلي 1 مم وقطر خارجي 2 مم).<ol>
<li>قطع 5 سم من الأنابيب وتسخين طرف واحد عن طريق وضع الطرف بجانب لهب عارية. بمجرد أن يبدأ 1 مم من الطرف في الذوبان ويصبح شفافا ، اضغط على الطرف ضد سطح مقاوم للحرارة الصلبة لتشكيل سلسلة من التلال عند طرف القنية لمنع القنية من الانزلاق من الأوعية.</li>
		<li>أدخل 1 سم من الطرف غير المسخن لكل قنية في طرفي أنابيب تصريف خزان الصرف.</li>
	</ol>
</li>
	<li>إزالة قنية الأبهر. تحت محلول القلب البارد ، قم بتوطين أوستيا اليسرى واليمنى للشرايين التاجية.</li>
	<li>باستخدام مقص مدبب ، افصل بعناية جذر الأبهر عن الأنسجة المحيطة فوق وأسفل أوستيا الشريان التاجي لتمكين خيوط خياطة حريرية 0 غرام تحت الوعاء التاجي.</li>
	<li>افتح الصنابير ثنائية الاتجاه وأدخل أطراف القنية في أوستيا الشريان التاجي. مع أطراف القنية التي تمتد 1-2 سم إلى أوستيا وخارج وضع الخيط ، اربط الكانيولا.</li>
	<li>شطف القلب أثناء تدليك البطينين بلطف لمدة 15 دقيقة حتى يتم تطهير القلب من الدم.</li>
	<li>بعد الشطف ، أغلق الصنابير ثنائية الاتجاه وافصلها عن الصنبور ثلاثي الاتجاهات. انقل القلب إلى حاوية بلاستيكية مقاومة للمواد الكيميائية سعة 1 لتر تحتوي على 500 مل من محلول PBS-EDTA.</li>
	<li>أعد تدوير محلول PBS-EDTA في أنابيب اللدائن الحرارية تحت غطاء الدخان باستخدام مضخة تمعجية مع قناتين. قم بتعبئة أنبوب المضخة حتى تغيب الأنابيب عن فقاعات الهواء ، ثم قم بفحص كل قنية شريان تاجي عن طريق إعادة التدوير في RT لمدة 2 ساعة عند 80 مل / دقيقة.</li>
	<li>تأكد من أن غطاء الدخان يعمل. أوقف المضخة ، واستنزف المحلول من الحاوية واستبدله بالفورمالين (10٪) للتثبيت لمدة 1 ساعة في RT عند 80 مل / دقيقة.</li>
	<li>استبدل محلول الفورمالين ب PBS لشطف المثبت ثلاث مرات لمدة 15 دقيقة لكل منهما عند 80 مل / دقيقة.</li>
</ol>4. جفاف الأنسجة وتجفيفها:
ملاحظة: استخدم نفس معدل التروية (80 مل / دقيقة) واترك الأنسجة تبقى في RT طوال الوقت.
<ol><li>استبدل محلول PBS بالإيثانول بنسبة 20٪ ، المخفف في الماء فائق النقاء ، وقم بتشغيله لمدة لا تقل عن 3 ساعات.</li>
	<li>قم بدمج القلب باستخدام سلسلة من تركيزات الإيثانول المتزايدة.<ol>
<li>ابدأ باستبدال محلول الإيثانول بنسبة 20٪ بالإيثانول المخفف إلى 30٪ وبيرفيس لمدة 2 ساعة.</li>
		<li>كرر التروية عن طريق زيادة تركيز الإيثانول في كل تكرار من خلال 40٪ ، 50٪ ، 60٪ ، 65٪ ، 70٪ ، 75٪ ، 80٪ ، 95٪ ، 90٪ ، 95٪ ، 99٪ ، و 100٪ لمدة لا تقل عن 1 ساعة في كل خطوة (تركيز). ملاحظة: قد تستريح عينات القلب دون تدفق التروية بين عشية وضحاها عند أي تخفيف للإيثانول إذا حدث الحد الأدنى من التروية لمدة 15 دقيقة لهذا التركيز.</li>
	</ol>
</li>
	<li>اختياري: في حالة تطبيق عوامل التباين عن طريق التروية ، قم بدمج القلب مع الإيثانول بنسبة 100٪ مع عامل التباين PMA ، 1٪ لمدة 48 ساعة. شطف عامل التباين عن طريق التروية مع الإيثانول 100٪ لمدة 2 ساعة.</li>
	<li>لتعزيز أنسجة القلب قبل التجفيف الهوائي ، أعد تدوير مزيج 50:50 من الإيثانول وسداسي ميثيل ديسيلازان (HMDS) لمدة 10 دقائق. اتبع هذا بنسبة 100٪ HMDS لمدة 2 ساعة أخرى. تحذير: HMDS مادة شديدة السمية وضارة. يتم إطلاق رائحة قوية من الأمونيا في اتصال مع الهواء. علاوة على ذلك ، فإن الشكل السائل من HMDS متقلب للغاية ويتم تحفيزه بواسطة عوامل تحتوي على اليود.</li>
	<li>افصل القنية عن الأنابيب القلب من خياطة الأبهر داخل غطاء الدخان.</li>
	<li>حرك كيس بسحاب بعناية فوق القلب وأغلق ختم الكيس فوق الخيط لتقليل تعرض القلب للهواء المتداول. اترك القلب ليجف من خلال التبخر لمدة 1 أسبوع.</li>
	<li>اختياري: بالنسبة لعوامل التباين التي يتم تحميلها على الانتشار، اغسل القلب بالإيثانول بنسبة 100٪ لمدة 15 دقيقة أثناء التحريض. غمر القلب في 100 ٪ الإيثانول المكمل مع PMA ، 1 ٪ ، لمدة 48 ساعة تحت فراغ. كرر الخطوة 4.6.</li>
</ol>5. ميكرو سي تي:
ملاحظة: تم استخدام نظام microCT للأشعة السينية لسطح المكتب لتصوير قلوب الخنازير.
<ol><li>قم بتركيب القلب المجفف بالهواء على حامل عينات مناسب. منع أي حركة أثناء قياسات التصوير المقطعي المحوسب المجهري بالأشعة السينية باستخدام مشبك مثبت على حامل العينة وتأمين القلب عبر الشريان الأورطي المجفف والصلب.</li>
	<li>قم بمحاذاة مركز عينة القلب بدقة على طول محورها الطولي مع مركز مجال رؤية التصوير لزوايا دوران 0 درجة و 90 درجة. لتحقيق ذلك في جميع الاتجاهات، القلب في الهواء عبر مشبك الأبهر المثبت على دعم العينة.</li>
	<li>بعد فتح البرنامج وبدء تشغيل نظام microCT للأشعة السينية ، قم بتطبيق مرشح الأشعة السينية الألومنيوم ، 1 مم ، جهد مصدر الأشعة السينية إلى 60 كيلو فولت والتيار إلى 120 ميكرو أمبير.</li>
	<li>اسحب حامل العينة خارج مجال الرؤية ومعايرة صورة الخلفية ووقت التعرض للأشعة السينية من خلال الحصول على تصحيح حقل مسطح. تأكد من أن متوسط انتقال الأشعة السينية في الخلفية أكبر من 80٪.</li>
	<li>صور انتقال الأشعة السينية الكشفية على طول الدعم لتحديد مجال التصوير الكلي في المحور الطولي للقلب. للمسح الضوئي، استخدم خطوة دوران تبلغ 0.18 درجة، وإطارا يبلغ متوسطه 5، ودوران عينة يبلغ 180 درجة. حدد وضع المسح الضوئي للإزاحة لتصوير العرض الكامل لدعم العينة. ملاحظة: تم اختيار معلمات الاكتساب المشار إليها في هذا القسم لتحسين جودة صورة تكوين قلب المجموعة.</li>
	<li>بعد المسح الضوئي ، استخدم البرنامج لإعادة البناء المقطعي لحجم صورة ثلاثي الأبعاد متساوي الخواص. لتطبيق برنامج NRecon ، استخدم تصحيح القطع الأثرية المتعلقة بالاقتناء ، بما في ذلك تأثيرات تصلب الحزم بنسبة 10٪ وتقليل القطع الأثرية الحلقية بنسبة 8.</li>
	<li>لتحسين قيود تخزين البيانات، قم بتطبيق الحد الأدنى من المنطقة المستطيلة ذات الأهمية التي تشمل voxels الصور الخاصة بالقلب. تصدير الصور بتنسيق نقطي 8 بت كمكدس صور.</li>
	<li>تصور مكدس البيانات المعاد إنشاؤه باستخدام برنامج DataViewer. قم بتوجيه العينة رقميا داخل حدود الصورة لإعادة محاذاة محاور العينة الطويلة والقصيرة مع المحاور الرئيسية الثلاثة لحجم الصورة.</li>
	<li>اقتصاص حجم الصورة في جميع المحاور الثلاثة لإزالة طبقات الخلفية الخارجية للصورة، لتقليل الحجم الإجمالي للصورة إلى أقصى حد.</li>
</ol>

تم وضع بروتوكول مفصل لمستحضرات الأنسجة الكبيرة باستخدام قلوب كاملة من الثدييات الكبيرة للتصوير الهيكلي عالي الدقة اللاحق. أزال نهج تجفيف الهواء تأثيرات توهين الأشعة السينية في الخلفية وتحسين الأنسجة إلى أقصى حد: تباين الخلفية29. باستخدام هذا النهج ، تم تحقيق دقة متساوية في حدود 20 ميكرومتر للتصوير الحجمي عبر عينات يصل قطرها إلى 7.2 سم. ومع ذلك ، يعتمد MicroCT للأنسجة الرخوة عادة على استخدام عوامل تباين غير محددة لتحسين امتصاص الأشعة السينية وحساسية أنظمة microCT34. على الرغم من أن عوامل تباين الأشعة السينية تحسن التوهين العام للأشعة السينية وتعزيز تصوير الأنسجة الرخوة ، إلا أن فصل مكونات الأنسجة على أساس التركيب الكيميائي الحيوي لا يزال يمثل تحديا. ومع ذلك ، لوحظ أن استخدام القلوب المجففة بالهواء مع عامل تباين الأشعة السينية الشائع في الإعداد المختبري ، PMA ، ملطخ بشكل انتقائي مكونات خارج الخلية. تم تعزيز النسيج الضام المرتبط بعضلة القلب الصحية وإعادة التشكيل الهيكلي المرضي في الأمراض المزمنة.
تتطلب عملية تجفيف الأنسجة البيولوجية بالهواء تدخلا لمقاومة تشوه العينة. إعداد عينة للمجهر الإلكتروني له متطلبات مماثلة. عادة ، يتم استخدام طريقة تجفيف النقاط الحرجة ، والتي تستخدم توازنا بين وسط غمر الأنسجة ودرجة الحرارة والضغط للقضاء على التوتر السطحي لمحتوى السائل في الأنسجة ، والذي يسبب تشوها على المستوى الجزيئي عند التبخر35. يتطلب هذا النهج استبدالا موحدا لمحتوى الماء في العينة بثاني أكسيد الكربون السائل ، وهو أكثر موثوقية في العينات الصغيرة والقابلة للانتشار بسهولة. بدلا من ذلك ، يمكن تحسين السلامة الهيكلية للأنسجة وتجفيف الهواء ، أي يمكن تطبيق مرحلة التبخر على مدى فترة أطول لتقليل التشوه الكلي. يخضع جزيء HMDS للسيليل لتشكيل سقالة قائمة على السيليكون لتعزيز واستقرار التنظيم الجزيئي لعينة الأنسجة36. يتم إطالة أمد التبخر عن طريق الحد من التيارات الهوائية المتداولة من البيئة ، وكذلك لتجنب التبخر غير المتجانس ، خاصة بين سطح العينة والطبقات الداخلية.
تم استخدام العديد من عوامل التباين سابقا للتصوير المقطعي المحوسب للأنسجة الرخوة. الأكثر شيوعا هي اليود وحمض الفوسفوتونجستيك (PTA) و PMA. وقد استخدم اليود على وجه الخصوص بسبب ارتفاع معدل الانتشار 34،37،38. ومع ذلك ، يعمل اليود كمحفز لسيليلات كاشف HMDS36. التفاعل المحفز عدواني وطارد للحرارة ، مع وجود خطر كبير لتدمير العينة ومخاطر السلامة إذا بقيت HMDS المتبقية بسبب الجفاف غير الكامل للعينة. يمكن استخدام كل من PTA و PMA المذاب في الإيثانول بأمان بالتزامن مع HMDS. وقد ثبت أن PTA و PMA يوفران قوة حل أكبر للهياكل الدقيقة في الأقراص الفقرية غير المعدنية عند مقارنتها بتلطيخ اليود38. في التصوير المقطعي المحوسب المجهري لعينات الثدييات ، تم استخدام PTA و PMA لتلطيخ أجنة الفئران39 ، ونظام القلب والأوعية الدموية للفئران37 ، وعضلات الأرانب والدماغ40 ، والأوردة الخنازير41. PTA لديه كتلة جزيئية أعلى وكثافة في محلول من PMA. ويرجع ذلك جزئيا إلى ارتفاع الكتلة الذرية للتنغستن (العدد الذري هو 74 جم / مول) ، وهو العنصر الموهن الرئيسي في PTA. وبالمقارنة، فإن أثقل عنصر في PMA، الموليبدينوم، لديه عدد ذري يبلغ 42 جم/مول. كل من الكتلة الذرية وكثافة العينة تكمن وراء توهين الأشعة السينية ، بالإضافة إلى سمك العينة42. زيادة طول مسار الأشعة السينية عن طريق زيادة أحجام العينات، يصبح توهين الأشعة السينية أكثر حساسية لزيادة كثافة العينة. لذلك ، تم اختيار عامل تباين PMA منخفض الكثافة لتقليل خطر التوهين الزائد وتحسين النطاق الديناميكي لتباين الصور للقلوب ذات الحجم الشبيه بالإنسان. وقد أظهرت أدلة أخرى أن تحميل الانتشار من PMA يعطي تلطيخا أكثر تجانسا من الجزيء الأكبر PTA في أنسجة القلب43.
تؤثر طريقة توصيل عامل التباين على توحيد توزيع عامل التباين في أنسجة القلب (الشكل 3). أظهر تروية عوامل التباين في القلب المجفف بالإيثانول مستويات تلطيخ خلفية غير مكتملة من PMA بسبب مقاومة الأوعية الدموية المتغيرة. في القلب المجفف بالهواء ، يتم التأكيد على البنية الصفائحية للعضلات من خلال عملية تجفيف العينة ، مما يزيد من الفصل الرقائقي للعضلات. أدى ذلك في النهاية إلى تحسين النفاذية الكلية للأنسجة لتحميل عامل التباين القائم على الانتشار. ونتيجة لذلك، سهل تجفيف الهواء الأنسجة: تباين الهواء على المستويات الصفائحية وداخل الصفيحة (الشكل 4). علاوة على ذلك ، يمكن تسهيل تحميل الانتشار عن طريق التطبيق تحت فراغ. وقد تبين كذلك أن انكماش الأنسجة من العينات غير المجففة يعتمد على تركيز عامل التباين40. ومع ذلك ، فإن التثبيت المورفولوجي السابق للعينة عن طريق تجفيف الهواء يمنع آثار انكماش الأنسجة29.
تنتج صور microCT عالية الدقة لأعضاء كاملة بطبيعتها كميات كبيرة من البيانات. تتيح طبيعة تقنيات التصوير المقطعي التصور ومعالجة الصور على أساس كل شريحة على حدة ، مما يخفف من معالجة الكمبيوتر وعبء الذاكرة. ومع ذلك ، لتصور مكدسات الصور ثلاثية الأبعاد ، على سبيل المثال ، لتقديم أحجام العينات في تمثيلات ثلاثية الأبعاد ، فإن الحد الأدنى الموصى به من مواصفات الكمبيوتر هو 128 غيغابايت من ذاكرة الوصول العشوائي وسرعة المعالج 3 غيغاهرتز.
يوفر ظهور التصوير المقطعي المحوسب المصغر في مجال القلب العديد من المزايا للدراسات الانتقالية والتحقق السريري. وقد أظهرت مزايا التصوير ثلاثي الأبعاد والميكرومتري بالفعل تطبيقات في تحديد العبء الخثاري لمرضى نقص تروية عضلة القلب ST-elevation44,45. يعتمد رسم خرائط المصادر المحتملة لعدم انتظام ضربات القلب لدى مرضى أمراض القلب الهيكلية إلى حد كبير على تحديد توزيع النسيج الندبي الليفي وتوطين المسارات المتشابكة لعضلة القلب الباقية على قيد الحياة. تستخدم مناهج الخط الثاني لتشخيص عدم انتظام ضربات القلب البطيني التصوير بالرنين المغناطيسي46. يمكن أن يحدد موقع التليف الكثيف بقوة ولكنه يقتصر على التوصيف المورفولوجي منخفض الدقة ويقدم نظرة محدودة على إعادة تشكيل البنية الدقيقة والتوزيعات المنتشرة للآفات الليفية47. الفحص عالي الدقة لتوزيع الندوب وتوصيفها لديه إمكانات هائلة لتحسين فهمنا لإعادة تشكيل القلب الهيكلي وخطر الإصابة بقصور القلب. على وجه الخصوص ، ستستفيد الدراسات البحثية الأساسية أو تحقيقات ما بعد الوفاة من الصور الهيكلية الداعمة لرسم الخرائط الكهربائية لعدم انتظام ضربات القلب.
في الختام ، يمكن تلطيخ القلوب المعززة بمعالجة HMDS وتجفيف الهواء لاحقا بعامل تباين الأشعة السينية لتعزيز توهين الأشعة السينية للمكونات خارج الخلية. على وجه التحديد ، في عضلة القلب الصحية ، يحدث تراكم PMA في الظهارة ، والأنسجة الصمامية ، ومقصورات نظام التوصيل البطيني المغلف بالنسيج الضام مما أدى إلى تعزيز توهين الأشعة السينية. علاوة على ذلك ، في عضلة القلب المريضة هيكليا ، كان التباين المعزز انتقائيا أكثر للتليف.

تمثل أمراض القلب الهيكلية غالبية الوفيات المرتبطة بالقلب في جميع أنحاء العالم1. إعادة تشكيل بنية القلب يؤثر على بيئة عضلة القلب والفضاء الخلالي. نظرا لأن كل من الوظيفة الكهربائية والميكانيكية للقلب تعتمد على تنظيم الخلايا العضلية ، يمكن أن يؤدي الاضطراب إلى عدم انتظام ضربات القلب الذي لا يطاق ، وضعف إجراءات ضخ الدم ، وفشل القلب2،3،4،5،6،7،8،9. تطورات العلاجات العلاجية لأمراض القلب الهيكلية تفوق بكثير انتشار المرض 2,5. على هذا النحو ، تظهر أعداد متزايدة من النماذج قبل السريرية لأمراض القلب الهيكلية لفهم أفضل للملامح التشريحية المورفولوجية والتسبب الناتج عن عدم انتظام ضربات القلب 10،11،12،13،14،15،16،17،18،19،20 ، 21,22,23. لوحظ عبر طيف الأمراض الهيكلية هو زيادة تنظيم التليف الخلالي ، وأكثر شيوعا في الحالات المتعلقة بنقص التروية ، استبدال عضلة القلب بالتليف والأنسجة الدهنية18. يمكن أن يتيح الفهم المورفولوجي للمكونات المرضية خارج الخلية تحديد الركائز المحتملة لعدم انتظام ضربات القلب. يوفر توزيع المرض ومداه مؤشرات قوية على خطر عدم انتظام ضربات القلب. ومع ذلك ، لا تزال هناك تحديات لتصوير ملامح الأمراض بشكل شامل من خلال دمج المقاييس الكلية والدقيقة في القلب السليم.
يظهر التصوير المقطعي المحوسب الدقيق (microCT) ، القائم على الأشعة السينية ، كأداة قوية لاستجواب البنية المجهرية للأنسجة البيولوجية الرخوة باستخدام عوامل التباين. تم الحصول على خرائط تشريحية مفصلة للغاية للقلوب من القوارض الصغيرة 24،25،26 وعينات تشريح صغيرة من قلوب الثدييات الكبيرة27،28. ومع ذلك ، فإن التصوير على مستوى العضو بأكمله لقلوب الثدييات الكبيرة يعرض أطوال مسار مفرطة يتم من خلالها تخفيف فوتونات الأشعة السينية باستخدام تقنيات تحضير الأنسجة التقليدية. وهذا ينطوي على تحميل الأنسجة على النقيض من ذلك وغمر العينة في مذيب عامل التباين أثناء الاستحواذ. وتفرض زيادة حجم العينة ودقتها إطالة أمد إجمالي وقت الاقتناء. لذلك يصبح استقرار الأنسجة أمرا بالغ الأهمية لإعادة بناء الصور القابلة للاستخدام ، مما يعني أنه يجب منع تشوه الأنسجة الناتج عن التجفيف. ومع ذلك ، فإن استخدام سائل الغمر له عيوب: (i) تصبح كثافة إشارة الخلفية الإجمالية غير ضئيلة و (ii) تعزز تخفيف جزيئات التباين المرتبطة بالأنسجة. يساهم كل من هذين العاملين في تقليل تباين الصورة.
تفصل هذه الدراسة خط أنابيب جديد لمعالجة الأنسجة للتخفيف من توهين الفوتون في الخلفية وتحسين النطاق الديناميكي الذي توفره عوامل تعزيز التباين. يقترح استخدام نهج تجفيف الهواء للأنسجة مع تعزيز الأنسجة الكيميائية للحد من تشوه الأنسجة29. لذلك يمكن أن تظل عينات الأنسجة مستقرة في الهواء لعمليات الاستحواذ الطويلة وحذف مساهمات الخلفية من سوائل الغمر. يوفر خط أنابيب المنهجية هذا: (أ) بروتوكول شامل لمعالجة الأنسجة والتصوير الأمثل باستخدام قلوب الخنازير الكاملة. (ii) تقييم تركيز التباين وتقنيات التحميل، و (iii) تطبيق خط الأنابيب هذا في نموذجين متميزين من الأمراض المزمنة من الرجفان الأذيني واحتشاء عضلة القلب في قلوب الأغنام. تم وصف تطوير نماذج الأمراض المزمنة في مكان آخر لكل نموذج من نماذج أمراض القلب المزمنة ، واحتشاء عضلة القلب الناجم عن انصمام الشريان التاجي عن طريق الجلد13 والرجفان الأذيني المستدام ذاتيا30.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% neutral buffered formalin</td>
			<td>Diapath</td>
			<td>F0043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride solution</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>21114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Canulation Tubing PTFE</td>
			<td>VWR</td>
			<td>DENE3400102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant Head 1L Reservoir</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>50-0496</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G5767</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20821.330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>796881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium (5000 U/mL)</td>
			<td>Panpharma</td>
			<td>3400891287301.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexamethyldisilazane (HMDS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>440191-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid, ACS reagent, 37%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>258148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride solution</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>63020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5368</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphomolybdic acid hydrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>417895000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pump Tubing, 3-Stop</td>
			<td>Ismatec</td>
			<td>FV-96328-48</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SkyScan, 1276</td>
			<td>Bruker</td>
			<td></td>
			<td>micro CT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S3014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide solution 50% in H2O</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>415413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube Connector Kits</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-1407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing pump</td>
			<td>Ismatec</td>
			<td>ISM 1089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing Tygon R-3603 1.6 mm 3.2 mm 0.8 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>228-1279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing Tygon R-3603 3.2 mm 4.8 mm 0.8 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>228-1283</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Two-part single-use syringes 50 mL</td>
			<td>Norm-Ject</td>
			<td>4850001000</td>
			<td>Pyrogen-free, PVC-free</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tissue preparation techniques for contrast-enhanced micro computed tomography imaging of large mammalian cardiac models with chronic disease

إعادة التشكيل الهيكلي هي نتيجة شائعة للضغوط المرضية المزمنة المفروضة على القلب. يعد فهم الخصائص المعمارية والتركيبية للأنسجة المريضة أمرا بالغ الأهمية لتحديد تفاعلاتها مع السلوك غير المنتظم. تظهر إعادة تشكيل الأنسجة المجهرية ، دون الدقة السريرية ، كمصدر مهم لعدم انتظام ضربات القلب القاتل ، مع انتشار مرتفع بين الشباب. لا تزال هناك تحديات في الحصول على تباين تصوير عال بدقة ميكروسكيل كافية للنماذج قبل السريرية ، مثل قلوب الثدييات الكبيرة الكاملة. علاوة على ذلك ، لا يزال هناك نقص في تحسين التباين الانتقائي لتكوين الأنسجة للتصوير ثلاثي الأبعاد عالي الدقة. يظهر التصوير غير المدمر باستخدام التصوير المقطعي المحوسب الدقيق وعدا بالتصوير عالي الدقة. وكان الهدف هو تخفيف المعاناة من الأشعة السينية على التوهين في العينات البيولوجية الكبيرة. تم استخراج القلوب من الخنازير السليمة (N = 2) ، والأغنام (N = 2) إما مع احتشاء عضلة القلب المزمن الناجم وتشكيل ندبة ليفية أو الرجفان الأذيني المزمن المستحث. تم استئصال القلوب مع: محلول ملحي مكمل بعامل تبريد أيون الكالسيوم وموسع للأوعية الدموية ، والإيثانول في الجفاف التسلسلي ، وسداسي ميثيل ديسيليزان تحت الفراغ. هذا الأخير عزز بنية القلب أثناء تجفيف الهواء لمدة 1 أسبوع. كانت الأنسجة المهيمنة على الكولاجين مرتبطة بشكل انتقائي بعامل تعزيز تباين الأشعة السينية ، وهو حمض الفوسفوموليبديك. كان تكوين الأنسجة مستقرا في الهواء ، مما سمح لعمليات التصوير المقطعي المحوسب الدقيق طويلة الأجل بالحصول على صور عالية الدقة (20.7 ميكرومتر متساوي الخواص). أظهر تحميل عامل التباين الأمثل عن طريق الانتشار تعزيزا انتقائيا للتباين للطبقة الظهارية وألياف Purkinje شبه الشغافية في البطينين الخنازير الصحيين. أظهرت قلوب الرجفان الأذيني (AF) تراكما معززا للتباين في الجدران الخلفية والزوائد من الأذينين، ويعزى ذلك إلى زيادة محتوى الكولاجين. أظهرت قلوب احتشاء عضلة القلب تباينا متزايدا بشكل انتقائي في مناطق تليف القلب ، مما مكن من تحديد ألياف عضلة القلب المتشابكة الباقية على قيد الحياة. مكنت مستحضرات الأنسجة المجففة بالهواء المعززة بالتباين من التصوير المجهري لقلب الثدييات الكبير السليم وتعزيز التباين الانتقائي لمكونات المرض الأساسية.

Watch this Scientific Journal Video about Tissue Preparation Techniques for Contrast-Enhanced Micro Computed Tomography Imaging of Large Mammalian Cardiac Models with Chronic Disease at JoVE.com

Tissue Preparation Techniques for Contrast-Enhanced Micro Computed Tomography Imaging of Large Mammalian Cardiac Models with Chronic Disease

هنا ، نقدم بروتوكولا للحصول على صور التصوير المقطعي المحوسب الدقيق عالية الدقة لقلوب الثدييات الكبيرة الصحية والمرضية مع تعزيز التباين الانتقائي للكولاجين.

تقنيات تحضير الأنسجة للتصوير المقطعي المحوسب الجزئي المعزز بالتباين لنماذج قلب الثدييات الكبيرة المصابة بأمراض مزمنة

Structural remodeling is a common consequence of chronic pathological stresses imposed on the heart. Understanding the architectural and compositional ...

يوفر هذا البروتوكول نظرة هيكلية دقيقة على الأمراض المرضية الهيكلية على نطاق الأعضاء بالكامل باستخدام التصوير المقطعي بالكمبيوتر الصغير. في هذا البروتوكول ، يتم تنفيذ طريقة متخصصة لإعداد الأنسجة لتحسين التصوير عالي الدقة لعينات القلب بالكامل من نماذج الثدييات الكبيرة الانتقالية في البشر مع تعزيز التباين الانتقائي للأمراض الهيكلية. البنية المجهرية للقلب مثل توزيع التليف وتنظيم عضلة القلب المثيرة تكمن وراء مجموعة واسعة من أمراض القلب وتمهد الطريق لعدم انتظام ضربات القلب الذي يهدد الحياة.سيوضح الإجراء نيستور بالاريس لوبون ، خريج ما بعد الدكتوراه والدكتوراه في مختبري. للبدء ، قم بإعداد محلول قلبي يحتوي على هيبارين الصوديوم وتخزين المحلول عند أربع درجات مئوية. بعد ذلك ، قم بإعداد PBS / EDTA عن طريق إضافة EDTA أولا إلى لتر واحد من الماء المقطر للحصول على تركيز نهائي 10 ملليمولار.ثم قم بزيادة والحفاظ على درجة الحموضة للمحلول عند 12 باستخدام هيدروكسيد الصوديوم لإذابة EDTA. بمجرد إذابة EDTA بالكامل ، اخفض الرقم الهيدروجيني إلى 7.4 باستخدام حمض الهيدروكلوريك. ثم أضف كيسا واحدا من رقائق PBS للحصول على محلول مولاري 0.01 مع درجة الحموضة 7.4.تخزين الحل المحضر في درجة حرارة الغرفة. أخيرا ، قم بإعداد محلول عامل تباين PMA للإيثانول بنسبة 1٪ عن طريق إضافة 10 غرامات من PMA إلى لتر واحد من الإيثانول المطلق. تخزين الحل المحضر في درجة حرارة الغرفة.قم بإعداد خزان سعة لتر واحد مدعوم ب 80 سم فوق طبق تشريح ، وقم بإقران أنبوب بلاستيكي حراري بمنفذ تصريف الخزان. قم بإصلاح صنبور ثلاثي الاتجاهات على أنابيب الصرف الصحي وأنابيب بلاستيكية حرارية أخرى لكل منفذ مجاني على الصنبور ثلاثي الاتجاهات. إصلاح الصنابير ثنائية الاتجاه إلى الأطراف الحرة للأنابيب.بعد ذلك ، املأ الخزان بمحلول القلب المستكمل بالهيبارين. افتح الصنابير للسماح للمحلول القلبي بتصريف إزالة جميع فقاعات الهواء. ثم أغلق الصنابير ثنائية الاتجاه.بعد استخراج القلب من القتل الرحيم ، ضعه في محلول قلبي بارد مخزن على الجليد حتى يصبح جاهزا للتشريح. ثم قم بإعداد قنية للعظم التاجي الأيسر والأيمن عن طريق قطع خمسة سنتيمترات من أنابيب PTFE وتسخين أحد طرفيها عن طريق وضع الطرف بجوار لهب عار. بمجرد أن يبدأ ملليمتر واحد من الطرف في الذوبان ويصبح شفافا ، اضغط على الطرف ضد سطح مقاوم للحرارة الصلبة لتشكيل سلسلة من التلال عند طرف القنية لمنع القنية من الانزلاق من الأوعية ، ثم أدخل سنتيمترا واحدا من الطرف غير المسخن لكل قنية في طرفي أنبوب تصريف خزان التصريف.بعد ذلك ، قم بإزالة قنية الأبهر وتوطين العظم الأيسر والأيمن للشرايين التاجية تحت محلول القلب البارد. باستخدام مقص مدبب ، افصل جذر الأبهر بعناية عن الأنسجة المحيطة فوق وأسفل عظم الشريان التاجي لتمكين خيوط خياطة حريرية بدون مقياس تحت الوعاء التاجي. ثم افتح الصنابير ثنائية الاتجاه وأدخل أطراف القنية في عظم الشريان التاجي.مع امتداد أطراف القنية من سنتيمتر إلى سنتيمترين في العظم وخارج موضع الخياطة ، اربط الكانيولا. بعد ذلك ، شطف القلب أثناء تدليك البطينين بلطف لمدة 15 دقيقة حتى يتم تطهير القلب من الدم. بعد الشطف ، أغلق الصنابير ثنائية الاتجاه ، وافصلها عن الصنبور ثلاثي الاتجاهات وانقل القلب إلى حاوية بلاستيكية مقاومة للمواد الكيميائية سعة لتر واحد تحتوي على 500 ملليلتر من محلول PBS / EDTA.أعد تدوير محلول PBS / EDTA في أنابيب اللدائن الحرارية تحت غطاء الدخان باستخدام مضخة تمعجية مع قناتين. قم بتوصيل أنبوب المضخة حتى تغيب الأنابيب عن فقاعات الهواء. ثم اطلع على كل قنية شريان تاجي عن طريق إعادة التدوير في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين بمعدل 80 ملليلتر في الدقيقة.بعد التأكد من تشغيل غطاء الدخان ، أوقف المضخة ، واستنزف المحلول من الحاوية واستبدله ب 10٪ من الفورمالين للتثبيت لمدة ساعة واحدة عند 80 ملليلتر في الدقيقة. اطلع على القلب باستخدام سلسلة من تركيزات الإيثانول المتزايدة ، بدءا من 20٪ من الإيثانول لمدة لا تقل عن ثلاث ساعات. ثم استبدل الإيثانول 20٪ ب 30٪ إيثانول وبيرفيوز لمدة ساعتين.استمر في التروية عن طريق زيادة تركيز الإيثانول في كل تكرار مع الحد الأدنى من التروية لمدة ساعة واحدة في كل تركيز. لتعزيز أنسجة القلب قبل التجفيف الهوائي ، أعد تدوير مزيج متساو من الإيثانول و HMDS لمدة 10 دقائق متبوعا ب HMDS بنسبة 100٪ لمدة ساعتين أخريين. أوقف مضخة التروية، ثم افصل القنية عن الأنبوب القلب من خياطة الأبهر داخل غطاء الدخان.حرك كيس قفل بسحاب بعناية فوق القلب وأغلق ختم الكيس فوق الخيط لتقليل تعرض القلب للهواء المتداول. اترك القلب يجف من خلال التبخر لمدة أسبوع واحد. للحصول على عوامل تباين تحميل الانتشار، قم بإزالة الحقيبة.اغسل القلب بنسبة 100٪ من الإيثانول لمدة 15 دقيقة مع الإثارة قبل غمره في 100٪ إيثانول مكمل ب 1٪ PMA لمدة 48 ساعة تحت الفراغ ، ثم قم بتغطية القلب بكيس قفل بسحاب كما هو موضح سابقا واتركه يجف. قم بتركيب القلب المجفف بالهواء على حامل عينات مناسب. لمنع أي حركة أثناء قياسات الأشعة السينية المقطعية الدقيقة، استخدم مشبكا مثبتا على حامل العينة وقم بتأمين القلب عبر الشريان الأورطي المجفف والصلب.قم بتركيب حامل العينة في الماسح الضوئي المقطعي المحوسب الصغير. بعد ذلك ، افتح البرنامج وابدأ نظام التصوير المقطعي المحوسب للأشعة السينية الدقيقة. ثم اضبط الألومنيوم مرشح الأشعة السينية على ملليمتر واحد.جهد مصدر الأشعة السينية إلى 60 كيلوفولت والتيار إلى 120 ميكروأمبير. بالإضافة إلى ذلك ، قم بتعيين أبعاد الصورة إلى 2،016 × 1،344 بكسل وحجم البكسل إلى 20 ميكرومتر. صور انتقال الأشعة السينية الكشفية على طول الدعم لتحديد مجال التصوير الكلي في الوصول الطولي للقلب.للمسح الضوئي، استخدم خطوة دوران مقدارها 0.18 درجة، وإطارا يبلغ متوسطه خمس درجات، وعينة دوران 180 درجة عن طريق إلغاء تحديد خيار الحصول على 360 درجة. حدد وضع المسح الضوئي للإزاحة لتصوير عرض دعم العينة بالكامل. بعد المسح الضوئي ، استخدم البرنامج لإعادة البناء المقطعي لحجم صورة ثلاثي الأبعاد متساوي الخواص.في النهاية ، استخدم تصحيح القطع الأثرية المتعلقة بالاستحواذ ، بما في ذلك تأثيرات تصلب الحزم بنسبة 10٪ وتقليل القطع الأثرية الحلقية من ثمانية. بعد ذلك ، باستخدام برنامج Data Viewer ، تصور مكدس البيانات المعاد إنشاؤه. قم بتوجيه العينة رقميا داخل حدود الصورة لإعادة محاذاة العينات ذات المحور الطويل والقصير مع المبدأ الثلاثة وهو محور حجم الصورة.وأخيرا، اقتصاص حجم الصورة في جميع المحاور الثلاثة لإزالة طبقات الخلفية الخارجية للصورة وتقليل الحجم الإجمالي للصورة إلى أقصى حد. يظهر التصوير بالأشعة السينية لقلوب الخنازير المجففة بالهواء المعالم التشريحية الرئيسية بما في ذلك تجاويف البطين وجدار العضلات. أظهرت عمليات إعادة البناء المقطعي لأحجام الصور ثلاثية الأبعاد فصلا متميزا بين الأنسجة والخلفية عند الحدود الشرجية والشغاف.أظهر تلطيخ ميسون ثلاثي الألوان تلطيخا إيجابيا للكولاجين في الطبقات الظهارية والبطانية بشكل شبه وعائي في الأنسجة تحت القلب. أظهرت إضاءة المجال الساطع تلوينا أغمق في هياكل الكولاجين بعد تلطيخ PMA ، مما يدعم التراكم التفضيلي ل PMA. كانت الصور الفلورية الملطخة ب PMA لأقسام الأنسجة البطينية تسبب في فقدان التألق الناجم عن PMA في مواقع الكولاجين.عندما تكون عينة القلب ملطخة بعامل تباين عن طريق التروية قبل التجفيف الهوائي ، كشفت إعادة بناء الصورة عن تلطيخ غير مكتمل للغاية داخل حجرة عضلة القلب. علاوة على ذلك ، أظهرت الأنسجة منخفضة التباين انفصالا ضعيفا عن كثافة الخلفية. كشف التصوير المقطعي المحوسب الدقيق لجزء من الأغنام يعاني من احتشاء عضلة القلب المزمن عن آفة ليفية مركزية كثيفة محاطة بمنطقة حدودية فضفاضة وغير متجانسة.يتم عرض أكبر كثافة إشارة لأحجام الصور المعاد بناؤها عند حدود الأنسجة ومناطق الندبة هنا. عوامل التباين تلطخ عضلة القلب الصحية بشكل سيئ ، ولكن تم الاحتفاظ بالتباين الهيكلي الصغير. في المنطقة الحدودية ، كان يتخلل النسيج الندبي عضلة القلب الباقية على قيد الحياة.ظهر التليف الكثيف عبر الجدارية ولكنه محكم مما يشير إلى اختلافات في التكوين. أظهرت المنطقة البطينية اليسرى عبر الجدارية من إعداد الأنسجة الملطخة PMA تلطيخا انتقائيا للكولاجين وعدم تلطيخ في مناطق عضلة القلب الباقية على قيد الحياة. يوصى باستخدام الإيثانول مرات أطول في التروية لضمان التبادل الكامل لمحتوى الماء في القلب مع الإيثانول.التفاعلات بين HMDS والماء تنتج الحرارة ، والتي قد تلحق الضرر بالعينة. ميزة قوية لهذا الإجراء هي القدرة على التحقق من صحة التصوير المقطعي المحوسب الدقيق باستخدام الأنسجة. يمكن تضمين العينات المجففة بالهواء مباشرة في البارافين لتقسيم التلطيخ والتصوير المجهري.

Research

JoVE Journal

Medicine

Contrast Enhanced Vessel Imaging using MicroCT

التصوير النقيض المحسن باستخدام سفينة MicroCT

Microscopic computed tomography (microCT) offers high-resolution volumetric imaging of the anatomy of living small animals. However, the contrast between ...

Segmentation and Measurement of Fat Volumes in Murine Obesity Models Using X-ray Computed Tomography

تجزئة والقياس من وحدات تخزين الدهون في الفئران نماذج السمنة عن طريق الأشعة السينية التصوير المقطعي

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are ...

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

إلى الوراء الإرواء وملء الأوعية الدموية التاجية الفأر كما التحضير للتصوير المقطعي بالكمبيوتر مايكرو

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

Osmotic Drug Delivery to Ischemic Hindlimbs and Perfusion of Vasculature with Microfil for Micro-Computed Tomography Imaging

ناضح تسليم المخدرات إلى Hindlimbs الدماغية ونضح من الأوعية الدموية مع Microfil للمشاريع المتناهية الصغر التصوير المقطعي التصوير

Preclinical research in animal models of peripheral arterial disease plays a vital role in testing the efficacy of therapeutic agents designed to ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

تقييم الجدوى من الدهون الإنسان الحقن في الفئران عارية مع مايكرو-التصوير المقطعي

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Combined Near-infrared Fluorescent Imaging and Micro-computed Tomography for Directly Visualizing Cerebral Thromboemboli

التصوير نيون المشتركة القريبة من تحت الحمراء والتصوير المقطعي مايكرو لتصور مباشرة الشلل Thromboemboli

Direct thrombus imaging visualizes the root cause of thromboembolic infarction. Being able to image thrombus directly allows far better investigation of ...

Cardiac Magnetic Resonance for the Evaluation of Suspected Cardiac Thrombus: Conventional and Emerging Techniques

الرنين المغناطيسي القلبي لتقييم الجلطات القلبية المشتبه بها: التقنيات التقليدية والناشئة

We present the conventional cardiac magnetic resonance (CMR) protocol for evaluating a suspected thrombus and highlight emerging techniques.&#160;The ...

DUCT: Double Resin Casting followed by Micro-Computed Tomography for 3D Liver Analysis

DUCT: الصب الراتنج المزدوج تليها التصوير المقطعي المحوسبة الدقيقة لتحليل الكبد 3D

The liver is the biggest internal organ in humans and mice, and high auto-fluorescence presents a significant challenge for assessing the ...

Sample Preparation for Computed Tomography-based Three-dimensional Visualization of Murine Hind-limb Vessels

إعداد عينة للتصور ثلاثي الأبعاد القائم على التصوير المقطعي المحوسب لأوعية الأطراف الخلفية الفئرانية

Blood vessels are complex networks with tree-like structures, and vascular networks are essential for maintaining both circulation and maintaining organ ...

Four-Dimensional Computed Tomography-Guided Valve Sizing for Transcatheter Pulmonary Valve Replacement

تغيير حجم الصمام المحوسب الموجه بالتصوير المقطعي رباعي الأبعاد لاستبدال الصمام الرئوي عبر القسطرة

The measurements of the right ventricle (RV) and pulmonary artery (PA), for selecting the optimal prosthesis size for transcatheter pulmonary valve ...