Name: tissue preparation techniques for contrast-enhanced micro computed tomography imaging of large mammalian cardiac models with chronic disease
Uploaded: 2022-02-08T14:00:00
Duration: 12 min 15 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tissue Preparation Techniques for Contrast-Enhanced Micro Computed Tomography Imaging of Large Mammalian Cardiac Models with Chronic Disease at JoVE.com

מחקר זה קיבל תמיכה כספית מממשלת צרפת כחלק מתוכנית "השקעות העתיד" המנוהלת על ידי סוכנות המחקר הלאומית (ANR), הפניה למענקים ANR-10-IAHU-04, וקרן Leducq (רשת RHYTHM), כמו גם הפניה למענק ANR-17-CE14-CE14-0029-01 [UNMASC], מימון מאזור המחקר האירופי במחלות לב וכלי דם (ERA-CVD), הפניה למענק H2020-HCO-2015_680969 [MultiFib] ומימון מהאזור הצרפתי נובל אקיטן, הפניות למענק 2016 - 1R 30113 0000 7550/2016-1R 30113 0000 7553 ו- ANR-19-ECVD-0006-01.

כל הניסויים בוצעו בהתאם להנחיות של דירקטיבה 2010/63/EU של הפרלמנט האירופי בנושא הגנה על בעלי חיים המשמשים למטרות מדעיות. פרוטוקולים של בעלי חיים אושרו על ידי ועדת האתיקה המקומית (CEEA50) באוניברסיטת בורדו. הלבבות מקורם בשלושה מודלים של יונקים גדולים, כולל (i) חזירים לבנים גדולים ובריאים (N = 2, 2 חודשים); (ii) כבשים (N = 1, 2 שנים) עם אוטם שריר הלב המושרה13 ו- (iii) כבשים (N = 1, 7 שנים) עם פרפור פרוזדורים מושרה30.
1. הכנת פתרון:
<ol><li>תמיסה לב-ריאה: מכינים 3 ליטר מים מזוקקים ומוסיפים נתרן כלורי (110 מ"מ), אשלגן כלורי (16 מ"מ), נתרן ביקרבונט (10 מ"מ), D-(+)-גלוקוז (9 מ"מ), תמיסת סידן כלורי (1.2 מ"מ) ותמיסת מגנזיום כלוריד (16 מ"מ). בסוף, הוסיפו 500 μL/L של נתרן הפרין. שמור על פתרון זה ב 4 °C (76 °F).</li>
	<li>מלח ביציאת פוספט - תמיסת EDTA (PBS-EDTA).<ol>
<li>ראשית, יש להוסיף חומצה אתילנדיאמינט-אצטית (EDTA) ל-1 ליטר מים מזוקקים לריכוז סופי של 10 מ"מ. הגדל ושמור על pH של תמיסה של 12 באמצעות תמיסת נתרן הידרוקסיד (1 M) כדי להמיס את ה- EDTA.</li>
		<li>לאחר שה-EDTA מומס במלואו, הורידו את ה-pH ל-7.4 באמצעות חומצה הידרוכלורית. הוסיפו שקית רדיד אלומיניום אחת של מי מלח עם מאגר פוספט כדי לקבל תמיסה ב-0.01 מ' (נתרן כלורי, 0.138 מ'; אשלגן כלורי, 0.0027 מ') ו-pH 7.4. שמור פתרון זה בטמפרטורת החדר (RT).</li>
	</ol>
</li>
	<li>אתנול - תמיסת סוכן הניגוד חומצה פוסופומוליבדית (PMA): מכינים 1 ליטר של אתנול מוחלט ומוסיפים את ה-PMA כדי לקבל תמיסה בריכוז של 1%. שמור על פתרון זה ב- RT.</li>
</ol>2. מקור הרקמה
<ol><li>המתת חסד את החיה ומיצוי הלב על פי הנחיות אתיות מקומיות. השקיעו במהירות את הלב בתמיסה אירו-ריאה קרה ועסו בעדינות את החדרים לשטיפה ראשונית.</li>
	<li>הקפידו לחתוך את אבי העורקים מתחת לקשת אבי העורקים ולהדק שני צדדים של דופן העורקים באמצעות מחזיקי מחט.</li>
	<li>השהיית הלב על ידי מחזיקי המחט, החדרת צינורית אבי העורקים לשורש אבי העורקים, תוך הקפדה שלא ליצור קשר עם המסתמים אבי העורקים או לבלוט דרכם. עוטפים תפר של 0 מדים סביב קשת אבי העורקים בגובה הצינורית וקושרים היטב את הצינורית למקומה.</li>
	<li>באמצעות מזרקים של 50 מ"ל, להזריק 200 מ"ל של תמיסה לב-ריאה קרה (4 מעלות צלזיוס). הסר את עודפי הצטברות הדם בחללים על ידי הטיית הלב על צדו האחורי כדי להתנקז דרך הוורידים הריאתיים.</li>
	<li>יש לטבול את הלב השטופה ולשמור על תמיסה קרדיופלגית קרה המאוחסנת על קרח עד שהיא מוכנה לנתיחה.</li>
</ol>3. הכנת רקמות:
<ol><li>מכינים מאגר של 1 ליטר הנתמך 80 ס"מ מעל צלחת דיסקציה. הצמידו צינור תרמופלסטי באורך 80 ס"מ וקוטר פנימי של 3.2 מ"מ וקוטר חיצוני של 4.8 מ"מ ליציאת ניקוז של המאגר.</li>
	<li>קבעו ברז תלת-כיווני לצינורות הניקוז והצמידו צינורות תרמופלסטיים נוספים (20 ס"מ, קוטר פנימי של 1.6 מ"מ וקוטר חיצוני של 3.2 מ"מ) לכל יציאה חופשית על הברז התלת-כיווני. תקן ברזים דו-כיווניים לקצות התשלום של הצינורות.</li>
	<li>מלאו את המאגר בתמיסה לב-ריאה בתוספת הפרין (2500 יחידות). פתחו את הברזים כדי לאפשר לתמיסה האירובית לנקז ולהסיר את כל בועות האוויר, ואז סגרו את הברזים הדו-כיווניים.</li>
	<li>הכינו צינוריות לאוסטיה כלילית שמאלית וימנית באמצעות צינורות Polytetratrafluoroethylene (PTFE) (קוטר פנימי של 1 מ"מ וקוטר חיצוני של 2 מ"מ).<ol>
<li>חותכים 5 ס"מ של צינורות ומחממים קצה אחד על ידי הנחת הקצה ליד להבה עירומה. ברגע ש-1 מ"מ מהקצה מתחיל להתמוסס והופך שקוף, לחצו את הקצה על משטח עמיד בחום קשה כדי ליצור רכס בקצה הצינורית כדי למנוע מהצינוריות להחליק החוצה מהכלים.</li>
		<li>הכנס 1 ס"מ של הקצה הלא מחומם של כל צינורית לשני הקצוות של צינורות הניקוז של מאגר הניקוז.</li>
	</ol>
</li>
	<li>יש להסיר את צינורית אבי העורקים. תחת תמיסה קרדיופלגית קרה, למקם את האוסטיה השמאלית והימנית של העורקים הכליליים.</li>
	<li>באמצעות מספריים מחודדים, מפרידים בזהירות את שורש אבי העורקים מהרקמה הסובבת מעל ומתחת לאוסטיה הכלילית כדי לאפשר השחלה של תפר משי 0 גרם מתחת לכלי הכלילית.</li>
	<li>פתחו את הברזים הדו-כיווניים והכניסו את קצות הצינוריות לאוסטיה הכלילית. עם קצות הצינוריות הנמתחות 1-2 ס"מ לתוך האוסטיה ומעבר למיקום התפר, קושרים את הצינוריות.</li>
	<li>יש לשטוף את הלב תוך עיסוי עדין של החדרים במשך 15 דקות עד שהלב מתנקה מדם.</li>
	<li>לאחר השטיפה, סגרו את הברזים הדו-כיווניים וניתקו אותם מהברז התלת-כיווני. העבירו את הלב למיכל פלסטיק 1 ליטר עמיד בפני כימיקלים המכיל 500 מ"ל של תמיסת PBS-EDTA.</li>
	<li>שחזרו את תמיסת PBS-EDTA בצינורות התרמופלסטיים מתחת למכסה אדים באמצעות משאבה פריסטלטית עם שני ערוצים. מקבעים את צינורות המשאבה עד שהצינורות נעדרים בועות אוויר, ואז מנקבים כל צינורית עורק כלילי על ידי סירקולציה ב-RT למשך 2 שעות ב-80 מ"ל/דקה.</li>
	<li>ודא שמכסה המנוע של האדים פועל. עצרו את המשאבה, נקזו את התמיסה מהמיכל והחליפו אותה בפורמלין (10%) לקיבוע למשך שעה אחת ב-RT ב-80 מ"ל לדקה.</li>
	<li>החלף את תמיסת הפורמלין ב- PBS כדי לשטוף את המקבע שלוש פעמים במשך 15 דקות כל אחת ב- 80 מ"ל לדקה.</li>
</ol>4. התייבשות וייבוש רקמות:
הערה: השתמש באותו קצב זלוף (80 מ"ל לדקה) ותן לרקמה להישאר ב- RT לאורך כל הדרך.
<ol><li>החלף את תמיסת PBS באתנול ב-20%, מדולל במים טהורים במיוחד, ונקב במשך 3 שעות לפחות.</li>
	<li>מנקבים את הלב באמצעות סדרה של ריכוזי אתנול מצטברים.<ol>
<li>התחילו בהחלפת תמיסת האתנול של 20% באתנול מדולל ל-30% ופרפוזה למשך שעתיים.</li>
		<li>חזרו על פרפוזיה על ידי הגדלת ריכוז האתנול בכל איטרציה עד 40%, 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 95%, 90%, 95%, 99%, ו-100% למשך זמן מינימלי של שעה אחת בכל שלב(ריכוז). הערה: דגימות לב עשויות לנוח ללא זרימת פרפוזיה במהלך הלילה בכל דילול אתנול אם התרחשה זלוף מינימלי של 15 דקות עבור ריכוז זה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>אופציונלי: אם תפעילו חומרי ניגוד באמצעות זלוף, יש להחדיר ללב 100% אתנול בתוספת חומר הניגוד PMA, 1% למשך 48 שעות. יש לשטוף את חומר הניגודיות על ידי פרפוזיה עם 100% אתנול למשך שעתיים.</li>
	<li>כדי לחזק את רקמת הלב לפני ייבוש האוויר, יש לשחזר תערובת של 50:50 של אתנול והקסמתילדיזלאזאן (HMDS) במשך 10 דקות. לאחר מכן על ידי 100% HMDS למשך 2 שעות נוספות. אזהרה: HMDS הוא חומר רעיל ומזיק ביותר. ריח חזק של אמוניה משתחרר במגע עם האוויר. יתר על כן, הצורה הנוזלית של HMDS היא נדיפה מאוד ומזרזת על ידי חומרים המכילים יוד.</li>
	<li>נתקו את הצינורית מהצינוריות ותלו את הלב מתופר אבי העורקים בתוך מכסה המנוע של האדים.</li>
	<li>החליקו בזהירות שקית רוכסן על הלב וסגרו את חותם השקית מעל התפר כדי להפחית את החשיפה של הלב לאוויר המסתובב. אפשרו ללב להתייבש באמצעות אידוי במשך שבוע.</li>
	<li>אופציונלי: עבור חומרי ניגוד להעמסת דיפוזיה, שטפו את הלב ב-100% אתנול למשך 15 דקות תוך כדי תסיסה. יש לטבול את הלב ב-100% אתנול בתוספת PMA, 1%, למשך 48 שעות תחת ואקום. חזור על שלב 4.6.</li>
</ol>5. מיקרו-CT:
הערה: מערכת מיקרו-CT של קרני רנטגן שולחנית שימשה להדמיית לבבות חזירים.
<ol><li>הרכיבו את הלב המיובש באוויר על מחזיק דגימה מתאים. מנעו כל תנועה במהלך מדידות המיקרו-CT של קרני הרנטגן באמצעות מהדק המעוגן למחזיק הדגימה ואבטחו את הלב באמצעות אבי העורקים המיובש והנוקשה.</li>
	<li>יישרו בקפידה את מרכז דגימת הלב לאורך ציר האורך שלה עם מרכז שדה הראייה של ההדמיה עבור זוויות סיבוב של 0° ו-90°. כדי להשיג זאת בכל הכיוונים, להשעות את הלב באוויר באמצעות מהדק אבי העורקים הקבוע לתמיכת הדגימה.</li>
	<li>לאחר פתיחת התוכנה וייזום מערכת המיקרו-CT של קרני רנטגן, החל את מסנן קרני הרנטגן אלומיניום, 1 מ"מ, מתח מקור קרני רנטגן ל-60 קילו-וולט וזרם ל-120 μA. הגדר את מידות התמונה ל-2016 x 1344 פיקסלים וגודל פיקסלים ל-20 מיקרומטר.</li>
	<li>הוציאו את בעל הדגימה משדה הראייה וכיילו את תמונת הרקע ואת זמן החשיפה לקרני רנטגן על ידי קבלת תיקון שדה שטוח. ודא שתמסורת הרנטגן הממוצעת ברקע גדולה מ-80%.</li>
	<li>תמונות שידור רנטגן של סקאוט לאורך התמיכה כדי לקבוע את שדה ההדמיה הכולל בציר האורך של הלב. לצורך סריקה, השתמש בשלב סיבוב של 0.18°, מסגרת ממוצעת של 5 וסיבוב מדגם של 180°. בחר את מצב סריקת ההסטה כדי לצלם את הרוחב המלא של התמיכה לדוגמה. הערה: פרמטרי הרכישה המצוינים בסעיף זה נבחרו כדי לייעל את איכות התמונה של קומפוזיציית הלב של האנסמבל.</li>
	<li>לאחר הסריקה, השתמש בתוכנה לשחזור טומוגרפי של נפח תמונה תלת מימדי איזוטרופי. עבור היישום של תוכנת NRecon, השתמש בתיקון ממצאים הקשורים לרכישה, כולל השפעות התקשות קרן של 10% והפחתת חפץ טבעתי של 8.</li>
	<li>כדי למטב את מגבלות אחסון הנתונים, החל את אזור העניין המלבני המינימלי הכולל את הווקסלים הספציפיים ללב. ייצא את התמונות בתבנית מפת סיביות של 8 סיביות כערימה של תמונות.</li>
	<li>הצג באופן חזותי את מחסנית הנתונים המשוחזרת באמצעות תוכנת DataViewer. כוון באופן דיגיטלי את הדגימה בתוך גבולות התמונה כדי להתאים מחדש את הצירים הארוכים והקצרים של הדגימה עם שלושת הצירים העיקריים של נפח התמונה.</li>
	<li>גזור את עוצמת הקול של התמונה בכל שלושת הצירים כדי להסיר את שכבות הרקע החיצוניות של התמונה, כדי להקטין באופן מרבי את גודל התמונה הכולל.</li>
</ol>

פרוטוקול מפורט להכנת רקמות גדולות נקבע באמצעות לבבות שלמים מיונקים גדולים להדמיה מבנית ברזולוציה גבוהה לאחר מכן. גישת ייבוש האוויר הסירה השפעות של הנחתת קרני רנטגן ברקע ואופטימיזציה מקסימלית של רקמות: ניגודיות רקע29. באמצעות גישה זו הושגה רזולוציה איזוטרופית בטווח של 20 מיקרומטר להדמיה נפחית על פני דגימות בקוטר של עד 7.2 ס"מ. עם זאת, MicroCT של רקמות רכות מסתמך בדרך כלל על שימוש בחומרי ניגוד לא ספציפיים כדי להקל על ספיגת קרני רנטגן ורגישות של מערכות microCT34. אף על פי שחומרי הניגודיות של קרני רנטגן משפרים את הנחתת קרני הרנטגן הכוללת ואת שיפור ההדמיה של רקמות רכות, הפרדת מרכיבי הרקמות על בסיס הרכב ביוכימי נותרה מאתגרת. עם זאת, נצפה כי שימוש בלבבות מיובשים באוויר בשילוב עם חומר ניגוד קרני רנטגן נפוץ בסביבת המעבדה, PMA, הכתים באופן סלקטיבי רכיבים חוץ-תאיים. רקמת חיבור הקשורה לשריר הלב בריא ושיפוץ מבני פתולוגי במחלות כרוניות שופרו.
תהליך ייבוש הרקמה הביולוגית באוויר דורש התערבות כדי להתנגד לעיוות של הדגימה. להכנת דגימה למיקרוסקופיית אלקטרונים יש דרישות דומות. בדרך כלל, נעשה שימוש בשיטת ייבוש נקודתית קריטית, המשתמשת באיזון של מדיום טבילת רקמות, טמפרטורה ולחץ כדי למנוע מתח פנים של התוכן הנוזלי של הרקמה, מה שגורם לעיוות ברמה המולקולרית עם אידוי35. גישה זו דורשת החלפה אחידה של תכולת המים של הדגימה בפחמן דו-חמצני נוזלי, שהוא אמין יותר בדגימות קטנות וקלות לפיזור. לחלופין, ניתן לשפר את השלמות המבנית של הרקמה ולייבש את האוויר, כלומר ניתן ליישם את שלב האידוי על פני תקופה ארוכה יותר כדי להפחית את העיוות הכולל. המולקולה HMDS עוברת סילילציה ליצירת פיגום מבוסס סיליקון כדי לחזק ולייצב את הארגון המולקולרי של דגימת הרקמה36. האידוי מתארך עוד יותר על ידי הגבלת זרמי האוויר המסתובבים מהסביבה, גם כדי למנוע אידוי לא הומוגני, במיוחד בין פני השטח של הדגימה לשכבות התוך-גופיות.
חומרי ניגוד רבים שימשו בעבר להדמיית מיקרו-CT של רקמות רכות. הנפוצים ביותר הם יוד, חומצה פוספוטונגסטית (PTA) ו- PMA. יוד במיוחד הועסק בשל קצב דיפוזיה גבוה יותר של 34,37,38. עם זאת, יוד משמש כזרז לסילילציה של מגיב HMDS36. התגובה המואצת היא אגרסיבית ואקסותרמית, עם סיכון גבוה להרס הדגימה וסיכון בטיחותי אם שאריות HMDS יישארו עקב ייבוש לא שלם של הדגימה. גם PTA וגם PMA המומסים באתנול יכולים לשמש בבטחה בשילוב עם HMDS. הודגם כי PTA ו-PMA מספקים כוח פתרון גדול יותר של מבנים עדינים בדיסקים בין-חולייתיים שאינם ממובנים בהשוואה לכתמי יוד38. בהדמיית microCT של דגימות יונקים, PTA ו- PMA שימשו להכתמת עוברי עכברים39, מערכת לב וכלי דם של עכבר37, שריר ארנב ומוח40, וורידים חזיריים41. ל-PTA יש מסה מולקולרית גבוהה יותר וצפיפות גבוהה יותר בתמיסה מאשר ל-PMA. זאת, בין היתר, בשל מסה אטומית גבוהה יותר של טונגסטן (המספר האטומי הוא 74 גרם/מול), היסוד המחליש העיקרי ב-PTA. לשם השוואה, ליסוד הכבד ביותר ב-PMA, מוליבדן, יש מספר אטומי של 42 גרם/מול. הן המסה האטומית והן צפיפות הדגימה עומדות בבסיס הנחתת קרני הרנטגן, בנוסף לעובי הדגימה42. הגדלת אורך נתיב הרנטגן על ידי הגדלת גודל המדגם, הנחתת קרני רנטגן הופכת רגישה יותר לצפיפות דגימה מוגברת. לכן, סוכן הניגודיות PMA בצפיפות נמוכה יותר נבחר כדי להפחית את הסיכון להנחתת יתר ולייעל את הטווח הדינמי של ניגודיות התמונה עבור לבבות בקנה מידה דמוי אדם. ראיות נוספות הראו כי העמסת דיפוזיה של PMA מעניקה יותר כתמים הומוגניים מאשר עבור המולקולה הגדולה יותר PTA ברקמת הלב43.
השיטה של העברת חומרי ניגוד משפיעה על האחידות של התפלגות חומרי הניגוד ברקמת הלב (איור 3). זלוף של חומרי ניגוד בלב מיובש באתנול הראה רמות צביעת רקע מטושטשות של PMA עקב עמידות משתנה של כלי הדם. בלב המיובש באוויר, המבנה הלמינרי של השריר מודגש על ידי תהליך ההתייבשות לדוגמה, מה שמגדיל את ההפרדה הלמינרית של השרירים. זה שיפר בסופו של דבר את החדירות הכוללת של הרקמה להעמסה של חומר ניגוד מבוסס דיפוזיה. כתוצאה מכך, ייבוש האוויר הקל על רקמות: ניגודיות אוויר ברמה הלמינרית והתוך-למינרית (איור 4). יתר על כן, ניתן להקל עוד יותר על טעינת דיפוזיה על ידי יישום תחת ואקום. עוד הוכח כי התכווצות רקמות של דגימות לא מיובשות תלויה בריכוז חומר הניגוד40. עם זאת, ייצוב מורפולוגי קודם של הדגימה על ידי ייבוש אוויר מעכב את השפעות התכווצות הרקמות29.
תמונות microCT ברזולוציה גבוהה של איברים שלמים מייצרות מטבען נפחי נתונים גדולים. האופי של טכניקות הדמיה טומוגרפיות מאפשר הדמיה וטיפול בתמונות על בסיס פרוסה אחר פרוסה, מה שמקל על עיבוד המחשב ועל עומס הזיכרון. עם זאת, כדי להמחיש ערימות תמונה תלת-ממדיות, לדוגמה, כדי לעבד נפחי דגימה בייצוגים תלת-ממדיים, מפרטי המחשב המינימליים המומלצים הם זיכרון RAM של 128 GB ומהירות מעבד של 3 GHz. כוננים קשיחים במצב מוצק גם שיפרו מאוד את העברת הנתונים.
הופעתה של הדמיית microCT בתחום הלב מעניקה יתרונות רבים למחקרים תרגומיים ולאימות קליני. היתרונות של ההדמיה התלת-ממדית והמיקרומטרית שלה כבר הראו יישומים בקביעת הנטל הטרומבוטי של חולי איסכמיה שריר הלב בגובה ST44,45. מיפוי מקורות פוטנציאליים של הפרעות קצב בחולי מחלות לב מבניות תלוי במידה רבה בקביעת התפלגות רקמת הצלקת הפיברוטית ובמיקום מסלולים שזורים של שריר הלב ששרד. גישות קו שני לאבחון הפרעות קצב חדריות משתמשות בהדמיית תהודה מגנטית46. הוא יכול למקם בחוזקה פיברוזיס צפוף אך הוא מוגבל לאפיון מורפולוגי ברזולוציה נמוכה ומציע תובנה מוגבלת לגבי שיפוץ מיקרו-סטרוקטורלי והתפלגויות מפוזרות של נגעים פיברוטיים47. לבחינה ברזולוציה גבוהה של הפצת צלקות ואפיון יש פוטנציאל עצום לשיפור ההבנה שלנו לגבי שיפוץ מבני לב והסיכון לפתח אי ספיקת לב. במיוחד, מחקרים בסיסיים או מחקרים שלאחר המוות ייהנו מתמונות מבניות מאומתות למיפוי חשמלי של הפרעות קצב לב.
לסיכום, לבבות מחוזקים בטיפול HMDS ובייבוש אוויר יכולים לאחר מכן להיות מוכתמים בחומר ניגוד רנטגן כדי לשפר את הנחתת קרני הרנטגן של רכיבים חוץ-תאיים. באופן ספציפי, בשריר הלב בריא, הצטברות PMA מתרחשת באפיתל, רקמה וולוולרית ותאים של מערכת ההולכה החדרית הנשענת על ידי רקמת חיבור וכתוצאה מכך הנחתת קרני רנטגן משופרת. יתר על כן, במחלה מבנית של שריר הלב, ניגודיות משופרת הייתה סלקטיבית עוד יותר עבור פיברוזיס.

מחלות לב מבניות מהוות את רוב התמותה הקשורה ללב ברחבי העולם1. שיפוץ מבנה הלב משפיע על סביבת שריר הלב ועל המרחב הבין-משרדי. מכיוון שגם התפקוד החשמלי וגם התפקוד המכני של הלב תלוי בארגון המיוציטים, הפרעה עלולה להוביל להפרעות קצב לב בלתי נסבלות, לפגיעה בפעולות שאיבת הדם ולאי ספיקת לב 2,3,4,5,6,7,8,9. ההתפתחויות של טיפולים מרפאים למחלות לב מבניות עולות בהרבה על שכיחות המחלה 2,5. ככזה, מספר גדל והולך של מודלים פרה-קליניים של מחלות לב מבניות מתגלים כדי להבין טוב יותר את הפרופילים האנטומיים-מורפולוגיים ואת הפתוגנזה הנובעת מכך של הפרעות קצב לב 10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20, 21,22,23. נצפתה על פני ספקטרום המחלות המבניות היא ויסות של פיברוזיס אינטרסטיציאלי, ובאופן נפוץ יותר במקרים הקשורים לאיסכמיה, החלפת שריר הלב בפיברוזיס ורקמת שומן18. הבנה מורפולוגית של רכיבים חוץ-תאיים פתולוגיים יכולה לאפשר זיהוי של מצעים פוטנציאליים של הפרעות קצב. התפלגותה והיקפה של המחלה מספקים אינדיקטורים חזקים לסיכון קצבי. עם זאת, עדיין נותרו אתגרים לצילום מקיף של פרופילי מחלות על ידי שילוב מאקרו ומיקרו-קנה מידה בלב שלם.
טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת (microCT), המבוססת על צילומי רנטגן, מתגלה ככלי רב עוצמה לחקר מיקרו-מבנה של רקמות ביולוגיות רכות באמצעות חומרי ניגוד. מפות אנטומיות מפורטות ביותר התקבלו עבור לבבות ממכרסמים קטנים 24,25,26 ודגימות קטנות שנותחו מלבבות יונקים גדולים 27,28. עם זאת, הדמיה ברמת האיבר השלם של לבבות יונקים גדולים מציגה אורכי נתיב מוגזמים שעליהם מוחלשים פוטונים של קרני רנטגן באמצעות טכניקות הכנה קונבנציונליות של רקמות. זה כרוך בהעמסת ניגודיות של הרקמה וטבילת הדגימה בממס סוכן ניגוד במהלך הרכישה. הגדלת גודל המדגם והרזולוציה מטילה הארכה של זמן הרכישה הכולל. לכן יציבות הרקמה הופכת להיות חיונית לשחזור תמונה שמיש, כלומר יש למנוע עיוות רקמות כתוצאה מייבוש. עם זאת, לשימוש בנוזל טבילה יש חסרונות: (i) עוצמת אות הרקע הכוללת הופכת לבלתי זניחה ו-(ii) מקדמת דילול של מולקולות ניגוד הקשורות לרקמות. שני גורמים אלה תורמים להורדת ניגודיות התמונה.
מחקר זה מפרט צינור עיבוד רקמות חדשני כדי להקל על הנחתת הפוטונים ברקע ולמטב את הטווח הדינמי שמעניקים סוכני שיפור הניגודיות. מומלץ להשתמש בגישה של ייבוש אוויר ברקמות עם חיזוק רקמות כימיות כדי להגביל את עיוות הרקמה29. לכן דגימות רקמות יכולות להישאר יציבות באוויר למשך רכישות ארוכות ולהשמיט תרומות רקע מנוזלי טבילה. צינור מתודולוגיה זה מספק: (1) פרוטוקול עיבוד והדמיה מקיף של רקמות הממוטב באמצעות לבבות חזירים שלמים; (ii) הערכה של טכניקות ריכוז וטעינה של ניגודיות, ו-(3) יישום של צינור זה בשני מודלים שונים של מחלות כרוניות של פרפור פרוזדורים ואוטם שריר הלב בלב כבשים. התפתחות המודלים של מחלות כרוניות תוארה במקום אחר עבור כל מודל של מחלת לב כרונית, אוטם שריר הלב המושרה על ידי אמבוליזציה של עורקים כליליים מלעוריים13 ופרפור פרוזדורים המקיים את עצמו30.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% neutral buffered formalin</td>
			<td>Diapath</td>
			<td>F0043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride solution</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>21114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Canulation Tubing PTFE</td>
			<td>VWR</td>
			<td>DENE3400102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant Head 1L Reservoir</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>50-0496</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G5767</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20821.330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>796881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium (5000 U/mL)</td>
			<td>Panpharma</td>
			<td>3400891287301.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexamethyldisilazane (HMDS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>440191-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid, ACS reagent, 37%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>258148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride solution</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>63020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5368</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphomolybdic acid hydrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>417895000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pump Tubing, 3-Stop</td>
			<td>Ismatec</td>
			<td>FV-96328-48</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SkyScan, 1276</td>
			<td>Bruker</td>
			<td></td>
			<td>micro CT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S3014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide solution 50% in H2O</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>415413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube Connector Kits</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-1407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing pump</td>
			<td>Ismatec</td>
			<td>ISM 1089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing Tygon R-3603 1.6 mm 3.2 mm 0.8 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>228-1279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing Tygon R-3603 3.2 mm 4.8 mm 0.8 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>228-1283</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Two-part single-use syringes 50 mL</td>
			<td>Norm-Ject</td>
			<td>4850001000</td>
			<td>Pyrogen-free, PVC-free</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tissue preparation techniques for contrast-enhanced micro computed tomography imaging of large mammalian cardiac models with chronic disease

שיפוץ מבני הוא תוצאה שכיחה של לחצים פתולוגיים כרוניים המוטלים על הלב. הבנת התכונות האדריכליות וההרכביות של רקמות חולות היא קריטית כדי לקבוע את האינטראקציות שלהם עם התנהגות קצבית. שיפוץ רקמות בקנה מידה זעיר, מתחת לרזולוציה הקלינית, מתגלה כמקור חשוב להפרעת קצב קטלנית, עם שכיחות גבוהה בקרב מבוגרים צעירים. עדיין נותרו אתגרים בהשגת ניגודיות הדמיה גבוהה ברזולוציה מיקרוסקופית מספקת עבור מודלים פרה-קליניים, כגון לבבות שלמים של יונקים גדולים. יתר על כן, שיפור הניגודיות הסלקטיבית של הרכב הרקמות להדמיה תלת-ממדית ברזולוציה גבוהה עדיין חסר. הדמיה לא הרסנית באמצעות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת מראה הבטחה להדמיה ברזולוציה גבוהה. המטרה הייתה להקל על הסבל מצילום רנטגן על הנחתת יתר בדגימות ביולוגיות גדולות. לבבות הופקו מחזירים בריאים (N = 2), וכבשים (N = 2) עם אוטם שריר הלב כרוני המושרה והיווצרות צלקת פיברוטית או פרפור פרוזדורים כרוני. לבבות שנכרתו הודבקו ב: תמיסת מלח בתוספת חומר מרווה של יון סידן ומרחיב כלי דם, אתנול בהתייבשות סדרתית והקסמתילדיזליזיאן תחת ואקום. זה האחרון חיזק את מבנה הלב במהלך ייבוש האוויר במשך שבוע. רקמה דומיננטית של קולגן נקשרה באופן סלקטיבי על ידי חומר משפר ניגודיות של קרני רנטגן, חומצה פוספומוליבדית. קונפורמציית הרקמה הייתה יציבה באוויר, ואיפשרה רכישות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבות ארוכות טווח כדי לקבל תמונות ברזולוציה גבוהה (איזוטרופיות של 20.7 מיקרומטר). העמסת חומר ניגוד אופטימלי על ידי דיפוזיה הראתה שיפור ניגודיות סלקטיבי של שכבת האפיתל וסיבי Purkinje תת-אנדוקרדיאליים בחדרי חזירים בריאים. לבבות פרפור פרוזדורים (AF) הראו הצטברות ניגודיות מוגברת בדפנות האחוריות ובנספחים של האטריה, המיוחסת לתכולת קולגן גבוהה יותר. לבבות אוטם שריר הלב הראו ניגודיות מוגברת באופן סלקטיבי באזורים של פיברוזיס לבבי, מה שאיפשר זיהוי של סיבי שריר הלב ששרדו. תכשירי רקמות מיובשות באוויר, המשופרות בניגודיות, אפשרו הדמיה בקנה מידה זעיר של לב היונקים הגדולים השלם ושיפור הניגודיות הסלקטיבית של מרכיבי המחלה הבסיסית.

Watch this Scientific Journal Video about Tissue Preparation Techniques for Contrast-Enhanced Micro Computed Tomography Imaging of Large Mammalian Cardiac Models with Chronic Disease at JoVE.com

Tissue Preparation Techniques for Contrast-Enhanced Micro Computed Tomography Imaging of Large Mammalian Cardiac Models with Chronic Disease

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לקבלת תמונות טומוגרפיה ממוחשבות מיקרו ברזולוציה גבוהה של לבבות שלמים של יונקים גדולים בריאים ופתולוגיים עם שיפור ניגודיות סלקטיבית של קולגן.

טכניקות הכנת רקמות להדמיית טומוגרפיה ממוחשבת מיקרו משופרת ניגודיות של מודלים לבביים של יונקים גדולים עם מחלות כרוניות

Structural remodeling is a common consequence of chronic pathological stresses imposed on the heart. Understanding the architectural and compositional ...

פרוטוקול זה מספק תובנה מיקרו-מבנית על מחלות פתולוגיות מבניות בכל קנה המידה של האיברים באמצעות טומוגרפיה של מיקרו-מחשבים. בפרוטוקול זה מיושמת שיטת הכנת רקמות מיוחדת כדי לייעל הדמיה ברזולוציה גבוהה של דגימות לב שלמות ממודלים תרגומיים של יונקים גדולים בבני אדם עם שיפור ניגודיות סלקטיבי של מחלות מבניות. המיקרו-מבנה הלב כגון התפלגות הפיברוזיס וארגון שריר הלב הנרגש עומד בבסיס ספקטרום רחב של מחלות לב ומכין את הקרקע להפרעת קצב מסכנת חיים.מי שידגים את ההליך יהיה נסטור פאלארס-לופון, פוסט-דוקטורנט בוגר המעבדה שלי. כדי להתחיל, להכין תמיסה cardioplegic המכיל נתרן הפרין ולאחסן את הפתרון על ארבע מעלות צלזיוס. לאחר מכן, הכינו PBS/EDTA על ידי הוספה ראשונה של EDTA לליטר אחד של מים מזוקקים לריכוז סופי של 10 מילימולר.לאחר מכן להגדיל ולשמור על ה- pH של הפתרון ב 12 באמצעות נתרן הידרוקסיד כדי להמיס את EDTA. לאחר שה-EDTA מומס במלואו, הורידו את ה-pH ל-7.4 באמצעות חומצה הידרוכלורית. לאחר מכן הוסף שקית נייר כסף אחת של PBS כדי לקבל תמיסת טוחנת 0.01 עם pH 7.4.אחסנו את הפתרון המוכן בטמפרטורת החדר. לבסוף, הכינו תמיסת סוכן ניגודיות PMA של 1%אתנול על ידי הוספת 10 גרם PMA לליטר אחד של אתנול מוחלט. אחסנו את הפתרון המוכן בטמפרטורת החדר.מכינים מאגר של ליטר אחד הנתמך 80 ס"מ מעל צלחת כריתה, ומצמידים צינור תרמופלסטי לנמל ניקוז של המאגר. קבעו ברז תלת-כיווני לצינורות הניקוז והצמידו צינורות תרמופלסטיים נוספים לכל יציאה פנויה על הברז התלת-כיווני. תקן הקשות דו-כיווניות לקצוות החופשיים של הצינורות.לאחר מכן, למלא את המאגר עם תמיסה cardioplegic בתוספת הפרין. פתחו את הברזים כדי לאפשר לתמיסת הלב-ריאה להתנקז ולהסיר את כל בועות האוויר. לאחר מכן סגרו את הברזים הדו-כיווניים.לאחר חילוץ הלב מבעל חיים מורדם, מניחים אותו בתמיסה לב-ריאה קרה המאוחסנת על קרח עד שהיא מוכנה לנתיחה. לאחר מכן הכינו צינורית לאוסטאו הכלילי השמאלי והימני על ידי חיתוך חמישה סנטימטרים של צינורות PTFE וחימום קצה אחד על ידי הנחת הקצה ליד להבה עירומה. ברגע שמילימטר אחד של הקצה מתחיל להתמוסס והופך שקוף, לחץ את הקצה על משטח עמיד בחום קשה כדי לעצב רכס בקצה הצינורית כדי למנוע מהצינורית להחליק מתוך הכלים, ואז הכנס סנטימטר אחד של הקצה הלא מחומם של כל צינורית לשני הקצוות של צינורית הניקוז של מאגר הניקוז.לאחר מכן, הסר את צינורית אבי העורקים ולמקם את האוסטאו השמאלי והימני של העורקים הכליליים תחת תמיסת הלב הקר. באמצעות מספריים מחודדים, מפרידים בזהירות את שורש אבי העורקים מהרקמה הסובבת מעל ומתחת לאוסטאו הכלילי כדי לאפשר השחלה של תפר משי בעל מד אפס מתחת לכלי הכלילית. לאחר מכן פתחו את הברזים הדו-כיווניים והכניסו את קצות הצינורית לתוך האוסטאו הכלילי.כאשר קצות הצינורית נמתחים סנטימטר עד שני סנטימטרים לתוך האוסטאו ומעבר למיקום התפר, קושרים את הצינורית. לאחר מכן, לשטוף את הלב תוך עיסוי עדין של החדרים במשך 15 דקות עד שהלב מתנקה מדם. לאחר השטיפה, סגרו את הברזים הדו-כיווניים, נתקו אותם מהברז התלת-כיווני והעבירו את הלב למיכל פלסטיק אחד ליטר עמיד בפני כימיקלים המכיל 500 מיליליטרים של תמיסת PBS/EDTA.שחזרו את תמיסת ה-PBS/EDTA בצינורות התרמופלסטיים מתחת למכסה אדים באמצעות משאבה פריסטלטית עם שני ערוצים. מכינים את צינורות המשאבה עד שהצינורות נעדרים בועות אוויר. לאחר מכן יש לעיין בכל צינורית עורק כלילי על ידי סירקולציה בטמפרטורת החדר במשך שעתיים ב-80 מיליליטר לדקה.לאחר הקפדה על הפעלת מכסה האדים, עצרו את המשאבה, נקזו את התמיסה מהמיכל והחליפו אותה ב-10% פורמלין לקיבוע למשך שעה אחת ב-80 מיליליטר לדקה. מעיינים בלב באמצעות סדרה של ריכוזי אתנול מצטברים, החל מ-20% אתנול למשך שלוש שעות לפחות. לאחר מכן החליפו את ה-20% אתנול ב-30% אתנול ותחליפו אותה במשך שעתיים.המשך את הזלוף על ידי הגדלת ריכוז האתנול בכל איטרציה עם זלוף מינימלי של שעה אחת בכל ריכוז. כדי לחזק את רקמת הלב לפני ייבוש האוויר, יש לשחזר תערובת שווה של אתנול ו-HMDS למשך 10 דקות ולאחר מכן 100% HMDS למשך שעתיים נוספות. עצרו את משאבת הזלוף, ואז נתקו את הצינורית מהצינוריות והשעו את הלב מתופר אבי העורקים בתוך מכסה המנוע של האדים.החליקו בזהירות שקית נעילת רוכסן על הלב וסגרו את אטם השקית מעל התפר כדי להפחית את החשיפה של הלב לאוויר המסתובב. אפשרו ללב להתייבש באמצעות אידוי במשך שבוע. עבור חומרי ניגוד להעמסת דיפוזיה, הסר את השקית.יש לשטוף את הלב ב-100%אתנול במשך 15 דקות עם תסיסה לפני שאתם טובלים אותו ב-100% אתנול בתוספת 1%PMA למשך 48 שעות תחת ואקום, ואז מכסים את הלב בשקית רוכסן כפי שהודגם קודם לכן ומאפשרים לו להתייבש. הרכיבו את הלב המיובש באוויר על מחזיק הדגימה המתאים. כדי למנוע כל תזוזה במהלך מדידות המיקרו CT של קרני הרנטגן, השתמשו במהדק המעוגן למחזיק הדגימה ואבטחו את הלב באמצעות אבי העורקים המיובש והנוקשה.הרכיבו את מחזיק הדגימה בסורק המיקרו-CT. לאחר מכן, פתח את התוכנה ויזם את מערכת המיקרו CT של קרני רנטגן. לאחר מכן הגדר את מסנן הרנטגן אלומיניום למילימטר אחד.מתח מקור רנטגן ל 60 קילובולטים וזרם ל 120 מיקרואמפרים. בנוסף, הגדר את ממדי התמונה ל- 2, 016 על 1, 344 פיקסלים וגודל פיקסלים ל- 20 מיקרומטר. תצפית על צילומי רנטגן לאורך התמיכה כדי לקבוע את שדה ההדמיה הכולל בגישה האורכית של הלב.לצורך סריקה, השתמש בשלב סיבוב של 0.18 מעלות, מסגרת ממוצעת של חמש וסיבוב מדגם של 180 מעלות על ידי ביטול הבחירה באפשרות לרכישה של 360 מעלות. בחר במצב סריקת היסט כדי לצלם את כל רוחב התמיכה לדוגמה. לאחר הסריקה, השתמש בתוכנה לשחזור טומוגרפי של נפח תמונה תלת מימדי איזוטרופי.בסופו של דבר תוכנת recon, השתמש בתיקון ממצאים הקשורים לרכישה, כולל השפעות התקשות קרן של 10% והפחתת חפץ טבעתי של שמונה. לאחר מכן, באמצעות תוכנת Data Viewer, הצג באופן חזותי את מחסנית הנתונים המשוחזרת. לכוון באופן דיגיטלי את הדגימה בתוך גבולות התמונה כדי להתאים מחדש את הציר הארוך והקצר של הדגימות עם שלושת העקרונות של ציר נפח התמונה.לבסוף, חתוך את עוצמת הקול של התמונה בכל שלושת הצירים כדי להסיר שכבות רקע חיצוניות של התמונה ולהפחית באופן מרבי את גודל התמונה הכולל. הדמיית שידור רנטגן של לבבות חזירים מיובשים באוויר מראה ציוני דרך אנטומיים עיקריים כולל חללי החדר וקיר השריר. שחזורים טומוגרפיים של נפחי תמונה תלת-ממדיים הראו הפרדה ברורה בין רקמה לרקע בגבולות אפיקרדיאליים ואנדוקרדיאליים.צביעת הטריכרום של מייסון הראתה כתמים חיוביים של קולגן בשכבות האפיתל והאנדותל באופן פרא-וסקולרי ברקמה התת-אפיקרדיאלית. תאורת שדה בהיר הראתה צבע כהה יותר במבנים קולגן לאחר צביעת PMA, מה שתומך בהצטברות המועדפת של PMA. תמונות פלואורסצנטיות מוכתמות של PMA של מקטעי רקמות חדריות גרמו ל-PMA לגרום לאובדן פלואורסצנציה באתרים של קולגן.כאשר דגימת לב מוכתמת בחומר ניגוד באמצעות זלוף לפני ייבוש האוויר, שחזור התמונה חשף כתמים מטושטשים מאוד בתוך תא שריר הלב. יתר על כן, רקמת ניגודיות נמוכה הראתה הפרדה לקויה מעוצמת הרקע. הדמיית מיקרו CT של חלק כבשה הסובל מאוטם שריר הלב כרוני חשפה נגע פיברוטי מרכזי וצפוף המוקף באזור גבול רופף והטרוגני.עוצמות האות הגדולות ביותר של נפחי תמונה משוחזרים בגבולות הרקמה ובאזורי הצלקת מוצגות כאן. חומרי הניגודיות הכתימו בצורה גרועה את שריר הלב הבריא, אך הניגודיות המיקרו-מבנית נשמרה. באזור הגבול, רקמת הצלקת הייתה שזורה בשריר הלב ששרד.פיברוזיס צפוף נראה טרנסמורלי אך בעל מרקם המצביע על שונות בהרכב. אזור החדר השמאלי הטרנסמורלי של הכנת רקמות מוכתמות PMA הראה כתמים סלקטיביים לקולגן וללא כתמים באזורים של שריר הלב ששרדו. זמני זלוף ארוכים יותר באמצעות אתנול מומלצים כדי להבטיח החלפה מלאה של תוכן המים של הלב עם אתנול.אינטראקציות בין HMDS למים מייצרות חום, שעלול לפגוע בדגימה. יתרון חזק של הליך זה הוא היכולת לאמת הדמיית מיקרו CT באמצעות היסטולוגיה. דגימות מיובשות באוויר יכולות להיות מוטמעות ישירות בפרפין לצורך חתך כתמים, והדמיית מיקרוסקופ.

Research

JoVE Journal

Medicine

Contrast Enhanced Vessel Imaging using MicroCT

כלי משופר ניגודיות הדמיה באמצעות MicroCT

Microscopic computed tomography (microCT) offers high-resolution volumetric imaging of the anatomy of living small animals. However, the contrast between ...

Segmentation and Measurement of Fat Volumes in Murine Obesity Models Using X-ray Computed Tomography

פילוח ומדידה של כמויות השומן מודלים השמנת יתר Murine באמצעות קרני רנטגן טומוגרפיה ממוחשבת

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are ...

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

זלוף מדרדר ומילוי בכלי הדם הכליליים עכבר כהכנה מיקרו טומוגרפיה ממוחשבת והדמיה

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

Osmotic Drug Delivery to Ischemic Hindlimbs and Perfusion of Vasculature with Microfil for Micro-Computed Tomography Imaging

משלוח סמים האוסמוטי לhindlimbs איסכמי וטפטוף של כלי דם עם Microfil למייקרו-טומוגרפיה ממוחשבת הדמיה

Preclinical research in animal models of peripheral arterial disease plays a vital role in testing the efficacy of therapeutic agents designed to ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

הערכה של יכולת הקיום של הזרקת שומן האנושי בעכברי עירום עם מיקרו-טומוגרפיה ממוחשבת

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Combined Near-infrared Fluorescent Imaging and Micro-computed Tomography for Directly Visualizing Cerebral Thromboemboli

משולב האינפרה-אדום הקרוב הדמיה פלורסנט וטומוגרפיה-מחושב מיקרו ישירות חזותי מוחין Thromboemboli

Direct thrombus imaging visualizes the root cause of thromboembolic infarction. Being able to image thrombus directly allows far better investigation of ...

Cardiac Magnetic Resonance for the Evaluation of Suspected Cardiac Thrombus: Conventional and Emerging Techniques

תהודה מגנטית קרדיולוגית להערכת החשוד בתרובוס הלב: טכניקות קונבנציונליות והמתעוררים

We present the conventional cardiac magnetic resonance (CMR) protocol for evaluating a suspected thrombus and highlight emerging techniques.&#160;The ...

DUCT: Double Resin Casting followed by Micro-Computed Tomography for 3D Liver Analysis

צינור: יציקת שרף כפול ואחריו טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת לניתוח כבד תלת-ממדי

The liver is the biggest internal organ in humans and mice, and high auto-fluorescence presents a significant challenge for assessing the ...

Sample Preparation for Computed Tomography-based Three-dimensional Visualization of Murine Hind-limb Vessels

הכנה מדגמית להדמיה תלת-ממדית מבוססת טומוגרפיה ממוחשבת של כלי דם הינדיים של מורין

Blood vessels are complex networks with tree-like structures, and vascular networks are essential for maintaining both circulation and maintaining organ ...

Four-Dimensional Computed Tomography-Guided Valve Sizing for Transcatheter Pulmonary Valve Replacement

שינוי גודל שסתום מונחה טומוגרפיה ממוחשבת ארבע מימדי להחלפת שסתום ריאות Transcatheter

The measurements of the right ventricle (RV) and pulmonary artery (PA), for selecting the optimal prosthesis size for transcatheter pulmonary valve ...