Name: in situ hybridization in zebrafish larvae and juveniles during mesonephros development
Uploaded: 2021-08-13T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Situ Hybridization in Zebrafish Larvae and Juveniles during Mesonephros Development at JoVE.com

Die Finanzierung wurde von der Pennsylvania Academy of Science und dem Commonwealth of Pennsylvania Biologs sowie der Indiana University of Pennsylvania (School of Graduate Studies and Research, Department of Biology und dem Cynthia Sushak Undergraduate Biology Fund for Excellence) bereitgestellt. Die transgene Tg(lhx1a-EGFP)- Leitung wurde von Dr. Neil Hukriede (University of Pittsburgh) zur Verfügung gestellt.

Die Verwendung von Zebrafischlarven und Jungfischen ist von der IUP IACUC genehmigt (Protokoll #02-1920, #08-1920). Details zum Lösungsinhalt sind in der Materialtabelle aufgeführt.
1. Aufzucht von Larven
HINWEIS: Es dauert bis zu 21 Tage oder länger, um Larven und Jungtiere in das Stadium des Interesses zu bringen.
<ol><li>Richten Sie erwachsene Zebrafische ein, um sich zu paaren, indem Sie am späten Nachmittag nach ihrer letzten Mahlzeit 1 m...

<ol>
	<li>Kinth, P., Mahesh, G., Panwar, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+of+zebrafish+research:+a+global+outlook.">Mapping of zebrafish research: a global outlook.</a> Zebrafish. 10 (4), 510-517 (2013).</li><li>Grunwald, D. J., Eisen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Headwaters+of+the+zebrafish+-+emergence+of+a+new+model+vertebrate.">Headwaters of the zebrafish - emergence of a new model vertebrate.</a> Nature Reviews. Genetics. 3 (9), 717-724 (2002).</li><li>Wingert, R. A., Davidson, A. 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Die hier beschriebene In-situ-Hybridisierungsmethode zielt darauf ab, die Entwicklung von Mesonephrosen zu untersuchen. Es kann jedoch angewendet werden, um die Entwicklung anderer Gewebe und Organe während der Metamorphose zu untersuchen, wie Darm, Nervensystem, Schuppen und Pigmentierung14. Sonden können für endogene Gene oder fluoreszierende Marker in transgenen Linien erzeugt werden.
Es ist wichtig, dass die Larven intakt bleiben, um die Organe und Geweb...

Der Zebrafisch-Embryo ist aufgrund seiner geringen Größe, Transparenz, verfügbaren Werkzeuge und seines Überlebens ohne Fütterung für bis zu fünf Tage ein wichtiges Modell für die Untersuchung der Gewebeentwicklung1,2. Es hat wesentlich zum Verständnis der Nierenentwicklung und des Schutzes zwischen Zebrafischen und Säugetieren beigetragen3,4,5. Die Niere spielt eine wesentliche Rolle bei der Aufrechterhaltung der Flüssigkeitshomöostase, der Filterung des Blutes und der Ausscheidung von Abfällen6. Das Nephron, die funktionelle Einheit der Niere, besteht aus einem Blutfilter, der mit einem langen Tubulus verbunden ist. Im Zebrafisch bilden sich während seines gesamten Lebens zwei Nierenstrukturen. Der Pronephros (die temporäre embryonale Niere) bildet sich zuerst während der frühen Entwicklung. Es besteht aus zwei Nephronen, die entlang der anterior-posterioren Achse verlaufen und wird etwa 2 Tage nach der Befruchtung funktionsfähig (dpf). Der Nutzen des Pronephros liegt in seiner Einfachheit, da er nur zwei Nephrone hat, die meist linear und leicht zu visualisieren sind (obwohl sich der proximale gewundene Tubulus bei drei dpf zu winden beginnt)3. Dies hat nicht nur Studien seiner frühen Entwicklung aus dem intermediären Mesoderm ermöglicht, sondern auch das Segmentierungsmuster und die Tubulireparatur7,8.
Die Nützlichkeit von Zebrafischen wird nach fünf dpf begrenzt, wenn das Eigelb vermindert ist und die Larven auf die Fütterung im aquatischen System angewiesen sind9. Im Alter von etwa 2 Wochen durchlaufen die Larven eine Metamorphose zu Juvenilen, bei denen sich neues Gewebe bildet und alte Gewebe verloren gehen und / oder reorganisiert werden9. Dies ist auch der Zeitpunkt, an dem sich der Mesonephros (die permanente erwachsene Niere) bildet10,11,12. Das erste erwachsene Nephron bildet sich in der Nähe des sechsten Somites und verschmilzt mit dem distalen frühen Tubulus des Pronephros. Zusätzliche Nephrone werden zunächst posterior zu dieser Position hinzugefügt, später aber auch nach vorne. Die primären Nephrone in dieser ersten Welle verschmelzen mit den Tubuli des Pronephros und teilen sich ein gemeinsames Lumen, um ihren Abfall zu deponieren. Sekundäre Nephrone bilden sich in der nächsten Welle und verschmelzen zu primären Nephronen. Dieser wiederholte Prozess erzeugt einen Mesonephros, der verzweigt ist, ähnlich wie die Säugetierniere. Vermutlich verliert der Pronephros schließlich seine Tubulusidentität und wird zu zwei großen Sammelkanälen, in denen alle Nephrone ihren Abfall ablassen13.
Vor der Bildung des ersten adulten Nephrons beginnen einzelne Vorläuferzellen in ~ 4 mm (Gesamtlänge) Larven (~ 10 dpf) zu erscheinen. Diese Zellen, die in der transgenen Linie Tg(lhx1a-EGFP) markiert sind, haften am Pronephros und scheinen an zukünftige Stellen der Nephrogenese zu wandern. Die einzelnen Zellen verschmelzen zu Clustern, die sich zu neuen Nephronen differenzieren12. Es ist unklar, wo sich diese Zellen befinden oder welche Gene sie vor Beginn der Mesonephrogenese exprimieren.
Das Verständnis der Mesonephrosentwicklung liefert Einblicke in die Säugetierniere auf eine Weise, die der Pronephros nicht kann. Dazu gehören die Bildung nephrogener Aggregate aus einzelnen Vorläuferzellen, die funktionelle Integration neuer Nephrone mit bestehenden und die verzweigte Morphogenese. Es gibt jedoch Einschränkungen bei der Untersuchung der postembryonalen Entwicklung. Die Larven sind aufgrund ihrer größeren Größe und Pigmentierung weniger transparent. Die Entwicklungszeit ist zwischen den einzelnen Tieren nicht synchron und hängt stark von Umweltfaktoren wie Fütterung und Gedränge ab9,14. Obwohl Knockdown-Reagenzien existieren, sind sie bei Larven im Vergleich zu Embryonen weniger wirksam15. In diesem Protokoll wird eine In-situ-Hybridisierungsmethode zur Bestimmung der Genexpression während der Entwicklung von Zebrafisch-Mesonephrosen beschrieben. Mehrere Schritte werden optimiert, um die Visualisierung des Mesonephros und das Eindringen und Waschen der Sonde und des Antikörpers zu verbessern. Die transgene Linie Tg (lhx1a-EGFP) wird zusammen mit einer Sonde für EGFP verwendet, um einzelne Vorläuferzellen, nephrogene Aggregate und die distalen Tubuli von entstehenden Nephronen zu markieren. Diese Methode wird ein tieferes Verständnis der Mesonephrosentwicklung und Einblicke in regenerative Therapien ermöglichen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anti-fluorescein antibody</td>
			<td>Roche/Sigma-Aldrich</td>
			<td>11426338910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleaching solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>0.8% KOH, 0.9% H2O2 in PBST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blocking reagent</td>
			<td>Roche/Sigma-Aldrich</td>
			<td>11096176001</td>
			<td>Use for blocking solution, prepare according to manufacture&#39;s instruction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>&#160;22-363-549</td>
			<td>100 &#956;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E3 medium</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>5 mM NaCl, 0.33 mM CaCl2, 0.33 mM MgSO4, 0.17 mM KCl, 0.0001% methylene blue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eyelash manipulator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1083208</td>
			<td>Use to manipulate larvae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixing solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>4% paraformaldehyde, 1% DMSO in PBS; heat at 65&#176;C while shaking until the powder dissolves, then add DMSO after it cools down</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein probe synthesis</td>
			<td>Roche/Sigma-Aldrich</td>
			<td>11685619910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass vial</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-338B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hatchfry encapsulation</td>
			<td>Argent</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyb- solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>50% formamide, 5X SSC, 0.1% Tween-20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyb+ solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>HYB-, 5 mg/mL torula RNA, 50 ug/mL heparin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MAB (10X)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1 M maleic acid, 1.5 M NaCl, pH 7.5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MABT</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1X MAB, 0.1% Tween-20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Maleic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M0375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (10X)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>8% NaCl, 0.2% KCl, 1.44% Na2HPO4, 0.24% KH2PO4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBST</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1X PBS, 0.1% Tween-20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBST2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1X PBS, 0.2% Tween-20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powder food</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Mix 2 g of each of spirulina and hatchfry encapsulon in 50 mL of fish system water and shake well</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5568</td>
			<td>Use to permeabilize larvae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>20&#160; &#956;g/mL, 1% DMSO final concentration in PBST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spirulina microfine powder</td>
			<td>Argent</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SSC (20X)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>3 M NaCl, 0.3 M sodium acetate anhydrous, pH 7, autoclave</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SSCT (0.2X)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Dilute from 20X SSC, 0.1% Tween-20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SSCT (2X)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Dilute from 20X SSC, 0.1% Tween-20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Staining buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>100 mM Tris pH 9.5, 50 mM MgCl2, 100 mM NaCl, 0.1% Tween-20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Staining solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>200 &#956;g/mL iodonitrotetrazolium chloride, 200 &#956;g/mL 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate disodium salt, in staining buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stopping solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1 mM EDTA, pH 5.5, in PBST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Torula (yeast) RNA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R6625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E10521</td>
			<td>2%, pH 7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wash buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>50% formamide, 2X SSC, 0.1% Tween-20</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in situ hybridization in zebrafish larvae and juveniles during mesonephros development

Der Zebrafisch bildet in seinem Leben zwei Nierenstrukturen. Der Pronephros (embryonale Niere) bildet sich während der Embryonalentwicklung und beginnt 2 Tage nach der Befruchtung zu funktionieren. Der pronephros besteht aus nur zwei Nephronen und dient während des Larvenlebens als einzige Niere, bis aufgrund der zunehmenden Körpermasse mehr Nierenfunktion erforderlich ist. Um diesem höheren Bedarf gerecht zu werden, beginnt sich während der Metamorphose der Mesonephros (erwachsene Niere) zu bilden. Die neuen primären Nephrone verschmelzen mit dem Pronephros und bilden verbundene Lumen. Dann verschmelzen sekundäre Nephrone mit primären (und so weiter), um ein verzweigtes Netzwerk im Mesonephros zu schaffen. Die überwiegende Mehrheit der Forschung konzentriert sich auf den Pronephros aufgrund der Leichtigkeit der Verwendung von Embryonen. Daher besteht die Notwendigkeit, Techniken zu entwickeln, um ältere und größere Larven und Jungfische zu untersuchen, um die Entwicklung von Mesonephrosen besser zu verstehen. Hier ist ein In-situ-Hybridisierungsprotokoll für die Genexpressionsanalyse für die Penetration von Sonden, das Waschen von Sonden und Antikörpern und das Bleichen von Pigmenten optimiert, um die Mesonephrose besser sichtbar zu machen. Die transgene Linie Tg(lhx1a-EGFP) wird verwendet, um Vorläuferzellen und die distalen Tubuli von naszierenden Nephronen zu markieren. Dieses Protokoll füllt eine Lücke in der Mesonephrosforschung. Es ist ein entscheidendes Modell, um zu verstehen, wie sich neues Nierengewebe bildet und in bestehende Nephrone integriert und Einblicke in regenerative Therapien gibt.

Unter Verwendung der transgenen Linie Tg(lhx1a-EGFP) wurde gezeigt, dass dieses In-situ-Hybridisierungsprotokoll bei der Markierung von Nierenvorläuferzellen und verschiedenen Nephronstrukturen während der Mesonephrosentwicklung wirksam ist. Wie erwartet, ist auch das zentrale Nervensystem in dieser transgenen Linie markiert (nicht gezeigt). Das anfängliche mesonephrische Nephron bildet sich bei etwa 5,2 mm, dorsal zum Pronephros (Abbildung 2A), und der distale Tubulus d...

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In Situ Hybridization in Zebrafish Larvae and Juveniles during Mesonephros Development

Der Zebrafisch ist ein wichtiges Modell für das Verständnis der Nierenentwicklung. Hier wird ein In-situ-Hybridisierungsprotokoll optimiert, um die Genexpression in Zebrafischlarven und Juvenilen während der Mesonephrosentwicklung nachzuweisen.

In situ Hybridisierung in Zebrafischlarven und Jungfischen während der Mesonephrosentwicklung

The zebrafish forms two kidney structures in its lifetime. The pronephros (embryonic kidney) forms during embryonic development and begins to function at ...

Dieses Protokoll ist von Bedeutung, da es die Bestimmung der Genexpression bei älteren Zebrafischlarven und Jungtieren während der Metamorphose ermöglicht. Der Vorteil dieser Technik besteht darin, dass mehrere Schritte für die Penetration der Sonde und die Visualisierung der Niere optimiert wurden. Stellen Sie zunächst erwachsene Zebrafische für die Paarung auf, indem Sie am späten Nachmittag nach ihrer letzten Mahlzeit einen männlichen und einen weiblichen Fisch in einem Paarungsbecken hinzufügen.Am nächsten Tag werden die Embryonen in Petriplatten mit E3-Medium gesammelt. Legen Sie fünf Tage nach der Düngung einen 400-Mikrometer-Bildschirm in einen 2,8-Liter-Tank und füllen Sie ihn mit 2 Zentimetern Systemwasser. Dann fügen Sie die Larve von einer Petriplatte hinzu.Um die Larve zu fixieren, entfernen Sie einen Larventank zum gewünschten Zeitpunkt, dann mit einem Netz und einer Transferpipette mit abgeschnittener Spitze übertragen Sie die Larve auf die Petriplatte. Als nächstes fügen Sie zwei Milliliter 2% Tricain hinzu, um die Larve zu immobilisieren. Ersetzen Sie nach der Immobilisierung das Tricain durch 20 Milliliter Fixierlösung.Nach 30 Minuten die Larve in ein 50-Milliliter-Röhrchen mit 25 Millilitern frischer Fixierlösung geben. Dann, um sicherzustellen, dass die Kappe fest ist, schaukeln Sie die Röhre langsam bei vier Grad Celsius für zwei Tage. Ersetzen Sie am dritten Tag die Fixierlösung durch 20 Milliliter PBST und übertragen Sie die Larve auf eine Petriplatte.Um die Larve zu messen, legen Sie die Petriplatte auf ein flaches Lineal unter einem Seziermikroskop und bewegen Sie dann mit einem Wimpernmanipulator jede Larve auf das Lineal, um ihre Gesamtlänge zu messen. Nachdem Sie alle Larven gemessen haben, kombinieren Sie mehrere Larven ähnlicher Länge auf einem 5,5-Milliliter-Glasfläschchen mit PBST. Ersetzen Sie zur Austrocknung das PBST in der Glasfläschchen durch vier Milliliter 100% Methanol und lagern Sie die Durchstechflasche dann zwei Tage lang bei minus 20 Grad Celsius.Ersetzen Sie zur Rehydratation das 100% Methanol durch vier Milliliter einer 75% Methanol- und 25% PBST-Lösung und rocken Sie die Durchstechflasche fünf Minuten lang. Ersetzen Sie dann die Methanol- und PBST-Lösung durch vier Milliliter frisches PBST und rocken Sie die Durchstechflasche erneut für 10 Minuten. Für die Proteinase-K-Verdauung ersetzen Sie das PBST durch zwei Milliliter einer Proteinase-K-Lösung und rocken die Durchstechflasche bei Raumtemperatur für 30 Minuten.Als nächstes übertragen Sie zum Bleichen die Larve auf eine Sechs-Well-Platte und ersetzen Sie das PBST durch drei Milliliter frische Bleichlösung. Nach dem vollständigen Verschwinden der Pigmentierung entlang des Mesonephros übertragen Sie die Larve zurück in eine Glasfläschchen, ersetzen Sie die Bleichlösung durch vier Milliliter PBST und rocken Sie die Durchstechflasche für 10 Minuten. Ersetzen Sie für die Vorhybridisierung die Fixierlösung durch vier Milliliter PBST und rocken Sie die Durchstechflasche für 10 Minuten, ersetzen Sie dann das PBST durch vier Milliliter Hyb-Lösung und Gestein für 10 Minuten.Nach zwei zusätzlichen Inkubationen in der Hyb-Lösung ersetzen Sie die Lösung durch vier Milliliter der Hyb+-Lösung. Verdünnen Sie gleichzeitig die EGFP-Fluoresceinsonde eins auf 100 in 500 Mikroliter Hybridisierung plus Lösung und inkubieren Sie die Durchstechflasche und die Sonde bei 70 Grad Celsius über Nacht. Um die Sonde zu hybridisieren, ersetzen Sie am nächsten Tag die Hyb+-Lösung in der Durchstechflasche durch die vorgewärmte Sonde und inkubieren Sie über Nacht bei 70 Grad Celsius.Am nächsten Tag fügen Sie 50 Milliliter vorgewärmtes 0,2-faches SSCT in ein 50-Milliliter-Röhrchen hinzu. Führen Sie dann ein 100-Mikrometer-Zellsieb in die Oberseite des Röhrchens ein, übertragen Sie die Larve aus der Glasfläschchen in das Zellsieb und stellen Sie sicher, dass die Larven in den Puffer eingetaucht sind, inkubieren Sie das Fläschchen bei 70 Grad Celsius für zwei Stunden. Nach der Inkubation wird das Zellsieb in ein neues Röhrchen mit 0,2-fachem SSCT vorgewärmt und zwei Stunden lang bei 70 Grad Celsius erneut inkubiert.Als nächstes, zum Blockieren, übertragen Sie die Larve auf eine neue Glasfläschchen und lassen Sie sie auf Raumtemperatur abkühlen. Ersetzen Sie dann die 0,2-fache SSCT-Lösung durch vier Milliliter einer 67%0,2-fachen SSCT- und 33%igen MABT-Lösung und rocken Sie die Durchstechflasche bei Raumtemperatur für 10 Minuten. Als nächstes ersetzen Sie die SSCTT MABT-Lösung durch vier Milliliter frisches MABT und inkubieren Sie die Durchstechflasche 10 Minuten lang auf einer Wippe.Ersetzen Sie dann den MABT durch vier Milliliter Blocklösung und inkubieren Sie vier Grad Celsius über Nacht. Ersetzen Sie am nächsten Tag die Blocklösung durch eine Antikörperlösung und inkubieren Sie zwei Tage lang bei vier Grad Celsius. Zum Waschen von Antikörpern die Larve in ein 50-Milliliter-Röhrchen übertragen, dann 40 Milliliter PBST2 hinzufügen und das Röhrchen auf die Seite legen, um über Nacht bei vier Grad Celsius zu inkubieren.Ersetzen Sie am Tag 12, nachdem Sie die Lava auf eine Sechs-Well-Platte übertragen haben, den PBST2 durch drei Milliliter Färbepuffer. Nach einer fünfminütigen Inkubation auf einer Wippe den Färbepuffer durch drei Milliliter der Färbelösung ersetzen. Wenn die gewünschte Färbeintensität erreicht ist, ersetzen Sie die Färbelösung durch drei Milliliter der Stopplösung und des Gesteins für 30 Minuten.Dann die Larve in eine neue Glasfläschchen geben, die Stopplösung durch vier Milliliter frische Fixierlösung ersetzen und eine Stunde bei Raumtemperatur inkubieren. Ersetzen Sie für die Bildgebung die Fixierlösung durch vier Milliliter frisches PBST. Nach einer 10-minütigen Inkubation auf einer Wippe die Larve auf eine Sechs-Well-Platte übertragen, dann die PBST durch vier Milliliter frisches PBST ersetzen und die Platte erneut für 10 Minuten schaukeln.Als nächstes fügen Sie drei Milliliter 50% Glycerin in PBST und Gestein für 10 Minuten hinzu und fotografieren Sie dann mit einem Seziermikroskop die Larve direkt in der Sechs-Well-Platte. Dieses In-situ-Hybridisierungsprotokoll markiert effektiv Nierenvorläuferzellen und verschiedene Nephronstrukturen unter Verwendung der Mesonephrosentwicklung. Das anfängliche mesonephrische Nephron bildet sich etwa 5,2 Millimeter dorsal zum Pronephros.Cluster von Vorläuferzellen sind während der Mesonephrosentwicklung zusätzlich zu einzelnen Vorläuferzellen vorhanden. Bei größeren Jungtieren kann eine Hintergrundfärbung in den Somiten auftreten. Insgesamt kann diese Methode verwendet werden, um andere Gewebe zu untersuchen, die sich während der Metamorphose bilden, zusätzlich zu sezierten erwachsenen Organen.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

In Situ Hybridization in Zebrafish Larvae and Juveniles during Mesonephros Development

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Das Verständnis frühen Organogenese das vereinfachte<em&gt; In-situ-</em&gt; Hybridisierung Protokoll<em&gt; Xenopus</em

Organogenesis is the study of how organs are specified and then acquire their specific shape and functions during development.  The Xenopuslaevis embryo ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

Capturing Tissue Repair in Zebrafish Larvae with Time-lapse Brightfield Stereomicroscopy

Erfassen von Gewebereparatur in Zebrafisch-Larven mit Zeitrafferhellstereomikroskopie

The zebrafish larval tail fin is ideal for studying tissue regeneration due to the simple architecture of the larval fin-fold, which comprises of two ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analyse von Zebrafisch-Larven Skelettmuskel Integrität mit Evans Blue Dye

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

Induktion von Hypoxie im lebenden Frosch und Zebrafisch Embryonen

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

Visualizing Multiciliated Cells in the Zebrafish Through a Combined Protocol of Whole Mount Fluorescent In Situ Hybridization and Immunofluorescence

Visualizing Multiciliated Cells in the Zebrafish Through a Combined Protocol of Whole Mount Fluorescent In Situ Hybridization and Immunofluorescence

Visualisierung von Multiciliated Zellen in der Zebrabärbling durch ein kombiniertes Protokoll der ganze Berg Leuchtstofflampen In Situ Hybridisierung und Immunfluoreszenz

In recent years, the zebrafish embryo has emerged as a popular model to study developmental biology due to traits such as ex utero embryo development and ...

Wholemount In Situ Hybridization for Astyanax Embryos

Wholemount In Situ Hybridization for Astyanax Embryos

Wholemount In Situ Hybridisierung für Astyanax Embryonen

In recent years, a draft genome for the blind Mexican cavefish (Astyanax mexicanus) has been released, revealing the sequence identities for thousands of ...

Genotyping and Quantification of In Situ Hybridization Staining in Zebrafish

Genotypisierung und Quantifizierung der In-Situ-Hybridisierungsfärbung in Zebrafischen

In situ hybridization (ISH) is an important technique that enables researchers to study mRNA distribution in situ and has been a critical technique in ...

Whole-Mount In Situ Hybridization in Zebrafish Embryos and Tube Formation Assay in iPSC-ECs to Study the Role of Endoglin in Vascular Development

Ganz-Mount-In-Situ-Hybridisierung in Zebrafisch-Embryonen und Tube-Formations-Assay in iPSC-ECs zur Untersuchung der Rolle von Endoglin in der Gefäßentwicklung

Vascular development is determined by the sequential expression of specific genes, which can be studied by performing in situ hybridization assays in ...

Whole Mount Immunohistochemistry in Zebrafish Embryos and Larvae

Ganzer Berg Immunhistochemie in Zebrafisch Embryonen und Larven

Immunohistochemistry is a widely used technique to explore protein expression and localization during both normal developmental and disease states. ...

Fluorescent Calcium Imaging and Subsequent In Situ Hybridization for Neuronal Precursor Characterization in Xenopus laevis

Fluorescent Calcium Imaging and Subsequent In Situ Hybridization for Neuronal Precursor Characterization in Xenopus laevis

Fluoreszierende Calcium-Bildgebung und anschließende In-Situ-Hybridisierung zur neuronalen Vorläufercharakterisierung bei Xenopus laevis

Spontaneous intracellular calcium activity can be observed in a variety of cell types and is proposed to play critical roles in a variety of physiological ...