Name: multiplexed fluorescent immunohistochemical staining of four endometrial immune cell types in recurrent miscarriage
Uploaded: 2021-08-04T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Multiplexed Fluorescent Immunohistochemical Staining of Four Endometrial Immune Cell Types in Recurrent Miscarriage at JoVE.com

Это исследование было поддержано Гонконгским акушерско-гинекологическим трастовым фондом в 2018 году и Гонконгским фондом здравоохранения и медицинских исследований (06170186, 07180226).

Исследование было одобрено Объединенным комитетом по этике клинических исследований Восточного кластера Китайского университета Гонконга и Новых территорий. Информированное согласие было получено от участниц перед сбором биопсии эндометрия. Критерии включения контрольной и РМ гру...

<ol>
	<li>ESHRE Guideline Group on RPL et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ESHRE+guideline:+recurrent+pregnancy+loss.">ESHRE guideline: recurrent pregnancy loss.</a> Human Reproduction Open. 2018 (2), 004 (2018).</li><li>Stirrat, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recurrent+miscarriage.">Recurrent miscarriage.</a> Lancet. 336 (8716), 673-675 (1990).</li><li>Rai, R., Regan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recurrent+miscarriage.">Recurrent miscarriage.</a> Lancet. 368 (9535), 601-611 (2006).</li><li>Royal College of Obstetricians &amp; Gynaecologists. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+investigation+and+treatment+of+couples+with+recurrent+first-trimester+and+second-trimester+miscarriage.+Green-top+Guideline+No.+17.">The investigation and treatment of couples with recurrent first-trimester and second-trimester miscarriage. Green-top Guideline No. 17.</a> Royal College of Obstetricians &amp; Gynaecologists. , (2011).</li><li>King, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uterine+leukocytes+and+decidualization.">Uterine leukocytes and decidualization.</a> Human Reproduction Update. 6 (1), 28-36 (2000).</li><li>Le Bouteiller, P., Piccinni, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+NK+cells+in+pregnant+uterus:+why+there.">Human NK cells in pregnant uterus: why there.</a> American Journal of Reproductive Immunology. 59 (5), 401-406 (2008).</li><li>Lash, G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardisation+of+uterine+natural+killer+(uNK)+cell+measurements+in+the+endometrium+of+women+with+recurrent+reproductive+failure.">Standardisation of uterine natural killer (uNK) cell measurements in the endometrium of women with recurrent reproductive failure.</a> Journal of Reproductive Immunology. 116, 50-59 (2016).</li><li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HOXA-10+and+E-cadherin+expression+in+the+endometrium+of+women+with+recurrent+implantation+failure+and+recurrent+miscarriage.">HOXA-10 and E-cadherin expression in the endometrium of women with recurrent implantation failure and recurrent miscarriage.</a> Fertility and Sterility. 107 (1), 136-143 (2017).</li><li>Tuckerman, E., Laird, S. M., Prakash, A., Li, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+value+of+the+measurement+of+uterine+natural+killer+cells+in+the+endometrium+of+women+with+recurrent+miscarriage.">Prognostic value of the measurement of uterine natural killer cells in the endometrium of women with recurrent miscarriage.</a> Human Reproduction. 22 (8), 2208-2213 (2007).</li><li>Jasper, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage-derived+LIF+and+IL1B+regulate+alpha(1,2)fucosyltransferase+2+(Fut2)+expression+in+mouse+uterine+epithelial+cells+during+early+pregnancy.">Macrophage-derived LIF and IL1B regulate alpha(1,2)fucosyltransferase 2 (Fut2) expression in mouse uterine epithelial cells during early pregnancy.</a> Biology of Reproduction. 84 (1), 179-188 (2011).</li><li>Kopcow, H. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+apoptosis+at+the+maternal-fetal+interface+in+early+human+pregnancy,+involvement+of+galectin-1.">T cell apoptosis at the maternal-fetal interface in early human pregnancy, involvement of galectin-1.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (47), 18472-18477 (2008).</li><li>Johnson, P. M., Christmas, S. E., Vince, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+aspects+of+implantation+and+implantation+failure.">Immunological aspects of implantation and implantation failure.</a> Human Reproduction. 14, 26-36 (1999).</li><li>Hong, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+fluorescent+immunohistochemical+staining,+imaging,+and+analysis+in+histological+samples+of+lymphoma.">Multiplexed fluorescent immunohistochemical staining, imaging, and analysis in histological samples of lymphoma.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (143), e58711 (2019).</li><li>Carstens, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+computation+of+intratumoral+T+cells+correlates+with+survival+of+patients+with+pancreatic+cancer.">Spatial computation of intratumoral T cells correlates with survival of patients with pancreatic cancer.</a> Nature Communications. 8, 15095 (2017).</li><li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+multiplex+staining+to+measure+the+density+and+clustering+of+four+endometrial+immune+cells+around+the+implantation+period+in+women+with+recurrent+miscarriage:+comparison+with+fertile+controls.">The use of multiplex staining to measure the density and clustering of four endometrial immune cells around the implantation period in women with recurrent miscarriage: comparison with fertile controls.</a> Journal of Molecular Histology. 51 (5), 593-603 (2020).</li></ol>

Критические шаги в рамках протокола Важно отметить, что мультиплексное окрашивание требует тщательной оптимизации. Извлечение антигена с использованием цитратного буфера и микроволновой технологии требует оптимизации для обеспечения полного удаления антител и поддержан...

Повторный выкидыш (РМ) может быть определен как потеря двух или более беременностей до 24 недель беременности1. Этим частым репродуктивным состоянием страдает до 1% пар во всем мире2,3. Патофизиология является многофакторной и может быть разделена на эмбриологически обусловленные причины (в основном из-за аномального эмбрионального кариотипа) и материнские причины, которые влияют на эндометрий и / или плацентарное развитие. Это проявление может быть результатом родительских генетических аномалий, аномалий матки, протромботических состояний, эндокринологических факторов и иммунологических нарушений4.
В последние годы дисфункция иммунных эффекторных клеток была вовлечена в патогенез ранней потери беременности5. Это вдохновило многие исследования по выяснению конкретных популяций иммунных клеток в эндометрии во время менструального цикла, имплантации и ранней беременности, с конкретными ролями на ранних сроках беременности. Среди этих иммунных клеток клетки-естественные киллеры матки (uNK) играют решающую роль во время имплантации эмбриона и беременности, особенно в процессах трофобластической инвазии и ангиогенеза6. Исследования показали повышенную плотность клеток uNK в эндометрии женщин с РМ7,8,хотя этот вывод не был связан с повышенным рискомвыкидыша 9. Тем не менее, это стимулировало исследования, оценивающие плотность других типов иммунных клеток (таких как макрофаги, дендритные клетки матки) в эндометрии у женщин с RM10,11. Тем не менее, остается неясным, происходит ли значительное изменение плотности иммунных клеток в периимплантационном эндометрии у женщин с РМ.
Одним из возможных объяснений неопределенности является то, что оценка плотности иммунных клеток эндометрия может быть затруднена из-за быстрых изменений в эндометрии во время окна имплантации. В течение 24-часового периода значительные изменения в эндометрии изменяют плотность иммунных клеток и секрецию цитокинов, вводя источник вариаций в эти результаты12. Кроме того, большинство отчетов в основном основаны на использовании одноклеточного окрашивания (например, традиционных методов IHC), которые не могут исследовать несколько маркеров на одном и том же участке ткани. Хотя проточная цитометрия может быть использована для обнаружения нескольких клеточных популяций в одном образце, большое количество необходимых клеток и трудоемкая оптимизация препятствуют популярности и эффективности этого метода. Следовательно, недавний прогресс в мультиплексном окрашивании IHC может решить эту проблему путем иммуноокрашивания нескольких маркеров на одном слайде для оценки нескольких параметров, включая клеточную линию и гистологическую локализацию отдельных иммунных субпопуляций. Кроме того, эта технология может максимизировать информацию, полученную в случае ограниченной доступности тканей. В конечном счете, этот метод может помочь прояснить различия во взаимодействиях иммунных клеток в эндометрии между фертильными женщинами и женщинами с РМ.
Две группы женщин были набраны из больницы принца Уэльского, в том числе фертильные контрольные женщины (FC) и женщины с необъяснимым повторным выкидышем (RM). Фертильный контроль был определен как женщины, у которых был по крайней мере один живой род без какой-либо истории спонтанного выкидыша, а женщины РМ были определены как те, у кого была история ≥2 последовательных выкидышей до 20 недель беременности. Испытуемые из двух групп соответствовали следующим критериям включения: (a) возраст от 20 до 42 лет, (b) некурящий, (c) регулярный менструальный цикл (25-35 дней) и нормальная структура матки, (d) не использование какого-либо гормонального режима в течение как минимум 3 месяцев до биопсии эндометрия, (e) отсутствие гидросальпинкса с помощью гистеросальпингограммы. Кроме того, все набранные субъекты имели нормальное кариотипирование, нормальную 3-мерную ультрасонографическую гистеросальпингограмму, фолликулостимулирующий гормон 2-й день < 10 МЕ / л, среднелютеиновый прогестерон > 30 нмоль / л, нормальную функцию щитовидной железы и отрицательный результат на антикоагулянты волчанки и антикардиолипиновые антитела IgG и IgM.
Чтобы лучше понять иммунологическую основу РМ, было бы наиболее желательно одновременно количественно оценить и локализовать основные типы иммунных клеток, присутствующих в эндометрии во время имплантации. В этой статье описывается весь протокол от подготовки образцов, мультиплексной оптимизации с маркерами для подтипов иммунных клеток и сканирования слайдов с последующим анализом данных с конкретной ссылкой на обнаружение иммунных клеток эндометрия. Кроме того, в данной работе описывается, как определить плотность и кластеризацию типов иммунных клеток одновременно в эндометрии.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Amplification Diluent</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>FP1498</td>
			<td>Fluorophore diluent buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibody diluent</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>ARD1001EA</td>
			<td>Diluting the antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3</td>
			<td>Spring Bioscience</td>
			<td>M3072</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD20</td>
			<td>Biocare Medical</td>
			<td>CM004B</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD56</td>
			<td>Leica</td>
			<td>NCL-CD56-504</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD68</td>
			<td>Spring Bioscience</td>
			<td>M5510</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate Buffer Solution, pH 6.0 (10x)</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>AB64214</td>
			<td>Antigen retrieval solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EMSURE Xylene (isomeric mixture)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>108297</td>
			<td>Dewaxing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Merck</td>
			<td>107017</td>
			<td>Ethyl alcohol for rehydration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoCore BIOCUT Manual Rotary Leica Microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>RM2125RTS</td>
			<td>Sectioning of paraffin-embedded tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>inForm Advanced Image Analysis Software</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>inForm&#174; Tissue Finder Software 2.2.1 (version 14.0)</td>
			<td>Data Analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mantra&#174; Workstation</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>CLS140089</td>
			<td>Spectral imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>Inverter</td>
			<td>Microwave stripping</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 520</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>FP1487A</td>
			<td>Appropriate tyramide based fluorescent reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 620</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>FP1495A</td>
			<td>Appropriate tyramide based fluorescent reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 650</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>FP1496A</td>
			<td>Appropriate tyramide based fluorescent reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 690</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>FP1497A</td>
			<td>Appropriate tyramide based fluorescent reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oven</td>
			<td>Memmert</td>
			<td>U10</td>
			<td>Dewaxing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peroxidase Blocking Solution</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>S2023</td>
			<td>Removal of tissue peroxidase activities</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine coated slide</td>
			<td>FISHER SCIENTIFIC</td>
			<td>120-550-15</td>
			<td>Slide for routine histological use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PolyHRP Broad Spectrum</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>ARH1001EA</td>
			<td>Secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong&#8482; Gold Antifade Mountant</td>
			<td>ThemoFisher Scientific</td>
			<td>P36930</td>
			<td>Mounting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatstat</td>
			<td>/</td>
			<td>Version 2.1-0</td>
			<td>Spatial point pattern analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectral DAPI</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>FP1490A</td>
			<td>Nucleic acid staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Processor</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>Excelsior ES</td>
			<td>Tissue processing for dehydration and paraffination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Buffer Saline (TBS), 10x</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>12498S</td>
			<td>Washing solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1370-1L</td>
			<td>Nonionic detergent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

multiplexed fluorescent immunohistochemical staining of four endometrial immune cell types in recurrent miscarriage

Иммуногистохимия является наиболее часто используемым методом идентификации и визуализации тканевых антигенов в биологических исследованиях и клинической диагностике. Он может быть использован для характеристики различных биологических процессов или патологий, таких как заживление ран, иммунный ответ, отторжение тканей и взаимодействие тканей с биоматериалом. Однако визуализация и количественная оценка нескольких антигенов (особенно для иммунных клеток) в одном участке ткани с использованием обычного иммуногистохимического (IHC) окрашивания остается неудовлетворительной. Следовательно, в последние годы были внедрены мультиплексированные технологии для идентификации нескольких биологических маркеров в одном образце ткани или ансамбле различных образцов тканей. 
Эти технологии могут быть особенно полезны для дифференциации изменений в иммунных межклеточных взаимодействиях в эндометрии между фертильными женщинами и женщинами с рецидивирующими выкидышами во время имплантации. В этой статье описывается подробный протокол мультиплексированного флуоресцентного окрашивания IHC для исследования плотности и кластеризации четырех основных типов иммунных клеток одновременно в точно синхронизированных образцах эндометрия во время имплантации эмбриона. Метод включает в себя пробоподготовку, мультиплексную оптимизацию маркерами для подтипов иммунных клеток и сканирование слайдов с последующим анализом данных с конкретной ссылкой на обнаружение иммунных клеток эндометрия. 
Используя этот метод, плотность и кластеризация четырех основных типов иммунных клеток в эндометрии могут быть одновременно проанализированы в одном участке ткани. Кроме того, в этом документе будут обсуждаться критические факторы и устранение неполадок для преодоления возможной флуорофорной интерференции между применяемыми флуоресцентными зондами. Важно отметить, что результаты этого метода мультиплексного окрашивания могут помочь обеспечить глубокое понимание иммунологического взаимодействия и регуляции во время имплантации эмбриона.

Общий схематический процесс выполнения 4-цветного мультиплексного анализа для выявления 4 типов иммунных клеток эндометрия показан на рисунке 1. Короче говоря, протокол для этого мультиплексного иммунофлуоресцентного окрашивания требовал 8 ключевых этапов: 1. Подготов?...

Watch this Scientific Journal Video about Multiplexed Fluorescent Immunohistochemical Staining of Four Endometrial Immune Cell Types in Recurrent Miscarriage at JoVE.com

Multiplexed Fluorescent Immunohistochemical Staining of Four Endometrial Immune Cell Types in Recurrent Miscarriage

Несмотря на достижения в мультиплексной иммуногистохимии и мультиспектральной визуализации, характеристика плотности и кластеризации основных иммунных клеток одновременно в эндометрии остается проблемой. В этой статье описывается подробный протокол мультиплексного окрашивания и визуализации для одновременной локализации четырех типов иммунных клеток в эндометрии.

Мультиплексированное флуоресцентное иммуногистохимическое окрашивание четырех типов иммунных клеток эндометрия при рецидивирующем выкидыше

Immunohistochemistry is the most commonly used method for the identification and visualization of tissue antigens in biological research and clinical ...

Настоящая технология позволяет использовать антитела, выращенные у одного вида, для обнаружения до семи маркеров. Продемонстрировать процедуру будет Лусия Чан, техник из лаборатории. Начните с подготовки формалиновых фиксированных парафиновых стеклянных слайдов, установленных вместе с образцом ткани, поместив слайды в духовку, чтобы выпекать при температуре 60 градусов цельсия с тканью, обращенной вверх.Через час очистите воск и регидратируйте слайды в течение 10 минут каждый с серией химических веществ, как описано в рукописи. Погрузите слайды в трис-буферизованный физиологический раствор, а затем в пластиковую коробку для слайдов, заполненную смесью формальдегида, разбавленного в метаноле, чтобы зафиксировать образцы. Затем дважды промойте горки в деионизированной воде в течение двух минут.Приступайте к извлечению эпитопов, поместив стойку слайдов в термостойкий ящик, заполненный буфером лимонной кислоты при рН 6,0. А затем поместите коробку в микроволновую печь, чтобы нагреть слайды сначала на 100% мощности в течение 50 секунд, затем 20 минут на 20% мощности, чтобы поддерживать ту же температуру. После промывки горок в дистиллированной воде и промывки TBST, погрузите горку в банку, содержащую раствор, блокирующий перекисное окисление, на 10 минут.После инкубации промойте горки в дистиллированной воде и промойте TBST, затем используйте гидрофобную барьерную ручку, чтобы отметить границу вокруг участка ткани на слайде. Затем промойте горку в TBST, накройте участки тканей блокирующим буфером и высиживайте слайды в увлажненной камере в течение 15 минут. Чтобы удалить блокирующие реагенты, сначала инкубируют слайды с первичным антителом, представляющим интерес, а затем удаляют первичное антитело, промывая слайды трижды TBST, перед инкубацией с полимерной пероксидазой полимерного хрена, меченым вторичным антителом.После инкубации промыть слайды перед нанесением опаловой флоры на рабочий раствор TSA, а затем промыть горку буфером извлечения антигена. Выполните зачистку на основе микроволновой печи, нагревая слайды в буфере извлечения антигена в микроволновой печи на 100% мощности в течение 50 секунд, а затем 20% мощности в течение 20 минут в контейнерах, безопасных для микроволновой печи. После охлаждения образцов при комнатной температуре в течение 15 минут промойте горки в дистиллированной воде и TBST, а затем инкубируйте с раствором dappy в течение пяти минут.Затем высушите горку на воздухе перед монтажом с помощью соответствующего монтажного носителя. Перед созданием изображения слайдов предварительно установите соответствующие фильтры в рабочей станции. Захватите не менее 10 полей для анализа при 200-кратном увеличении.Чтобы подсчитать ячейки, нажмите на кнопку подсчета объектов на панели шагов, чтобы отобразить панель настроек подсчета объектов. Если ткань сегментирована, выберите категорию тканей, в которой объекты должны быть найдены. Затем выберите нужное масштабирование сигнала из автоматического масштабирования или фиксированного масштаба.Для сегментации объектов выберите основной компонент из раскрывающегося списка. Чтобы обнаружить объекты, соприкасающиеся с другими объектами, как отдельные, а не объединенные объекты, установите флажок Максимальный размер и пиксели, а затем выберите уточненное разделение. Затем подсчитайте все стромальные клетки в иммунных клетках отдельно, чтобы выразить данные в процентах иммунных клеток относительно общего количества стромальных клеток для каждого захваченного изображения.Позже отобразите итоговое количество ячеек как среднее значение всех полей. С помощью редактора представлений изучите полученные таблицы данных после обработки, а затем экспортируйте таблицу данных счетчика. В репрезентативном анализе четыре типа иммунных клеток в образце эндометрия мы дифференцированы.Обработанное изображение показывает сегментацию тканей как эпителиальных, так и стромальных компартментов. Мультиплексное иммуноокрашивание было выполнено на биопсии эндометрия у фертильной контрольной женщины и женщины с необъяснимым рецидивирующим выкидышем, один пол для нас, представляющий CD3, CD56, CD68 и CD20, были выявлены в иммуноокрашивании. Как только иммунный звук был идентифицирован, дальнейшее окрашивание под цитокином может помочь решить их взаимодействие и механизм успеха имплантации.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Anatomy and Physiology

Biology

Unit 1

The Endocrine System

SCIENTISTS IN ACTION

Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures

Получение 2-dGuo обработанных Thymus культур Органный

In the thymus, interactions between developing T-cell precursors and stromal cells that include cortical and medullary epithelial cells are known to play ...

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy (FSM)

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy FSM

Живая изображений Сотовые Ф-актина Динамика через Флуоресцентный Спекл микроскопия (FSM)

In this protocol we describe the use of Fluorescent Speckle Microscopy (FSM) to capture high-resolution images of actin dynamics in PtK1 cells. A unique ...

Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo

Всего монтажа иммуногистохимического анализа для Эмбриональные сосудистой кожи конечностей: модельная система для исследования сосудистой Ветвление Морфогенез в зародыше

Whole-mount immunohistochemical analysis for imaging the entire vasculature is pivotal for understanding the cellular mechanisms of branching ...

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization (FISH)

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH

Анализ одноклеточных транскрипции гена РНК-флуоресцентный<em&gt; В Situ</em&gt; Гибридизация (FISH)

Adhesion of Plasmodium falciparum infected erythrocytes (IE) to human endothelial receptors during malaria infections is mediated by expression of PfEMP1 ...

Separation of Spermatogenic Cell Types Using STA-PUT Velocity Sedimentation

Разделение сперматогенного Типы клеток с использованием STA-PUT скорости осаждения

Mammalian spermatogenesis is a complex  differentiation process that occurs in several stages in the seminiferous  tubules of the testes. Currently, there ...

Genetic Barcoding with Fluorescent Proteins for Multiplexed Applications

Генетический штрих кода с флуоресцентных белков для мультиплексированных приложений

Fluorescent proteins, fluorescent dyes and fluorophores in general have revolutionized the field of molecular cell biology. In particular, the discovery ...

Quantitation of Protein Expression and Co-localization Using Multiplexed Immuno-histochemical Staining and Multispectral Imaging

Количественное экспрессии белка и совместной локализации Использование Multiplexed иммуногистохимическое окрашиванием и мультиспектральных визуализации

Immunohistochemistry is a commonly used clinical and research lab detection technique for investigating protein expression and localization within ...

Development of an Insert Co-culture System of Two Cellular Types in the Absence of Cell-Cell Contact

Разработка Вставка совместного культивирования системы двух клеточных типов в отсутствие межклеточных контактов

The role of secreted soluble factors in the modification of cellular responses is a recurrent theme in the study of all tissues and systems. In an attempt ...

Isolation and Transcriptome Analysis of Plant Cell Types

Выделение и транскриптомный анализ типов растительных клеток

In multicellular organisms, developmental programming and environmental responses can be highly divergent in different cell types or even within cells, ...

Investigating Zinc Transport Mechanism in Mammalian Cells with FluoZin-3 Assay

Characterizing Mammalian Zinc Transporters Using an In Vitro Zinc Transport Assay

Exploring Cellular Zinc Regulation Through ZnT1 Functionality (Video) | JoVE

Характеристика переносчиков цинка млекопитающих с помощью анализа транспорта цинка in vitro

Transition metals such as Zn2+ ions must be tightly regulated due to their cellular toxicity. Previously, the activity of Zn2+ transporters was measured ...