Name: measuring glucose uptake in drosophila models of tdp-43 proteinopathy
Uploaded: 2021-08-03T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Glucose Uptake in Drosophila Models of TDP-43 Proteinopathy at JoVE.com

Vi takker Stefanie Schirmeier og Takeshi Iwatsubo for å ha gitt Drosophila stammer. Vi takker også Patricia Jansma for å ha bistått med bildebehandling i Marley Imaging Core ved University of Arizona. Dette arbeidet ble finansiert av National Institutes of Health NIH NS091299, NS115514 (til DCZ), HHMI Gilliam Fellowship (til EM) og Bachelor Biology Research Program (til HB).

UAS FLII12Pglu-700μδ6 transgene fluer ble rapportert i Volkenhoff et al.10 og vennligst levert av Dr. S. Schirmeier. UAS TDP-43G298S transgene linjer ble vennlig levert av Dr. T. Iwatsubo13. Rekombinante Drosophila-linjer som huser både UAS FLII12Pglu-700μδ6 og UAS TDP-43 transgenes ble generert i Zarnescu-laboratoriet ved hjelp av standard genetiske tilnærminger og rapportert i Manzo et al.9. D42 GAL4 ble brukt til å drive...

<ol>
	<li>Ingre, C., Roos, P. M., Piehl, F., Kamel, F., Fang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+factors+for+amyotrophic+lateral+sclerosis.">Risk factors for amyotrophic lateral sclerosis.</a> Clinical Epidemiology. 7, 181-193 (2015).</li><li>Dupuis, L., Pradat, P. F., Ludolph, A. C., Loeffler, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energy+metabolism+in+amyotrophic+lateral+sclerosis.">Energy metabolism in amyotrophic lateral sclerosis.</a> The Lancet Neurology. 10 (1), 75-82 (2011).</li><li>Buratti, E., Baralle, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+functional+implications+of+the+RNA+binding+properties+of+nuclear+factor+TDP-43,+a+novel+splicing+regulator+of+CFTR+exon+9.">Characterization and functional implications of the RNA binding properties of nuclear factor TDP-43, a novel splicing regulator of CFTR exon 9.</a> The Journal of Biological Chemistry. 276 (39), 36337-36343 (2001).</li><li>Polymenidou, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+pre-mRNA+depletion+and+RNA+missplicing+contribute+to+neuronal+vulnerability+from+loss+of+TDP-43.">Long pre-mRNA depletion and RNA missplicing contribute to neuronal vulnerability from loss of TDP-43.</a> Nature Neuroscience. 14 (4), 459-468 (2011).</li><li>Tollervey, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+the+RNA+targets+and+position-dependent+splicing+regulation+by+TDP-43.">Characterizing the RNA targets and position-dependent splicing regulation by TDP-43.</a> Nature Neuroscience. 14 (4), 452-458 (2011).</li><li>Ling, S. C., Polymenidou, M., Cleveland, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Converging+mechanisms+in+ALS+and+FTD:+disrupted+RNA+and+protein+homeostasis.">Converging mechanisms in ALS and FTD: disrupted RNA and protein homeostasis.</a> Neuron. 79 (3), 416-438 (2013).</li><li>Estes, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wild-type+and+A315T+mutant+TDP-43+exert+differential+neurotoxicity+in+a+Drosophila+model+of+ALS.">Wild-type and A315T mutant TDP-43 exert differential neurotoxicity in a Drosophila model of ALS.</a> Human Molecular Genetics. 20 (12), 2308-2321 (2011).</li><li>Estes, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+neurons+and+glia+exhibit+specific+individualized+responses+to+TDP-43+expression+in+a+Drosophila+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis.">Motor neurons and glia exhibit specific individualized responses to TDP-43 expression in a Drosophila model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 6 (3), 721-733 (2013).</li><li>Manzo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycolysis+upregulation+is+neuroprotective+as+a+compensatory+mechanism+in+ALS.">Glycolysis upregulation is neuroprotective as a compensatory mechanism in ALS.</a> eLife. 8, 45114 (2019).</li><li>Volkenhoff, A., Hirrlinger, J., Kappel, J. M., Klambt, C., Schirmeier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+using+a+FRET+glucose+sensor+reveals+glucose+delivery+to+all+cell+types+in+the+Drosophila+brain.">Live imaging using a FRET glucose sensor reveals glucose delivery to all cell types in the Drosophila brain.</a> Journal of Insect Physiology. 106, 55-64 (2018).</li><li>Fehr, M., Lalonde, S., Lager, I., Wolff, M. W., Frommer, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+the+dynamics+of+glucose+uptake+in+the+cytosol+of+COS-7+cells+by+fluorescent+nanosensors.">In vivo imaging of the dynamics of glucose uptake in the cytosol of COS-7 cells by fluorescent nanosensors.</a> The Journal of Biological Chemistry. 278 (21), 19127-19133 (2003).</li><li>Takanaga, H., Chaudhuri, B., Frommer, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GLUT1+and+GLUT9+as+major+contributors+to+glucose+influx+in+HepG2+cells+identified+by+a+high+sensitivity+intramolecular+FRET+glucose+sensor.">GLUT1 and GLUT9 as major contributors to glucose influx in HepG2 cells identified by a high sensitivity intramolecular FRET glucose sensor.</a> Biochimedica et Biophysica Acta. 1778 (4), 1091-1099 (2008).</li><li>Ihara, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+binding+mediates+neurotoxicity+in+the+transgenic+Drosophila+model+of+TDP-43+proteinopathy.">RNA binding mediates neurotoxicity in the transgenic Drosophila model of TDP-43 proteinopathy.</a> Human Molecular Genetics. 22 (22), 4474-4484 (2013).</li><li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118 (2), 401-415 (1993).</li><li>Diaz-Garcia, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+in+vivo+imaging+of+neuronal+glucose+concentrations+with+a+genetically+encoded+fluorescence+lifetime+sensor.">Quantitative in vivo imaging of neuronal glucose concentrations with a genetically encoded fluorescence lifetime sensor.</a> Journal of Neuroscience Research. 97 (8), 946-960 (2019).</li><li>Mergenthaler, P., Lindauer, U., Dienel, G. A., Meisel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sugar+for+the+brain:+the+role+of+glucose+in+physiological+and+pathological+brain+function.">Sugar for the brain: the role of glucose in physiological and pathological brain function.</a> Trends in Neurosciences. 36 (10), 587-597 (2013).</li><li>Lu, B., Vogel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+models+of+neurodegenerative+diseases.">Drosophila models of neurodegenerative diseases.</a> Annual Review of Pathology. 4, 315-342 (2009).</li></ol>

Teknikken beskrevet i detalj her kan brukes til å måle glukoseopptak i en bestemt celletype av interesse for levende Drosophila ved hjelp av FLII12Pglu-700μδ6, en FRET-basert sensor som kan oppdage endringer i glukosenivåer til et millimolarområde10,11,12. Denne sensoren har tidligere blitt brukt sammen med UAS-GAL4-systemet for å målrette uttrykket mot bestemte celletyper, inkludert nevroner9<...

Amyotrofisk lateral sklerose (ALS) er en progressiv nevrodegenerativ lidelse som for tiden er uhelbredelig. ALS påvirker øvre og nedre motoriske nevroner som fører til tap av motorisk koordinering, irreversibel lammelse, åndedrettssvikt og eventuell død innen 2-5 års diagnose1. ALS er forbundet med metabolske defekter som vekttap, dyslipidemi og hypermetabolisme (gjennomgått i2); Det er imidlertid fortsatt uklart hvordan disse endringene i metabolismen forholder seg til motorisk nevron degenerasjon. En fellesnevner i ALS og relaterte nevrodegenerative sykdommer er TDP-43, et nukleinsyrebindende protein involvert i flere trinn i RNA-behandling3,4,5. Selv om mutasjoner i TDP-43 bare påvirker 3% -5% av pasientene, finnes wild-type TDP-43 protein i cytoplasmatiske aggregater i >97% av ALS-tilfeller (gjennomgått i6). Denne patologien ble modellert i Drosophila ved overekspression av menneskelig wildtype eller mutant TDP-43 (G298S) i motoriske nevroner, som recapitulates flere aspekter av ALS, inkludert cytoplasmatiske inneslutninger, lokomotorisk dysfunksjon og redusert levetid7,8. Ved hjelp av disse modellene ble det nylig rapportert at TDP-43 proteinopati forårsaker en betydelig økning i pyruvatnivåer og fosfofructokinase (PFK) mRNA, den hastighetsbegrensende enzymet av glykolyse9. Lignende økninger i PFK-transkripsjoner ble funnet i pasientavledede motoriske nevroner og ryggmarger, noe som tyder på at glykolyse er oppregulert i sammenheng med TDP-43 proteinopati. Interessant nok reduserte ytterligere økning i glykolyse ved hjelp av kostholds- og genetiske manipulasjoner flere ALS-fenotyper som lokomotorisk dysfunksjon og økt levetid i flymodeller av TDP-43 proteinopati, i samsvar med en kompenserende, nevrobeskyttende mekanisme for degenerering av motoriske nevroner.
For ytterligere sondeendringer i glykolyse og måle glukoseopptak i Drosophila-modeller av TDP-43-proteinopati, ble en tidligere rapportert genetisk kodet FRET-basert sensor FLII12Pglu-700μδ610 uttrykt i motoriske nevroner spesielt ved hjelp av UAS-GAL4-uttrykkssystemet. FLII12Pglu-700μδ6 glukosesensor bruker resonansenergioverføring mellom to varianter av grønt fluorescerende protein, cyan og gule fluorescerende proteiner (CFP og YFP) for å oppdage glukose på cellenivå. Den består av et bakteriell glukosebindingsdomene fra E. coli MglB-genet smeltet sammen til CFP og YFP i motsatte ender av molekylet. Når sensoren er bundet til et glukosemolekyl, gjennomgår den en konformasjonsendring som bringer CFP og YFP nærmere hverandre og lar FRET forekomme, som deretter kan brukes til å kvantifisere intracellulære glukosenivåer10,11,12 ( figur1). Her viser vi hvordan FLII12Pglu-700μδ6-sensoren kan brukes til å bestemme endringer i glukoseopptak forårsaket av TDP-43 proteinopati i motoriske nevroner. Forsøkene beskrevet her viser at overekspressering av et ALS-assosiert mutant, TDP-43G298S, i motoriske nevroner forårsaker en betydelig økning i glukoseopptak sammenlignet med kontroller. Denne tilnærmingen kan brukes i andre typer ALS (f.eks. SOD1, C9orf72, etc.) og/eller andre celletyper (f.eks. glia, muskler) for å bestemme endringer i glukoseopptaket forbundet med nevrodegenerasjon.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>35 mm tissue culture dishes</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>CLS430165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40X water immersion lens</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>440090</td>
			<td>dippable, N.A. 0.8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dissection scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5618</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100189-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #55 forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100189-244</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minutien pins</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>26002-10</td>
			<td>used for dissections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYLGARD 184 Silicone Elastomer Kit</td>
			<td>Dow</td>
			<td>1317318</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM880 NLO upright multiphoton/confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring glucose uptake in drosophila models of tdp-43 proteinopathy

Amyotrofisk lateral sklerose er en nevrodegenerativ lidelse som forårsaker progressiv muskelsvakhet og død innen 2-5 år etter diagnosen. Kliniske manifestasjoner inkluderer vekttap, dyslipidemi og hypermetabolisme; Det er imidlertid fortsatt uklart hvordan disse forholder seg til motorisk nevron degenerasjon. Ved hjelp av en Drosophila-modell av TDP-43-proteinopati som rekapitulerer flere funksjoner i ALS, inkludert cytoplasmatiske inneslutninger, lokomotorisk dysfunksjon og redusert levetid, identifiserte vi nylig brede metabolske underskudd. Blant disse ble glykolyse funnet å være oppregulert og genetiske interaksjonseksperimenter ga bevis for en kompenserende nevrobeskyttende mekanisme. Faktisk, til tross for oppregulering av fosfofructokinase, hastigheten begrensende enzym i glykolyse, en økning i glykolyse ved hjelp av kosthold og genetiske manipulasjoner ble vist å redusere lokomotorisk dysfunksjon og økt levetid i fly modeller av TDP-43 proteinopati. For å undersøke effekten på TDP-43 proteinopati på glykolytisk flux i motoriske nevroner, ble en tidligere rapportert genetisk kodet, FRET-basert sensor, FLII12Pglu-700μδ6, brukt. Denne sensoren består av et bakteriell glukosesensordomene og cyan og gule fluorescerende proteiner som FRET-paret. Ved glukosebinding gjennomgår sensoren en konformasjonsendring som gjør at FRET kan forekomme. Ved hjelp av FLII12Pglu-700μδ6 ble glukoseopptak funnet å være betydelig økt i motoriske nevroner som uttrykker TDP-43G298S, en ALS forårsaker variant. Her viser vi hvordan du måler glukoseopptak, ex vivo, i larval ventrale nerveledningspreparater som uttrykker glukosesensoren FLII12Pglu-700μδ6 i sammenheng med TDP-43 proteinopati. Denne tilnærmingen kan brukes til å måle glukoseopptak og vurdere glykolytisk flux i forskjellige celletyper eller i sammenheng med ulike mutasjoner som forårsaker ALS og relaterte nevrodegenerative lidelser.

Bildeinnhenting av glukosesensoren i lufte nerveledningen (VNC), ex vivo For å bestemme forskjeller i glukoseopptak i en Drosophila-modell av ALS basert på TDP-43, ble det brukt en genetisk kodet FRET-basert glukosesensor. Sensoren besto av CFP og YFP smeltet sammen til glukosebindingsdomenet fra E. coli MglB-genet. Glukosebinding fremkaller en konformasjonsendring, som kan påvises ved fluorescensresonansenergioverføring (FRET) mellom CFP og YFP <sup c...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Glucose Uptake in Drosophila Models of TDP-43 Proteinopathy at JoVE.com

Measuring Glucose Uptake in Drosophila Models of TDP-43 Proteinopathy

Glukoseopptaket økes i Drosophila motoriske nevroner påvirket av TAR DNA-bindende protein (TDP-43) proteinopati, som indikert av en FRET-basert, genetisk kodet glukosesensor.

Måling av glukoseopptak i Drosophila-modeller av TDP-43 proteinopati

Amyotrophic lateral sclerosis is a neurodegenerative disorder causing progressive muscle weakness and death within 2-5 years following diagnosis. Clinical ...

Denne teknikken er betydelig fordi den kan måle glukoseopptak i spesifikke celler i levende Drosophila vev. Den FRET-baserte sensoren gir et direkte mål på endringer i intracellulære glukosenivåer. Denne teknikken gjør det mulig for forskere å evaluere endringer i glukosenivåer i sanntid, innen levende motoriske nevroner fra ALS-modeller kontra kontroller.Et utfordrende aspekt er å forestille seg det samme settet med nevroner etter å ha endret bufferen. Å la prøven ligge på mikroskopet bidrar til å sikre at VMC beveger seg så lite som mulig. Før du begynner, slås disseksjonene på bildemikroskopet og laserne.Samle deretter en vandrende tredje instar larve, skyll den med dobbelt destillert vann og legg den i en dråpe HL3 buffer på en tidligere tilberedt elastomerforet tallerken. Neste under et dissekerende mikroskop, bruk et par tang for å feste de fremre og bakre endene av larven, dorsal side opp, ved å forsiktig strekke larven lengdemessig med insektpinner. Bruk en par vinklede Iris saks, gjør et snitt like over bakre pinne.Lag deretter et vertikalt kutt fra snittet mot den fremre enden av larven. Etter å ha lagt til noen dråper HL3-buffer om nødvendig, fjern luftrøret og resten av de flytende organene uten å forstyrre sentralnervesystemet. Fest deretter klaffene, strekk kroppsveggen for å eksponere sentralnervesystemet mens du holder det nevromuskulære systemet intakt.For bildeanskaffelse, bruk oppreist konfokalt mikroskop med en 40 ganger vanninnlevelseslinse. Velg deretter 405 nanometerlaseren for å begeistre CFP. Deretter optimaliserer du anskaffelsesparametrene som skannehastighet, gjennomsnitt, målsetting, zoom-pinhole-størrelse og romlig oppløsning.Juster forsterkningen slik at signalet er i det optimale dynamiske området og bruk de samme parametrene for alle genotyper. For å avbilde motoriske nevroner i lufte nerveledningen, plasser silikonfatet med den dissekerte prøven under linsen og senk linsen slik at den kommer i kontakt med trehalosesukrose HL3-bufferen. Kontroller at objektivet er helt nedsenket i bufferen, og legg til mer buffer om nødvendig. Neste.Ved hjelp av CFP- og FRET-kanalene velger du manuelt et optisk utvalg som består av minst seks motoriske nevroner i fokus langs midtlinjen til ventral nerveledningen. Hent deretter bilder hvert 10. Disse bildene representerer grunnlinjen.For glukosestimulering, fjern trehalosesukrose som inneholder HL3 buffer ved hjelp av en Pasteur pipette og tilsett fem millimolar glukose supplert HL3 buffer uten å flytte ventral nerveledning. Hent deretter bilder hvert 10. Disse bildene representerer stimuleringsfasen.Lagre bildene som CZI filer eller en hvilken som helst filtype som støttes av bildebehandling programvare med et filnavn inkludert dato, genetisk bakgrunn, eksperimentell tilstand og kanaler som brukes. Bruk parameterne på nytt til å bilde alle genotypene. For bildebehandling åpne Fiji-ImageJ bildebehandling programvare, deretter åpne CZI filer, velg visningsstakk med hyper stack og sett fargemodus til grå skala og velg delte kanaler i separate vinduer. Neste.Behandle bildene ved hjelp av drift korreksjon plug-ins, turbo reg og stack reg. Hver kanal korrigeres separat ved å velge stack reg under plugin-moduler og deretter velge transformasjon til oversettelse. Velg manuelt områdene av interesse eller ROIer ved å spore alle motoriske nevroner som forblir i fokus gjennom hele tidsserien.Bruk deretter ROI-lederen til å lagre hver motor neuron-kontur. Bruk multimålfunksjonen til å måle gjennomsnittsgråverdien i hver avkastning på hvert tidspunkt. Kopier deretter ROIene som spores fra den første kanalen, til den andre kanalen for bildet for forhåndsstimulering.For dataanalyse beregner du FRET med CFP-forholdet ved hjelp av de gjennomsnittlige grå verdiene for FRET- og CFP-kanalene. Endringer i FRET ved CFP-forhold gjenspeiler endringer i den intracellulære glukosekonsentrasjonen. Deretter plotter du FRET etter CFP-forhold for hver avkastning og hvert tidspunkt kontra tid.En genetisk kodet FRET-basert glukosesensor ble brukt til å måle glukoseopptak i motoriske nevroner. Når glukose ikke er bundet til sensoren, forårsaker CFP-eksitasjon bare CFP-utslipp. Og når glukose binder seg, kan YFP-signalet oppdages på grunn av FRET som forekommer mellom CFP og YFP.Vist her er bilder av FRET- og CFP-signaler i glukosesensorkontroller i TDP-43 mutante nevroner under baseline og stimuleringsforhold. En representativ motorisk neuron er skissert i hvert bilde som et eksempel på avkastning. Ved glukosestimulering viser kontrollmotoriske nevroner som uttrykker glukosesensorer, en liten økning i glukoseopptaket, mens nevroner som uttrykker TDP-43 viste et betydelig høyere glukoseopptak.Ytterligere FRET ved CFP-forhold mellom TDP-43 mutantmotoriske nevroner ble normalisert til glukosesensorkontroller ved hvert tidspunkt. Under baseline-forhold var det ingen forskjell mellom genotypene. Ved glukosestimulering ble det imidlertid observert en rask og betydelig økning i glukoseopptaket hos TDP-43 mutanter sammenlignet med kontrollen.I en bargrafrepresentasjon viste glukosestimulering hos nevroner som uttrykker glukosesensoren en liten, men betydelig økning i FRET ved CFP-forhold sammenlignet med baseline. I motsetning til nevroner som uttrykte TDP-43 viste en betydelig økning i forholdet ved stimulering sammenlignet med baseline. Nettoforskjellen i FRET ved CFP-forhold mellom motornevroner som uttrykker TDP-43 og glukosesensor er rundt 10,9% Tidsstyring er avgjørende for denne prosedyren, slik at nevronene ikke dør i løpet av avbildningen.Det er viktig å se umiddelbart etter disseksjoner for å unngå dette. Denne teknikken fremhevet viktigheten av glukosemetabolisme i nevroner og har ført til at gruppen vår videre undersøker rollen som glykolyse i motorisk nevronregenerering.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Measuring Glucose Uptake in Drosophila Models of TDP-43 Proteinopathy

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of ...

Measuring Motor Coordination in Mice

Måle motorisk koordinasjon i Mus

Mice are increasingly being used in behavioral neuroscience, largely replacing rats as the behaviorist's animal of choice. Before aspects of behavior such ...

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Visualisering av Proprioceptors i<em&gt; Drosophila</em&gt; Larver og pupper

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

En billig, skalerbar Behavioral undersøkelse for å måle Etanol Sedasjon Følsomhet og Rapid Toleranse i<em&gt; Drosophila</em

Alcohol use disorder (AUD) is a serious health challenge. Despite a large hereditary component to AUD, few genes have been unambiguously implicated in ...

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Måle og endre Mating Drive i Male<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, ...

Measuring Synaptic Vesicle Endocytosis in Cultured Hippocampal Neurons

Måle Synaptic Vesicle endocytose i kulturperler hippocampus nerveceller

During endocytosis, fused synaptic vesicles are retrieved at nerve terminals, allowing for vesicle recycling and thus the maintenance of synaptic ...

Assessment of Dopaminergic Homeostasis in Mice by Use of High-performance Liquid Chromatography Analysis and Synaptosomal Dopamine Uptake

Vurdering av Dopaminergic homeostase i mus ved bruk av høytytende flytende kromatografi analyse og Synaptosomal dopamin opptak

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) ...

Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

Kvantitativ cellebiologi mentalt tilbakestående da i Drosophila gjennom objektiv analyse av Fluorescently merket proteiner med ImageJ

With the rising prevalence of neurodegenerative diseases, it is increasingly important to understand the underlying pathophysiology that leads to neuronal ...

Alternate Immersion in Glucose to Produce Prolonged Hyperglycemia in Zebrafish

Alternativ nedsenking i glukose for å produsere langvarig hyperglykemi hos sebrafisk

Zebrafish (Danio rerio) are an excellent model to investigate the effects of chronic hyperglycemia, a hallmark of Type II Diabetes Mellitus (T2DM). This ...

Semi-Quantitative Determination of Dopaminergic Neuron Density in the Substantia Nigra of Rodent Models using Automated Image Analysis

Semi-kvantitativ bestemmelse av dopaminerg nevrontetthet i Substantia Nigra av gnagermodeller ved hjelp av automatisert bildeanalyse

Estimation of the number of dopaminergic neurons in the substantia nigra is a key method in pre-clinical Parkinson's disease research. Currently, unbiased ...