Name: measuring glucose uptake in drosophila models of tdp-43 proteinopathy
Uploaded: 2021-08-03T15:00:00
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Agradecemos a Stefanie Schirmeier e Takeshi Iwatsubo por fornecerem cepas de Drosophila. Agradecemos também a Patricia Jansma por ajudar com a imagem no Marley Imaging Core na Universidade do Arizona. Este trabalho foi financiado pelos Institutos Nacionais de Saúde NIH NS091299, NS115514 (para DCZ), HHMI Gilliam Fellowship (para EM) e o Programa de Pesquisa em Biologia de Graduação (para HB).

As moscas transgênicas UAS FLII12Pglu-700μδ6 foram relatadas em Volkenhoff et al.10 e gentilmente fornecidas pelo Dr. S. Schirmeier. As linhas transgênicas UAS TDP-43G298S foram gentilmente fornecidas pelo Dr. T. Iwatsubo13. As linhas recombinantes de Drosophila que abrigam tanto os transgênicos UAS FLII12Pglu-700μδ6 quanto uas TDP-43 foram gerados no laboratório Zarnescu utilizando abordagens genéticas padrão e relatados em Manzo et al.<sup cl...

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	<li>Ingre, C., Roos, P. M., Piehl, F., Kamel, F., Fang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+factors+for+amyotrophic+lateral+sclerosis.">Risk factors for amyotrophic lateral sclerosis.</a> Clinical Epidemiology. 7, 181-193 (2015).</li><li>Dupuis, L., Pradat, P. F., Ludolph, A. C., Loeffler, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energy+metabolism+in+amyotrophic+lateral+sclerosis.">Energy metabolism in amyotrophic lateral sclerosis.</a> The Lancet Neurology. 10 (1), 75-82 (2011).</li><li>Buratti, E., Baralle, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+functional+implications+of+the+RNA+binding+properties+of+nuclear+factor+TDP-43,+a+novel+splicing+regulator+of+CFTR+exon+9.">Characterization and functional implications of the RNA binding properties of nuclear factor TDP-43, a novel splicing regulator of CFTR exon 9.</a> The Journal of Biological Chemistry. 276 (39), 36337-36343 (2001).</li><li>Polymenidou, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+pre-mRNA+depletion+and+RNA+missplicing+contribute+to+neuronal+vulnerability+from+loss+of+TDP-43.">Long pre-mRNA depletion and RNA missplicing contribute to neuronal vulnerability from loss of TDP-43.</a> Nature Neuroscience. 14 (4), 459-468 (2011).</li><li>Tollervey, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+the+RNA+targets+and+position-dependent+splicing+regulation+by+TDP-43.">Characterizing the RNA targets and position-dependent splicing regulation by TDP-43.</a> Nature Neuroscience. 14 (4), 452-458 (2011).</li><li>Ling, S. C., Polymenidou, M., Cleveland, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Converging+mechanisms+in+ALS+and+FTD:+disrupted+RNA+and+protein+homeostasis.">Converging mechanisms in ALS and FTD: disrupted RNA and protein homeostasis.</a> Neuron. 79 (3), 416-438 (2013).</li><li>Estes, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wild-type+and+A315T+mutant+TDP-43+exert+differential+neurotoxicity+in+a+Drosophila+model+of+ALS.">Wild-type and A315T mutant TDP-43 exert differential neurotoxicity in a Drosophila model of ALS.</a> Human Molecular Genetics. 20 (12), 2308-2321 (2011).</li><li>Estes, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+neurons+and+glia+exhibit+specific+individualized+responses+to+TDP-43+expression+in+a+Drosophila+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis.">Motor neurons and glia exhibit specific individualized responses to TDP-43 expression in a Drosophila model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 6 (3), 721-733 (2013).</li><li>Manzo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycolysis+upregulation+is+neuroprotective+as+a+compensatory+mechanism+in+ALS.">Glycolysis upregulation is neuroprotective as a compensatory mechanism in ALS.</a> eLife. 8, 45114 (2019).</li><li>Volkenhoff, A., Hirrlinger, J., Kappel, J. M., Klambt, C., Schirmeier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+using+a+FRET+glucose+sensor+reveals+glucose+delivery+to+all+cell+types+in+the+Drosophila+brain.">Live imaging using a FRET glucose sensor reveals glucose delivery to all cell types in the Drosophila brain.</a> Journal of Insect Physiology. 106, 55-64 (2018).</li><li>Fehr, M., Lalonde, S., Lager, I., Wolff, M. W., Frommer, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+the+dynamics+of+glucose+uptake+in+the+cytosol+of+COS-7+cells+by+fluorescent+nanosensors.">In vivo imaging of the dynamics of glucose uptake in the cytosol of COS-7 cells by fluorescent nanosensors.</a> The Journal of Biological Chemistry. 278 (21), 19127-19133 (2003).</li><li>Takanaga, H., Chaudhuri, B., Frommer, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GLUT1+and+GLUT9+as+major+contributors+to+glucose+influx+in+HepG2+cells+identified+by+a+high+sensitivity+intramolecular+FRET+glucose+sensor.">GLUT1 and GLUT9 as major contributors to glucose influx in HepG2 cells identified by a high sensitivity intramolecular FRET glucose sensor.</a> Biochimedica et Biophysica Acta. 1778 (4), 1091-1099 (2008).</li><li>Ihara, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+binding+mediates+neurotoxicity+in+the+transgenic+Drosophila+model+of+TDP-43+proteinopathy.">RNA binding mediates neurotoxicity in the transgenic Drosophila model of TDP-43 proteinopathy.</a> Human Molecular Genetics. 22 (22), 4474-4484 (2013).</li><li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118 (2), 401-415 (1993).</li><li>Diaz-Garcia, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+in+vivo+imaging+of+neuronal+glucose+concentrations+with+a+genetically+encoded+fluorescence+lifetime+sensor.">Quantitative in vivo imaging of neuronal glucose concentrations with a genetically encoded fluorescence lifetime sensor.</a> Journal of Neuroscience Research. 97 (8), 946-960 (2019).</li><li>Mergenthaler, P., Lindauer, U., Dienel, G. A., Meisel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sugar+for+the+brain:+the+role+of+glucose+in+physiological+and+pathological+brain+function.">Sugar for the brain: the role of glucose in physiological and pathological brain function.</a> Trends in Neurosciences. 36 (10), 587-597 (2013).</li><li>Lu, B., Vogel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+models+of+neurodegenerative+diseases.">Drosophila models of neurodegenerative diseases.</a> Annual Review of Pathology. 4, 315-342 (2009).</li></ol>

A técnica descrita em detalhes aqui pode ser aplicada para medir a absorção de glicose em um tipo específico de interesse celular em Drosophila viva usando FLII12Pglu-700μδ6, um sensor baseado em FRET que pode detectar alterações nos níveis de glicose para uma faixa mililitro10,11,12. Este sensor foi usado anteriormente em conjunto com o sistema UAS-GAL4 para direcionar sua expressão para tipos celulares espec...

A Esclerose Lateral Amiotrófica (ELA) é uma doença neurodegenerativa progressiva que atualmente é incurável. A ELA afeta neurônios motores superiores e inferiores levando à perda da coordenação motora, paralisia irreversível, insuficiência respiratória e eventual morte dentro de 2-5 anos após o diagnóstico1. A ELA está associada a defeitos metabólicos como perda de peso, dislipidemia e hipermetabolismo (revisado em2); no entanto, ainda não está claro como essas alterações no metabolismo se relacionam com a degeneração do neurônio motor. Um denominador comum em ELA e doenças neurodegenerativas relacionadas é o TDP-43, uma proteína de ligação nucleica de ácido envolvida em várias etapas do processamento de RNA3,4,5. Embora as mutações no TDP-43 afetem apenas 3%-5% dos pacientes, a proteína TDP-43 de tipo selvagem é encontrada dentro de agregados citoplasmicos em >97% dos casos de ELA (revisados em6). Esta patologia foi modelada em Drosophila por superexpressão do tipo selvagem humano ou mutante TDP-43 (G298S) em neurônios motores, que recapitula múltiplos aspectos da ELA, incluindo inclusões citoplasmáticas, disfunção locomotora e redução da vida útil7,8. Usando esses modelos, foi recentemente relatado que a proteinopatia TDP-43 causa um aumento significativo nos níveis de piruvato e mRNA de fosfofructokinase (PFK), a enzima que limita a taxa da glicólise9. Aumentos semelhantes nas transcrições de PFK foram encontrados em neurônios motores derivados do paciente e medulas espinhais, sugerindo que a glicólise é regulada no contexto da proteinopatia TDP-43. Curiosamente, o aumento da glicolise usando manipulações dietéticas e genéticas mitigau vários fenótipos da ALS, como disfunção locomotor e aumento da vida útil em modelos de moscas de proteinopatia TDP-43, consistente com um mecanismo compensatório e neuroprotetor na degeneração de neurônios motores.
Para sondar ainda mais mudanças na glicólise e medir a absorção de glicose em modelos de Drosophila de proteinopatia TDP-43, um sensor baseado em FRET geneticamente codificado anteriormente FLII12Pglu-700μδ610 foi expresso em neurônios motores especificamente usando o sistema de expressão UAS-GAL4. O sensor de glicose FLII12Pglu-700μδ6 utiliza a transferência de energia de ressonância entre duas variantes de proteína fluorescente verde, ciano e proteínas fluorescentes amarelas (CFP e YFP) para detectar glicose no nível celular. Consiste em um domínio de ligação de glicose bacteriana do gene E. coli MglB fundido a CFP e YFP em extremidades opostas da molécula. Quando ligado a uma molécula de glicose, o sensor sofre uma alteração conformacional aproximando o PCP e o YFP e permitindo que o FRET ocorra, que pode ser usado para quantificar os níveis de glicose intracelulares10,11,12 (Figura 1). Aqui, mostramos como o sensor FLII12Pglu-700μδ6 pode ser usado para determinar alterações na absorção de glicose causadas pela proteinopatia TDP-43 em neurônios motores. Os experimentos descritos aqui mostram que a superexpressão de um mutante associado à ALS, TDP-43G298S,em neurônios motores causa um aumento significativo na absorção de glicose em comparação com os controles. Essa abordagem pode ser usada em outros tipos de ELA (por exemplo, SOD1, C9orf72, etc.) e/ou outros tipos de células (por exemplo, glia, músculos) para determinar alterações na absorção de glicose associadas à neurodegeneração.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>35 mm tissue culture dishes</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>CLS430165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40X water immersion lens</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>440090</td>
			<td>dippable, N.A. 0.8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dissection scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5618</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100189-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #55 forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100189-244</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minutien pins</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>26002-10</td>
			<td>used for dissections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYLGARD 184 Silicone Elastomer Kit</td>
			<td>Dow</td>
			<td>1317318</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM880 NLO upright multiphoton/confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring glucose uptake in drosophila models of tdp-43 proteinopathy

A esclerose lateral amiotrófica é uma doença neurodegenerativa que causa fraqueza muscular progressiva e morte dentro de 2-5 anos após o diagnóstico. As manifestações clínicas incluem perda de peso, dislipidemia e hipermetabolismo; no entanto, ainda não está claro como estes se relacionam com a degeneração do neurônio motor. Usando um modelo de Drosophila de proteinopatia TDP-43 que recapitula várias características da ELA, incluindo inclusões citoplasmáticas, disfunção locomotor e redução da vida útil, recentemente identificamos amplos déficits metabólicos. Entre elas, verificou-se que a glicólise era regulada e os experimentos de interação genética forneceram evidências para um mecanismo neuroprotetor compensatório. De fato, apesar da regulação da fosfofructokinase, a taxa que limita a enzima na glicólise, um aumento da glicólise usando manipulações dietéticas e genéticas foi mostrado para mitigar a disfunção locomotor e o aumento da vida útil em modelos de moscas da proteinopatia TDP-43. Para investigar melhor o efeito sobre a proteinopatia TDP-43 no fluxo glicóglitico em neurônios motores, foi utilizado um sensor geneticamente codificado geneticamente, baseado em FRET, FLII12Pglu-700μδ6. Este sensor é composto por um domínio bacteriano de sensoriamento de glicose e proteínas fluorescentes ciano e amarela como o par FRET. Após a ligação de glicose, o sensor sofre uma alteração conformacional permitindo que o FRET ocorra. Utilizando FLII12Pglu-700μδ6, a absorção de glicose foi significativamente aumentada em neurônios motores expressando TDP-43G298S, uma variante causadora de ELA. Aqui, mostramos como medir a absorção de glicose, ex vivo,nas preparações do cabo do nervo ventral larval expressando o sensor de glicose FLII12Pglu-700μδ6 no contexto da proteinopatia TDP-43. Essa abordagem pode ser usada para medir a absorção de glicose e avaliar o fluxo glicóltico em diferentes tipos de células ou no contexto de várias mutações que causam ELA e distúrbios neurodegenerativos relacionados.

Aquisição de imagem do sensor de glicose no fio do nervo ventral (VNC), ex vivo Para determinar diferenças na absorção de glicose em um modelo de Drosophila de ALS baseado no TDP-43, foi utilizado um sensor de glicose à base de FRET geneticamente codificado. O sensor era composto por CFP e YFP fundidos ao domínio de ligação de glicose do gene E. coli MglB. A ligação de glicose provoca uma alteração conformacional, que pode ser detectada por tr...

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Measuring Glucose Uptake in Drosophila Models of TDP-43 Proteinopathy

A absorção de glicose é aumentada em neurônios motores Drosophila afetados pela proteína de ligação de DNA TAR (TDP-43), como indicado por um sensor de glicose à base de FRET, geneticamente codificado.

Medição da captação de glicose em modelos de Drosophila de Proteinopatia TDP-43

Amyotrophic lateral sclerosis is a neurodegenerative disorder causing progressive muscle weakness and death within 2-5 years following diagnosis. Clinical ...

Esta técnica é significativa porque pode medir a absorção de glicose em células específicas em tecidos Drosophila vivos. O sensor baseado em FRET fornece uma medida direta das alterações nos níveis de glicose intracelular. Essa técnica permite que os pesquisadores avaliem mudanças nos níveis de glicose em tempo real, dentro de neurônios motores vivos de modelos de ELA versus controles.Um aspecto desafiador é a imagem do mesmo conjunto de neurônios depois de mudar o buffer. Deixar a amostra no microscópio ajuda a garantir que o VMC se mova o mínimo possível. Antes de começar, as dissecções ligam o microscópio de imagem e os lasers.Em seguida, colete uma terceira larva instar errante, enxágüe-a com água dupla destilada e coloque-a em uma gota de tampão HL3 em um prato alinhado de elastômero previamente preparado. Em seguida, sob um microscópio dissecando, use um par de fórceps para fixar as extremidades anterior e posterior da larva, lado dorsal para cima, esticando cuidadosamente o comprimento da larva em termos de pinos de insetos. Usando um par de tesouras iris angulares, faça uma incisão logo acima do pino posterior.Em seguida, faça um corte vertical da incisão em direção à extremidade anterior da larva. Depois de adicionar algumas gotas de tampão HL3, se necessário, remova a traqueia e o resto dos órgãos flutuantes sem perturbar o sistema nervoso central. Em seguida, fixar os retalhos, esticando a parede do corpo para expor o sistema nervoso central, mantendo o sistema neuromuscular intacto.Para aquisição de imagens, use microscópio confocal vertical com uma lente de imersão de água 40 vezes. Em seguida, selecione o laser de 405 nanômetros para excitar o PCP. Em seguida, otimize os parâmetros de aquisição, como velocidade de varredura, velocidade de varredura, tamanho médio, objetivo, zoom pinhole e resolução espacial.Ajuste o ganho de modo que o sinal esteja no intervalo dinâmico ideal e use os mesmos parâmetros para todos os genótipos. Para a imagem dos neurônios motores dentro do fio nervoso ventral, coloque a antena de silicone com a amostra dissecada sob a lente e baixe a lente para que ela entre em contato com o tampão de sacarose trehalose HL3. Certifique-se de que a lente está completamente submersa no buffer e adicione mais tampão, se necessário. Próximo.Utilizando os canais CFP e FRET, selecione manualmente uma seleção óptica composta por pelo menos seis neurônios motores em foco localizados ao longo da linha média do cabo nervoso ventral. Em seguida, adquira imagens a cada 10 segundos por 10 minutos. Essas imagens representam a linha de base.Para estimulação de glicose, remova a sacarose trehalose contendo tampão HL3 usando uma pipeta Pasteur e adicione cinco tampão HL3 suplementado de glicose milimila sem mover o fio nervoso ventral. Em seguida, adquira imagens a cada 10 segundos por mais 10 minutos. Essas imagens representam a fase de estimulação.Salve as imagens como arquivos CZI ou qualquer tipo de arquivo suportado pelo software de imagem com um nome de arquivo, incluindo data, fundo genético, condição experimental e canais usados. Reutilize os parâmetros para a imagem de todos os genótipos. Para processar imagens abra o software de imagem Fiji-ImageJ e, em seguida, abra os arquivos CZI, escolha a pilha de visualização com hipercompacta e defina o modo de cor em escala cinza e selecione canais divididos em janelas separadas. Próximo.Processe as imagens usando plug-ins de correção de deriva, turbo reg e stack reg. Cada canal é corrigido separadamente selecionando stack reg sob plug-ins e, em seguida, escolhendo a transformação para a tradução. Escolha manualmente as regiões de interesse ou ROIs rastreando todos os neurônios motores que permanecem em foco durante toda a série temporal.Em seguida, use o gerenciador de ROI para salvar cada contorno do neurônio motor. Use a função multi medida para medir o valor cinza médio em cada ROI em cada ponto de tempo. Em seguida, copie os ROIs rastreados do primeiro canal para o segundo canal para a imagem pré-estimulação.Para análise de dados, calcule a razão FRET por CFP utilizando os valores cinza médios para os canais FRET e CFP. Alterações nas relações DE TRAP por CFP refletem alterações na concentração de glicose intracelular. Em seguida, plote as relações FRET por CFP para cada ROI e ponto de tempo versus tempo.Um sensor de glicose à base de FRET geneticamente codificado foi usado para medir a absorção de glicose em neurônios motores. Quando a glicose não está ligada ao sensor, a excitação cfp causa apenas emissão de CFP. E quando a glicose se liga, o sinal YFP pode ser detectado devido ao TRASco ocorrendo entre CFP e YFP.Aqui são mostradas imagens de sinais DE FRET e CFP em controles de sensores de glicose em neurônios mutantes TDP-43 sob condições de linha de base e estimulação. Um neurônio motor representativo é descrito em cada imagem como um exemplo de ROI. Após a estimulação da glicose, controle os neurônios motores que expressam sensores de glicose, apresentam um pequeno aumento na absorção de glicose, enquanto os neurônios que expressam TDP-43 mostraram uma absorção de glicose significativamente maior.Outras relações FRET por CFP de neurônios motores mutantes TDP-43 foram normalizadas para controles de sensores de glicose em cada ponto de tempo. Sob condições básicas, não houve diferença entre os genótipos. No entanto, após a estimulação da glicose, observou-se um aumento rápido e significativo na absorção de glicose em mutantes TDP-43 em comparação com o controle.Em uma representação de gráfico de barras, a estimulação de glicose em neurônios expressando o sensor de glicose demonstrou um pequeno, mas significativo aumento na relação FRET por CFP em comparação com a linha de base. Em contraste, os neurônios que expressam TDP-43 apresentaram um aumento significativo na razão de estimulação em comparação com a linha de base. A diferença líquida nas relações DE TRAC por CFP entre neurônios motores expressando TDP-43 e sensor de glicose é em torno de 10,9% O gerenciamento de tempo é fundamental para este procedimento para que os neurônios não morram ao longo da imagem.É importante imaginar imediatamente após as dissecções para evitar isso. Esta técnica destacou a importância do metabolismo da glicose nos neurônios e levou nosso grupo a investigar melhor o papel da glicólise na regeneração do neurônio motor.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Measuring Glucose Uptake in Drosophila Models of TDP-43 Proteinopathy

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Locomotor ensaio, Aprendizagem e Memória Os déficits no Drosophila Modelos de neurodegeneração

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of ...

Neurociência

Measuring Motor Coordination in Mice

Medindo Coordenação Motora em Ratos

Mice are increasingly being used in behavioral neuroscience, largely replacing rats as the behaviorist's animal of choice. Before aspects of behavior such ...

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Visualização de Propriocepção em<em&gt; Drosophila</em&gt; As larvas e pupas

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

Um Ensaio Behavioral Barato, escalável para medição Ethanol Sedação sensibilidade e tolerância rápida em<em&gt; Drosophila</em

Alcohol use disorder (AUD) is a serious health challenge. Despite a large hereditary component to AUD, few genes have been unambiguously implicated in ...

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Medir e alterando Acasalamento Drive em Male<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, ...

Measuring Synaptic Vesicle Endocytosis in Cultured Hippocampal Neurons

Medindo a endocitose da vesícula sináptica nos neurônios Hippocampal culturas

During endocytosis, fused synaptic vesicles are retrieved at nerve terminals, allowing for vesicle recycling and thus the maintenance of synaptic ...

Assessment of Dopaminergic Homeostasis in Mice by Use of High-performance Liquid Chromatography Analysis and Synaptosomal Dopamine Uptake

Avaliação da homeostase Dopaminergic em camundongos pelo uso de análise de cromatografia líquida de alta performance e captação da dopamina Synaptosomal

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) ...

Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

Biologia celular quantitativa de neurodegeneração em Drosophila , através de uma análise imparcial das proteínas fluorescente etiquetadas usando o ImageJ

With the rising prevalence of neurodegenerative diseases, it is increasingly important to understand the underlying pathophysiology that leads to neuronal ...

Alternate Immersion in Glucose to Produce Prolonged Hyperglycemia in Zebrafish

Imersão alternativa em glicose para produzir hiperglicemia prolongada em zebrafish

Zebrafish (Danio rerio) are an excellent model to investigate the effects of chronic hyperglycemia, a hallmark of Type II Diabetes Mellitus (T2DM). This ...

Semi-Quantitative Determination of Dopaminergic Neuron Density in the Substantia Nigra of Rodent Models using Automated Image Analysis

Determinação semi-quantitativa da densidade do neurônio dopaminérgico na Substantia Nigra dos Modelos de Roedores usando análise automatizada de imagem

Estimation of the number of dopaminergic neurons in the substantia nigra is a key method in pre-clinical Parkinson's disease research. Currently, unbiased ...