Name: measuring glucose uptake in drosophila models of tdp-43 proteinopathy
Uploaded: 2021-08-03T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Glucose Uptake in Drosophila Models of TDP-43 Proteinopathy at JoVE.com

Мы благодарим Стефани Ширмайер и Такеши Ивацубо за предоставление штаммов дрозофилы. Мы также благодарим Патрисию Янсму за помощь в визуализации в Marley Imaging Core в Университете Аризоны. Эта работа финансировалась Национальными институтами здравоохранения NIH NS091299, NS115514 (для DCZ), HHMI Gilliam Fellowship (для EM) и Программой исследований биологии бакалавриата (для HB).

Трансгенные мухи UAS FLII12Pglu-700μδ6 были зарегистрированы в Volkenhoff et al.10 и любезно предоставлены доктором С. Ширмайером. Трансгенные линии UAS TDP-43G298S были любезно предоставлены доктором Т. Ивацубо13. Рекомбинантные линии Drosophila, содержащие трансгены UAS FLII12Pglu-70...

<ol>
	<li>Ingre, C., Roos, P. M., Piehl, F., Kamel, F., Fang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+factors+for+amyotrophic+lateral+sclerosis.">Risk factors for amyotrophic lateral sclerosis.</a> Clinical Epidemiology. 7, 181-193 (2015).</li><li>Dupuis, L., Pradat, P. F., Ludolph, A. C., Loeffler, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energy+metabolism+in+amyotrophic+lateral+sclerosis.">Energy metabolism in amyotrophic lateral sclerosis.</a> The Lancet Neurology. 10 (1), 75-82 (2011).</li><li>Buratti, E., Baralle, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+functional+implications+of+the+RNA+binding+properties+of+nuclear+factor+TDP-43,+a+novel+splicing+regulator+of+CFTR+exon+9.">Characterization and functional implications of the RNA binding properties of nuclear factor TDP-43, a novel splicing regulator of CFTR exon 9.</a> The Journal of Biological Chemistry. 276 (39), 36337-36343 (2001).</li><li>Polymenidou, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+pre-mRNA+depletion+and+RNA+missplicing+contribute+to+neuronal+vulnerability+from+loss+of+TDP-43.">Long pre-mRNA depletion and RNA missplicing contribute to neuronal vulnerability from loss of TDP-43.</a> Nature Neuroscience. 14 (4), 459-468 (2011).</li><li>Tollervey, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+the+RNA+targets+and+position-dependent+splicing+regulation+by+TDP-43.">Characterizing the RNA targets and position-dependent splicing regulation by TDP-43.</a> Nature Neuroscience. 14 (4), 452-458 (2011).</li><li>Ling, S. C., Polymenidou, M., Cleveland, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Converging+mechanisms+in+ALS+and+FTD:+disrupted+RNA+and+protein+homeostasis.">Converging mechanisms in ALS and FTD: disrupted RNA and protein homeostasis.</a> Neuron. 79 (3), 416-438 (2013).</li><li>Estes, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wild-type+and+A315T+mutant+TDP-43+exert+differential+neurotoxicity+in+a+Drosophila+model+of+ALS.">Wild-type and A315T mutant TDP-43 exert differential neurotoxicity in a Drosophila model of ALS.</a> Human Molecular Genetics. 20 (12), 2308-2321 (2011).</li><li>Estes, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+neurons+and+glia+exhibit+specific+individualized+responses+to+TDP-43+expression+in+a+Drosophila+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis.">Motor neurons and glia exhibit specific individualized responses to TDP-43 expression in a Drosophila model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 6 (3), 721-733 (2013).</li><li>Manzo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycolysis+upregulation+is+neuroprotective+as+a+compensatory+mechanism+in+ALS.">Glycolysis upregulation is neuroprotective as a compensatory mechanism in ALS.</a> eLife. 8, 45114 (2019).</li><li>Volkenhoff, A., Hirrlinger, J., Kappel, J. M., Klambt, C., Schirmeier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+using+a+FRET+glucose+sensor+reveals+glucose+delivery+to+all+cell+types+in+the+Drosophila+brain.">Live imaging using a FRET glucose sensor reveals glucose delivery to all cell types in the Drosophila brain.</a> Journal of Insect Physiology. 106, 55-64 (2018).</li><li>Fehr, M., Lalonde, S., Lager, I., Wolff, M. W., Frommer, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+the+dynamics+of+glucose+uptake+in+the+cytosol+of+COS-7+cells+by+fluorescent+nanosensors.">In vivo imaging of the dynamics of glucose uptake in the cytosol of COS-7 cells by fluorescent nanosensors.</a> The Journal of Biological Chemistry. 278 (21), 19127-19133 (2003).</li><li>Takanaga, H., Chaudhuri, B., Frommer, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GLUT1+and+GLUT9+as+major+contributors+to+glucose+influx+in+HepG2+cells+identified+by+a+high+sensitivity+intramolecular+FRET+glucose+sensor.">GLUT1 and GLUT9 as major contributors to glucose influx in HepG2 cells identified by a high sensitivity intramolecular FRET glucose sensor.</a> Biochimedica et Biophysica Acta. 1778 (4), 1091-1099 (2008).</li><li>Ihara, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+binding+mediates+neurotoxicity+in+the+transgenic+Drosophila+model+of+TDP-43+proteinopathy.">RNA binding mediates neurotoxicity in the transgenic Drosophila model of TDP-43 proteinopathy.</a> Human Molecular Genetics. 22 (22), 4474-4484 (2013).</li><li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118 (2), 401-415 (1993).</li><li>Diaz-Garcia, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+in+vivo+imaging+of+neuronal+glucose+concentrations+with+a+genetically+encoded+fluorescence+lifetime+sensor.">Quantitative in vivo imaging of neuronal glucose concentrations with a genetically encoded fluorescence lifetime sensor.</a> Journal of Neuroscience Research. 97 (8), 946-960 (2019).</li><li>Mergenthaler, P., Lindauer, U., Dienel, G. A., Meisel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sugar+for+the+brain:+the+role+of+glucose+in+physiological+and+pathological+brain+function.">Sugar for the brain: the role of glucose in physiological and pathological brain function.</a> Trends in Neurosciences. 36 (10), 587-597 (2013).</li><li>Lu, B., Vogel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+models+of+neurodegenerative+diseases.">Drosophila models of neurodegenerative diseases.</a> Annual Review of Pathology. 4, 315-342 (2009).</li></ol>

Метод, подробно описанный здесь, может быть применен для измерения поглощения глюкозы в определенном типе клеток, представляющих интерес для живой дрозофилы, с использованием FLII12Pglu-700μδ6, датчика на основе FRET, который может обнаруживать изменения уровня глюкозы в миллимолярном?...

Боковой амиотрофический склероз (БАС) является прогрессирующим нейродегенеративным расстройством, которое в настоящее время неизлечимо. БАС поражает верхние и нижние двигательные нейроны, что приводит к потере двигательной координации, необратимому параличу, дыхательной недостаточности и возможной смерти в течение 2-5 лет после постановки диагноза1. БАС связан с метаболическими дефектами, такими как потеря веса, дислипидемия и гиперметаболизм (рассмотрено в2); однако остается неясным, как эти изменения в метаболизме связаны с дегенерацией двигательных нейронов. Общим знаменателем при БАС и связанных с ним нейродегенеративных заболеваниях является TDP-43, белок, связывающий нуклеиновые кислоты, участвующий в нескольких стадиях обработки РНК3,4,5. Хотя мутации в TDP-43 затрагивают только 3-5% пациентов, белок TDP-43 дикого типа обнаруживается в цитоплазматических агрегатах в >97% случаев БАС (рассмотрен в6). Эта патология была смоделирована у дрозофилы путем сверхэкспрессии человеческого дикого типа или мутантного TDP-43 (G298S) в двигательных нейронах, который рекапитулирует множественные аспекты БАС, включая цитоплазматические включения, двигательную дисфункцию и снижение продолжительности жизни7,8. Используя эти модели, недавно сообщалось, что протеинопатия TDP-43 вызывает значительное повышение уровня пирувата и мРНК фосфофруктокиназы (PFK), ограничивающего скорость фермента гликолиза9. Аналогичное увеличение транскриптов PFK было обнаружено в производных от пациента двигательных нейронах и спинном мозге, что свидетельствует о том, что гликолиз повышается в контексте протеинопатии TDP-43. Интересно, что дальнейшее увеличение гликолиза с использованием диетических и генетических манипуляций смягчило несколько фенотипов БАС, таких как двигательная дисфункция и увеличение продолжительности жизни в моделях протеинопатии TDP-43, что согласуется с компенсаторным, нейропротекторным механизмом в дегенерирующих двигательных нейронах.
Для дальнейшего исследования изменений в гликолизе и измерения поглощения глюкозы в моделях дрозофилы протеинопатии TDP-43 ранее зарегистрированный генетически закодированный датчик на основе FRET FLII12Pglu-700μδ610 был экспрессирован в двигательных нейронах, специально используя систему экспрессии UAS-GAL4. Датчик глюкозы FLII12Pglu-700μδ6 использует резонансный перенос энергии между двумя вариантами зеленого флуоресцентного белка, голубых и желтых флуоресцентных белков (CFP и YFP) для обнаружения глюкозы на клеточном уровне. Он состоит из бактериального глюкозосвязывающего домена из гена E. coli MglB, слитого с CFP и YFP на противоположных концах молекулы. При связывании с молекулой глюкозы датчик претерпевает конформационное изменение, сближающее CFP и YFP и позволяющее возникать FRET, которое затем может быть использовано для количественной оценки внутриклеточных уровней глюкозы10,11,12 (рисунок 1). Здесь мы покажем, как датчик FLII12Pglu-700μδ6 может быть использован для определения изменений в поглощении глюкозы, вызванных протеинопатией TDP-43 в двигательных нейронах. Эксперименты, описанные здесь, показывают, что сверхэкспрессия мутанта, связанного с БАС, TDP-43G298S,в двигательных нейронах вызывает значительное увеличение поглощения глюкозы по сравнению с контрольной группой. Этот подход может быть использован в других типах БАС (например, SOD1, C9orf72 и т.д.) и/или других типах клеток (например, глия, мышцы) для определения изменений в поглощении глюкозы, связанных с нейродегенерацией.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>35 mm tissue culture dishes</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>CLS430165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40X water immersion lens</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>440090</td>
			<td>dippable, N.A. 0.8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dissection scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5618</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100189-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #55 forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100189-244</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minutien pins</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>26002-10</td>
			<td>used for dissections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYLGARD 184 Silicone Elastomer Kit</td>
			<td>Dow</td>
			<td>1317318</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM880 NLO upright multiphoton/confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring glucose uptake in drosophila models of tdp-43 proteinopathy

Боковой амиотрофический склероз является нейродегенеративным расстройством, вызывающим прогрессирующую мышечную слабость и смерть в течение 2-5 лет после постановки диагноза. Клинические проявления включают потерю веса, дислипидемию и гиперметаболизм; однако остается неясным, как они связаны с дегенерацией двигательных нейронов. Используя модель дрозофилы протеинопатии TDP-43, которая повторяет несколько особенностей БАС, включая цитоплазматические включения, двигательную дисфункцию и снижение продолжительности жизни, мы недавно выявили широкий спектр метаболических дефицитов. Среди них было обнаружено, что гликолиз регулируется, и эксперименты с генетическим взаимодействием предоставили доказательства компенсаторного нейропротекторного механизма. Действительно, несмотря на повышение регуляции фосфофруктокиназы, ограничивающего скорость фермента при гликолизе, было показано, что увеличение гликолиза с использованием диетических и генетических манипуляций смягчает двигательную дисфункцию и увеличивает продолжительность жизни в моделях протеинопатии TDP-43. Для дальнейшего изучения влияния протеинопатии TDP-43 на гликолитический поток в двигательных нейронах был использован ранее зарегистрированный генетически закодированный датчик на основе FRET FLII12Pglu-700μδ6. Этот датчик состоит из бактериального глюкозочувствительного домена и голубых и желтых флуоресцентных белков в качестве пары FRET. При связывании глюкозы датчик претерпевает конформационное изменение, позволяющее возникать FRET. Используя FLII12Pglu-700μδ6, было обнаружено, что поглощение глюкозы значительно увеличивается в двигательных нейронах, экспрессирующих TDP-43G298S,вариант, вызывающий БАС. Здесь мы покажем, как измерить поглощение глюкозы, ex vivo,в препаратах личиночного вентрального нервного канатика, экспрессирующих датчик глюкозы FLII12Pglu-700μδ6 в контексте протеинопатии TDP-43. Этот подход может быть использован для измерения поглощения глюкозы и оценки гликолитического потока в различных типах клеток или в контексте различных мутаций, вызывающих БАС и связанные с ним нейродегенеративные расстройства.

Получение изображения датчика глюкозы в вентральном нервном канатике (VNC), ex vivo Для определения различий в поглощении глюкозы в модели дрозофилы БАС на основе TDP-43 был использован генетически закодированный датчик глюкозы на основе FRET. Датчик содержал CFP и ...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Glucose Uptake in Drosophila Models of TDP-43 Proteinopathy at JoVE.com

Measuring Glucose Uptake in Drosophila Models of TDP-43 Proteinopathy

Поглощение глюкозы увеличивается в моторных нейронах Drosophila, пораженных протеинопатией белка, связывающего ДНК(TDP-43), о чем свидетельствует генетически закодированный датчик глюкозы на основе FRET.

Измерение поглощения глюкозы в моделях дрозофилы протеинопатии TDP-43

Amyotrophic lateral sclerosis is a neurodegenerative disorder causing progressive muscle weakness and death within 2-5 years following diagnosis. Clinical ...

Этот метод важен, потому что он может измерять поглощение глюкозы в определенных клетках в живых тканях дрозофилы. Датчик на основе FRET обеспечивает прямое измерение изменений внутриклеточного уровня глюкозы. Этот метод позволяет исследователям оценивать изменения уровня глюкозы в режиме реального времени в живых двигательных нейронах из моделей БАС по сравнению с контрольной группой.Сложным аспектом является визуализация того же набора нейронов после изменения буфера. Оставление образца на микроскопе помогает гарантировать, что VMC движется как можно меньше. Перед началом вскрытия включают микроскоп и лазеры.Затем соберите блуждающую третью личинку звезды, промойте ее двойной дистиллированной водой и поместите в каплю буфера HL3 на предварительно приготовленную блюдо с эластомерной подкладкой. Затем под рассекающим микроскопом используйте пару щипцов, чтобы закрепить передний и задний концы личинки, спинной стороной вверх, осторожно растянув личинку по длине с помощью штифтов насекомых. Используя пару угловых ножниц Iris, сделайте разрез чуть выше задней булавки.Затем делают вертикальный срез от разреза в сторону переднего конца личинки. После добавления нескольких капель буфера HL3, если это необходимо, удалите трахею и остальные плавающие органы, не нарушая центральную нервную систему. Затем зажмите лоскуты, растягивая стенку тела, чтобы обнажить центральную нервную систему, сохраняя при этом нервно-мышечную систему нетронутой.Для получения изображения используйте вертикальный конфокальный микроскоп с 40-кратной линзой погружения в воду. Затем выберите 405-нанометровый лазер для возбуждения CFP. Затем оптимизируйте параметры сбора, такие как скорость сканирования, среднее значение, цель, размер точечного отверстия и пространственное разрешение.Отрегулируйте коэффициент усиления таким образом, чтобы сигнал находился в оптимальном динамическом диапазоне и используйте одинаковые параметры для всех генотипов. Чтобы визуализировать двигательные нейроны в вентральном нервном канатике, поместите силиконовую тарелку с рассеченным образцом под линзу и опустите линзу так, чтобы она вступила в контакт с буфером трегалозной сахарозы HL3. Убедитесь, что объектив полностью погружен в буфер и при необходимости добавьте дополнительный буфер. Следующий.Используя каналы CFP и FRET, вручную выберите оптический выбор, состоящий по меньшей мере из шести двигательных нейронов в фокусе, расположенных вдоль средней линии вентрального нервного канатика. Затем получайте изображения каждые 10 секунд в течение 10 минут. Эти изображения представляют базовую линию.Для стимуляции глюкозой удалите трегалозную сахарозу, содержащую буфер HL3, с помощью пипетки Пастера и добавьте пять миллимоляров глюкозы, дополненных буфером HL3, не перемещая вентральный нервный канатик. Затем получайте изображения каждые 10 секунд в течение еще 10 минут. Эти изображения представляют фазу стимуляции.Сохраните изображения в виде файлов CZI или любого типа файлов, поддерживаемого программным обеспечением для обработки изображений, с именем файла, включая дату, генетический фон, экспериментальное состояние и используемые каналы. Повторно используйте параметры для изображения всех генотипов. Для обработки изображений откройте программное обеспечение для обработки изображений Fiji-ImageJ, затем откройте файлы CZI, выберите стек представлений с гиперстеком и установите цветовой режим в шкалу серого и выберите разделение каналов на отдельные окна. Следующий.Обрабатывайте изображения с помощью плагинов коррекции дрейфа, turbo reg и stack reg. Каждый канал корректируется отдельно, выбирая стек reg в плагинах, а затем выбирая преобразование в трансляцию. Вручную выберите интересующие области или ROI, отслеживая все двигательные нейроны, которые остаются в фокусе в течение всего временного ряда.Затем используйте менеджер ROI, чтобы сохранить контур каждого двигательного нейрона. Используйте функцию multi measure для измерения среднего значения серого цвета в каждом ROI в каждый момент времени. Затем скопируйте ROI, прослеженные от первого канала ко второму каналу для изображения перед стимуляцией.Для анализа данных рассчитайте коэффициент FRET по CFP, используя средние значения серого цвета для каналов FRET и CFP. Изменения коэффициентов FRET по CFP отражают изменения внутриклеточной концентрации глюкозы. Затем постройте график FRET по соотношениям CFP для каждой рентабельности инвестиций и точки времени в зависимости от времени.Генетически закодированный датчик глюкозы на основе FRET использовался для измерения поглощения глюкозы в двигательных нейронах. Когда глюкоза не связана с датчиком, возбуждение CFP вызывает только эмиссию CFP. И когда глюкоза связывается, сигнал YFP может быть обнаружен из-за FRET, возникающего между CFP и YFP.Здесь показаны изображения сигналов FRET и CFP в элементах управления датчиками глюкозы в мутантных нейронах TDP-43 в исходных условиях и условиях стимуляции. Репрезентативный двигательный нейрон очерчен на каждом изображении в качестве примера ROI. При стимуляции глюкозой контрольные двигательные нейроны, экспрессирующие датчики глюкозы, демонстрируют небольшое увеличение поглощения глюкозы, в то время как нейроны, экспрессирующие TDP-43, показали значительно более высокое поглощение глюкозы.В дальнейшем коэффициенты FRET по CFP мутантных двигательных нейронов TDP-43 нормализовались для контроля датчиков глюкозы в каждый момент времени. В исходных условиях не было никакой разницы между генотипами. Однако при стимуляции глюкозой у мутантов TDP-43 наблюдалось быстрое и значительное увеличение поглощения глюкозы по сравнению с контролем.В гистограммном представлении стимуляция глюкозы в нейронах, экспрессирующих датчик глюкозы, продемонстрировала небольшое, но значительное увеличение FRET по соотношению CFP по сравнению с исходным уровнем. Напротив, нейроны, экспрессирующие TDP-43, показали значительное увеличение соотношения при стимуляции по сравнению с исходным уровнем. Чистая разница в коэффициентах FRET по CFP между моторными нейронами, экспрессирующими TDP-43, и датчиком глюкозы составляет около 10,9% Управление временем имеет решающее значение для этой процедуры, чтобы нейроны не умирали в ходе визуализации.Важно изобразить сразу после вскрытия, чтобы избежать этого. Этот метод подчеркнул важность метаболизма глюкозы в нейронах и привел нашу группу к дальнейшему исследованию роли гликолиза в регенерации двигательных нейронов.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Measuring Glucose Uptake in Drosophila Models of TDP-43 Proteinopathy

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Опорно-двигательного опробование, обучение и память Дефицит Drosophila Модели нейродегенерации

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of ...

Measuring Motor Coordination in Mice

Измерение моторной координации у мышей

Mice are increasingly being used in behavioral neuroscience, largely replacing rats as the behaviorist's animal of choice. Before aspects of behavior such ...

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Визуализация проприорецепторов в<em&gt; Drosophila</em&gt; Личинки и куколки

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

Недорогой, масштабируемая Поведенческая Анализ для измерения этанола седации Чувствительность и быстрый толерантности в<em&gt; Drosophila</em

Alcohol use disorder (AUD) is a serious health challenge. Despite a large hereditary component to AUD, few genes have been unambiguously implicated in ...

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Измерение и изменяющий Спаривание Drive в Мале<em&gt; Дрозофилы</em

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, ...

Measuring Synaptic Vesicle Endocytosis in Cultured Hippocampal Neurons

Измеряя эндоцитоза синаптических пузырьков в культивированный Нейроны гиппокампа

During endocytosis, fused synaptic vesicles are retrieved at nerve terminals, allowing for vesicle recycling and thus the maintenance of synaptic ...

Assessment of Dopaminergic Homeostasis in Mice by Use of High-performance Liquid Chromatography Analysis and Synaptosomal Dopamine Uptake

Оценка дофаминергической гомеостаза у мышей с использованием высокопроизводительных жидкостной хроматографии анализа и поглощение синаптосомальных допамина

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) ...

Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

Количественные клеточной биологии нейродегенеративные у дрозофилы путем объективного анализа дневно тегами белков с помощью ImageJ

With the rising prevalence of neurodegenerative diseases, it is increasingly important to understand the underlying pathophysiology that leads to neuronal ...

Alternate Immersion in Glucose to Produce Prolonged Hyperglycemia in Zebrafish

Альтернативное погружение в глюкозу для производства длительной гипергликемии у рыбок данио

Zebrafish (Danio rerio) are an excellent model to investigate the effects of chronic hyperglycemia, a hallmark of Type II Diabetes Mellitus (T2DM). This ...

Semi-Quantitative Determination of Dopaminergic Neuron Density in the Substantia Nigra of Rodent Models using Automated Image Analysis

Полу количественное определение плотности дофаминергических нейронов в Чернии субстанции моделей грызунов с использованием автоматизированного анализа изображений

Estimation of the number of dopaminergic neurons in the substantia nigra is a key method in pre-clinical Parkinson's disease research. Currently, unbiased ...