Name: measuring glucose uptake in drosophila models of tdp-43 proteinopathy
Uploaded: 2021-08-03T15:00:00
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Agradecemos a Stefanie Schirmeier y Takeshi Iwatsubo por proporcionar cepas de Drosophila. También agradecemos a Patricia Jansma por ayudar con las imágenes en el Marley Imaging Core de la Universidad de Arizona. Este trabajo fue financiado por los Institutos Nacionales de Salud NIH NS091299, NS115514 (a DCZ), HHMI Gilliam Fellowship (a EM) y el Programa de Investigación de Biología de Pregrado (a HB).

Las moscas transgénicas UAS FLII12Pglu-700μδ6 fueron reportadas en Volkenhoff et al.10 y amablemente proporcionadas por el Dr. S. Schirmeier. Las líneas transgénicas UAS TDP-43G298S fueron amablemente proporcionadas por el Dr. T. Iwatsubo13. Las líneas recombinantes de Drosophila que albergan transgenes UAS FLII12Pglu-700μδ6 y UAS TDP-43 se generaron en el laboratorio zarnescu utilizando enfoques genéticos estándar y se informaron en Manzo et a...

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	<li>Ingre, C., Roos, P. M., Piehl, F., Kamel, F., Fang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+factors+for+amyotrophic+lateral+sclerosis.">Risk factors for amyotrophic lateral sclerosis.</a> Clinical Epidemiology. 7, 181-193 (2015).</li><li>Dupuis, L., Pradat, P. F., Ludolph, A. C., Loeffler, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energy+metabolism+in+amyotrophic+lateral+sclerosis.">Energy metabolism in amyotrophic lateral sclerosis.</a> The Lancet Neurology. 10 (1), 75-82 (2011).</li><li>Buratti, E., Baralle, F. 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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+the+RNA+targets+and+position-dependent+splicing+regulation+by+TDP-43.">Characterizing the RNA targets and position-dependent splicing regulation by TDP-43.</a> Nature Neuroscience. 14 (4), 452-458 (2011).</li><li>Ling, S. C., Polymenidou, M., Cleveland, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Converging+mechanisms+in+ALS+and+FTD:+disrupted+RNA+and+protein+homeostasis.">Converging mechanisms in ALS and FTD: disrupted RNA and protein homeostasis.</a> Neuron. 79 (3), 416-438 (2013).</li><li>Estes, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wild-type+and+A315T+mutant+TDP-43+exert+differential+neurotoxicity+in+a+Drosophila+model+of+ALS.">Wild-type and A315T mutant TDP-43 exert differential neurotoxicity in a Drosophila model of ALS.</a> Human Molecular Genetics. 20 (12), 2308-2321 (2011).</li><li>Estes, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+neurons+and+glia+exhibit+specific+individualized+responses+to+TDP-43+expression+in+a+Drosophila+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis.">Motor neurons and glia exhibit specific individualized responses to TDP-43 expression in a Drosophila model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 6 (3), 721-733 (2013).</li><li>Manzo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycolysis+upregulation+is+neuroprotective+as+a+compensatory+mechanism+in+ALS.">Glycolysis upregulation is neuroprotective as a compensatory mechanism in ALS.</a> eLife. 8, 45114 (2019).</li><li>Volkenhoff, A., Hirrlinger, J., Kappel, J. M., Klambt, C., Schirmeier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+using+a+FRET+glucose+sensor+reveals+glucose+delivery+to+all+cell+types+in+the+Drosophila+brain.">Live imaging using a FRET glucose sensor reveals glucose delivery to all cell types in the Drosophila brain.</a> Journal of Insect Physiology. 106, 55-64 (2018).</li><li>Fehr, M., Lalonde, S., Lager, I., Wolff, M. W., Frommer, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+the+dynamics+of+glucose+uptake+in+the+cytosol+of+COS-7+cells+by+fluorescent+nanosensors.">In vivo imaging of the dynamics of glucose uptake in the cytosol of COS-7 cells by fluorescent nanosensors.</a> The Journal of Biological Chemistry. 278 (21), 19127-19133 (2003).</li><li>Takanaga, H., Chaudhuri, B., Frommer, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GLUT1+and+GLUT9+as+major+contributors+to+glucose+influx+in+HepG2+cells+identified+by+a+high+sensitivity+intramolecular+FRET+glucose+sensor.">GLUT1 and GLUT9 as major contributors to glucose influx in HepG2 cells identified by a high sensitivity intramolecular FRET glucose sensor.</a> Biochimedica et Biophysica Acta. 1778 (4), 1091-1099 (2008).</li><li>Ihara, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+binding+mediates+neurotoxicity+in+the+transgenic+Drosophila+model+of+TDP-43+proteinopathy.">RNA binding mediates neurotoxicity in the transgenic Drosophila model of TDP-43 proteinopathy.</a> Human Molecular Genetics. 22 (22), 4474-4484 (2013).</li><li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118 (2), 401-415 (1993).</li><li>Diaz-Garcia, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+in+vivo+imaging+of+neuronal+glucose+concentrations+with+a+genetically+encoded+fluorescence+lifetime+sensor.">Quantitative in vivo imaging of neuronal glucose concentrations with a genetically encoded fluorescence lifetime sensor.</a> Journal of Neuroscience Research. 97 (8), 946-960 (2019).</li><li>Mergenthaler, P., Lindauer, U., Dienel, G. A., Meisel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sugar+for+the+brain:+the+role+of+glucose+in+physiological+and+pathological+brain+function.">Sugar for the brain: the role of glucose in physiological and pathological brain function.</a> Trends in Neurosciences. 36 (10), 587-597 (2013).</li><li>Lu, B., Vogel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+models+of+neurodegenerative+diseases.">Drosophila models of neurodegenerative diseases.</a> Annual Review of Pathology. 4, 315-342 (2009).</li></ol>

La técnica descrita en detalle aquí se puede aplicar para medir la absorción de glucosa en un tipo celular específico de interés en Drosophila viva utilizando FLII12Pglu-700μδ6, un sensor basado en FRET que puede detectar cambios en los niveles de glucosa a un rango milimolar10,11,12. Este sensor se ha utilizado previamente en conjunto con el sistema UAS-GAL4 para dirigir su expresión a tipos celulares específi...

La Esclerosis Lateral Amiotrófica (ELA) es un trastorno neurodegenerativo progresivo que actualmente es incurable. La ELA afecta a las neuronas motoras superiores e inferiores, lo que lleva a la pérdida de la coordinación motora, parálisis irreversible, insuficiencia respiratoria y eventual muerte dentro de los 2-5 años posteriores al diagnóstico1. La ELA se asocia con defectos metabólicos como pérdida de peso, dislipidemia e hipermetabolismo (revisado en2); sin embargo, sigue sin estar claro cómo estas alteraciones en el metabolismo se relacionan con la degeneración de la neurona motora. Un denominador común en la ELA y las enfermedades neurodegenerativas relacionadas es TDP-43, una proteína de unión a ácidos nucleicos implicada en varios pasos del procesamiento del ARN3,4,5. Aunque las mutaciones en TDP-43 solo afectan al 3%-5% de los pacientes, la proteína TDP-43 de tipo salvaje se encuentra dentro de los agregados citoplasmáticos en >97% de los casos de ELA (revisado en6). Esta patología fue modelada en Drosophila por sobreexpresión de tipo salvaje humano o mutante TDP-43 (G298S) en neuronas motoras, que recapitula múltiples aspectos de la ELA, incluyendo inclusiones citoplasmáticas, disfunción locomotora y reducción de la vida útil7,8. Usando estos modelos, se informó recientemente que la proteinopatía TDP-43 causa un aumento significativo en los niveles de piruvato y ARNm fosfofructoquinasa (PFK), la enzima limitante de la velocidad de la glucólisis9. Se encontraron aumentos similares en las transcripciones de PFK en las neuronas motoras y la médula espinal derivadas de pacientes, lo que sugiere que la glucólisis está regulada al alza en el contexto de la proteinopatía TDP-43. Curiosamente, un aumento adicional en la glucólisis utilizando manipulaciones dietéticas y genéticas mitigó varios fenotipos de ELA, como la disfunción locomotora y el aumento de la vida útil en modelos de moscas de proteinopatía TDP-43, consistente con un mecanismo compensatorio y neuroprotector en las neuronas motoras degeneradas.
Para sondear aún más los cambios en la glucólisis y medir la absorción de glucosa en modelos de Drosophila de proteinopatía TDP-43, un sensor basado en FRET codificado genéticamente flII12Pglu-700μδ610 previamente informado se expresó en neuronas motoras utilizando específicamente el sistema de expresión UAS-GAL4. El sensor de glucosa FLII12Pglu-700μδ6 utiliza la transferencia de energía de resonancia entre dos variantes de proteína fluorescente verde, proteínas fluorescentes cian y amarillas (CFP y YFP) para detectar glucosa a nivel celular. Consiste en un dominio de unión a glucosa bacteriana del gen MglB de E. coli fusionado con CFP y YFP en extremos opuestos de la molécula. Cuando se une a una molécula de glucosa, el sensor sufre un cambio conformacional que acerca cfP y YFP y permite que ocurra FRET, que luego se puede usar para cuantificar los niveles de glucosa intracelular10,11,12 (Figura 1). Aquí, mostramos cómo el sensor FLII12Pglu-700μδ6 se puede utilizar para determinar los cambios en la absorción de glucosa causados por la proteinopatía TDP-43 en las neuronas motoras. Los experimentos descritos aquí muestran que la sobreexpresión de un mutante asociado a la ELA, TDP-43G298S,en las neuronas motoras causa un aumento significativo en la absorción de glucosa en comparación con los controles. Este enfoque se puede utilizar en otros tipos de ELA (por ejemplo, SOD1, C9orf72, etc.) y / u otros tipos de células (por ejemplo, glía, músculos) para determinar los cambios en la absorción de glucosa asociados con la neurodegeneración.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>35 mm tissue culture dishes</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>CLS430165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40X water immersion lens</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>440090</td>
			<td>dippable, N.A. 0.8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dissection scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5618</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100189-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #55 forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100189-244</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minutien pins</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>26002-10</td>
			<td>used for dissections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYLGARD 184 Silicone Elastomer Kit</td>
			<td>Dow</td>
			<td>1317318</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM880 NLO upright multiphoton/confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring glucose uptake in drosophila models of tdp-43 proteinopathy

La esclerosis lateral amiotrófica es un trastorno neurodegenerativo que causa debilidad muscular progresiva y muerte dentro de los 2-5 años posteriores al diagnóstico. Las manifestaciones clínicas incluyen pérdida de peso, dislipidemia e hipermetabolismo; sin embargo, no está claro cómo se relacionan con la degeneración de las neuronas motoras. Utilizando un modelo de Drosophila de proteinopatía TDP-43 que recapitula varias características de la ELA, incluidas las inclusiones citoplasmáticas, la disfunción locomotora y la reducción de la vida útil, recientemente identificamos déficits metabólicos de amplio alcance. Entre estos, se encontró que la glucólisis estaba regulada al alza y los experimentos de interacción genética proporcionaron evidencia de un mecanismo neuroprotector compensatorio. De hecho, a pesar de la regulación al alza de la fosfofructoquinasa, la enzima limitante de la velocidad en la glucólisis, se demostró que un aumento en la glucólisis mediante manipulaciones dietéticas y genéticas mitiga la disfunción locomotora y aumenta la vida útil en modelos de mosca de la proteinopatía TDP-43. Para investigar más a fondo el efecto de la proteinopatía TDP-43 sobre el flujo glicolítico en las neuronas motoras, se utilizó un sensor basado en FRET codificado genéticamente previamente, FLII12Pglu-700μδ6. Este sensor está compuesto por un dominio bacteriano sensible a la glucosa y proteínas fluorescentes cian y amarillas como el par FRET. Tras la unión a la glucosa, el sensor sufre un cambio conformacional que permite que se produzca FRET. Usando FLII12Pglu-700μδ6, se encontró que la absorción de glucosa aumentaba significativamente en las neuronas motoras que expresan TDP-43G298S,una variante causante de ELA. Aquí, mostramos cómo medir la absorción de glucosa, ex vivo,en preparaciones larvales del cordón nervioso ventral que expresan el sensor de glucosa FLII12Pglu-700μδ6 en el contexto de la proteinopatía TDP-43. Este enfoque se puede utilizar para medir la absorción de glucosa y evaluar el flujo glucolítico en diferentes tipos de células o en el contexto de diversas mutaciones que causan ELA y trastornos neurodegenerativos relacionados.

Adquisición de imágenes del sensor de glucosa en el cordón nervioso ventral (VNC), ex vivo Para determinar las diferencias en la absorción de glucosa en un modelo de ELA de Drosophila basado en TDP-43, se utilizó un sensor de glucosa basado en FRET codificado genéticamente. El sensor comprendía CFP y YFP fusionados al dominio de unión a glucosa del gen E. coli MglB. La unión a la glucosa provoca un cambio conformacional, que puede detectarse media...

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Measuring Glucose Uptake in Drosophila Models of TDP-43 Proteinopathy

La absorción de glucosa aumenta en las neuronas motoras de Drosophila afectadas por la proteinopatía de unión al ADN TAR (TDP-43), según lo indicado por un sensor de glucosa codificado genéticamente basado en FRET.

Medición de la absorción de glucosa en modelos de Drosophila de proteinopatía por TDP-43

Amyotrophic lateral sclerosis is a neurodegenerative disorder causing progressive muscle weakness and death within 2-5 years following diagnosis. Clinical ...

Esta técnica es importante porque puede medir la absorción de glucosa en células específicas en tejidos vivos de Drosophila. El sensor basado en FRET proporciona una medida directa de los cambios en los niveles intracelulares de glucosa. Esta técnica permite a los investigadores evaluar los cambios en los niveles de glucosa en tiempo real, dentro de las neuronas motoras vivas a partir de modelos de ELA versus controles.Un aspecto desafiante es obtener imágenes del mismo conjunto de neuronas después de cambiar el búfer. Dejar la muestra en el microscopio ayuda a garantizar que el VMC se mueva lo menos posible. Antes de comenzar las disecciones, encienda el microscopio de imágenes y los láseres.Luego recoja una tercera larva errante de instar, enjuáguela con agua destilada doble y colóquela en una gota de tampón HL3 en un plato forrado de elastómero previamente preparado. A continuación, bajo un microscopio de disección, use un par de fórceps para fijar los extremos anterior y posterior de la larva, del lado dorsal hacia arriba, estirando cuidadosamente la larva a lo largo con alfileres de insectos. Usando un par de tijeras Iris en ángulo, haga una incisión justo encima del pasador posterior.Luego haga un corte vertical desde la incisión hacia el extremo anterior de la larva. Después de agregar unas gotas de tampón HL3 si es necesario, retire la tráquea y el resto de los órganos flotantes sin perturbar el sistema nervioso central. Luego fije las solapas, estirando la pared del cuerpo para exponer el sistema nervioso central mientras mantiene intacto el sistema neuromuscular.Para la adquisición de imágenes, use un microscopio confocal vertical con una lente de inmersión en agua 40 veces mayor. A continuación, seleccione el láser de 405 nanómetros para excitar el CFP. A continuación, optimice los parámetros de adquisición, como la velocidad de escaneo, el promedio, el objetivo, el tamaño estenopeico del zoom y la resolución espacial.Ajuste la ganancia de tal manera que la señal esté en el rango dinámico óptimo y use los mismos parámetros para todos los genotipos. Para obtener imágenes de las neuronas motoras dentro del cordón nervioso ventral, coloque la placa de silicona con la muestra diseccionada debajo de la lente y baje la lente para que entre en contacto con el tampón HL3 de sacarosa trehalosa. Asegúrese de que la lente esté completamente sumergida en el búfer y agregue más búfer si es necesario. Próximo.Utilizando los canales CFP y FRET, seleccione manualmente una selección óptica que consista en al menos seis neuronas motoras enfocadas ubicadas a lo largo de la línea media del cordón nervioso ventral. A continuación, adquiera imágenes cada 10 segundos durante 10 minutos. Estas imágenes representan la línea de base.Para la estimulación de la glucosa, retire la sacarosa trehalosa que contiene el tampón HL3 usando una pipeta Pasteur y agregue cinco tampón HL3 suplementado con glucosa milimolar sin mover el cordón nervioso ventral. Luego adquiera imágenes cada 10 segundos durante otros 10 minutos. Estas imágenes representan la fase de estimulación.Guarde las imágenes como archivos CZI o cualquier tipo de archivo compatible con el software de imágenes con un nombre de archivo que incluya la fecha, los antecedentes genéticos, la condición experimental y los canales utilizados. Reutilice los parámetros para obtener imágenes de todos los genotipos. Para el procesamiento de imágenes, abra el software de imágenes Fiji-ImageJ, luego abra los archivos CZI, elija view stack con hyper stack y configure el modo de color en escala de grises y seleccione dividir los canales en ventanas separadas. Próximo.Procese las imágenes utilizando plug-ins de corrección de deriva, turbo reg y stack reg. Cada canal se corrige por separado seleccionando stack reg en plug-ins y, a continuación, eligiendo transformación a traducción. Elija manualmente las regiones de interés o ROI rastreando todas las neuronas motoras que permanecen enfocadas durante toda la serie de tiempo.Luego use el administrador de ROI para guardar cada contorno de neurona motora. Utilice la función de medición múltiple para medir el valor gris medio en cada ROI en cada punto de tiempo. A continuación, copie los ROI trazados desde el primer canal hasta el segundo canal para la imagen previa a la estimulación.Para el análisis de los datos, calcule la relación FRET por CFP utilizando los valores grises medios para los canales FRET y CFP. Los cambios en el FRET por las relaciones CFP reflejan alteraciones en la concentración intracelular de glucosa. A continuación, trace FRET por cfp ratios para cada ROI y punto de tiempo frente al tiempo.Se utilizó un sensor de glucosa basado en FRET codificado genéticamente para medir la absorción de glucosa en las neuronas motoras. Cuando la glucosa no está unida al sensor, la excitación cfp solo causa emisión de CFP. Y cuando la glucosa se une, la señal YFP se puede detectar debido a fret que ocurre entre CFP y YFP.Aquí se muestran imágenes de señales FRET y CFP en controles de sensores de glucosa en neuronas mutantes TDP-43 en condiciones basales y de estimulación. Una neurona motora representativa se describe en cada imagen como un ejemplo de ROI. Tras la estimulación de la glucosa, las neuronas motoras de control que expresan sensores de glucosa, exhiben un pequeño aumento en la absorción de glucosa, mientras que las neuronas que expresan TDP-43 mostraron una absorción de glucosa significativamente mayor.Las proporciones adicionales de FRET por CFP de las neuronas motoras mutantes TDP-43 se normalizaron a los controles del sensor de glucosa en cada punto de tiempo. En condiciones basales, no hubo diferencias entre los genotipos. Sin embargo, tras la estimulación de la glucosa, se observó un aumento rápido y significativo en la absorción de glucosa en los mutantes TDP-43 en comparación con el control.En una representación de gráfico de barras, la estimulación de la glucosa en las neuronas que expresan el sensor de glucosa demostró un aumento pequeño pero significativo en la relación FRET por CFP en comparación con la línea de base. En contraste, las neuronas que expresan TDP-43 mostraron un aumento significativo en la proporción tras la estimulación en comparación con la línea de base. La diferencia neta en FRET por las relaciones CFP entre las neuronas motoras que expresan TDP-43 y el sensor de glucosa es de alrededor del 10,9%La gestión del tiempo es crítica para este procedimiento para que las neuronas no mueran en el transcurso de la imagen.Es importante obtener imágenes inmediatamente después de las disecciones para evitar esto. Esta técnica destacó la importancia del metabolismo de la glucosa en las neuronas y ha llevado a nuestro grupo a investigar más a fondo el papel de la glucólisis en la regeneración de las neuronas motoras.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Measuring Glucose Uptake in Drosophila Models of TDP-43 Proteinopathy

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Locomotor ensayo, aprendizaje, memoria y déficit en Drosophila Los modelos de neurodegeneración

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of ...

Investigación

Neurociencias

Measuring Motor Coordination in Mice

Medición de Coordinación motora en ratones

Mice are increasingly being used in behavioral neuroscience, largely replacing rats as the behaviorist's animal of choice. Before aspects of behavior such ...

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Visualización de los propioceptores<em&gt; Drosophila</em&gt; Las larvas y pupas

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

Un ensayo de conducta Barato, escalable para medir etanol Sedación La sensibilidad y la tolerancia rápida en<em&gt; Drosophila</em

Alcohol use disorder (AUD) is a serious health challenge. Despite a large hereditary component to AUD, few genes have been unambiguously implicated in ...

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

La medición y la modificación de acoplamiento de unidad en Male<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, ...

Measuring Synaptic Vesicle Endocytosis in Cultured Hippocampal Neurons

Medición de endocitosis vesícula sináptica en neuronas Hippocampal cultivadas

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Assessment of Dopaminergic Homeostasis in Mice by Use of High-performance Liquid Chromatography Analysis and Synaptosomal Dopamine Uptake

Evaluación de la Homeostasis dopaminérgica en ratones por medio de análisis de cromatografía líquida de alto rendimiento y absorción de la dopamina Synaptosomal

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Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

Biología celular cuantitativa de neurodegeneración en Drosophila mediante análisis imparcial de fluorescencia etiquetas proteínas con ImageJ

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Semi-Quantitative Determination of Dopaminergic Neuron Density in the Substantia Nigra of Rodent Models using Automated Image Analysis

Determinación Semicuantita cuantitativa de la densidad de la neurona dopaminérgica en la sustancia negra de modelos de roedores utilizando el análisis automatizado de imágenes

Estimation of the number of dopaminergic neurons in the substantia nigra is a key method in pre-clinical Parkinson's disease research. Currently, unbiased ...