Name: measuring glucose uptake in drosophila models of tdp-43 proteinopathy
Uploaded: 2021-08-03T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Glucose Uptake in Drosophila Models of TDP-43 Proteinopathy at JoVE.com

Vi tackar Stefanie Schirmeier och Takeshi Iwatsubo för att de tillhandahåller Drosophila-stammar. Vi tackar också Patricia Jansma för att hon hjälpte till med avbildning i Marley Imaging Core vid University of Arizona. Detta arbete finansierades av National Institutes of Health NIH NS091299, NS115514 (till DCZ), HHMI Gilliam Fellowship (till EM) och Grundutbildningsbiologiforskningsprogrammet (till HB).

UAS FLII12Pglu-700μδ6 transgena flugor rapporterades i Volkenhoff et al.10 och vänligen tillhandahålls av Dr. S. Schirmeier. UAS TDP-43G298S transgena linjer tillhandahölls vänligt av Dr. T. Iwatsubo13. Rekombinanta Drosophila linjer som hyser både UAS FLII12Pglu-700μδ6 och UAS TDP-43 transgener genererades i Zarnescu laboratoriet med hjälp av standard genetiska metoder och rapporterades i Manzo et al.9. D42 GAL4 använd...

<ol>
	<li>Ingre, C., Roos, P. M., Piehl, F., Kamel, F., Fang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+factors+for+amyotrophic+lateral+sclerosis.">Risk factors for amyotrophic lateral sclerosis.</a> Clinical Epidemiology. 7, 181-193 (2015).</li><li>Dupuis, L., Pradat, P. F., Ludolph, A. C., Loeffler, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energy+metabolism+in+amyotrophic+lateral+sclerosis.">Energy metabolism in amyotrophic lateral sclerosis.</a> The Lancet Neurology. 10 (1), 75-82 (2011).</li><li>Buratti, E., Baralle, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+functional+implications+of+the+RNA+binding+properties+of+nuclear+factor+TDP-43,+a+novel+splicing+regulator+of+CFTR+exon+9.">Characterization and functional implications of the RNA binding properties of nuclear factor TDP-43, a novel splicing regulator of CFTR exon 9.</a> The Journal of Biological Chemistry. 276 (39), 36337-36343 (2001).</li><li>Polymenidou, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+pre-mRNA+depletion+and+RNA+missplicing+contribute+to+neuronal+vulnerability+from+loss+of+TDP-43.">Long pre-mRNA depletion and RNA missplicing contribute to neuronal vulnerability from loss of TDP-43.</a> Nature Neuroscience. 14 (4), 459-468 (2011).</li><li>Tollervey, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+the+RNA+targets+and+position-dependent+splicing+regulation+by+TDP-43.">Characterizing the RNA targets and position-dependent splicing regulation by TDP-43.</a> Nature Neuroscience. 14 (4), 452-458 (2011).</li><li>Ling, S. C., Polymenidou, M., Cleveland, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Converging+mechanisms+in+ALS+and+FTD:+disrupted+RNA+and+protein+homeostasis.">Converging mechanisms in ALS and FTD: disrupted RNA and protein homeostasis.</a> Neuron. 79 (3), 416-438 (2013).</li><li>Estes, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wild-type+and+A315T+mutant+TDP-43+exert+differential+neurotoxicity+in+a+Drosophila+model+of+ALS.">Wild-type and A315T mutant TDP-43 exert differential neurotoxicity in a Drosophila model of ALS.</a> Human Molecular Genetics. 20 (12), 2308-2321 (2011).</li><li>Estes, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+neurons+and+glia+exhibit+specific+individualized+responses+to+TDP-43+expression+in+a+Drosophila+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis.">Motor neurons and glia exhibit specific individualized responses to TDP-43 expression in a Drosophila model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 6 (3), 721-733 (2013).</li><li>Manzo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycolysis+upregulation+is+neuroprotective+as+a+compensatory+mechanism+in+ALS.">Glycolysis upregulation is neuroprotective as a compensatory mechanism in ALS.</a> eLife. 8, 45114 (2019).</li><li>Volkenhoff, A., Hirrlinger, J., Kappel, J. M., Klambt, C., Schirmeier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+using+a+FRET+glucose+sensor+reveals+glucose+delivery+to+all+cell+types+in+the+Drosophila+brain.">Live imaging using a FRET glucose sensor reveals glucose delivery to all cell types in the Drosophila brain.</a> Journal of Insect Physiology. 106, 55-64 (2018).</li><li>Fehr, M., Lalonde, S., Lager, I., Wolff, M. W., Frommer, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+the+dynamics+of+glucose+uptake+in+the+cytosol+of+COS-7+cells+by+fluorescent+nanosensors.">In vivo imaging of the dynamics of glucose uptake in the cytosol of COS-7 cells by fluorescent nanosensors.</a> The Journal of Biological Chemistry. 278 (21), 19127-19133 (2003).</li><li>Takanaga, H., Chaudhuri, B., Frommer, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GLUT1+and+GLUT9+as+major+contributors+to+glucose+influx+in+HepG2+cells+identified+by+a+high+sensitivity+intramolecular+FRET+glucose+sensor.">GLUT1 and GLUT9 as major contributors to glucose influx in HepG2 cells identified by a high sensitivity intramolecular FRET glucose sensor.</a> Biochimedica et Biophysica Acta. 1778 (4), 1091-1099 (2008).</li><li>Ihara, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+binding+mediates+neurotoxicity+in+the+transgenic+Drosophila+model+of+TDP-43+proteinopathy.">RNA binding mediates neurotoxicity in the transgenic Drosophila model of TDP-43 proteinopathy.</a> Human Molecular Genetics. 22 (22), 4474-4484 (2013).</li><li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118 (2), 401-415 (1993).</li><li>Diaz-Garcia, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+in+vivo+imaging+of+neuronal+glucose+concentrations+with+a+genetically+encoded+fluorescence+lifetime+sensor.">Quantitative in vivo imaging of neuronal glucose concentrations with a genetically encoded fluorescence lifetime sensor.</a> Journal of Neuroscience Research. 97 (8), 946-960 (2019).</li><li>Mergenthaler, P., Lindauer, U., Dienel, G. A., Meisel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sugar+for+the+brain:+the+role+of+glucose+in+physiological+and+pathological+brain+function.">Sugar for the brain: the role of glucose in physiological and pathological brain function.</a> Trends in Neurosciences. 36 (10), 587-597 (2013).</li><li>Lu, B., Vogel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+models+of+neurodegenerative+diseases.">Drosophila models of neurodegenerative diseases.</a> Annual Review of Pathology. 4, 315-342 (2009).</li></ol>

Tekniken som beskrivs i detalj här kan tillämpas för att mäta glukosupptag i en specifik celltyp av intresse för levande Drosophila med FLII12Pglu-700μδ6, en FRET-baserad sensor som kan upptäcka förändringar i glukosnivåer till ett millimolarområde10,11,12. Denna sensor har tidigare använts tillsammans med UAS-GAL4-systemet för att rikta dess uttryck till specifika celltyper, inklusive nervceller<sup class...

Amyotrofisk lateral skleros (ALS) är en progressiv neurodegenerativ sjukdom som för närvarande är obotlig. ALS påverkar övre och nedre motoriska nervceller som leder till förlust av motorisk samordning, irreversibel förlamning, andningssvikt och eventuell död inom 2-5 år efter diagnos1. ALS är associerad med metaboliska defekter som viktminskning, dyslipidemi och hypermetabolism (ses över i2); det är dock fortfarande oklart hur dessa förändringar i ämnesomsättningen relaterar till motor neuron degeneration. En gemensam nämnare i ALS och relaterade neurodegenerativa sjukdomar är TDP-43, ett nukleinsyrabindande protein som är involverat i flera steg av RNA-bearbetning3,4,5. Även om mutationer i TDP-43 endast påverkar 3%-5% av patienterna, finns wild-typ TDP-43 protein inom cytoplasmiska aggregat i >97% av ALS fall (ses i6). Denna patologi modellerades i Drosophila genom överuttryck av mänsklig vildtyp eller mutant TDP-43 (G298S) i motoriska nervceller, som rekapitulerar flera aspekter av ALS, inklusive cytoplasmiska inneslutningar, lokomotorisk dysfunktion och minskad livslängd7,8. Med hjälp av dessa modeller rapporterades nyligen att TDP-43 proteinopati orsakar en betydande ökning av pyruvatnivåer och phosphofructokinase (PFK) mRNA, det hastighetsbegränsande enzymet av glykolys9. Liknande ökningar i PFK transkript hittades i patientens-härledda motor nervceller och ryggmärg, vilket tyder på att glykolys är uppreglerad i samband med TDP-43 proteinopati. Intressant nog mildrade ytterligare ökning av glykolys med hjälp av kost och genetiska manipuleringar flera ALS-fenotyper såsom lokomotorisk dysfunktion och ökad livslängd i flugmodeller av TDP-43 proteinopati, i överensstämmelse med en kompensatorisk, neuroprotektiv mekanism i degenererande motoriska nervceller.
För att ytterligare undersöka förändringar i glykolys och mäta glukosupptag i Drosophila modeller av TDP-43 proteinopati, uttrycktes en tidigare rapporterad genetiskt kodad FRET-baserade sensor FLII12Pglu-700μδ610 i motor nervceller specifikt med hjälp av UAS-GAL4 uttryckssystemet. FLII12Pglu-700μδ6 glukossensor använder resonansenergiöverföring mellan två varianter av grönt fluorescerande protein, cyan och gula fluorescerande proteiner (CFP och YFP) för att detektera glukos på cellnivå. Den består av en bakteriell glukosbindningsdomän från E. coli MglB-genen smält till CFP och YFP i motsatta ändar av molekylen. När den är bunden till en glukosmolekyl genomgår sensorn en konformationell förändring som för CFP och YFP närmare varandra och tillåter FRET att uppstå, som sedan kan användas för att kvantifiera intracellulära glukosnivåer10,11,12 ( figur1). Här visar vi hur FLII12Pglu-700μδ6-sensorn kan användas för att bestämma förändringar i glukosupptaget som orsakas av TDP-43-proteinopati i motoriska nervceller. Experimenten som beskrivs här visar att överuttryck av en ALS-associerad mutant, TDP-43G298S, i motoriska nervceller orsakar en betydande ökning av glukosupptag jämfört med kontroller. Detta tillvägagångssätt kan användas i andra typer av ALS (t.ex. SOD1, C9orf72, etc.) och/eller andra celltyper (t.ex. glia, muskler) för att bestämma förändringar i glukosupptag i samband med neurodegeneration.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>35 mm tissue culture dishes</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>CLS430165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40X water immersion lens</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>440090</td>
			<td>dippable, N.A. 0.8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dissection scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5618</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100189-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #55 forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100189-244</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minutien pins</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>26002-10</td>
			<td>used for dissections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYLGARD 184 Silicone Elastomer Kit</td>
			<td>Dow</td>
			<td>1317318</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM880 NLO upright multiphoton/confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring glucose uptake in drosophila models of tdp-43 proteinopathy

Amyotrofisk lateral skleros är en neurodegenerativ sjukdom som orsakar progressiva muskel svaghet och död inom 2-5 år efter diagnos. Kliniska manifestationer inkluderar viktminskning, dyslipidemi och hypermetabolism; det är dock fortfarande oklart hur dessa relaterar till motor neuron degeneration. Med hjälp av en Drosophila modell av TDP-43 proteinopati som rekapitulerar flera funktioner i ALS inklusive cytoplasmic införanden, locomotor dysfunktion och minskad livslängd, identifierade vi nyligen omfattande metaboliska underskott. Bland dessa konstaterades glykolys vara uppreglerad och genetiska interaktion experiment gav bevis för en kompensatorisk neuroprotektiv mekanism. Trots uppreglering av phosphofructokinase, den hastighetsbegränsande enzym i glykolys, en ökning av glykolys med hjälp av kost och genetiska manipuleringar visade sig mildra locomotor dysfunktion och ökad livslängd i flug modeller av TDP-43 proteinopati. För att ytterligare undersöka effekten på TDP-43 proteinopati på glykolytiskt flöde i motoriska nervceller, användes en tidigare rapporterad genetiskt kodad, FRET-baserad sensor, FLII12Pglu-700μδ6. Denna sensor består av en bakteriell glukosavkännande domän och cyan och gula fluorescerande proteiner som FRET-paret. Vid glukosbindning genomgår sensorn en konformationsförändring som gör att FRET kan uppstå. Med hjälp av FLII12Pglu-700μδ6 konstaterades glukosupptag ökas avsevärt i motoriska nervceller som uttrycker TDP-43G298S, en ALS orsakar variant. Här visar vi hur man mäter glukosupptag, ex vivo, i larv ventrala nervkabelpreparat som uttrycker glukossensorn FLII12Pglu-700μδ6 i samband med TDP-43-proteinopati. Detta tillvägagångssätt kan användas för att mäta glukosupptag och bedöma glykolytiskt flöde i olika celltyper eller i samband med olika mutationer som orsakar ALS och relaterade neurodegenerativa sjukdomar.

Bildförvärv av glukossensorn i ventralnerven (VNC), ex vivo För att bestämma skillnader i glukosupptag i en Drosophila-modell av ALS baserat på TDP-43 användes en genetiskt kodad FRET-baserad glukossensor. Sensorn bestod av CFP och YFP smälte till glukosbindningsområdet från genen E. coli MglB. Glukosbindning framkallar en konformationell förändring, som kan detekteras genom fluorescensresonansenergiöverföring (FRET) mellan den gemensamma fisk...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Glucose Uptake in Drosophila Models of TDP-43 Proteinopathy at JoVE.com

Measuring Glucose Uptake in Drosophila Models of TDP-43 Proteinopathy

Glukosupptaget ökar i Drosophila motoriska nervceller som påverkas av TAR DNA-bindande protein (TDP-43) proteinopati, vilket indikeras av en FRET-baserad, genetiskt kodad glukossensor.

Mätning av glukosupptag i Drosophila modeller av TDP-43 Proteinopati

Amyotrophic lateral sclerosis is a neurodegenerative disorder causing progressive muscle weakness and death within 2-5 years following diagnosis. Clinical ...

Denna teknik är signifikant eftersom den kan mäta glukosupptag i specifika celler i levande Drosophila vävnader. Den FRET-baserade sensorn ger ett direkt mått på förändringar i intracellulära glukosnivåer. Denna teknik gör det möjligt för forskare att utvärdera förändringar i glukosnivåer i realtid, inom levande motoriska nervceller från ALS-modeller kontra kontroller.En utmanande aspekt är att avbilda samma uppsättning neuroner efter att ha ändrat bufferten. Att lämna provet på mikroskopet hjälper till att säkerställa att VMC rör sig så lite som möjligt. Innan dissekeringarna påbörjas slås de på bildmikroskopet och lasrarna.Samla sedan en vandrande tredje instar larva, skölj den med dubbeldestillerat vatten och placera den i en droppe HL3-buffert på en tidigare förberedd elastomerfodrad maträtt. Därefter under ett dissekerande mikroskop, använd ett par tångar för att fästa larvens främre och bakre ändar, dorsala sidan upp, genom att försiktigt sträcka larven längdmässigt med insektsstift. Använd ett par vinklade Iris saxar, gör ett snitt precis ovanför den bakre stiftet.Gör sedan ett vertikalt snitt från snittet mot larvens främre ände. Efter att ha lagt till några droppar HL3-buffert om det behövs, ta bort luftstrupen och resten av de flytande organen utan att störa centrala nervsystemet. Fäst sedan klaffarna, sträck kroppsväggen för att exponera centrala nervsystemet samtidigt som det neuromuskulära systemet hålls intakt.För bildförvärv, använd upprätt konfokalmikroskop med en 40 gånger vattensänkningslins. Välj sedan 405 nanometerslasern för att excitera den gemensamma fiskeripolitiken. Optimera sedan förvärvsparametrarna som skanningshastighet, medelvärde, mål, zoomhålsstorlek och rumslig upplösning.Justera förstärkningen så att signalen är i det optimala dynamiska området och använd samma parametrar för alla genotyper. För att avbilda motoriska nervceller i ventrala nervsladden, placera silikon skålen med det dissekerade provet under linsen och sänk linsen så att den kommer i kontakt med trehalose sackarose HL3 bufferten. Se till att objektivet är helt nedsänkt i bufferten och lägg till mer buffert vid behov. Nästa.Med hjälp av CFP- och FRET-kanalerna väljer du manuellt ett optiskt urval bestående av minst sex motoriska nervceller i fokus som ligger längs ventrala nervsladden mittlinjen. Skaffa sedan bilder var 10: e sekund i 10 minuter. Dessa bilder representerar baslinjen.För glukosstimulering, ta bort trehalose sackaros som innehåller HL3 buffert med en Pasteur pipette och tillsätt fem millimolar glukos kompletterad HL3 buffert utan att flytta ventrala nerv sladden. Skaffa sedan bilder var 10: e sekund i ytterligare 10 minuter. Dessa bilder representerar stimuleringsfasen.Spara bilderna som CZI-filer eller någon filtyp som stöds av bildbehandlingsprogramvaran med ett filnamn inklusive datum, genetisk bakgrund, experimentellt tillstånd och kanaler som används. Återanvänd parametrarna för att avbilda alla genotyper. För bildbehandling öppnar du Fiji-ImageJ-bildprogrammet, öppnar sedan CZI-filerna, väljer visa stack med hyperstapel och ställer in färgläge på grå skala och väljer delade kanaler i separata fönster. Nästa.Bearbeta bilderna med hjälp av plug-ins för driftkorrigering, turbo reg och stack reg. Varje kanal korrigeras separat genom att välja stack reg under plugin-program och sedan välja omvandling till översättning. Välj manuellt de regioner av intresse eller ROIs genom att spåra alla motoriska nervceller som förblir i fokus under hela tidsserien.Använd sedan ROI-hanteraren för att spara varje motorisk neuronkontur. Använd multimåttsfunktionen för att mäta medelvärdet för grått värde i varje ROI vid varje tidpunkt. Kopiera sedan rois som spåras från den första kanalen till den andra kanalen för förstimuleringsbilden.För dataanalys beräknar du FRET-kvoten efter CFP med hjälp av medelvärdet grå värden för FRET- och CFP-kanalerna. Förändringar i FRET med CFP-förhållanden återspeglar förändringar i den intracellulära glukoskoncentrationen. Rita sedan FRET efter CFP-förhållanden för varje ROI och tidspunkt kontra tid.En genetiskt kodad FRET-baserad glukossensor användes för att mäta glukosupptag i motoriska nervceller. När glukos inte är bundet till sensorn orsakar CFP-excitation endast CFP-utsläpp. Och när glukos binder kan YFP-signalen detekteras på grund av att FRET inträffar mellan CFP och YFP.Här visas bilder av FRET- och CFP-signaler i glukossensorkontroller i TDP-43 mutanta nervceller under baslinje- och stimuleringsförhållanden. En representativ motorisk neuron beskrivs i varje bild som ett exempel på ROI. Vid glukosstimulering, kontrollera motor nervceller uttrycker glukos sensorer, uppvisar en liten ökning av glukosupptag medan nervceller uttrycker TDP-43 visade en betydligt högre glukosupptag.Ytterligare FRET av CFP förhållanden av TDP-43 mutant motor nervceller normaliserades till glukos sensor kontroller vid varje tidpunkt. Under utgångsvärdet fanns det ingen skillnad mellan genotyperna. Vid glukosstimulering observerades dock en snabb och signifikant ökning av glukosupptaget hos TDP-43 mutanter jämfört med kontrollen.I en stapelgraf representation, glukos stimulering i nervceller uttrycker glukossensorn visade en liten men betydande ökning av FRET av CFP förhållandet jämfört med baslinjen. Däremot visade nervceller som uttrycker TDP-43 en signifikant ökning av förhållandet vid stimulering jämfört med baslinjen. Nettoskillnaden i FRET av CFP-förhållanden mellan motoriska nervceller som uttrycker TDP-43 och glukossensor är cirka 10,9%Tidshantering är avgörande för denna procedur så att nervcellerna inte dör under avbildningen.Det är viktigt att bilden omedelbart följer dissekeringar för att undvika detta. Denna teknik belyste vikten av glukos metabolism i nervceller och har lett vår grupp att ytterligare undersöka rollen av glykolys i motor neuron regenerering.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Measuring Glucose Uptake in Drosophila Models of TDP-43 Proteinopathy

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Testmetoder motoriskt, inlärning och minne Brister i Drosophila Modeller för neurodegeneration

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of ...

Measuring Motor Coordination in Mice

Mätning motorisk koordination hos möss

Mice are increasingly being used in behavioral neuroscience, largely replacing rats as the behaviorist's animal of choice. Before aspects of behavior such ...

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Visualisering av proprioceptorer i<em&gt; Drosophila</em&gt; Larver och puppor

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

En billig, skalbar Behavioral analys för att mäta Etanol Sedering Känslighet och Rapid Tolerans hos<em&gt; Drosophila</em

Alcohol use disorder (AUD) is a serious health challenge. Despite a large hereditary component to AUD, few genes have been unambiguously implicated in ...

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Mätning och förändra Mating Drive i Male<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, ...

Measuring Synaptic Vesicle Endocytosis in Cultured Hippocampal Neurons

Mäta synaptiskt vesikelprotein endocytos i odlade nervceller i hippocampus

During endocytosis, fused synaptic vesicles are retrieved at nerve terminals, allowing for vesicle recycling and thus the maintenance of synaptic ...

Assessment of Dopaminergic Homeostasis in Mice by Use of High-performance Liquid Chromatography Analysis and Synaptosomal Dopamine Uptake

Bedömning av dopaminerga homeostas i möss genom användning av högpresterande vätskekromatografi analys och Synaptosomal dopamin upptag

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) ...

Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

Kvantitativa cellbiologi för Neurodegeneration i Drosophila genom förutsättningslös analys av Fluorescently märkta proteiner med hjälp av ImageJ

With the rising prevalence of neurodegenerative diseases, it is increasingly important to understand the underlying pathophysiology that leads to neuronal ...

Alternate Immersion in Glucose to Produce Prolonged Hyperglycemia in Zebrafish

Alternativ nedsänkning i glukos för att producera långvarig hyperglykemi hos zebrafisk

Zebrafish (Danio rerio) are an excellent model to investigate the effects of chronic hyperglycemia, a hallmark of Type II Diabetes Mellitus (T2DM). This ...

Semi-Quantitative Determination of Dopaminergic Neuron Density in the Substantia Nigra of Rodent Models using Automated Image Analysis

Semikvantitativ bestämning av dopaminerg neurontäthet i substantia nigra av gnagaremodeller med hjälp av automatiserad bildanalys

Estimation of the number of dopaminergic neurons in the substantia nigra is a key method in pre-clinical Parkinson's disease research. Currently, unbiased ...