Name: duct: double resin casting followed by micro-computed tomography for 3d liver analysis
Uploaded: 2021-09-28T14:00:00
Duration: 12 min 39 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about DUCT: Double Resin Casting followed by Micro-Computed Tomography for 3D Liver Analysis at JoVE.com

Vi takker Kari Huppert og Stacey Huppert for deres ekspertise og hjælp til galdegang cannulation og deres laboratorie gæstfrihed. Vi takker også Nadja Schultz og Charlotte L. Mattsson for deres hjælp med fælles galdegang cannulation.
Vi takker følgende bevillingsagenturer for deres støtte:
For arbejde i ERA Lab: Karolinska Institutet (2-560/2015-280), Stockholms Läns Landsting (CIMED (2-538/2014-29)), Ragnar Söderbergs stiftelse 20170723 (2019-01350).
For arbejde i JK Lab: Vi anerkender CzechNanoLab Research Infrastructure støttet af MEYS CR (LM2018110). J.K. takket være støtten fra tilskud FSI-S-20-6353.

<ol>
	<li>Narat, J. K., Loef, J. A., Narat, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+preparation+of+multicolored+corrosion+specimens.">On the preparation of multicolored corrosion specimens.</a> The Anatomical Record. 64, 155-160 (1936).</li><li>Ludwig, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+of+the+human+biliary+system+studied+by+quantitative+computer-aided+three-dimensional+imaging+techniques.">Anatomy of the human biliary system studied by quantitative computer-aided three-dimensional imaging techniques.</a> Hepatology. 27, 893-899 (1998).</li><li>Masyuk, T. V., Ritman, E. L., LaRusso, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+the+rat+intrahepatic+biliary+system+by+three-dimensional+reconstruction.">Quantitative assessment of the rat intrahepatic biliary system by three-dimensional reconstruction.</a> American Journal of Pathology. 158, 2079-2088 (2001).</li><li>Masyuk, T. V., Ritman, E. L., LaRusso, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+artery+and+portal+vein+remodeling+in+rat+liver:+Vascular+response+to+selective+cholangiocyte+proliferation.">Hepatic artery and portal vein remodeling in rat liver: Vascular response to selective cholangiocyte proliferation.</a> American Journal of Pathology. 162, 1175-1182 (2003).</li><li>Sparks, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signaling+regulates+formation+of+the+three-dimensional+architecture+of+intrahepatic+bile+ducts+in+mice.">Notch signaling regulates formation of the three-dimensional architecture of intrahepatic bile ducts in mice.</a> Hepatology. 51, 1391-1400 (2010).</li><li>Cuervo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+notch+signaling+is+essential+to+prevent+hepatic+vascular+malformations+in+mice.">Endothelial notch signaling is essential to prevent hepatic vascular malformations in mice.</a> Hepatology. 64, 1302-1316 (2016).</li><li>Thakurdas, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Jagged1+heterozygosity+in+mice+results+in+a+congenital+cholangiopathy+which+is+reversed+by+concomitant+deletion+of+one+copy+of+Poglut1+(Rumi).">Jagged1 heterozygosity in mice results in a congenital cholangiopathy which is reversed by concomitant deletion of one copy of Poglut1 (Rumi).</a> Hepatology. 63, 550-565 (2016).</li><li>Walter, T. J., Sparks, E. E., Huppert, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3-Dimensional+resin+casting+and+imaging+of+mouse+portal+vein+or+intrahepatic+bile+duct+system.">3-Dimensional resin casting and imaging of mouse portal vein or intrahepatic bile duct system.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (68), e4272 (2012).</li><li>Hankeova, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DUCT+reveals+architectural+mechanisms+contributing+to+bile+duct+recovery+in+a+mouse+model+for+Alagille+syndrome.">DUCT reveals architectural mechanisms contributing to bile duct recovery in a mouse model for Alagille syndrome.</a> Elife. 1, 1-29 (2021).</li><li>Andersson, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+Alagille+syndrome+and+mechanisms+of+Jagged1+missense+mutations.">Mouse model of Alagille syndrome and mechanisms of Jagged1 missense mutations.</a> Gastroenterology. 154, 1080-1095 (2018).</li><li>Tanimizu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrahepatic+bile+ducts+are+developed+through+formation+of+homogeneous+continuous+luminal+network+and+its+dynamic+rearrangement+in+mice.">Intrahepatic bile ducts are developed through formation of homogeneous continuous luminal network and its dynamic rearrangement in mice.</a> Hepatology. 64, 175-188 (2016).</li><li>Ober, E. A., Lemaigre, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+liver:+Insights+into+organ+and+tissue+morphogenesis.">Development of the liver: Insights into organ and tissue morphogenesis.</a> Journal of Hepatology. 68, 1049-1062 (2018).</li></ol>

Et separat projekt i ERA laboratoriet er finansieret af ModeRNA. ModeRNA havde ingen rolle i det projekt/protokol, der er beskrevet her.

Flere kritiske trin bestemmer DUCT-succesen, fra prøveforberedelse til parametrene for CT-enheden. For at opnå de bedste resultater skal godt kontrasteret, godt injiceret og boblefri harpiks bruges til at tillade enkel digital behandling med automatiseret tærskel for at opnå 3D-data, billeder og film. Med træning og efter denne protokol er 90% af injektionerne vellykkede og resulterer i reproducerbare data. Det er vigtigt at bruge frisk gul harpiks for at opnå den bedste kontrast mellem de to injicerede systemer. Den gule harpiks har en meget stærk radiopacitet, mens den blå harpiks har målbart radiopacitet. Topresultater opnås inden for de første tre måneder efter åbningen af en ny gul harpiksflaske. Med tiden, harpiks bundfald, og efter længere opbevaring (>6 måneder), vil de gule og de grønne harpikser ikke længere kunne skelnes i CT-scanninger. Billeder med dårlig kontrast kræver omfattende og tidskrævende manuel sporing og segmentering af de to systemer. Dernæst er velspændt slanger uundværlig for at passe ind i den fælles galdegang af voksne mus og fælles galdegang og portalåre af postnatale mus. Indgangspunktet for injektionen skal oprettes med omhu. Hvis den fælles galdegang skæres åben på transversalt, det er sandsynligt, at løsrive sig fra det omgivende væv, forhindrer en vellykket indtræden af slangen. Dette trin er især delikat for postnatal mus, hvor den fælles galdegang trækker sig tilbage og "krøller op", hvis den har løsrevet sig fra det omgivende væv, hvilket gør indsættelsen af slangen ekstremt udfordrende. Den fælles galdegang indrejse og injektion kan kræve en vis praksis. Mens du forbereder slangen med harpiks og under hele injektionen, undgå bobledannelse, da bobler vil skabe negativ plads i CT-billederne og kræve tidskrævende manuel korrektion. Det er vigtigt at forsigtigt massere leveren ved at rulle over overfladen med en fugtet vatpind under og efter injektionsproceduren, da dette letter selv harpiksspredning. Efter afslutningen af injektion og fjernelse af slangen skal silke suturknuden strammes hurtigt og omhyggeligt, så harpiksen ikke strømmer ud af leveren, før den polymeriserer helt. For vellykket microCT-billeddannelse skal prøven være korrekt fastgjort på plads med agarose og termisk tilpasset for at eliminere bevægelsesartefakter i CT-dataene. Anskaffelsesindstillingerne er også af afgørende betydning, som bør optimeres for at nå frem til en passende rumlig opløsning til at løse fine strukturer.
Der kan foretages tekniske ændringer af injektionsproceduren for at opnå injektion hos yngre mus. I øjeblikket harpiks støbning af yngre muselever er begrænset af tilgængeligheden af tilstrækkeligt tynde slanger, med PE10 er den mindste kommercielt tilgængelige slanger. Tanimizu et al. med succes injiceres kulstof blæk i embryonale dag 17 (E17) fælles galdegang ved hjælp af glas kapillærer11. Fremtidige test af, om harpiks kan leveres via glas kapillær ville derfor være af interesse. DUCT blev yderligere tilpasset til at injicere andre rørformede systemer såsom luftvejene og lungepulsåren vaskulat af lungerne9. Den dobbelte harpiks injektion kunne også ændres til at blive brugt sammen med andre kommercielt tilgængelige harpikser, eller denne protokol kan bruges til injektioner med kulstof blæk.
En af de vigtigste begrænsende faktorer i DUCT-rørledningen er harpiksviskositeten. DUCT kan kun bruges til harpiksstøbning af rørformede strukturer over en diameter på 5 μm. I dette datasæt kan harpiksen trænge ind i rør med den mindste diameter på 5 μm9. Denne størrelsesbegrænsning udelukker analyse af fine duktuer og små kapillærer. For yderligere at fremme DUCT-rørledningen til mindre kaliberbeholdere bør andre kommercielt tilgængelige harpikser testes, eller udviklingen af nye radiopaquemidler med lav viskositet kan forbedre lumenindtrængningen.
I Hankeova et al.9 blev DUCT sammenlignet med to andre almindeligt anvendte teknikker, dobbelt carbon blæk injektioner efterfulgt af væv clearing og standard fotografering, og iDISCO + med farvning af blodkarrene med alfa-glat muskel celle actin og galde kanaler med cytokeratin 7, efterfulgt af 3D-billeddannelse9. DUCT udkonkurrerede de to andre metoder med hensyn til dobbelt analyse (hvilket var udfordrende for iDISCO+ på grund af høj lever autofluorescence), 3D-billeddannelse og kvantificering (ikke mulig med kulstofblækindsprøjtning) og lumenisering (DUCT leverer data for den interne lumenarkitektur og systemperfusion). Som nævnt ovenfor er den primære begrænsning af DUCT den mindste lumenstørrelse, der kan injiceres og analyseres (5 μm grænse), en parameter, hvor både kulstofblækindsprøjtning og iDISCO+ klarede sig bedre. DUCT er overlegen i forhold til enkelt system harpiks støbning3,5,6 fordi det giver mulighed for analyse af hver injiceret system separat og letter også dobbelt 3D undersøgelse for at studere det arkitektoniske forhold mellem de to systemer.
DUCT kan anvendes til at studere to rørformede netværk i 3D. Som bevis på princippet, DUCT blev brugt til at visualisere leveren galde og portal vene systemer og lungearterie vaskulatur og luftveje i lung9. De intrahepatiske galdegange udvikler sig ved siden af portalvenen, og portalvenen giver en strukturel skabelon og signalcenter, der regulerer væksten og differentieringen af galdetræet12. I Hankeova et al.9 udforskede DUCT galde regenerering i en musemodel for den menneskelige pædiatriske sygdom Alagille syndrom. DUCT afslørede tidligere urapporterede arkitektoniske mekanismer, som galdesystemet brugte til at opnå en vild typelignende volumen9. Alagille syndrom mus udnyttet to forskellige strategier: (1) i hilar og centrale regioner af leveren, galdesystemet øget sin forgrening, og (2) i leveren periferien, de novo-genererede galdegange var meget tortuous. Disse to faktorer kombineret til at give en næsten normal galde system volumen, på trods af den unormale arkitektur. Desuden, DUCT opdaget unormal galdegang forgrening, der opstod uafhængigt af portal vene forgrening og galdegange danner forbinder broer mellem to portal vener9. Disse fænotyper ville være umuligt at opdage i enkelt harpiks støbning og kunne fejlfortolkes i 2D histologiske sektioner som galdegang spredning. DUCT leverer således data, der beskriver 3D-arkitekturen i to rørformede netværk på hele organ- eller lobeniveau med mulighed for kvalitativ og dybdegående kvantitativ analyse. DUCT kunne være en ny standard for postnatal leverudvikling og leverregenereringsanalyser i forskellige dyremodeller.

Organharpiksstøbning er en teknik, der går tilbage til det 17. århundrede1. Et af de første eksempler på moderne harpiksstøbning blev udført på den menneskelige lever fra en obduktion. Intrahepatiske galdegange blev fyldt med et kontrastmiddel blandet med gelatine, efterfulgt af billeddannelse med en røntgen CT-scanning2. Formålet med DUCT teknikken er at visualisere, digitalisere og analysere to rørformede harpiksstøbte netværk, i tandem, i 3D.
DUCT er baseret på den omfattende eksisterende viden om enkeltsystem leverharpiks støbning3,4,5,6,7,8 og strækker sig til samtidig 3D visualisering og analyse af to systemer9. DUCT avanceret enkelt harpiks støbning til dobbelt harpiks støbning ved at blande to radiopaque harpikser af forskellig kontrast og injicere disse harpikser i to forskellige netværk, specielt den fælles galdegang og portal vene. DUCT kan anvendes på unge postnatale mus med reproducerbare resultater så tidligt som efternatal dag 15 (P15). Sammenlignet med mikroskopi-baserede billeddannelse teknikker, den største fordel er, at DUCT er hurtigere, antistof-fri, og levervæv autofluorescence ikke forstyrrer billeddannelse. Desuden indeholder DUCT kvantitative data, der beskriver lumeniseringsstatus, intern diameter, netværksforbindelse og perfusion. At skelne mellem tilstedeværelsen af lumendannende celler og deres de facto morfogenese i rør er afgørende for at analysere organer, hvor duklære celler er til stede, men ikke danner rør, som det kan være tilfældet i Alagille syndrom10. Den største ulempe ved DUCT er den begrænsede penetration af harpiksen, som er tyktflydende og ikke kommer ind i rør med en lille kaliber (<5 μm). DUCT kan anvendes til enhver rørformet struktur efter bestemmelse af injektion indgangspunktet, såsom arteriel og venøse kredsløbssystemer, luftveje, den ekstrahepatiske galdegang, eller lymfekar. Det kunne således lette hele organ arkitektur analyse af andre væv såsom lunger og bugspytkirtel.
MicroCT-segmenterede billeder kan behandles ved hjælp af kommercielt tilgængelig billedbehandlingssoftware, f.eks. Den harpiks-injicerede lever kan analyseres kvalitativt for netværksudvidelse og tilslutningsmuligheder eller kvantitativt for volumen, længde, forgrening, tortuositet af et enkelt system, og samspillet mellem to systemer såsom afstanden mellem to systemer, eller branchpoint afhængighed (gør system 1 filial i nærheden af system 2 forgrening?). DUCT-rørledningen, der omfatter harpiksindsprøjtning, microCT-scanning og CT-datasegmentering kombineret med detaljeret kvantitativ analyse af arkitektoniske mekanismer i to rørformede systemer, kunne give en standard for hele leveranalyse i dyremodeller.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL SafeSeal micro tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72.706</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 G butterfly needle with tubing</td>
			<td>BD bioscience</td>
			<td>367283</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G needle</td>
			<td>BD bioscience</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G needle</td>
			<td>BD bioscience</td>
			<td>305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Top-Bio</td>
			<td>P045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzyl alcohol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>108006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzyl benzoate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B6630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 50 mL tubes</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>CLS430829-500EA</td>
			<td>polypropylene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Medicarier</td>
			<td>60406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection Microscope</td>
			<td>Leica Camera AG</td>
			<td></td>
			<td>Leica M60</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70%</td>
			<td>VWR</td>
			<td>83801.41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon tube 15 mL</td>
			<td>Verkon</td>
			<td>331.850.084.006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11051-10</td>
			<td>Fine Graefe 10 cm curved</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps straight</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11050-10</td>
			<td>Fine Graefe 10 cm straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F8775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GE Phoenix v|tome|x L 240</td>
			<td>Waygate Technologoies</td>
			<td></td>
			<td>micro computed tomography scanner</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#39; Balanced Salt Solution</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14025092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Leo Pharma</td>
			<td>B01AB01</td>
			<td>5000 IE/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolfurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>FDG9623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11413413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MICROFIL</td>
			<td>Flowtech</td>
			<td>MV-122</td>
			<td>synthetic resin yellow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MICROFIL</td>
			<td>Flowtech</td>
			<td>MV-120</td>
			<td>synthetic resin blue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MICROFIL</td>
			<td>Flowtech</td>
			<td>MV-diluent</td>
			<td>clear resin diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette</td>
			<td>Verkon</td>
			<td>130.690.424.503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic pump</td>
			<td>AgnThos</td>
			<td>010.6131.M20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phoenix datos|x 2.0 software</td>
			<td>Baker Hughes</td>
			<td></td>
			<td>CT data reconstruction software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rocker</td>
			<td>VWR</td>
			<td>444-0142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk suture</td>
			<td>AgnThos</td>
			<td>14757</td>
			<td>Black silk, 4-0, sterile, 100 m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin scissor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-09</td>
			<td>Iris straight tip 9 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring scissor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-03</td>
			<td>Vannas micro, straight tip 2 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1 mL Luer</td>
			<td>BD bioscience</td>
			<td>303172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing PE10</td>
			<td>BD bioscience</td>
			<td>427401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing PE50</td>
			<td>BD bioscience</td>
			<td>427411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VG Studio MAX 3.3 software</td>
			<td>Volume Graphics GmbH</td>
			<td></td>
			<td>CT data processing and analysis software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

duct: double resin casting followed by micro-computed tomography for 3d liver analysis

Leveren er det største indre organ hos mennesker og mus, og høj auto-fluorescens udgør en betydelig udfordring for vurderingen af den tredimensionelle (3D) arkitektur af orgelet på hele organniveau. Leverarkitektur er kendetegnet ved flere forgrenede lumeniserede strukturer, som kan fyldes med harpiks, herunder vaskulære og galdetræer, hvilket etablerer et meget stereotyp mønster i det ellers hepatocytrige parenkym. Denne protokol beskriver rørledningen til udførelse af dobbelt harpiksstøbning mikro-computertomografi, eller "DUCT". DUCT indebærer indsprøjtning portalvene og fælles galdegang med to forskellige radiopaque syntetiske harpikser, efterfulgt af vævsfiksering. Kvalitetskontrol ved at rydde en lap, eller hele leveren, med en optisk clearing agent, giver mulighed for pre-screening af passende injicerede prøver. I den anden del af DUCT-rørledningen kan en lap eller hele leveren bruges til mikro-computertomografi (microCT) scanning, (semi-)automatiseret segmentering og 3D-gengivelse af portalen venøse og galdenetværk. MicroCT resulterer i 3D-koordinatdata for de to harpikser, der giver mulighed for kvalitativ såvel som kvantitativ analyse af de to systemer og deres rumlige forhold. DUCT kan anvendes på postnatal og voksen muselever og kan yderligere udvides til andre rørformede netværk, for eksempel vaskulære netværk og luftveje i lungerne.

Hvad skal man gøre Vellykket dobbelt harpiks injektion opnås, når både de intrahepatiske galdegange og portal vene vaskulatur er godt fyldt. Som et kvalitetskontroltrin giver rydning af en lap (for eksempel den venstre laterale lap) mulighed for verifikation af en vellykket injektion efterfulgt af billeddannelse af lapper af interesse. Den optisk ryddede lap kan scannes senere ved hjælp af microCT; derfor er det muligt at optisk rydde hele leveren. I velinsprøjtet muselever skal portalvene vasulatur fyldes med harpiks, indtil leveroverkanten og harpiksen skal være synlig i sidegrene (figur 4), og denne arkitektur er trofast rekapituleret i microCT-scannede og segmenterede data. Endvidere bør velinstrumlede intrahepatiske galdekanaler være synlige ved siden af hovedportalåregrenene, der strækker sig næsten til periferien, og harpiks skal være synlig i de store sidegrene. Hvis kontrollapet passerer kvalitetskontroltrinnet, kan de interessante lapper (inkluderet den optisk ryddede) scannes med microCT. Resultatet af de segmenterede data fra en godt injiceret lever vises for en P15-mus (Figur 4A, B) og en voksen mus (Figur 4C, D).
Hvad man ikke skal gøre Intakt levervæv er en forudsætning for en vellykket injektion. Vær ekstra forsigtig, når du skærer bughulen og membranen ikke at uheld nick levervævet. Hvis der er fysisk skade på leveren under denne procedure, harpiksen er meget sandsynligt, at lække ud under portal vene injektion (Figur 5A). Det er ikke muligt at opnå en god injektion af det vaskulære system, hvis leveren er fysisk beskadiget.
En af de almindelige fejl er underfyldning leveren med harpiks, der kan føre til udfordringer for visualisering eller analyse. En af årsagerne til systemets underfyldning er harpikshærdning for tidligt i nålen eller spidsen af slangen, før injektionen er afsluttet (Figur 5B, blå pilespidser, beslag skildrer store bobler). En god praksis er at bruge et injektionssæt pr. dyr og arbejde hurtigt, efter at hærdemidlet er tilsat harpiksen. Hvis harpiksen hærder under injektionen (som kan observeres af et halvt fyldt system, her eksemplificeret med en halvfyldt portal vene vaskulatur) fjerne slangen, skære spidsen af slangen (altid diagonalt for at skabe en skrå spids), og skubbe stemplet. Hvis harpiks begynder at dryppe igen, skal slangen forsigtigt indsættes igen og fastgøres med suturen. Hvis harpiksen er hærdet i nålen, skal du udskifte slangen helt, fylde den med harpiks (undgå bobler), forsigtigt indsætte slangen igen og fastgør den med suturen. Det kan være udfordrende at erstatte slangen, især hos unge postnatale mus <P30, da vævet er mere skrøbeligt. En anden årsag til dårlig harpiksfyldning af portalvene vaskulatur kan være utilstrækkelig transcardial perfusion (Figur 5C, blå pilespidser betegner blod synlige i terminalgrene). Dette kan observeres, når spidsen af fartøjerne er fyldt med blod i stedet for harpiks. For at undgå dette skal du sikre dig, at portalvenen (uden for leveren) ikke indeholder blod før injektionen. Den tredje årsag til underfyldt lever er, når slangen er indsat for dybt ind i leveren og kommer ind i en gren mod en af lapperne. For at forhindre dette skal slangen indsættes mindst 0,5 cm fra indgangen til leveren.
Omvendt bliver et eller begge af systemerne overfyldt med harpiks (figur 5D). Det er nødvendigt at visuelt overvåge leveren under hele injektionen. Galde system støbning med harpiks er mere udfordrende end portal vene harpiks støbning, da harpiksfyldte kanaler er kun svagt synlige på leverens overflade, og det er svært at vurdere, hvornår systemet er næsten fuld, og hvornår man skal stoppe. Når små gule harpiks prikker vises på leveren overflade (Figur 2Ci, blå pilespids), dette er et tegn på, at galdesystemet er helt fyldt, og harpiksen er begyndt at lække ud af kanalerne. Mindre harpikslækage kan korrigeres manuelt under segmentering af microCT-data (Figur 5D, højre paneler).
Hvis injektionstrykket er for højt, kan det medføre brud på fartøjer eller kanaler (figur 5E), uigenkaldeligt beskadigende kar- eller kanalarkitektur. Leveren vil ikke være egnet til microCT scanning eller analyse. For at undgå harpiks overfyldning, optimere den rigtige volumen og tryk, der anvendes til injektion i hver musemodel. Når du arbejder med mus, der er blevet udfordret med en giftig kost, genetisk modifikation, eller leverskade, der påvirker galde eller venøse systemer, eller lever stivhed, injektionstrykket og volumen kan være nødvendigt at justere som volumen og tryk tolereret kan være forskellig fra den vilde type mus. Denne protokol beskriver den manuelle injektion af de to systemer, men det er muligt at tilslutte sprøjten til en pumpe for at standardisere injektionstrykket. Bobler er en anden meget almindelig injektion artefakt, der fører til sparsom påfyldning af de rørformede netværk (Figur 5F-H, blå pilespidser). For at undgå bobledannelse skal du sørge for, at sprøjten og slangen ikke indeholder bobler, er helt fyldt med harpiks, og harpiksen drypper fra spidsen af slangen før injektion. Små bobler, der vises som negative områder på microCT-dataene, kan korrigeres manuelt under efterbehandlingstrin, selvom dette er besværligt.
Frisk er den bedste Brug af frisk gul harpiks er en afgørende faktor, der i væsentlig grad påvirker kontrasten mellem de to harpikser og microCT data segmentering. Når den nyåbnede harpiks anvendes (figur 6A), er der en klar forskel i modsætning mellem de gule harpiksindsprøjtede galdekanaler (lysehvide) og de grønne harpiksindsprøjtede portalårer (lysegrå). Lever, der injiceres med frisk harpiks, behandles let ved hjælp af automatiseret global fortærsering. Med langvarig opbevaring bunder harpiksen ud, og kontrasten mindskes. Efter 3 måneders opbevaring kan kontrasten stadig være tilstrækkelig til at skelne portalvenen fra galdegangen (figur 6B), men nedbør påvirker blandingen af de to harpikser, som er synlig som en heterogen uigennemsigtighed i den fyldte portalåre (Fig. 6B, blå pilespidser). Heterogen kontrast påvirker den automatiserede tærskel negativt og kræver manuelle rettelser, hvilket øger behandlingstiden. Hvis harpiksen er ældre end seks måneder, er kontrasten forringet til et punkt, hvor det ikke er muligt at skelne den gulsprøjtede galdegang fra den grønsprøjtede portalåre alene baseret på deres kontrast (figur 6C). I dette tilfælde skal galdegangen og portalvenen segmenteres manuelt baseret på deres diameter og position i hilar-regionen og følges manuelt i hele microCT-dataene. Denne procedure er ekstremt tidskrævende og bedst undgås.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62941/62941fig01.jpg"> Figur 1: Injektionssæt til harpiksstøbning. (A) Injektion sæt # 1 består af en 30 G nål og PE10 slanger, der er ~ 30 cm lang. Injektion sæt # 2 består af en 23 G nål og PE50 slanger ~ 30 cm lang. (B) Spidsen af slangen strækkes og skæres i en vinkel for at skabe en skrå spids. Linealen i A og B er en centimeter lineal med større trin på 1 cm, mellemliggende trin på 5 mm og mindre trin på 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62941/62941fig01large.jpg" target="_blank">Klik her for at se en større version af dette tal.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62941/62941fig02.jpg"> Figur 2: Dobbelt harpiksstøbningsplan. (A) Skematisk, der viser det mørke venøse kredsløb og hjertet med fremhævet højre atrium, som skal skæres væk før perfusion, og den venstre ventrikel, hvori nålen skal indsættes for perfusion for at vaske blodet væk fra kredsløbssystemet. Den ringere vena cava bør afskåret under nyrerne for at lindre vaskulært tryk. (B) Galdegang harpiks injektionsdiagram. (i) Zoom billede af (A) skildrer, hvor at afskære IVC. (ii) Billede, der viser den almindelige galdegang (gul prikket linje) fra leverfælveområdet til lukkemusklen Oddis (sorte pilespidser) med suturtråd under den ryddede fælles galdegang. iii) Passende position til løs overhåndsknude omkring fælles galdegang. iv) Den gule stiplede linje og de sorte pilespidser angiver Oddis lukkemuskel, der viser den skrå vinkel for snit, og hvordan åbningen skal se ud efter det skrå vinkel snit. v) Skematisk, der viser pe10-slangens facetåbningsretning (opad) ved indsættelsen. — gul harpiks, der tilføres; harpiks skal nemt passere løst bundet knude. IVC, ringere vena cava; CBD, almindelig galdegang. (C) Portal vene harpiks injektionsdiagram. i) Den grønne stiplede linje markerer portalåren fra hilar-regionen. De blå pilespidser mærker det overfyldte galdesystem. (ii) Passende sted for løs overhånd knude omkring portalen vene. iii) Skematisk, der demonstrerer facetåbningen (opad) ved indsættelsen. iv) Udseende af lever ved injektion af grøn harpiks og gul harpiks det harpiksfyldte blodkar i leverens periferi. Pv, portalåre. Figur 2A blev oprettet med Biorender.com. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62941/62941fig02large.jpg" target="_blank">Klik her for at se en større version af dette tal.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62941/62941fig03.jpg"> Figur 3: Mikro CT databehandling i volumengrafiksoftware. (A) Overfladebestemmelse, (i) overvurderet isoværdi (aktuel forhåndsvisning af udvælgelse er vist i gul farve), (ii) undervurderet isoværdi, (iii) optimalt valg af isoværdi for korrekt overfladebestemmelse af portalvene og galdekanaler. (B) Opdeling område af interesse (ROI) skabt af overfladebestemmelse, (i) indstille værdien i dialogvinduet højt nok, at kun ét segment (den største) vil forblive, (ii) i gule rammer de mindre (udelukkede) partikler er vist. (C) Overfladeudjævning af dataene, (i) udjævningsfunktionen er på venstre panel, (ii) indstil udjævningsstyrken til 1 (maks. 2) og skaber nye udjævnede INVESTERINGSAFKAST, (iii) udjævnede data. (D) Adskillelse af de enkelte rørformede systemer, i) i overfladebestemmelsesfunktionen angiver isoværdien, således at kun galdesystemet er inkluderet i udvælgelsen (aktuel forhåndsvisning af udvælgelse er vist i gul farve), ii) markere roi af begge systemer og ROI af kun galdesystemet og trække galdesystemet ROI fra ROI af begge systemer, iii) Portalåre vist med grå, galdesystemet vist med grønt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62941/62941fig03large.jpg" target="_blank">Klik her for at se en større version af dette tal.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62941/62941fig04.jpg"> Figur 4: Velinst injicerede galdegang (BD) og portal vene (PV) systemer. (A) Optisk ryddet højre mediale lap (RML) af postnatal dag 15 (P15) lever injiceret med to harpikser i de to systemer. Skalastang 1 mm. (B) 3D-gengivelse af P15 RML vist i (A) skildrer portal vene vaskulatur i hvidt og galdesystem i grønt. Skalastang 1 mm. (C) Optisk ryddet RML af voksen lever injiceret med to harpikser i de to systemer. Skalastang 1 mm. (D) 3D-gengivelse af voksen RML vist i (C) skildrer portal vene vaskulatur i hvid og galde system i grøn. H = hilar, P = perifer. Skalastang 1 mm. Paneler A, B, D tilpasses med tilladelse fra Hankeova et al.9. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62941/62941fig04large.jpg" target="_blank">Klik her for at se en større version af dette tal.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62941/62941fig05.jpg"> Figur 5: Almindelige udfordringer ved dobbeltharpiks lever injektioner. (A) Billedet skildrer en lever, der ved et uheld blev hugget under den første åbning af bughulen, og harpiksen lækker gennem snittet (blå pilespids). (B) Dårligt injiceret portal vene system på grund af harpiks hærdning. Blå pilespidser mærker tomme terminalgrene, og røde beslag mærker store bobler. Skalastang 1 mm. (C) Dårligt injiceret portalvenesystem på grund af dårlig transcardial perfusion. Blå pilespidser mærker blod synligt i terminalgrenene. Skalastang 1 mm. (D) Overfyldt galdesystem manifesteret af isolerede kugler af harpiks. De venstre paneler viser den optisk ryddede lever, og de rigtige paneler viser 3D microCT gengivet billede. De blå stiplede konturer viser zoom-in-områder. De sorte pilespidser mærker en del af leveren, der blev beskadiget under den optiske clearing efter microCT-scanning. Skalastang 1 mm. (E) Højt tryk under harpiksindsprøjtning kan forårsage brud på portalvenen (dyret i dette panel bærer en Jag1H268Q-mutation), præget af blå pilespidser. Skalastang 1 mm. (F) Bobler i harpiksen under portalåreindsprøjtning (blå pilespidser) og (G) galdesystemindsprøjtning (blå pilespids), skalastang 1 mm. (H) MicroCT-scanning af bobler (blå pilespids), dårligt fyldte terminalgrene (røde beslag) og harpikslækage (gul pilespids), skalastang 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62941/62941fig05large.jpg" target="_blank">Klik her for at se en større version af figuren.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62941/62941fig06.jpg"> Figur 6: Differentialharpiks kontrast. (A) Friskåbnet gul harpiks genererer tilstrækkelig kontrast til at skelne harpiks injiceret portal vene (grå) og galdegange (hvid). B) Tre måneders opbevaring af gul harpiks fører til udfældning af harpiksen, hvilket resulterer i heterogen uigennemsigtighed (gråhvid portalvene, blå pilespids). (C) Langvarig opbevaring (>6 måneder) af gul harpiks mindsker kontrasten mellem portalvenen (grå) og galdegangene (grå). Skalalinje 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62941/62941fig06large.jpg" target="_blank">Klik her for at se en større version af dette tal.</a>

Watch this Scientific Journal Video about DUCT: Double Resin Casting followed by Micro-Computed Tomography for 3D Liver Analysis at JoVE.com

DUCT: Double Resin Casting followed by Micro-Computed Tomography for 3D Liver Analysis

Dobbelt harpiksstøbning mikro-computertomografi, eller DUCT, muliggør visualisering, digitalisering og segmentering af to rørformede systemer samtidigt for at lette 3D-analyse af orgel arkitektur. DUCT kombinerer ex vivo injektion af to radiopaque harpikser efterfulgt af mikro-computertomografi scanning og segmentering af tomografi data.

DUCT: Dobbelt harpiksstøbning efterfulgt af mikro-computertomografi til 3D-leveranalyse

The liver is the biggest internal organ in humans and mice, and high auto-fluorescence presents a significant challenge for assessing the ...

Denne metode giver os mulighed for at analysere, visualisere og kvantificere lever vaskulære og galdekødssystemer arkitektur i 3D. Vi kan nu bedre forstå de rumlige aspekter af leversygdom og regenerering. Den største fordel ved denne teknik er, at den ikke er afhængig af eksistensen af antistoffer eller fluorescensbilleddannelse.Det giver også mulighed for direkte visualisering af, hvilke netværk der er korrekt lumenized. Denne metode er velegnet til analyse af rørformede systemer, derfor forskning af blodkar, galdegange, og luftveje er ideelle områder. Vi brugte DUCT til at forstå de strukturelle ændringer i forbindelse med galde regenerering.Før injektion harpiks i galde system af musen, begynde at flytte tarmen og bugspytkirtlen til venstre side af musen, ved hjælp af en vatpind fugtet med PBS at udsætte den fælles galdegang og portal vene. Lav derefter et lille tværgående snit i den ringere vena cava. Vend den ventrale side af leveren mod hjertet for at eksponere visceral overflade og hilar-regionen, og find den fælles galdegang, der løber fra hilar-regionen over bugspytkirtlen og ind i tarmen ved lukkemusklen i Oddi.Brug de lige sammentrak til at rydde det omgivende vævsområde på ca. fem millimeter fra den fælles galdegang. Derefter, ved at placere en silke sutur tråd under den fælles galdegang, binde en løs overhånd knude omkring den fælles galdegang. Hold fjedersaksen flad mod den fælles galdegang for at lave et skråt snit til den fælles galdegang på det sted, hvor den fælles galdegang kommer ind i bugspytkirtlen og tarmen ved siden af lukkemusklen i Oddi.Derefter blandes en milliliter af den gule harpiks med 50 mikroliter af MV hærdningsmiddel, og fylde en en milliliter luer sprøjte med harpiks hærdningsmiddel blanding. Tilslut den fyldte sprøjte med slangesættet en, og tryk stemplet for at fylde slangen, indtil harpikshærdende agentblandingen drypper fra spidsen af slangen. Brug de sammenkrumper til at rette området omkring den fælles galdegang snit.Før du indsætter slangen i åbningen i den fælles galdegang med den længste kant af den skrå spids nedad mod galdegangens dorsale side. Stram derefter silketrådsknuden for at fastgøre slangen inde i den fælles galdegang. Efter injektion af harpiksen i den fælles galdegang, observere galdeblæren og de enkelte leverlapper.Massér leveren med en PBS-fugtet vatpind for at hjælpe med at sprede harpiksen ligeligt. Harpiksfyldte galdegange terminalgrene vil være svagt synlige på leveroverfladen. Stop injektion af harpiksen, når prikker af harpiks vises på overfladen af leveren, eller når modstanden er opfyldt.Fjern derefter slangen ved at trække ud af den fælles galdegang og stram hurtigt silkeknuden ved hjælp af sammenkne for at forhindre harpiksen i at lække ud. Skær de løse ender af silke suturen, så de ikke forstyrrer portalen vene injektion. Før injektion af harpiksen i portalvenen, skal du fjerne portalvenen fra det omgivende væv omkring to centimeter fra dens indtræden i leveren ved hjælp af lige sammentrækninger.Placer derefter silke suturtråden under portalårens ryddede område for at binde en løs overhåndsknude. I portalen vene distal til leveren, lav en langsgående snit før binde knude. Derefter forberede den grønne harpiks hærdningsmiddel blanding i sprøjten og fylde slangen med blandingen som påvist tidligere.Brug vetskerne til at rette portalvenen ved at trække det omgivende væv mod bagsiden, før slangen indsættes med den længste kant af den skrå spids mod beholderens rygside. Stram silketråden for at fastgøre slangen i portalvenen. Efter injektion af harpiksen i portalvenen, observere blodkarrene fylde op med harpiks, og massere leveren med en PBS-fugtet vatpind for at hjælpe med at sprede harpiks.Når alle blodkar er fyldt, trække slangen ud af portalen venen, og hurtigt stramme silke knude ved hjælp af piletræ for at forhindre harpiksen i at lække ud. For mikro-computertomografi eller MicroCT scanning af dissekeret lever fra musen, placere den rigtige mediale lever lap i en 15 milliliter konisk rør, og fylde røret med 1% agarose gel til ca. to tredjedele af den samlede mængde af røret for at minimere uønsket prøve bevægelse under MicroCT måling. Monter det 15 milliliteriske koniske rør med prøven på rotationsstadiet på en CT-enhed.Lad røret tilpasse sig målekammeret i mindst en time. Når prøven er termisk tilpasset, centrere den i synsfeltet eller FOV, derefter optimere kildeprøven og prøvedetektorafstandene eller SSD og SDD for at nå tilstrækkelig voxelopløsning. Når parametrene er indstillet, skal du starte en CT-måling.Brug dedikeret tomografisk rekonstruktionssoftware til at rekonstruere CT-dataene. Hvis du vil analysere CT-dataene, skal du indlæse filerne ved at vælge fil, import og kommando. Brug funktionen overfladebestemmelse på det øverste panel til at segmentere harpiksen i dataene ved hjælp af global tærskeling.I dialogvinduet bestemmes tærskelværdien med histogrammeevalueringen ved at indstille placeringen af den røde isoværdilinje til kun at segmentere de harpiksfyldte fartøjer. I venstre panel skal du vælge modulet oprette ROI fra volumen eller CAD eller mesh for at skabe et område af interesse eller ROI af de harpiksfyldte fartøjer. Brug indstillingen Opret ROI'er fra fast til at vælge og bekræfte navnet på den behandlede diskenhed i dialogvinduet.Eliminer fejlagtig segmentering af støjklynger i baggrundsområdet for dette investeringsafkast. Markér investeringsafkast på højre panel ved at højreklikke og vælge modulet split ROI. I dialogvinduet skal du indstille voxelparameteren for minimumsvolumen for at udelukke alle støjpartiklerne.Parameterværdien er eksperiment- og dataafhængig og optimeret for hvert eksempel, der skal analyseres. På venstre panel bruge udjævning modul til at skabe glatte, kontinuerlige og faste kanal masker uden artefakter, ligesom tilstedeværelsen af luftbobler eller harpiks lækage i harpiks omkostninger ROI. Opret en separat ROI som beskrevet før for systemet fyldt med de mere absorptive harpiks som den gule harpiks, der anvendes til den fælles galdegang injektion med højere intensitet værdier i CT-data.Markér og harpiks maskerer det nye investeringsafkast ved at højreklikke, før du vælger subtrahering af investeringsafkast, og trækker derefter det nye investeringsafkast fra harpiksmasken ROI for at oprette et nyt investeringsafkast til det resterende rørformede system. Eksporter de resulterende ROI'er til begge rørformede systemer i forskellige formater baseret på operatørreferencer til efterfølgende behandling i forskellige software. Yderligere proces de resulterende ROI'er i en volumen grafik software til at eksportere den endelige visualisering i form af et billede eller en video.I denne undersøgelse, en vellykket dobbelt harpiks injektion blev opnået med godt fyldt intrahepatiske galdegange, og portal vene vaskulatur. Den repræsentative analyse illustrerer resultatet af de segmenterede data fra en godt injiceret lever til en P15-mus og en voksen mus, hvor harpiks er synlig i sidegrenene. I det typiske eksempel på mislykket injektion resulterede fysisk skade på leveren under den kirurgiske procedure i, at harpiksen lækkede.Også for tidlig hærdning af harpiksen i nålen eller spidsen af slangen før injektionen, og den utilstrækkelige transcardial perfusion forårsaget system underfyldning. Den mindre harpikslækage kan korrigeres manuelt under segmentering af MicroCT-data. Højt injektionstryk kan briste fartøjer eller kanaler, og uopretteligt skade fartøjet eller kanalen arkitektur.Derudover var boblerne en anden meget almindelig injektionsartefakt, der førte til den sparsomme påfyldning af de rørformede netværk. Når friskåbnet harpiks blev anvendt, en klar forskel i kontrasten mellem de gule harpiks-injicerede galdegange og grøn harpiks-injiceret portal vener blev observeret. Efter tre måneders opbevaring var kontrasten tilstrækkelig til at skelne portalvenen fra galdegangen.Nedbøren påvirkede imidlertid blanding af de to harpikser, som var synlig som en heterogen uigennemsigtighed i den fyldte portalåre. Når harpiksen var ældre end seks måneder, forringede kontrasten til et punkt, hvor det var umuligt at skelne den gulsprøjtede galdegang fra den grønsprøjtede portalåre, baseret på deres kontrast alene. Det er afgørende at gøre en skrå snit i den fælles galdegang.Ellers vil det være meget svært at indsætte slangen. DUCT-teknikken oplyser nye arkitektoniske mekanismer for galde regenerering i en klinisk relevant model med forskellige træk i hilar- og perifere lapområder.

Research

JoVE Journal

Medicine

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

Retrograd perfusion og påfyldning af Mouse koronar kar som forberedelse til Micro Computed Tomography Imaging

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

3-dimensionelt Resin Støbning og Imaging of Mouse Portal Vein eller Intrahepatisk galdegang System

In  organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is  indispensable for proper physiological function, and the formation and  ...

Osmotic Drug Delivery to Ischemic Hindlimbs and Perfusion of Vasculature with Microfil for Micro-Computed Tomography Imaging

Osmotisk Drug Delivery til Iskæmisk bagbensknogler og perfusion af kar med Microfil for Micro-computertomografi Imaging

Preclinical research in animal models of peripheral arterial disease plays a vital role in testing the efficacy of therapeutic agents designed to ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Vurdering af virksomhedens rentabilitet for Human Fat Injektion i nøgne mus med Micro-Computed Tomography

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

Bile Duct Ligering i mus: Induktion af inflammatorisk leverskade, og fibrose ved Obstruktiv Kolestase

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Using Micro-computed Tomography for the Assessment of Tumor Development and Follow-up of Response to Treatment in a Mouse Model of Lung Cancer

Brug Micro-computertomografi for Vurdering af Tumor Udvikling og opfølgning af respons på behandling i en musemodel for lungekræft

Lung cancer is the most lethal cancer in the world. Intensive research is ongoing worldwide to identify new therapies for lung cancer. Several mouse ...

Combined Near-infrared Fluorescent Imaging and Micro-computed Tomography for Directly Visualizing Cerebral Thromboemboli

Kombineret Nær-infrarød Fluorescent Imaging og Micro-computertomografi for Direkte Visualisering Cerebral tromboemboli

Direct thrombus imaging visualizes the root cause of thromboembolic infarction. Being able to image thrombus directly allows far better investigation of ...

Testing Acetylcholine Followed by Adenosine for Invasive Diagnosis of Coronary Vasomotor Disorders

Test acetylcholin efterfulgt af adenosin for invasiv diagnose af koronar vasomotoriske lidelser

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary ...

Tissue Preparation Techniques for Contrast-Enhanced Micro Computed Tomography Imaging of Large Mammalian Cardiac Models with Chronic Disease

Vævsforberedelsesteknikker til kontrastforstærket mikrocomputertomografibilleddannelse af store pattedyrs hjertemodeller med kronisk sygdom

Structural remodeling is a common consequence of chronic pathological stresses imposed on the heart. Understanding the architectural and compositional ...

HE Staining and Micro-CT to Evaluate Murine Trabecular Bone Microarchitecture

Trabecular Bone Microarchitecture Evaluation in an Osteoporosis Mouse Model

An Economic and Efficient Method for Quantitative Evaluation of Bone Microarchitecture in a Murine Osteoporosis Model (Video) | JoVE

Trabekulær knoglemikroarkitektur evaluering i en osteoporose mus model

Bone microstructure refers to the arrangement and quality of bone tissue at the microscopic level. Understanding the bone microstructure of the skeleton ...