Name: duct: double resin casting followed by micro-computed tomography for 3d liver analysis
Uploaded: 2021-09-28T14:00:00
Duration: 12 min 39 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about DUCT: Double Resin Casting followed by Micro-Computed Tomography for 3D Liver Analysis at JoVE.com

Agradecemos a Kari Huppert e Stacey Huppert por sua experiência e ajuda em relação à cannulação do ducto biliar e sua hospitalidade laboratorial. Agradecemos também a Nadja Schultz e Charlotte L. Mattsson por sua ajuda com a cannulação comum do ducto biliar.
Agradecemos às seguintes Agências de Concessão pelo apoio:
Para trabalhar no ERA Lab: Karolinska Institutet (2-560/2015-280), Estocolmo Läns Landsting (CIMED (2-538/2014-29)), Ragnar Sö Stiftelse (Swedish Foundations's Starting Grant), European Association for the Study of the Liver (Daniel Alagille Award), Swedish Heart-Lung Foundation (20170723) e Vetenskapsrådet (2019-01350).
Para trabalhar no JK Lab: Reconhecemos a Infraestrutura de pesquisa da CzechNanoLab apoiada pelo MEYS CR (LM2018110). J.K. graças ao apoio do Grant FSI-S-20-6353.

<ol>
	<li>Narat, J. K., Loef, J. A., Narat, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+preparation+of+multicolored+corrosion+specimens.">On the preparation of multicolored corrosion specimens.</a> The Anatomical Record. 64, 155-160 (1936).</li><li>Ludwig, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+of+the+human+biliary+system+studied+by+quantitative+computer-aided+three-dimensional+imaging+techniques.">Anatomy of the human biliary system studied by quantitative computer-aided three-dimensional imaging techniques.</a> Hepatology. 27, 893-899 (1998).</li><li>Masyuk, T. V., Ritman, E. L., LaRusso, N. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Jagged1+heterozygosity+in+mice+results+in+a+congenital+cholangiopathy+which+is+reversed+by+concomitant+deletion+of+one+copy+of+Poglut1+(Rumi).">Jagged1 heterozygosity in mice results in a congenital cholangiopathy which is reversed by concomitant deletion of one copy of Poglut1 (Rumi).</a> Hepatology. 63, 550-565 (2016).</li><li>Walter, T. J., Sparks, E. E., Huppert, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3-Dimensional+resin+casting+and+imaging+of+mouse+portal+vein+or+intrahepatic+bile+duct+system.">3-Dimensional resin casting and imaging of mouse portal vein or intrahepatic bile duct system.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (68), e4272 (2012).</li><li>Hankeova, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DUCT+reveals+architectural+mechanisms+contributing+to+bile+duct+recovery+in+a+mouse+model+for+Alagille+syndrome.">DUCT reveals architectural mechanisms contributing to bile duct recovery in a mouse model for Alagille syndrome.</a> Elife. 1, 1-29 (2021).</li><li>Andersson, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+Alagille+syndrome+and+mechanisms+of+Jagged1+missense+mutations.">Mouse model of Alagille syndrome and mechanisms of Jagged1 missense mutations.</a> Gastroenterology. 154, 1080-1095 (2018).</li><li>Tanimizu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrahepatic+bile+ducts+are+developed+through+formation+of+homogeneous+continuous+luminal+network+and+its+dynamic+rearrangement+in+mice.">Intrahepatic bile ducts are developed through formation of homogeneous continuous luminal network and its dynamic rearrangement in mice.</a> Hepatology. 64, 175-188 (2016).</li><li>Ober, E. A., Lemaigre, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+liver:+Insights+into+organ+and+tissue+morphogenesis.">Development of the liver: Insights into organ and tissue morphogenesis.</a> Journal of Hepatology. 68, 1049-1062 (2018).</li></ol>

Um projeto separado no laboratório ERA é financiado pela ModeRNA. A ModeRNA não teve papel no projeto/protocolo descrito aqui.

Várias etapas críticas determinam o sucesso do DUCT, desde a preparação da amostra até os parâmetros do dispositivo CT. Para alcançar os melhores resultados, resina bem contrastada, bem injetada e sem bolhas deve ser usada para permitir o processamento digital simples com limiar automatizado para obter dados, imagens e filmes 3D. Com o treinamento e seguindo este protocolo, 90% das injeções são bem sucedidas e resultam em dados reprodutíveis. É importante usar resina amarela fresca para obter o melhor contraste entre os dois sistemas injetados. A resina amarela tem uma radiopacidade muito forte, enquanto a resina azul tem uma radiopacidade indetectável. Os melhores resultados são alcançados nos primeiros três meses após a abertura de uma nova garrafa de resina amarela. Com o tempo, a resina precipita, e após um armazenamento mais longo (>6 meses), as resinas amarelas e verdes não serão mais distinguidas nas tomografias. Imagens com baixo contraste exigem rastreamento manual extenso e demorado e segmentação dos dois sistemas. Em seguida, tubos bem esticados são indispensáveis para caber no ducto biliar comum de camundongos adultos e ducto biliar comum e veia portal de camundongos pós-natais. O ponto de entrada para a injeção deve ser criado com cuidado. Se o ducto biliar comum for aberto transversalmente, é provável que se desprende do tecido circundante, impedindo a entrada bem sucedida da tubulação. Este passo é especialmente delicado para camundongos pós-natais em que o ducto biliar comum se retrai e "enrola- se" se tiver se separado de seu tecido circundante, tornando a inserção da tubulação extremamente desafiadora. A entrada e injeção do ducto biliar comum podem exigir alguma prática. Ao preparar a tubulação com resina e toda a injeção, evite a formação de bolhas, pois as bolhas criarão espaço negativo nas imagens ct e exigirão correção manual demorada. É importante massagear suavemente o fígado rolando sobre sua superfície com um cotonete de algodão molhado durante e após o procedimento de injeção, pois isso facilita até mesmo a propagação da resina. Após a conclusão da injeção e remoção do tubo, o nó de sutura de seda deve ser apertado de forma rápida e cuidadosa, para que a resina não flua para fora do fígado antes que polimerize completamente. Para imagens microCT bem sucedidas, a amostra deve ser adequadamente fixada no lugar com agarose e adaptada termicamente para eliminar artefatos de movimento nos dados da tomografia. As configurações de aquisição também são de fundamental importância, que devem ser otimizadas para alcançar uma resolução espacial adequada para resolver estruturas finas.
Modificações técnicas no procedimento de injeção podem ser feitas para obter injeção em camundongos mais jovens. Atualmente, a fundição de resina de fígados de rato mais jovens é limitada pela disponibilidade de tubos suficientemente finos, com PE10 sendo o menor tubo comercialmente disponível. Tanimizu et al. injetaram tinta de carbono com sucesso no ducto biliar comum do dia 17 (E17) usando capilares de vidro11. Testes futuros de se a resina pode ser entregue via capilar de vidro seria, portanto, de interesse. O DUCT foi ainda adaptado para injetar outros sistemas tubulares, como as vias aéreas e a vasculatura da artéria pulmonar dos pulmões9. A injeção dupla de resina também pode ser modificada para ser usada com outras resinas disponíveis comercialmente, ou este protocolo poderia ser usado para injeções com tinta de carbono.
Um dos principais fatores limitantes do gasoduto DUCT é a viscosidade da resina. O DUCT só pode ser usado para fundição de resina de estruturas tubulares acima de um diâmetro de 5 μm. Neste conjunto de dados, a resina poderia penetrar tubos com o menor diâmetro de 5 μm9. Essa limitação de tamanho impede a análise de dutos finos e pequenos capilares. Para avançar ainda mais o gasoduto DUCT para embarcações de menor calibre, outras resinas disponíveis comercialmente devem ser testadas, ou o desenvolvimento de novos agentes radiopaquenos de baixa viscosidade pode melhorar a penetração do lúmen.
Em Hankeova et al.9, o DUCT foi comparado com duas outras técnicas comumente utilizadas, injeções duplas de tinta de carbono seguidas de limpeza tecidual e fotografia padrão, e iDISCO+ com coloração dos vasos sanguíneos com actina de células musculares alfa-lisas e ductos biliares com citokeratina 7, seguido por imagens 3D9. O DUCT superou os outros dois métodos em termos de análise dupla (o que foi desafiador para iDISCO+ devido à alta autofluorescência hepática), imagem 3D e quantificação (não possível com injeção de tinta de carbono) e lumenização (DUCT fornece dados para a arquitetura interna de lúmen e perfusão do sistema). Como mencionado acima, a principal limitação do DUCT é o tamanho mínimo de lúmen que pode ser injetado e analisado (limite de 5 μm), um parâmetro no qual tanto a injeção de tinta de carbono quanto o iDISCO+ tiveram melhor desempenho. O DUCT é superior ao fundição de resina de sistema único3,5,6 porque permite a análise de cada sistema injetado separadamente e também facilita a investigação 3D dupla para estudar a relação arquitetônica entre os dois sistemas.
O DUCT pode ser aplicado para estudar quaisquer duas redes tubulares em 3D. Como prova de princípio, o DUCT foi utilizado para visualizar os sistemas de veias hepáticas e portal e a vasculatura da artéria pulmonar e as vias aéreas no pulmão9. Os dutos biliares intrahápticos desenvolvem-se adjacentes à veia portal, e a veia portal fornece um modelo estrutural e centro de sinalização que regula o crescimento e diferenciação da árvore biliar12. Em Hankeova et al.9, a DUCT explorou a regeneração biliar em um modelo de camundongo para a doença pediátrica humana Síndrome de Alagille. O DUCT revelou mecanismos arquitetônicos não relatados anteriormente que o sistema biliar usou para alcançar um volume de tipo selvagem9. Os camundongos com síndrome de Alagille utilizaram duas estratégias diferentes: (1) nas regiões hilar e central do fígado, o sistema biliar aumentou sua ramificação, e (2) na periferia hepática, os ductos biliares gerados por novo eram altamente tortuosos. Estes dois fatores combinados para produzir um volume de sistema biliar quase normal, apesar da arquitetura anormal. Além disso, o DUCT detectou ramificações anormais do ducto biliar que ocorreram independentemente do ramificação da veia portal e dos canais biliares formando pontes de conexão entre duas veias do portal9. Esses fenótipos seriam impossíveis de detectar em fundição de resina única e poderiam ser mal interpretados em seções histológicas 2D como proliferação de ductos biliares. O DUCT fornece, assim, dados que descrevem a arquitetura 3D de duas redes tubulares em todo o nível de órgão ou lobo com a possibilidade de análise quantitativa qualitativa e aprofundada. O DUCT pode ser um novo padrão para o desenvolvimento do fígado pós-natal e análises de regeneração hepática em diferentes modelos animais.

Fundição de resina de órgãos é uma técnica que remonta ao século XVII1. Um dos primeiros exemplos de fundição moderna de resina foi realizado no fígado humano a partir de uma autópsia. Os dutos biliares intrahápticos foram preenchidos com um agente de contraste misturado com gelatina, seguido por imagem com tomografia computadorizada de raio-x2. O objetivo da técnica DUCT é visualizar, digitalizar e analisar duas redes tubulares lançadas com resina, em conjunto, em 3D.
O DUCT baseia-se no amplo conhecimento existente de resina hepática de sistema único, fundindo 3,4,5,6,7,8 e se estende à visualização e análise 3D simultâneas de dois sistemas9. O DUTO avançou o fundição de resina única para o fundição de resina dupla, misturando duas resinas radiopacas de contraste diferente e injetando essas resinas em duas redes diferentes, especificamente o ducto biliar comum e a veia portal. O DUCT pode ser aplicado a camundongos pós-natais jovens com resultados reprodutíveis já no pós-natal 15 (P15). Em comparação com as técnicas de imagem baseadas em microscopia, a principal vantagem é que o DUCT é mais rápido, livre de anticorpos e a autofluorescência do tecido hepático não interfere na imagem. Além disso, o DUCT fornece dados quantitativos descrevendo o estado de lumenização, diâmetro interno, conectividade de rede e perfusão. Diferenciar entre a presença de células formadoras de lúmen e sua morfogênese de fato em tubos é essencial para analisar órgãos nos quais as células ductulares estão presentes, mas não formam tubos, como pode ser o caso da síndrome de Alagille10. A principal desvantagem do DUCT é a penetração limitada da resina, que é viscosa e não entra em tubos de pequeno calibre (<5 μm). O DUCT PODE ser aplicado para qualquer estrutura tubular após determinar o ponto de entrada da injeção, como os sistemas circulatórios arterial e venoso, as vias aéreas, o ducto biliar extrahático ou vasos linfáticos. Poderia, assim, facilitar a análise completa da arquitetura de órgãos de outros tecidos, como pulmões e pâncreas.
As imagens segmentadas de MicroCT podem ser processadas usando software de imagem disponível comercialmente, como ImageJ, ou pipelines personalizados (por exemplo, MATLAB). O fígado injetado em resina pode ser analisado qualitativamente para expansão e conectividade de rede ou quantitativamente para volume, comprimento, ramificação, tortuosidade de um único sistema e a interação entre dois sistemas, como a distância entre dois sistemas ou dependência de galhos (o sistema 1 se ramifica próximo à ramificação do sistema 2?). O pipeline duct que engloba injeção de resina, digitalização de microCT e segmentação de dados de TC, combinado com análise quantitativa detalhada de mecanismos arquitetônicos de dois sistemas tubulares, poderia fornecer um padrão para análise hepática completa em modelos animais.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL SafeSeal micro tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72.706</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 G butterfly needle with tubing</td>
			<td>BD bioscience</td>
			<td>367283</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G needle</td>
			<td>BD bioscience</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G needle</td>
			<td>BD bioscience</td>
			<td>305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Top-Bio</td>
			<td>P045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzyl alcohol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>108006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzyl benzoate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B6630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 50 mL tubes</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>CLS430829-500EA</td>
			<td>polypropylene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Medicarier</td>
			<td>60406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection Microscope</td>
			<td>Leica Camera AG</td>
			<td></td>
			<td>Leica M60</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70%</td>
			<td>VWR</td>
			<td>83801.41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon tube 15 mL</td>
			<td>Verkon</td>
			<td>331.850.084.006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11051-10</td>
			<td>Fine Graefe 10 cm curved</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps straight</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11050-10</td>
			<td>Fine Graefe 10 cm straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F8775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GE Phoenix v|tome|x L 240</td>
			<td>Waygate Technologoies</td>
			<td></td>
			<td>micro computed tomography scanner</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#39; Balanced Salt Solution</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14025092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Leo Pharma</td>
			<td>B01AB01</td>
			<td>5000 IE/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolfurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>FDG9623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11413413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MICROFIL</td>
			<td>Flowtech</td>
			<td>MV-122</td>
			<td>synthetic resin yellow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MICROFIL</td>
			<td>Flowtech</td>
			<td>MV-120</td>
			<td>synthetic resin blue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MICROFIL</td>
			<td>Flowtech</td>
			<td>MV-diluent</td>
			<td>clear resin diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette</td>
			<td>Verkon</td>
			<td>130.690.424.503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic pump</td>
			<td>AgnThos</td>
			<td>010.6131.M20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phoenix datos|x 2.0 software</td>
			<td>Baker Hughes</td>
			<td></td>
			<td>CT data reconstruction software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rocker</td>
			<td>VWR</td>
			<td>444-0142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk suture</td>
			<td>AgnThos</td>
			<td>14757</td>
			<td>Black silk, 4-0, sterile, 100 m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin scissor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-09</td>
			<td>Iris straight tip 9 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring scissor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-03</td>
			<td>Vannas micro, straight tip 2 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1 mL Luer</td>
			<td>BD bioscience</td>
			<td>303172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing PE10</td>
			<td>BD bioscience</td>
			<td>427401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing PE50</td>
			<td>BD bioscience</td>
			<td>427411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VG Studio MAX 3.3 software</td>
			<td>Volume Graphics GmbH</td>
			<td></td>
			<td>CT data processing and analysis software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

duct: double resin casting followed by micro-computed tomography for 3d liver analysis

O fígado é o maior órgão interno em humanos e camundongos, e a alta fluorescência automática apresenta um desafio significativo para avaliar a arquitetura tridimensional (3D) do órgão no nível de todo o órgão. A arquitetura hepática é caracterizada por múltiplas estruturas lúmenizadas ramificadas, que podem ser preenchidas com resina, incluindo árvores vasculares e bilares, estabelecendo um padrão altamente estereotipado no parenchyma rico em hepatocitos. Este protocolo descreve o pipeline para a realização de tomografia microcomputada de fundição de resina dupla, ou "DUCT". O DUCT implica injetar a veia do portal e o ducto biliar comum com duas resinas sintéticas radiopacas diferentes, seguidas pela fixação tecidual. O controle de qualidade limpando um lobo, ou todo o fígado, com um agente de compensação óptica, permite a pré-triagem de amostras injetadas adequadamente. Na segunda parte do duto duct, um lobo ou todo o fígado pode ser usado para tomografia microcomputante (microCT) microCT, (segmentação semi-)automatizada e renderização 3D das redes venosas e biliares do portal. O MicroCT resulta em dados de coordenadas 3D para as duas resinas permitindo a análise qualitativa e quantitativa dos dois sistemas e sua relação espacial. O DUCT pode ser aplicado ao fígado de camundongos pós-natal e adulto e pode ser ainda mais estendido para outras redes tubulares, por exemplo, redes vasculares e vias aéreas nos pulmões.

O que fazer A injeção de resina dupla bem sucedida é alcançada quando ambos os dutos biliares intrahápticos e a vasculatura da veia portal estão bem preenchidos. Como etapa de controle de qualidade, a limpeza de um lobo (por exemplo, o lobo lateral esquerdo) permite a verificação de uma injeção bem sucedida, seguida de imagem de lóbulos de interesse. O lobo limpo opticamente pode ser escaneado posteriormente usando microCT; portanto, é possível limpar o fígado óptico. No fígado de rato bem injetado, a vasculatura da veia portal deve ser preenchida com resina até que a periferia do fígado e a resina devem ser visíveis em ramos laterais (Figura 4), e esta arquitetura é fielmente recapitulada em dados microCT digitalizados e segmentados. Além disso, os dutos biliares intrahápticos bem injetados devem ser visíveis ao lado dos principais ramos da veia do portal que se estendem quase até a periferia, e a resina deve ser visível nos principais ramos laterais. Se o lobo de controle passar pela etapa de controle de qualidade, os lóbulos de interesse (incluídos o desmatado opticamente) podem ser escaneados com microCT. O resultado dos dados segmentados de um fígado bem injetado é mostrado para um rato P15 (Figura 4A,B) e um rato adulto (Figura 4C,D).
O que não fazer Tecido hepático intacto é um pré-requisito para injeção bem sucedida. Tome cuidado extra ao cortar a cavidade abdominal e o diafragma para não cortar acidentalmente o tecido do fígado. Se houver danos físicos ao fígado durante este procedimento, é muito provável que a resina vaze durante a injeção de veia portal (Figura 5A). Não é possível conseguir uma boa injeção do sistema vascular se o fígado estiver fisicamente danificado.
Um dos erros comuns é subabastecer o fígado com resina que pode levar a desafios para visualização ou análise. Uma das causas para o subabastequimento do sistema é o endurecimento da resina prematuramente na agulha ou a ponta da tubulação antes da injeção ser concluída (Figura 5B, pontas de flecha azul, suportes retratam grandes bolhas). Uma boa prática é usar um conjunto de injeção por animal e trabalhar rápido depois que o agente de cura é adicionado à resina. Se a resina endurecer durante a injeção (que pode ser observada por um sistema meio cheio, aqui exemplificada com uma vasculatura venosa de portal meio cheia) retire a tubulação, corte a ponta do tubo (sempre na diagonal para criar uma ponta chanfrada) e empurre o êmbolo. Se a resina começar a gotejar novamente, reinsira cuidadosamente a tubulação e fixe-a com a sutura. Se a resina tiver endurecido na agulha, substitua completamente o tubo, encha-o com resina (evitando bolhas), reinsira cuidadosamente o tubo e fixe-o com a sutura. Pode ser desafiador substituir a tubulação, especialmente em camundongos pós-natais jovens <P30, já que o tecido é mais frágil. Outra causa do mau preenchimento da vasculatura da veia portal pode ser a perfusão transcárrica insuficiente (Figura 5C, pontas de flecha azul denotam sangue visível em galhos terminais). Isso pode ser observado quando as pontas dos vasos são preenchidas com sangue em vez de resina. Para evitar isso, certifique-se de que a veia portal (fora do fígado) não contenha sangue antes da injeção. A terceira causa do fígado subabastecido é quando a tubulação é inserida muito profundamente no fígado e entra em um galho em direção a um dos lóbulos. Para evitar isso, insira o tubo a um mínimo de 0,5 cm da entrada para o fígado.
Por outro lado, um, ou ambos, dos sistemas ficam sobrecarregados com resina (Figura 5D). É necessário monitorar visualmente o fígado durante toda a injeção. O revestimento do sistema biliar com resina é mais desafiador do que o fundição de resina venosa portal, uma vez que os dutos cheios de resina são apenas levemente visíveis na superfície hepática, e é difícil avaliar quando o sistema está quase cheio e quando parar. Quando pequenos pontos de resina amarela aparecem na superfície do fígado (Figura 2Ci, ponta de flecha azul), este é um sinal de que o sistema biliar está completamente preenchido, e a resina está começando a vazar para fora dos dutos. O pequeno vazamento de resina pode ser corrigido manualmente durante a segmentação de dados microCT (Figura 5D, painéis à direita).
Se a pressão de injeção for muito alta, isso pode causar a ruptura de vasos ou dutos (Figura 5E), danificando irreversivelmente a arquitetura de vasos ou dutos. O fígado não será adequado para varredura ou análise de microCT. Para evitar o excesso de resina, otimize o volume certo e a pressão usados para injeção em cada modelo do mouse. Ao trabalhar com camundongos que foram desafiados com uma dieta tóxica, modificação genética ou lesão hepática que afeta os sistemas biliar ou venoso, ou rigidez hepática, a pressão e o volume de injeção podem precisar ser ajustados, pois o volume e a pressão tolerados podem ser diferentes dos ratos do tipo selvagem. Este protocolo descreve a injeção manual dos dois sistemas, mas é possível conectar a seringa a uma bomba para padronizar a pressão de injeção. Bolhas são outro artefato de injeção muito comum que leva ao enchimento esparso das redes tubulares (Figura 5F-H, pontas de flecha azul). Para evitar a formação de bolhas, certifique-se de que a seringa e a tubulação não contenham bolhas, estejam completamente cheias de resina, e a resina esteja pingando da ponta da tubulação antes da injeção. Pequenas bolhas que aparecem como áreas negativas nos dados do microCT podem ser corrigidas manualmente durante as etapas pós-processamento, embora isso seja trabalhoso.
Fresco é o melhor O uso de resina amarela fresca é um fator crucial, afetando significativamente o contraste das duas resinas e a segmentação de dados microCT. Quando a resina recém-aberta é usada (Figura 6A) há uma clara diferença no contraste entre os dutos biliares injetados por resina amarela (branco brilhante) e as veias de portal injetadas em resina verde (cinza brilhante). O fígado injetado com resina fresca é facilmente processado usando limiares globais automatizados. Com armazenamento prolongado, a resina precipita, e o contraste diminui. Após 3 meses de armazenamento, o contraste ainda pode ser suficiente para distinguir a veia portal do ducto biliar (Figura 6B), mas a precipitação afeta a mistura das duas resinas, que é visível como uma opacidade heterogênea na veia do portal preenchido (Fig 6B, pontas de flecha azul). O contraste heterogêneo afeta negativamente o limiar automatizado e requer correções manuais, o que aumenta o tempo de processamento. Se a resina for maior de seis meses, o contraste se degradou a um ponto em que não é possível distinguir o ducto biliar injetado em amarelo da veia portal injetada pelo verde com base apenas em seu contraste (Figura 6C). Neste caso, o ducto biliar e a veia portal devem ser segmentados manualmente com base em seu diâmetro e posição na região hilar e acompanhados manualmente por todo o dado microCT. Este procedimento é extremamente demorado e melhor evitado.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62941/62941fig01.jpg"> Figura 1: Conjunto de injeção para fundição de resina. (A) O conjunto de injeção nº 1 compreende uma agulha de 30 G e uma tubulação PE10 de ~30 cm de comprimento. O conjunto de injeção #2 é composto por uma agulha de 23 G e tubos PE50 ~30 cm de comprimento. (B) A ponta da tubulação é esticada e cortada em um ângulo para criar uma ponta chanfrada. A régua em A e B é uma régua de centímetros, com grandes incrementos de 1 cm, incrementos intermediários de 5 mm, e pequenos incrementos de 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62941/62941fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62941/62941fig02.jpg"> Figura 2: Gráfico de fluxo de fundição de resina dupla. (A) Esquemático mostrando o sistema circulatório venoso murino e o coração com átrio direito destacado, que deve ser cortado antes da perfusão, e o ventrículo esquerdo no qual a agulha deve ser inserida para a perfusão para lavar o sangue do sistema circulatório. A veia cava inferior deve ser cortada sob os rins para aliviar a pressão vascular. (B) Gráfico de injeção de resina do ducto biliar. i Imagem de zoom de (A) representando onde cortar o IVC. (ii) Imagem representando o ducto biliar comum (linha pontilhada amarela) da região do fígado hilar até o esfíncter de Oddi (pontas de flecha preta), com fio de sutura sob o ducto biliar comum limpo. (iii) Posição adequada para nó de mão sobre mão solta em torno do ducto biliar comum. (iv) A linha pontilhada amarela e as pontas das flechas pretas rotulam o esfíncter de Oddi, demonstrando o ângulo oblíquo para incisão e como a abertura deve aparecer após a incisão do ângulo oblíquo. v Esquema demonstrando a orientação da abertura de bip do tubo PE10 (para cima) após a inserção. (vi) Aparecimento de resina amarela sendo injetada; a resina deve facilmente passar o nó frouxamente amarrado. IVC, veia cava inferior; CBD, ducto biliar comum. (C) Gráfico de injeção de resina venosa portal. (i) A linha pontilhada verde marca a veia portal da região de Hilar. As pontas das flechas azuis rotulam o sistema biliar sobrecarregado. (ii) Local adequado para nó de mão solta ao redor da veia do portal. (iii) Esquemático demonstrando a abertura de bisel (para cima) após a inserção. (iv) Aparecimento de fígado após injeção de resina verde e resina amarela; note o vaso sanguíneo cheio de resina na periferia do fígado. PV, veia portal. A Figura 2A foi criada com Biorender.com. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62941/62941fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62941/62941fig03.jpg"> Figura 3: Processamento de dados micro CT em software gráfico de volume. (A) Determinação de superfície, (i) isovalor superestimado (atual prévia da seleção é mostrado na cor amarela), (ii) isovalor subestimado, (iii) seleção ideal de isovalor para determinação adequada da superfície dos canais de veia portal e biliares. (B) Região de interesse de divisão (ROI) criada por determinação superficial, (i) definir o valor na janela de diálogo alto o suficiente para que apenas um segmento (o maior) permaneça, (ii) em quadros amarelos as partículas menores (excluídas) são mostradas. (C) A suavização superficial dos dados, (i) função de alisamento está no painel esquerdo, (ii) definir a força de suavização para 1 (máx. 2) e criar novos dados alisados do ROI, (iii). (D) A separação dos sistemas tubulares individuais, (i) na função de determinação da superfície definir o isovalor para que apenas o sistema biliar seja incluído na seleção (a visualização atual da seleção é mostrada na cor amarela), (ii) marcar o ROI de ambos os sistemas e o ROI de apenas o sistema biliar e o sistema biliar subtrato do ROI de ambos os sistemas, (iii) Veia de portal mostrada em cinza, o sistema biliar mostrado em verde. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62941/62941fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62941/62941fig04.jpg"> Figura 4: Sistemas de ducto biliar bem injetado (BD) e veia portal (PV). (A) Sistema de lobo medial direito (RML) do fígado pós-natal 15 (P15) injetado com duas resinas nos dois sistemas. Escala barra 1 mm. (B) renderização 3D de P15 RML mostrada em (A) representando vasculatura veia portal em branco e sistema biliar em verde. Barra de escala 1 mm. (C) RML desmatada óptica de fígado adulto injetado com duas resinas nos dois sistemas. Escala barra 1 mm. (D) renderização 3D de RML adulto mostrado em (C) representando vasculatura veia portal em branco e sistema biliar em verde. H = hilar, P = periférico. Barra de escala 1 mm. Os painéis A, B, D são adaptados com permissão de Hankeova et al.9. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62941/62941fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62941/62941fig05.jpg"> Figura 5: Desafios comuns de injeções de fígado de resina dupla. (A) A imagem retrata um fígado que foi acidentalmente cortado durante a abertura inicial da cavidade abdominal, e a resina está vazando através do corte (ponta de flecha azul). (B) Sistema de veia portal mal injetado devido ao endurecimento da resina. Pontas de flecha azul rotulam galhos terminais vazios, e suportes vermelhos rotulam grandes bolhas. Barra de escala 1 mm. (C) Sistema venoso portal mal injetado devido à má perfusão transcárquia. Pontas de flecha azul rotulam o sangue visível nos galhos terminais. Barra de escala 1 mm. (D) Sistema biliário sobrenchido manifestado por bolas isoladas de resina. Os painéis esquerdos mostram o fígado limpo opticamente, e os painéis direito mostram a imagem renderizada 3D microCT. Os contornos pontilhados azuis retratam regiões de zoom. As pontas das flechas pretas rotulam uma parte do fígado que foi danificada durante a limpeza óptica após a varredura de microCT. Barra de escala 1 mm. (E) Alta pressão durante a injeção de resina pode causar ruptura da veia portal (o animal neste painel carrega uma mutação Jag1H268Q), marcada por pontas de flecha azul. Barra de escala 1 mm. (F) Bolhas na resina durante a injeção de veia portal (pontas de flecha azul) e (G) injeção do sistema biliar (ponta de flecha azul), barra de escala 1 mm. (H) Varredura microCT de bolhas (ponta de flecha azul), galhos terminais mal preenchidos (suportes vermelhos) e vazamento de resina (ponta de flecha amarela), barra de escala 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62941/62941fig05large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62941/62941fig06.jpg"> Figura 6: Contraste diferencial da resina. (A) Resina amarela recém-aberta gera contraste suficiente para distinguir veia portal injetada em resina (cinza) e ductos biliares (brancos). (B) O armazenamento de três meses de resina amarela leva à precipitação da resina resultando em opacidade heterogênea (veia portal cinza-branco, ponta de flecha azul). (C) O armazenamento prolongado (>6 meses) de resina amarela diminui o contraste entre a veia portal (cinza) e os canais biliares (cinza). Barra de escala 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62941/62941fig06large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

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DUCT: Double Resin Casting followed by Micro-Computed Tomography for 3D Liver Analysis

A tomografia microcomputada de fundição dupla de resina, ou DUCT, permite a visualização, digitalização e segmentação de dois sistemas tubulares simultaneamente para facilitar a análise 3D da arquitetura de órgãos. O DUCT combina a injeção ex vivo de duas resinas radiopacas seguidas de tomografia microcomputada e segmentação dos dados tomográficos.

DUCT: Fundição de Resina Dupla seguida de Tomografia Microcomputada para Análise hepática 3D

The liver is the biggest internal organ in humans and mice, and high auto-fluorescence presents a significant challenge for assessing the ...

Este método nos permite analisar, visualizar e quantificar a arquitetura de sistemas vasculares e biliares hepáticos em 3D. Agora podemos entender melhor os aspectos espaciais da doença hepática e da regeneração. A principal vantagem dessa técnica é que ela não se baseia na existência de anticorpos ou imagens de fluorescência.Também permite a visualização direta de quais redes são adequadamente lubrificadas. Este método é adequado para a análise de sistemas tubulares, portanto, a pesquisa de vasos sanguíneos, ductos biliares e vias aéreas são áreas ideais. Utilizamos o DUCT para entender as mudanças estruturais relacionadas à regeneração biliar.Antes de injetar resina no sistema biliar do camundongo, comece a mover o intestino e o pâncreas para o lado esquerdo do camundongo, usando um cotonete molhado com PBS para expor o ducto biliar comum e a veia portal. Em seguida, faça uma pequena incisão transversal na veia cava inferior. Vire o lado ventral do fígado em direção ao coração para expor a superfície visceral e a região hilar, e localize o ducto biliar comum que corre da região do hilar através do pâncreas, e para o intestino no esfíncter de Oddi.Use os fórceps retos para limpar a área tecidual circundante de aproximadamente cinco milímetros do ducto biliar comum. Em seguida, colocando um fio de sutura de seda sob o ducto biliar comum, amarre um nó de mão sobre mão solto ao redor do ducto biliar comum. Segure a tesoura de mola plana contra o ducto biliar comum para fazer uma incisão oblíqua ao ducto biliar comum no local onde o ducto biliar comum entra no pâncreas e no intestino ao lado do esfíncter de Oddi.Em seguida, misture um mililitro da resina amarela com 50 microliters do agente de cura MV, e encha uma seringa de um mililitro com a mistura de agente de cura de resina. Conecte a seringa recheada com o conjunto de tubos e pressione o êmbolo para encher a tubulação até que a mistura do agente de cura de resina escorre da ponta da tubulação. Use os fórceps para endireitar a área ao redor da incisão comum do ducto biliar.Antes de inserir a tubulação na abertura no ducto biliar comum com a borda mais longa da ponta chanfrada para baixo em direção ao lado dorsal do ducto biliar. Em seguida, aperte o nó de fio de seda para fixar o tubo dentro do ducto biliar comum. Depois de injetar a resina no ducto biliar comum, observe a vesícula biliar e os lobos hepáticos individuais.Massageie o fígado com um cotonete de algodão molhado pbs para ajudar a espalhar a resina igualmente. Os ramos terminais dos dutos biliares cheios de resina serão levemente visíveis na superfície hepática. Pare de injetar a resina quando pontos de resina aparecerem na superfície do fígado ou quando a resistência for atingida.Em seguida, remova a tubulação puxando para fora do ducto biliar comum e aperte rapidamente o nó de seda usando fórceps para evitar que a resina vaze. Corte as pontas soltas da sutura de seda, para que elas não interfiram com a injeção de veia portal. Antes de injetar a resina na veia portal, limpe a veia portal de seu tecido circundante cerca de dois centímetros de sua entrada no fígado, usando fórceps retos.Em seguida, coloque o fio de sutura de seda sob a área desmatada da veia portal para amarrar um nó de mão solta. Na veia do portal distal ao fígado, faça uma incisão longitudinal antes de amarrar o nó. Em seguida, prepare a mistura de agente de cura de resina verde na seringa e encha a tubulação com a mistura como demonstrado anteriormente.Use os fórceps para endireitar a veia do portal puxando o tecido circundante em direção ao lado da cauda antes de inserir o tubo com a borda mais longa da ponta chanfrada em direção ao lado dorsal do vaso. Aperte o fio de seda para fixar o tubo na veia do portal. Depois de injetar a resina na veia portal, observe os vasos sanguíneos enchendo com resina, e massageie o fígado com um cotonete de algodão molhado pbs para ajudar a espalhar a resina.Quando todos os vasos sanguíneos estiverem cheios, retire a tubulação da veia do portal, e aperte rapidamente o nó de seda usando fórceps para evitar que a resina vaze. Para tomografia microcomputada ou microCT do fígado dissecado do camundongo, coloque o lobo hepático medial direito em um tubo concético de 15 mililitros e encha o tubo com gel de 1%agarose para aproximadamente dois terços do volume total do tubo para minimizar o movimento amostral indesejado durante a medição do MicroCT. Monte o tubo cônico de 15 mililitros com a amostra no estágio rotacional de um dispositivo ct.Deixe que o tubo se adapte termicamente à câmara de medição por pelo menos uma hora. Quando a amostra estiver adaptada termicamente, centralize-a no campo de visão ou FOV, em seguida, otimize as distâncias da amostra de origem e detector de amostras, ou SSD e SDD para alcançar resolução voxel suficiente. Uma vez definidos os parâmetros, inicie uma medição de tomografia computadorizada.Use software dedicado de reconstrução tomográfica para reconstruir os dados ct. Para analisar os dados do CT, carregue os arquivos selecionando arquivo, importação e comando. Use a função de determinação da superfície no painel superior para segmentar a resina nos dados usando limiar global.Na janela de diálogo, determine o valor limiar com a avaliação do histograma definindo a posição da linha isovalor vermelha para segmentar apenas os vasos cheios de resina. No painel esquerdo, selecione o módulo criar ROI a partir de volume ou CAD ou malha para criar uma região de interesse ou ROI dos vasos cheios de resina. Na janela de diálogo, use a opção criar ROIs de sólido para selecionar e confirmar o nome do volume processado.Eliminar a segmentação errônea de clusters de ruído na região de fundo deste ROI. Marque o ROI no painel direito clicando com o botão direito do mouse e selecionando o ROI dividido do módulo. Na janela de diálogo, defina o parâmetro voxel de volume mínimo para excluir todas as partículas de ruído.O valor do parâmetro é experimentado e dependente de dados, e otimizado para cada amostra a ser analisada. No painel esquerdo use o módulo de alisamento para criar máscaras de canal suaves, contínuas e sólidas sem artefatos, como a presença de bolhas de ar ou vazamento de resina no ROI de custo de resina. Crie um ROI separado como descrito anteriormente para o sistema preenchido com a resina mais absortiva como a resina amarela usada para a injeção comum do ducto biliar com valores de maior intensidade nos dados ct.Marque e resina mascaram o novo ROI clicando com o botão direito do mouse antes de selecionar ROIs subtraídas e, em seguida, subtrair o novo ROI da máscara de resina para criar um novo ROI para o sistema tubular restante. Exporte os ROIs resultantes para ambos os sistemas tubulares em vários formatos com base em referências do operador para processamento subsequente em diferentes softwares. Processe ainda mais os ROIs resultantes em um software gráfico de volume para exportar a visualização final na forma de uma imagem ou um vídeo.Neste estudo, foi alcançada uma injeção de resina dupla bem sucedida com dutos biliares intrahápticos bem preenchidos e vasculatura de veia portal. A análise representativa ilustra o resultado dos dados segmentados de um fígado bem injetado para um rato P15, e um rato adulto onde a resina é visível nos ramos laterais. No exemplo típico de injeção mal sucedida, danos físicos ao fígado durante o procedimento cirúrgico resultaram no vazamento da resina.Também o endurecimento prematuro da resina na agulha ou na ponta da tubulação antes da injeção, e a perfusão transcárdia insuficiente causaram o subenchimento do sistema. O pequeno vazamento de resina pode ser corrigido manualmente durante a segmentação de dados MicroCT. A alta pressão de injeção pode romper vasos ou dutos, e danificar irreversivelmente a arquitetura do vaso ou duto.Além disso, as bolhas foram outro artefato de injeção muito comum que levou ao enchimento esparso das redes tubulares. Quando utilizada a resina recém-aberta, observou-se uma clara diferença no contraste entre os dutos biliares injetados por resina amarela e as veias do portal injetadas por resina verde. Após três meses de armazenamento, o contraste foi suficiente para distinguir a veia portal do ducto biliar.No entanto, a precipitação afetou a mistura das duas resinas, que era visível como uma opacidade heterogênea na veia do portal preenchido. Quando a resina tinha mais de seis meses, o contraste se degradou a um ponto em que era inviável distinguir o ducto biliar injetado em amarelo da veia portal injetada pelo verde, com base apenas no seu contraste. É crucial fazer uma incisão oblíqua no ducto biliar comum.Caso contrário, será muito difícil inserir a tubulação. A técnica DUCT esclarece novos mecanismos arquitetônicos de regeneração biliar em um modelo clinicamente relevante com características distintas nas regiões do lóbulo hilar e periférico.

Research

JoVE Journal

Medicine

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

Perfusão retrógrada e enchimento da vasculatura coronariana do rato como preparação para Micro tomografia computadorizada

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

Medicina

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

3-Dimensional Fundição de resina e Imagem da Veia Rato Portal ou Sistema intra-hepática Duto Biliar

In  organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is  indispensable for proper physiological function, and the formation and  ...

Osmotic Drug Delivery to Ischemic Hindlimbs and Perfusion of Vasculature with Microfil for Micro-Computed Tomography Imaging

Osmótica Drug Delivery para hindlimbs isquêmicos e perfusão da vasculatura com Microfil para Micro-tomografia computadorizada

Preclinical research in animal models of peripheral arterial disease plays a vital role in testing the efficacy of therapeutic agents designed to ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Avaliação da viabilidade de gordura humana injecção em ratinhos nu com Micro-Tomografia Computadorizada

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

Ligadura do ducto biliar em ratos: Indução de Inflammatory Lesão hepática e fibrose por colestase obstrutiva

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Using Micro-computed Tomography for the Assessment of Tumor Development and Follow-up of Response to Treatment in a Mouse Model of Lung Cancer

Usando tomografia Micro-computadas para a avaliação do desenvolvimento do tumor e Acompanhamento da resposta ao tratamento em um modelo do rato do cancro do pulmão

Lung cancer is the most lethal cancer in the world. Intensive research is ongoing worldwide to identify new therapies for lung cancer. Several mouse ...

Combined Near-infrared Fluorescent Imaging and Micro-computed Tomography for Directly Visualizing Cerebral Thromboemboli

Combinada Near-infrared imagens fluorescentes e tomografia Micro-computado para Diretamente Visualizando Cerebral tromboêmbolos

Direct thrombus imaging visualizes the root cause of thromboembolic infarction. Being able to image thrombus directly allows far better investigation of ...

Testing Acetylcholine Followed by Adenosine for Invasive Diagnosis of Coronary Vasomotor Disorders

Testando acetilcolina seguida de adenosina para diagnóstico invasivo de distúrbios vasomotores coronários

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary ...

Tissue Preparation Techniques for Contrast-Enhanced Micro Computed Tomography Imaging of Large Mammalian Cardiac Models with Chronic Disease

Técnicas de preparação de tecidos para imagens de tomografia microcomputante aprimorada de contraste de grandes modelos cardíacos de mamíferos com doença crônica

Structural remodeling is a common consequence of chronic pathological stresses imposed on the heart. Understanding the architectural and compositional ...

HE Staining and Micro-CT to Evaluate Murine Trabecular Bone Microarchitecture

Trabecular Bone Microarchitecture Evaluation in an Osteoporosis Mouse Model

An Economic and Efficient Method for Quantitative Evaluation of Bone Microarchitecture in a Murine Osteoporosis Model (Video) | JoVE

Avaliação da Microarquitetura Óssea Trabecular em Modelo de Osteoporose em Camundongos

Bone microstructure refers to the arrangement and quality of bone tissue at the microscopic level. Understanding the bone microstructure of the skeleton ...