Name: duct: double resin casting followed by micro-computed tomography for 3d liver analysis
Uploaded: 2021-09-28T14:00:00
Duration: 12 min 39 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about DUCT: Double Resin Casting followed by Micro-Computed Tomography for 3D Liver Analysis at JoVE.com

Vi tackar Kari Huppert och Stacey Huppert för deras expertis och hjälp med gallgångsburkulering och deras laboratorie gästfrihet. Vi tackar också Nadja Schultz och Charlotte L. Mattsson för deras hjälp med gemensam gallgångsburkulering.
Vi tackar följande beviljande organ för deras stöd:
För arbete i ERA Lab: Karolinska Institutet (2-560/2015-280), Stockholms Läns Landsting (CIMED (2-538/2014-29)), Ragnar Söderbergs stiftelse (Stiftelsens startbidrag), Europeiska föreningen för leverstudier (Daniel Alagille Award), Hjärt-Lungfonden (20170723) och Vetenskapsrådet (2019-01350).
För arbete i JK Lab: Vi bekräftar CzechNanoLab Research Infrastructure som stöds av MEYS CR (LM2018110). J.K. tack vare stödet från bidraget FSI-S-20-6353.

<ol>
	<li>Narat, J. K., Loef, J. A., Narat, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+preparation+of+multicolored+corrosion+specimens.">On the preparation of multicolored corrosion specimens.</a> The Anatomical Record. 64, 155-160 (1936).</li><li>Ludwig, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+of+the+human+biliary+system+studied+by+quantitative+computer-aided+three-dimensional+imaging+techniques.">Anatomy of the human biliary system studied by quantitative computer-aided three-dimensional imaging techniques.</a> Hepatology. 27, 893-899 (1998).</li><li>Masyuk, T. V., Ritman, E. L., LaRusso, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+the+rat+intrahepatic+biliary+system+by+three-dimensional+reconstruction.">Quantitative assessment of the rat intrahepatic biliary system by three-dimensional reconstruction.</a> American Journal of Pathology. 158, 2079-2088 (2001).</li><li>Masyuk, T. V., Ritman, E. L., LaRusso, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+artery+and+portal+vein+remodeling+in+rat+liver:+Vascular+response+to+selective+cholangiocyte+proliferation.">Hepatic artery and portal vein remodeling in rat liver: Vascular response to selective cholangiocyte proliferation.</a> American Journal of Pathology. 162, 1175-1182 (2003).</li><li>Sparks, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signaling+regulates+formation+of+the+three-dimensional+architecture+of+intrahepatic+bile+ducts+in+mice.">Notch signaling regulates formation of the three-dimensional architecture of intrahepatic bile ducts in mice.</a> Hepatology. 51, 1391-1400 (2010).</li><li>Cuervo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+notch+signaling+is+essential+to+prevent+hepatic+vascular+malformations+in+mice.">Endothelial notch signaling is essential to prevent hepatic vascular malformations in mice.</a> Hepatology. 64, 1302-1316 (2016).</li><li>Thakurdas, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Jagged1+heterozygosity+in+mice+results+in+a+congenital+cholangiopathy+which+is+reversed+by+concomitant+deletion+of+one+copy+of+Poglut1+(Rumi).">Jagged1 heterozygosity in mice results in a congenital cholangiopathy which is reversed by concomitant deletion of one copy of Poglut1 (Rumi).</a> Hepatology. 63, 550-565 (2016).</li><li>Walter, T. J., Sparks, E. E., Huppert, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3-Dimensional+resin+casting+and+imaging+of+mouse+portal+vein+or+intrahepatic+bile+duct+system.">3-Dimensional resin casting and imaging of mouse portal vein or intrahepatic bile duct system.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (68), e4272 (2012).</li><li>Hankeova, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DUCT+reveals+architectural+mechanisms+contributing+to+bile+duct+recovery+in+a+mouse+model+for+Alagille+syndrome.">DUCT reveals architectural mechanisms contributing to bile duct recovery in a mouse model for Alagille syndrome.</a> Elife. 1, 1-29 (2021).</li><li>Andersson, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+Alagille+syndrome+and+mechanisms+of+Jagged1+missense+mutations.">Mouse model of Alagille syndrome and mechanisms of Jagged1 missense mutations.</a> Gastroenterology. 154, 1080-1095 (2018).</li><li>Tanimizu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrahepatic+bile+ducts+are+developed+through+formation+of+homogeneous+continuous+luminal+network+and+its+dynamic+rearrangement+in+mice.">Intrahepatic bile ducts are developed through formation of homogeneous continuous luminal network and its dynamic rearrangement in mice.</a> Hepatology. 64, 175-188 (2016).</li><li>Ober, E. A., Lemaigre, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+liver:+Insights+into+organ+and+tissue+morphogenesis.">Development of the liver: Insights into organ and tissue morphogenesis.</a> Journal of Hepatology. 68, 1049-1062 (2018).</li></ol>

Ett separat projekt i ERA-labbet finansieras av ModeRNA. ModeRNA hade ingen roll i projektet/protokollet som beskrivs här.

Flera kritiska steg avgör DUCT-framgång, från provberedning till CT-enhetens parametrar. För att uppnå bästa resultat bör välkontrast, välinsprutat och bubbelfritt harts användas för att möjliggöra enkel digital bearbetning med automatiserad tröskel för att få 3D-data, bilder och filmer. Med utbildning och efter detta protokoll, 90% av injektionerna är framgångsrika och resulterar i reproducerbara data. Det är viktigt att använda färskt gult harts för att uppnå bästa kontrast mellan de två injicerade systemen. Det gula hartset har en mycket stark radiopacitet, medan det blå hartset har oidentifierbar radiopacitet. Toppresultat uppnås inom de första tre månaderna efter öppnandet av en ny gul hartsflaska. Med tiden fälls harts ut, och efter längre lagring (>6 månader) kommer de gula och gröna hartserna inte längre att kunna särskiljas i CT-skanningar. Bilder med dålig kontrast kräver omfattande och tidskrävande manuell spårning och segmentering av de två systemen. Därefter är välsträckt slang oumbärlig för att passa in i den gemensamma gallgången hos vuxna möss och gemensam gallkanal och portalven hos postnatala möss. Injektionsstället måste skapas varsamt. Om den gemensamma gallgången skärs upp tvärgående, är det troligt att den lossnar från den omgivande vävnaden, vilket förhindrar framgångsrikt inträde av slangen. Detta steg är särskilt känsligt för postnatala möss där den gemensamma gallgången dras tillbaka och "krullar upp" om den har lossnat från sin omgivande vävnad, vilket gör införandet av slangen extremt utmanande. Den gemensamma gallgångens ingång och injektion kan kräva viss övning. När du förbereder slangen med harts och under hela injektionen, undvik bubbelbildning eftersom bubblor kommer att skapa negativt utrymme i CT-bilderna och kräver tidskrävande manuell korrigering. Det är viktigt att försiktigt massera levern genom att rulla över ytan med en våt bomullspinne under och efter injektionsförfarandet eftersom detta underlättar jämn spridning av harts. Efter avslutad injektion och avlägsnande av slangen måste silkessystknuten dras åt snabbt och försiktigt, så hartset inte strömmar ut ur levern innan det polymeriseras helt. För framgångsrik mikroCT-avbildning måste provet vara korrekt fastsatt med agaros och termiskt anpassat för att eliminera rörelseartefakter i CT-data. Förvärvsinställningarna är också av avgörande betydelse, som bör optimeras för att nå en adekvat rumslig upplösning för att lösa fina strukturer.
Tekniska ändringar av injektionsförfarandet kan göras för att uppnå injektion hos yngre möss. För närvarande begränsas hartsgjutning av yngre muslever av tillgången på tillräckligt tunna slangar, med PE10 som den minsta kommersiellt tillgängliga slangen. tanimizu m.fl. framgångsrikt injicerat kolbläck i embryonala dag 17 (E17) gemensam galla kanal med hjälp av glas kapillärer11. Framtida tester av om harts kan levereras via kapillär av glas skulle därför vara av intresse. DUCT anpassades ytterligare för att injicera andra rörformiga system såsom luftvägarna och pulmonell gatan vaskulaturen i lungorna9. Dubbelhartsinjektionen kan också modifieras för att användas med andra kommersiellt tillgängliga hartser, eller detta protokoll kan användas för injektioner med kolbläck.
En av de viktigaste begränsande faktorerna i DUCT-rörledningen är hartsviskositeten. DUCT kan endast användas för hartsgjutning av rörformiga strukturer över en diameter av 5 μm. I denna datauppsättning kan hartset penetrera rör med den minsta diametern på 5 μm9. Denna storleksbegränsning utesluter analys av fina duktuler och små kapillärer. För att ytterligare föra DUCT-rörledningen vidare till mindre kalibriga kärl bör andra kommersiellt tillgängliga hartser testas, eller utvecklingen av nya radiopapper med låg viskositet kan förbättra lumenpenetrationen.
I Hankeova et al.9 jämfördes DUCT med två andra vanliga tekniker, dubbla kolbläckinjektioner följt av vävnadsrensning och standardfotografering och iDISCO+ med färgning av blodkärlen med alfa-slät muskelcell aktin och galla kanaler med cytokeratin 7, följt av 3D imaging9. DUCT överträffade de andra två metoderna när det gäller dubbel analys (som var utmanande för iDISCO + på grund av hög leverautoscens), 3D-avbildning och kvantifiering (inte möjligt med kolbläckinjektion) och lumenisering (DUCT tillhandahåller data för den interna lumenarkitekturen och systemperfusion). Som nämnts ovan är huvudbegränsningen för DUCT den minsta lumenstorleken som kan injiceras och analyseras (5 μm gräns), en parameter där både kolbläckinjektion och iDISCO+ presterade bättre. DUCT är överlägsen enkel systemhartsgjutning3,5,6 eftersom det möjliggör analys av varje injicerat system separat och underlättar också dubbel 3D-undersökning för att studera det arkitektoniska förhållandet mellan de två systemen.
DUCT kan tillämpas för att studera två rörformade nätverk i 3D. Som bevis på princip användes DUCT för att visualisera lever galla och portal ven system och pulmonell gatan vaskulatur och luftvägarna i lung9. De intrahepatiska gallgångarna utvecklas intill portalvenen, och portalvenen ger en strukturell mall och signalcenter som reglerar tillväxten och differentieringen av gallträdet12. I Hankeova et al.9 utforskade DUCT gallregenerering i en musmodell för den mänskliga pediatriska sjukdomen Alagille syndrom. DUCT avslöjade tidigare orapporterade arkitektoniska mekanismer som gallsystemet använde för att uppnå en vild-typ-liknande volym9. Alagille syndrom möss använde två olika strategier: (1) i hilar och centrala regioner i levern, galla systemet ökade sin förgrening, och (2) i levern periferi, de novo-genererade galla trummor var mycket plågsam. Dessa två faktorer kombinerades för att ge en nästan normal gallsystem volym, trots den onormala arkitekturen. Dessutom upptäckte DUCT onormal galla trumman förgrening som inträffade oberoende av portal ven förgrening och galla kanaler bildar anslutande broar mellan två portal vener9. Dessa fenotyper skulle vara omöjliga att upptäcka i enda harts gjutning och kan misstolkas i 2D histologiska avsnitt som galla trumman spridning. DUCT tillhandahåller således data som beskriver 3D-arkitekturen för två rörformiga nätverk på hela organ- eller lobnivå med möjlighet till kvalitativ och djupgående kvantitativ analys. DUCT kan vara en ny standard för postnatal leverutveckling och leverregenereringsanalyser i olika djurmodeller.

Orgelhartsgjutning är en teknik som går tillbaka till 1600-talet1. Ett av de första exemplen på modern hartsgjutning utfördes på den mänskliga levern från en obduktion. Intrahepatic galla kanaler fylldes med ett kontrastmedel blandat med gelatin, följt av imaging med en röntgen CT scan2. Syftet med DUCT-tekniken är att visualisera, digitalisera och analysera två tubulära hartsgjutna nätverk, tillsammans, i 3D.
DUCT bygger på omfattande befintlig kunskap om ensystems leverhartsgjutning3,4,5,6,7,8 och sträcker sig till samtidig 3D-visualisering och analys av två system9. DUCT avancerad enkelhartsgjutning till dubbel hartsgjutning genom att blanda två radiopaque hartser av olika kontrast och injicera dessa hartser i två olika nätverk, särskilt den gemensamma gallgången och portalvenen. DUCT kan appliceras på unga postnatala möss med reproducerbara resultat redan efter födseln dag 15 (P15). Jämfört med mikroskopibaserade avbildningstekniker är den största fördelen att DUCT är snabbare, antikroppsfri och att autofluorescens av levervävnad inte stör avbildningen. Vidare tillhandahåller DUCT kvantitativa data som beskriver lumeniseringsstatus, intern diameter, nätverksanslutning och perfusion. Differentiering mellan förekomsten av lumenbildande celler och deras de facto morfogenes i rör är avgörande för att analysera organ där dukulära celler är närvarande men inte bildar rör, som kan vara fallet i Alagille syndrom10. Den största nackdelen med DUCT är den begränsade penetrationen av hartset, som är trögflytande och inte går in i rör med liten kaliber (<5 μm). DUCT kan appliceras för alla rörformiga strukturer efter bestämning av injektionsingången, såsom kranskärlens och venösa cirkulationssystem, luftvägarna, den extrahepatiska gallgången eller lymfkärlen. Det skulle därmed kunna underlätta hela organarkitektur analys av andra vävnader såsom lungor och bukspottkörtel.
MicroCT-segmenterade bilder kan bearbetas med hjälp av kommersiellt tillgängliga bildbehandlingsprogram, till exempel ImageJ, eller specialskrivna pipelines (t.ex. MATLAB). Den hartsinsprutade levern kan analyseras kvalitativt för nätverksexpansion och anslutning eller kvantitativt för volym, längd, förgrening, tortuositet hos ett enda system och interaktionen mellan två system som avståndet mellan två system eller branchpointberoende (förgrenar sig system 1 i närheten av system 2-förgrening?). DUCT-rörledningen som omfattar hartsinjektion, microCT-skanning och CT-datasegmentering, i kombination med detaljerad kvantitativ analys av arkitektoniska mekanismer i två rörsystem, kan ge en standard för helleveranalys i djurmodeller.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL SafeSeal micro tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72.706</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 G butterfly needle with tubing</td>
			<td>BD bioscience</td>
			<td>367283</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G needle</td>
			<td>BD bioscience</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G needle</td>
			<td>BD bioscience</td>
			<td>305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Top-Bio</td>
			<td>P045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzyl alcohol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>108006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzyl benzoate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B6630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 50 mL tubes</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>CLS430829-500EA</td>
			<td>polypropylene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Medicarier</td>
			<td>60406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection Microscope</td>
			<td>Leica Camera AG</td>
			<td></td>
			<td>Leica M60</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70%</td>
			<td>VWR</td>
			<td>83801.41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon tube 15 mL</td>
			<td>Verkon</td>
			<td>331.850.084.006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11051-10</td>
			<td>Fine Graefe 10 cm curved</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps straight</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11050-10</td>
			<td>Fine Graefe 10 cm straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F8775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GE Phoenix v|tome|x L 240</td>
			<td>Waygate Technologoies</td>
			<td></td>
			<td>micro computed tomography scanner</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#39; Balanced Salt Solution</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14025092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Leo Pharma</td>
			<td>B01AB01</td>
			<td>5000 IE/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolfurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>FDG9623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11413413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MICROFIL</td>
			<td>Flowtech</td>
			<td>MV-122</td>
			<td>synthetic resin yellow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MICROFIL</td>
			<td>Flowtech</td>
			<td>MV-120</td>
			<td>synthetic resin blue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MICROFIL</td>
			<td>Flowtech</td>
			<td>MV-diluent</td>
			<td>clear resin diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette</td>
			<td>Verkon</td>
			<td>130.690.424.503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic pump</td>
			<td>AgnThos</td>
			<td>010.6131.M20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phoenix datos|x 2.0 software</td>
			<td>Baker Hughes</td>
			<td></td>
			<td>CT data reconstruction software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rocker</td>
			<td>VWR</td>
			<td>444-0142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk suture</td>
			<td>AgnThos</td>
			<td>14757</td>
			<td>Black silk, 4-0, sterile, 100 m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin scissor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-09</td>
			<td>Iris straight tip 9 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring scissor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-03</td>
			<td>Vannas micro, straight tip 2 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1 mL Luer</td>
			<td>BD bioscience</td>
			<td>303172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing PE10</td>
			<td>BD bioscience</td>
			<td>427401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing PE50</td>
			<td>BD bioscience</td>
			<td>427411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VG Studio MAX 3.3 software</td>
			<td>Volume Graphics GmbH</td>
			<td></td>
			<td>CT data processing and analysis software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

duct: double resin casting followed by micro-computed tomography for 3d liver analysis

Levern är det största inre organet hos människor och möss, och hög autofluorescens utgör en betydande utmaning för att bedöma organets tredimensionella (3D) arkitektur på helorgansnivå. Leverarkitektur kännetecknas av flera förgrenande lumeniserade strukturer, som kan fyllas med harts, inklusive kärl- och gallträd, vilket etablerar ett mycket stereotypt mönster i den annars hepatocytrika parenkym. Detta protokoll beskriver rörledningen för att utföra dubbelhartsgjutning mikro-datortomografi, eller "DUCT". DUCT innebär att injicera portalvenen och den gemensamma gallgången med två olika radiopaque syntetiska hartser, följt av vävnad fixering. Kvalitetskontroll genom att rensa en lob, eller hela levern, med ett optiskt clearingmedel, möjliggör förkontroll av lämpligt injicerade prover. I den andra delen av DUCT-rörledningen kan en lob eller hela levern användas för mikro-datortomografi (microCT) skanning, (semi-)automatiserad segmentering och 3D-rendering av portalens venösa och gallnät. MicroCT resulterar i 3D-koordinatdata för de två hartserna som möjliggör kvalitativ såväl som kvantitativ analys av de två systemen och deras rumsliga relation. DUCT kan appliceras på postnatal och vuxen muslever och kan vidare utvidgas till andra rörformiga nätverk, till exempel kärlnät och luftvägar i lungorna.

Vad man ska göra Framgångsrik dubbelhartsinjektion uppnås när både intrahepatic gallgångarna och portalvenvaskulaturen är välfyllda. Som ett steg för kvalitetskontroll möjliggör röjning av en lob (till exempel den vänstra sidoloben) verifiering av en framgångsrik injektion, följt av avbildning av lober av intresse. Den optiskt rensade loben kan skannas senare med hjälp av microCT; därför är det möjligt att optiskt rensa hela levern. I väl injicerad muslever bör portalvenvaskulaturen fyllas med harts tills leverperisfären och hartset ska vara synliga i sidogrenar (figur 4), och denna arkitektur återerövras troget i mikroCT skannade och segmenterade data. Vidare bör väl injicerade intrahepatiska gallgångar vara synliga bredvid huvudportalvengrenarna som sträcker sig nästan till periferin, och harts bör vara synligt i de stora sidogrenarna. Om kontrollloben klarar kvalitetskontrollen kan loberna (inklusive den optiskt rensade) skannas med microCT. Resultatet av segmenterade data från en välinsprutad lever visas för en P15-mus (figur 4A, B) och en vuxen mus (figur 4C, D).
Vad man inte ska göra Intakt levervävnad är en förutsättning för framgångsrik injektion. Var extra försiktig när du skär bukhålan och membranet för att inte oavsiktligt hacka levervävnaden. Om det finns fysiska skador på levern under denna procedur är det mycket troligt att hartset läcker ut under portalveninjektion (figur 5A). Det är inte möjligt att uppnå en bra injektion av kärlsystemet om levern är fysiskt skadad.
Ett av de vanliga misstagen är att underfylla levern med harts som kan leda till utmaningar för visualisering eller analys. En av orsakerna till systemets underfyllning är hartshärdning i förtid i nålen eller spetsen på slangen innan injektionen är klar (figur 5B, blå pilspetsar, fästen visar stora bubblor). En bra praxis är att använda en injektionsuppsättning per djur och arbeta snabbt efter att härdningsmedlet har tillsatts hartset. Om hartset härdar under injektionen (som kan observeras av ett halvfyllt system, här exemplifierat med en halvfylld portalvenvaskulatur) ta bort slangen, skär spetsen på slangen (alltid diagonalt för att skapa en fasad spets) och tryck kolven. Om harts börjar droppa igen, sätt försiktigt in slangen igen och säkra den med suturen. Om hartset har härdat i nålen, byt ut slangen helt, fyll den med harts (undvik bubblor), sätt försiktigt in slangen igen och säkra den med suturen. Det kan vara utmanande att byta slangen, särskilt hos unga postnatala möss <P30, eftersom vävnaden är mer bräcklig. En annan orsak till dålig hartsfyllning av portalvenvaskulatur kan vara otillräcklig transkardiär perfusion (figur 5C, blå pilspetsar betecknar blod synligt i terminalgrenar). Detta kan observeras när kärlens spetsar fylls med blod istället för harts. För att undvika detta, se till att portalvenen (utanför levern) inte innehåller något blod före injektionen. Den tredje orsaken till underfylld lever är när slangen sätts in för djupt i levern och går in i en gren mot en av lober. För att förhindra detta, sätt in slangen på minst 0,5 cm från ingången till levern.
Omvänt blir ett eller båda systemen överfyllda med harts (figur 5D). Det är nödvändigt att visuellt övervaka levern under hela injektionen. Gallsystemgjutning med harts är mer utmanande än portalvenhartsgjutning eftersom hartsfyllda kanaler endast är svagt synliga på leverytan, och det är svårt att bedöma när systemet är nästan fullt och när man ska stoppa. När små gula harts prickar uppträder på leverytan (figur 2Ci, blå pilspets), är detta ett tecken på att gallsystemet är helt fyllt och hartset börjar läcka ut ur kanalerna. Mindre hartsläckage kan korrigeras manuellt under mikroCT-datasegmentering (figur 5D, höger paneler).
Om injektionstrycket är för högt kan detta leda till att kärl eller kanaler spricker (figur 5E), irreversibelt skadligt kärl- eller kanalarkitektur. Levern kommer inte att vara lämplig för microCT skanning eller analys. För att undvika överfyllning av harts, optimera rätt volym och tryck som används för injektion i varje musmodell. Vid arbete med möss som har utmanats med en giftig diet, genetisk modifiering eller leverskada som påverkar gall- eller vensystemen, eller leverstelhet, kan injektionstrycket och volymen behöva justeras eftersom volym och tryck som tolereras kan skilja sig från möss av vildtyp. Detta protokoll beskriver den manuella injektionen av de två systemen, men det är möjligt att ansluta sprutan till en pump för att standardisera injektionstrycket. Bubblor är en annan mycket vanlig injektionsartefakt som leder till gles fyllning av rörformiga nätverk (figur 5F-H, blå pilspetsar). För att undvika bubbelbildning, se till att sprutan och slangen inte innehåller några bubblor, är helt fyllda med harts och hartset droppar från slangspetsen före injektion. Små bubblor som visas som negativa områden på microCT-data kan korrigeras manuellt under efterbehandlingssteg, även om detta är mödosamt.
Färskt är det bästa Att använda färskt gult harts är en avgörande faktor som avsevärt påverkar kontrasten mellan de två hartserna och mikroCT-datasegmenteringen. När det nyöppnade hartset används (figur 6A) finns det en tydlig skillnad i kontrast mellan de gula hartsinsprutade gallgångarna (ljusvita) och de gröna hartsinsprutade portalvenerna (ljusgrå). Lever som injiceras med färskt harts bearbetas enkelt med hjälp av automatiserad global tröskel. Med långvarig lagring fälls hartset ut och kontrasten minskar. Efter 3 månaders lagring kan kontrasten fortfarande vara tillräcklig för att skilja portalvenen från gallgången (figur 6B), men nederbörd påverkar blandningen av de två hartserna, vilket är synligt som en heterogen opacitet i den fyllda portalvenen (Fig 6B, blå pilspetsar). Heterogen kontrast påverkar den automatiska tröskningen negativt och kräver manuella korrigeringar, vilket ökar bearbetningstiden. Om hartset är äldre än sex månader har kontrasten försämrats till en punkt där det inte är möjligt att skilja den gulinsprutade gallgången från den gröninsprutade portalvenen enbart baserat på deras kontrast (figur 6C). I detta fall måste gallgången och portalvenen segmenteras manuellt baserat på deras diameter och position i hilarregionen och följas manuellt genom hela mikroCT-data. Denna procedur är extremt tidskrävande och undviks bäst.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62941/62941fig01.jpg"> Bild 1: Injektionsset för hartsgjutning. (A) Injektionsset #1 består av en 30 G nål och PE10 slangar som är ~ 30 cm lång. Injektionsset #2 består av en 23 G nål och PE50 slangar ~ 30 cm långa. (B) Slangspetsen sträcks och skärs i vinkel för att skapa en fasad spets. Linjalen i A och B är en centimeter linjal, med större steg på 1 cm, mellanliggande steg på 5 mm och mindre steg på 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62941/62941fig01large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62941/62941fig02.jpg"> Bild 2: Diagram över dubbelt hartsgjutningsflöde. (A) Schemat som visar det murin venösa cirkulationssystemet och hjärtat med markerat höger atrium, som bör skäras bort före perfusion, och den vänstra ventrikeln i vilken nålen ska sättas in för perfusion för att tvätta bort blodet från cirkulationssystemet. Den sämre vena cava bör avskiljas under njurarna för att lindra vaskulär tryck. B) Flödesschema för insprutningsflöde för gallgångskanalharts. i) Zoombild av (A) som visar var IVC ska avskiljas. (ii) Bild föreställande den gemensamma gallgången (gul prickad linje) från lever hilar regionen till sfinktern i Oddi (svarta pilspetsar), med sutur tråd under den rensade gemensamma galla kanalen. iii) Lämplig position för lös överhandsknut runt gemensam gallgång. iv) Den gula prickade linjen och de svarta pilspetsarna märker Oddis sfinkter, vilket visar den sneda vinkeln för snitt och hur öppningen ska se ut efter det sneda vinkelsnittet. v) Schematisk som visar orienteringen av PE10-slangens fasadöppning (uppåt) vid införing. vi) Utseende av gult harts som injiceras. harts bör lätt passera den löst bundna knuten. IVC, sämre vena cava; CBD, vanlig gallgång. (C) Portal venharts injektion flöde diagram. i) Den gröna prickade linjen markerar portalvenen från hilarregionen. De blå pilspetsarna märker det överfyllda gallsystemet. ii) Lämplig plats för lös överhandsknut runt portalvenen. iii) Schematisk som visar avfasningsöppningen (uppåt) vid införandet. iv) Leverutseende vid injektion av grönt harts och gult harts. notera det hartsfyllda blodkärlet i leverperifären. PV, portalven. Figur 2A skapades med Biorender.com. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62941/62941fig02large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av den här figuren.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62941/62941fig03.jpg"> Figur 3: Mikro-CT-databehandling i volymgrafikprogramvara. (A) Ytbestämning, i) överskattat isovärde (aktuell förhandsgranskning av urvalet visas i gul färg), ii) underskattat isovärde, iii) optimalt val av isovärde för korrekt ytbestämning av portalvener och gallgångar. (B) Uppdelning av intresseområde (ROI) som skapas genom ytbestämning, i) ange värdet i dialogfönstret tillräckligt högt för att endast ett segment (det största) ska finnas kvar, ii) i gula ramar visas de mindre (uteslutna) partiklarna. C) Ytutjämning av data, i) utjämningsfunktionen finns på den vänstra panelen, ii) ställ in utjämnande styrka på 1 (max 2) och skapa ny utjämnad ROI, iii) utjämnade data. D) Uppdelning av enskilda rörsystem, i) i) i ytbestämningsfunktionen fastställs isovärdet så att endast gallsystemet ingår i urvalet (aktuell förhandsgranskning av urvalet visas i gul färg), ii) markera avkastningen för båda systemen och ROI för endast gallsystemet och subtrahera gallsystemet ROI från ROI i båda systemen. iii) Portalven som visas i grått, det gallsystem som visas i grönt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62941/62941fig03large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av den här figuren.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62941/62941fig04.jpg"> Figur 4: Välinsprutade gallgångssystem (BD) och portalvensystem (PV) (A) Optiskt rensad höger medialalob (RML) av postnatal dag 15 (P15) lever injicerad med två hartser i de två systemen. Skalstång 1 mm. (B) 3D-rendering av P15 RML som visas i A) som visar portalvenvaskulatur i vitt och gallsystem i grönt. Skalstång 1 mm. (C) Optiskt rensad RML av vuxen lever injiceras med två hartser i de två systemen. Skalstång 1 mm. (D) 3D-rendering av RML för vuxna som visas i C och som visar portalvenvaskulatur i vitt och gallsystem i grönt. H = hilar, P = perifer. Skalstång 1 mm. Panelerna A, B, D är anpassade med tillstånd från Hankeova m.fl.9. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62941/62941fig04large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av den här figuren.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62941/62941fig05.jpg"> Figur 5: Vanliga utmaningar med dubbla hartsleverinjektioner. (A) Bilden föreställer en lever som oavsiktligt stals under den första öppningen av bukhålan, och hartset läcker genom snittet (blå pilspets). B) Dåligt injicerat portalvensystem på grund av hartshärdning. Blå pilspetsar märker tomma terminalgrenar och röda hakparenteser märker stora bubblor. Skalstång 1 mm. (C) Dåligt injicerat portalvensystem på grund av dålig transkardiär perfusion. Blå pilspetsar märker blod synligt i terminalgrenarna. Skalstång 1 mm. (D) Överfyllt gallsystem manifesterat av isolerade bollar av harts. De vänstra panelerna visar den optiskt rensade levern, och de högra panelerna visar den 3D-mikroCT-renderade bilden. De blå prickade konturerna visar inzoomningsregioner. De svarta pilspetsarna märker en del av levern som skadades under den optiska clearingen efter microCT-skanning. Skalstång 1 mm. (E) Högt tryck under hartsinjektion kan orsaka bristning av portalvenen (djuret i denna panel bär en Jag1H268Q-mutation), markerad med blå pilspetsar. Skalstång 1 mm. (F) Bubblor i hartset under portalveninjektion (blå pilspetsar) och (G) gallsysteminjektion (blå pilspets), skalstång 1 mm . (H) MicroCT-skanning av bubblor (blå pilspets), dåligt fyllda terminalgrenar (röda fästen) och hartsläckage (gul pilspets), skalstång 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62941/62941fig05large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna figur.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62941/62941fig06.jpg"> Figur 6: Differentialhartskontrast. (A) Nyöppnat gult harts ger tillräcklig kontrast för att särskilja hartsinsprutade portalvener (grå) och gallgångar (vita). B) Tre månaders lagring av gult harts leder till utfällning av hartset, vilket resulterar i heterogen opacitet (gråvit portalven, blå pilspets). C) Långvarig lagring (>6 månader) av gult harts minskar kontrasten mellan portalvenen (grå) och gallgångarna (grå). Skalstreck 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62941/62941fig06large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>

Watch this Scientific Journal Video about DUCT: Double Resin Casting followed by Micro-Computed Tomography for 3D Liver Analysis at JoVE.com

DUCT: Double Resin Casting followed by Micro-Computed Tomography for 3D Liver Analysis

Dubbelhartsgjutning mikro-datortomografi, eller DUCT, möjliggör visualisering, digitalisering och segmentering av två rörsystem samtidigt för att underlätta 3D-analys av organarkitektur. DUCT kombinerar ex vivo injektion av två radiopaque hartser följt av mikro-datortomografi skanning och segmentering av tomographic data.

DUCT: Dubbelhartsgjutning följt av mikroberäkningstomografi för 3D-leveranalys

The liver is the biggest internal organ in humans and mice, and high auto-fluorescence presents a significant challenge for assessing the ...

Denna metod gör det möjligt för oss att analysera, visualisera och kvantifiera lever vaskulär och gallsystem arkitektur i 3D. Vi kan nu bättre förstå de rumsliga aspekterna av leversjukdom och regenerering. Den största fördelen med denna teknik är att den inte förlitar sig på förekomsten av antikroppar eller fluorescensavbildning.Det möjliggör också direkt visualisering av vilka nätverk som är korrekt lumeniserade. Denna metod är lämplig för analys av rörsystem, därför är forskning av blodkärl, gallgångar och luftvägar idealiska områden. Vi använde DUCT för att förstå de strukturella förändringarna relaterade till gallregenerering.Innan du injicerar harts i musens gallsystem, börja flytta tarmarna och bukspottkörteln till vänster sida av musen, med hjälp av en bomullspinne fuktad med PBS för att exponera den gemensamma gallgången och portalvenen. Gör sedan ett litet tvärgående snitt i den sämre vena cava. Vänd den ventrala sidan av levern mot hjärtat för att exponera den viscerala ytan och hilarregionen och lokalisera den gemensamma gallgången som löper från hilarregionen över bukspottkörteln och in i tarmarna vid Oddis sfinkter.Använd de raka tångarna för att rensa det omgivande vävnadsområdet på cirka fem millimeter från den gemensamma gallgången. Sedan, genom att placera en silkes suturtråd under den gemensamma gallgången, knyt en lös överhandsknut runt den gemensamma gallgången. Håll vårsaxen platt mot den gemensamma gallgången för att göra ett snett snitt på den gemensamma gallgången på den plats där den gemensamma gallgången kommer in i bukspottkörteln och tarmarna bredvid Oddis sfinkter.Blanda sedan en milliliter av det gula hartset med 50 mikroliter av MV-härdningsmedlet och fyll en en milliliter luerspruta med hartshärdningsmedlet. Anslut den fyllda sprutan med slangsetet ett och tryck på kolven för att fylla slangen tills hartshärdningsmedlets blandning droppar från slangspetsen. Använd tången för att räta ut området runt det gemensamma gallgångssnittet.Innan du för in slangen i öppningen i den gemensamma gallgången med den längsta kanten av den fasade spetsen nedåt mot gallgångens dorsala sida. Dra sedan åt sidentrådknuten för att säkra slangen inuti den gemensamma gallgången. Efter att ha injicerat hartset i den gemensamma gallgången, observera gallblåsan och de enskilda leverloberna.Massera levern med en PBS-våt bomullspinne för att hjälpa till att sprida hartset lika. Hartsfyllda gallgångar terminalgrenar kommer att vara svagt synliga vid leverytan. Sluta injicera hartset när prickar av harts uppträder vid leverns yta eller när motståndet är uppfyllt.Ta sedan bort slangen genom att dra ut ur den gemensamma gallgången och dra snabbt åt sidenknuten med tång för att förhindra att hartset läcker ut. Skär de lösa ändarna av silkessyssen, så att de inte stör portalveninjektionen. Innan du injicerar hartset i portalvenen, rensa portalvenen från dess omgivande vävnad cirka två centimeter från dess inträde till levern, med hjälp av raka tångar.Placera sedan silkessysstningen under portalvenens rensade område för att knyta en lös överhandsknut. I portalvenen distala till levern, gör ett längsgående snitt innan du binder knuten. Förbered sedan den gröna härdningsmedlet i sprutan och fyll slangen med blandningen som visats tidigare.Använd tången för att räta ut portalvenen genom att dra den omgivande vävnaden mot baksidan innan du sätter in slangen med den längsta kanten av den fasade spetsen mot kärlets dorsala sida. Dra åt silkestråden för att säkra slangen i portalvenen. Efter att ha injicerat hartset i portalvenen, observera blodkärlen som fylls med harts och massera levern med en PBS-fuktad bomullspinne för att hjälpa till att sprida hartset.När alla blodkärl är fyllda, dra ut slangen från portalvenen och dra snabbt åt silkeknuten med tång för att förhindra att hartset läcker ut. För mikro-datortomografi eller MicroCT skanning av den dissekerade levern från musen, placera rätt mediala leverloben i ett 15 milliliter koniskt rör och fyll röret med 1% agarose gel till ungefär två tredjedelar av rörets totala volym för att minimera oönskad provrörelse under MicroCT-mätning. Montera det koniska röret på 15 milliliter med provet på rotationssteget på en CT-enhet.Låt röret termiskt anpassa sig till mätkammaren i minst en timme. När provet är termiskt anpassat centrerar du det i synfältet eller FOV, optimerar sedan källprovet och provdetektoravstånden, eller SSD och SDD för att nå tillräcklig voxelupplösning. När parametrarna har ställts in startar du en CT-mätning.Använd dedikerad tomografisk rekonstruktionsprogramvara för att rekonstruera CT-data. Om du vill analysera CT-data läser du in filerna genom att markera fil, import och kommando. Använd ytbestämningsfunktionen på den övre panelen för att segmentera hartset i data med hjälp av global trösklar.I dialogfönstret bestämmer du tröskelvärdet med histogramutvärderingen genom att ställa in positionen för den röda isovärdelinjen till segment endast de hartsfyllda kärlen. På den vänstra panelen väljer du modulen skapa ROI från volym eller CAD eller nät för att skapa en region av intresse eller ROI för de hartsfyllda kärlen. I dialogfönstret använder du alternativet skapa ROIs från heldragna för att välja och bekräfta namnet på den bearbetade volymen.Eliminera felaktig segmentering av bruskluster i bakgrundsregionen för denna ROI. Markera AVKASTNINGEN på den högra panelen genom att högerklicka och välja moduldelnings-ROI. I dialogfönstret ställer du in voxelparametern för minsta volym för att utesluta alla bruspartiklar.Parametervärdet är experiment- och databeroende och optimerat för varje exempel som ska analyseras. På den vänstra panelen använder utjämningsmodulen för att skapa släta, kontinuerliga och solida kanalmasker utan artefakter, som närvaron av luftbubblor eller hartsläckage i hartskostnaden ROI. Skapa en separat ROI som beskrivits tidigare för systemet fyllt med det mer absorptiva hartset som det gula hartset som används för den gemensamma gallkanalinjektionen med högre intensitetsvärden i CT-data.Markera och harts maskera den nya ROI genom att högerklicka innan du väljer subtrahera ROM och sedan subtrahera den nya AVKASTNINGEN från hartsmasken ROI för att skapa en ny ROI för det återstående rörsystemet. Exportera de resulterande ROM:erna för båda rörsystemen i olika format baserat på operatörsreferenser för efterföljande bearbetning i olika program. Bearbeta ytterligare de resulterande ROIs i en volymgrafikprogramvara för att exportera den slutliga visualiseringen i form av en bild eller en video.I denna studie uppnåddes en framgångsrik dubbelhartsinjektion med välfyllda intrahepatic gallgångare och portal ven vaskulatur. Den representativa analysen illustrerar resultatet av segmenterade data från en väl injicerad lever för en P15-mus och en vuxen mus där harts är synligt i sidogrenarna. I det typiska exemplet på misslyckad injektion resulterade fysiska skador på levern under det kirurgiska ingreppet i att hartset läckte.Även för tidig härdning av hartset i nålen eller spetsen på slangen före injektionen, och den otillräckliga transkardiala perfusionen orsakade systemet underfyllning. Det mindre hartsläckaget kan korrigeras manuellt under MicroCT-datasegmentering. Högt insprutningstryck kan brista kärl eller kanaler och irreversibelt skada kärl- eller kanalarkitekturen.Dessutom var bubblorna en annan mycket vanlig injektion artefakt som ledde till den glesa fyllningen av rörformiga nätverk. När nyöppnat harts användes observerades en tydlig skillnad i kontrasten mellan de gula hartsinsprutade gallgångarna och gröna hartsinsprutade portalvener. Efter tre månaders lagring var kontrasten tillräcklig för att skilja portalvenen från gallgången.Nederbörden påverkade dock blandningen av de två hartserna, som var synliga som en heterogen opacitet i den fyllda portalvenen. När hartset var äldre än sex månader försämrades kontrasten till en punkt där det var omöjligt att skilja den gulinsprutade gallgången från den gröninsprutade portalvenen, enbart baserat på deras kontrast. Det är viktigt att göra ett snett snitt i den gemensamma gallgången.Annars blir det mycket svårt att sätta in slangen. DUCT tekniken upplysa nya arkitektoniska mekanismer för galla regenerering i en kliniskt relevant modell med distinkta funktioner i hilar och perifera lob regioner.

Research

JoVE Journal

Medicine

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

Retrograd perfusion och påfyllning av mus kranskärlen som förberedelse för Micro datortomografi Imaging

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

3-dimensionell hartsgjutdel och avbildning av mus portvenen eller Intrahepatisk Bile Duct System

In  organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is  indispensable for proper physiological function, and the formation and  ...

Osmotic Drug Delivery to Ischemic Hindlimbs and Perfusion of Vasculature with Microfil for Micro-Computed Tomography Imaging

Osmotisk Drug Delivery ischemisk bakben och perfusion av kärlsystemet med Microfil för Micro-Datortomografi Imaging

Preclinical research in animal models of peripheral arterial disease plays a vital role in testing the efficacy of therapeutic agents designed to ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Bedömning av livskraft Human Fat Injektion i nakna möss med Micro-datortomografi

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

Bile Duct Tion hos möss: Induktion av inflammatoriska leverskada och fibros av obstruktiv Kolestas

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Using Micro-computed Tomography for the Assessment of Tumor Development and Follow-up of Response to Treatment in a Mouse Model of Lung Cancer

Använda Micro-datortomografi för bedömning av tumörutveckling och uppföljning av behandlingssvar i en musmodell av lungcancer

Lung cancer is the most lethal cancer in the world. Intensive research is ongoing worldwide to identify new therapies for lung cancer. Several mouse ...

Combined Near-infrared Fluorescent Imaging and Micro-computed Tomography for Directly Visualizing Cerebral Thromboemboli

Kombinerad nära infraröda fluorescerande Imaging och Micro-datortomografi för direkt Visualisera Cerebral tromboemboli

Direct thrombus imaging visualizes the root cause of thromboembolic infarction. Being able to image thrombus directly allows far better investigation of ...

Testing Acetylcholine Followed by Adenosine for Invasive Diagnosis of Coronary Vasomotor Disorders

Testa acetylkolin följt av adenosin för invasiv diagnos av koronar vasomotoriska störningar

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary ...

Tissue Preparation Techniques for Contrast-Enhanced Micro Computed Tomography Imaging of Large Mammalian Cardiac Models with Chronic Disease

Vävnadsberedningstekniker för kontrastförbättrad mikrodatortomografiavbildning av stora däggdjurshjärtmodeller med kronisk sjukdom

Structural remodeling is a common consequence of chronic pathological stresses imposed on the heart. Understanding the architectural and compositional ...

HE Staining and Micro-CT to Evaluate Murine Trabecular Bone Microarchitecture

Trabecular Bone Microarchitecture Evaluation in an Osteoporosis Mouse Model

An Economic and Efficient Method for Quantitative Evaluation of Bone Microarchitecture in a Murine Osteoporosis Model (Video) | JoVE

Utvärdering av trabekulär benmikroarkitektur i en osteoporosmusmodell

Bone microstructure refers to the arrangement and quality of bone tissue at the microscopic level. Understanding the bone microstructure of the skeleton ...