Name: rodent heart and brain tissue preparation for digital macro photography after ischemia-reperfusion
Uploaded: 2022-02-01T14:10:00
Duration: 6 min 27 s
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लेखकों को अनुदान समझौते के तहत यूरोपीय संघ के क्षितिज 2020 अनुसंधान और नवाचार कार्यक्रम द्वारा समर्थित किया गया था, कोई 857394 नहीं, प्रोजेक्ट FAT4BRAIN।

<ol>
	<li>Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+heart+perfusion:+the+Langendorff+technique+of+isolated+heart+perfusion.">Retrograde heart perfusion: the Langendorff technique of isolated heart perfusion.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50 (6), 940-950 (2011).</li><li>Botker, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+guidelines+for+rigor+and+reproducibility+in+preclinical+and+clinical+studies+on+cardioprotection.">Practical guidelines for rigor and reproducibility in preclinical and clinical studies on cardioprotection.</a> Basic Research in Cardiology. 113 (5), 39 (2018).</li><li>Uluc, K., Miranpuri, A., Kujoth, G. C., Akture, E., Baskaya, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+cerebral+ischemia+model+by+endovascular+suture+occlusion+of+the+middle+cerebral+artery+in+the+rat.">Focal cerebral ischemia model by endovascular suture occlusion of the middle cerebral artery in the rat.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (48), e1978 (2011).</li><li>Zvejniece, L., Svalbe, B., Liepinsh, E., Pulks, E., Dambrova, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sensorimotor+and+cognitive+deficits+in+rats+following+90-+and+120-min+transient+occlusion+of+the+middle+cerebral+artery.">The sensorimotor and cognitive deficits in rats following 90- and 120-min transient occlusion of the middle cerebral artery.</a> Journal of Neuroscience Methods. 208 (2), 197-204 (2012).</li><li>Liepinsh, E., Kuka, J., Dambrova, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Troubleshooting+digital+macro+photography+for+image+acquisition+and+the+analysis+of+biological+samples.">Troubleshooting digital macro photography for image acquisition and the analysis of biological samples.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 67 (2), 98-106 (2013).</li><li>Kolwicz, S. C., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+cardiac+function+and+energetics+in+isolated+mouse+hearts+using+31P+NMR+spectroscopy.">Assessment of cardiac function and energetics in isolated mouse hearts using 31P NMR spectroscopy.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (42), e2069 (2010).</li><li>Herr, D. J., Aune, S. E., Menick, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+and+assessment+of+ischemia-reperfusion+injury+in+Langendorff-perfused+rat+hearts.">Induction and assessment of ischemia-reperfusion injury in Langendorff-perfused rat hearts.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (101), e52908 (2015).</li><li>Liepinsh, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+L-carnitine+biosynthesis+and+transport+by+methyl-gamma-butyrobetaine+decreases+fatty+acid+oxidation+and+protects+against+myocardial+infarction.">Inhibition of L-carnitine biosynthesis and transport by methyl-gamma-butyrobetaine decreases fatty acid oxidation and protects against myocardial infarction.</a> British Journal of Pharmacology. 172 (5), 1319-1332 (2015).</li><li>Nakamura, K., Al-Ruzzeh, S., Ilsley, C., Yacoub, M. H., Amrani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+effect+of+cerivastatin+on+cardiac+regional+ischemia+in+a+rat+model+mimicking+off-pump+coronary+surgery.">Acute effect of cerivastatin on cardiac regional ischemia in a rat model mimicking off-pump coronary surgery.</a> Journal of Cardiac Surgery. 20 (6), 507-511 (2005).</li><li>Li, Q., Morrison, M. S., Lim, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+a+cardiac+anchor+to+refine+myocardial+infarction+surgery+in+the+rat.">Using a cardiac anchor to refine myocardial infarction surgery in the rat.</a> Lab Animal. 39 (10), 313-317 (2010).</li><li>Wu, Y., Yin, X., Wijaya, C., Huang, M. H., McConnell, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+myocardial+infarction+in+rats.">Acute myocardial infarction in rats.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (48), e2464 (2011).</li><li>Vavers, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neuroprotective+effects+of+R-phenibut+after+focal+cerebral+ischemia.">The neuroprotective effects of R-phenibut after focal cerebral ischemia.</a> Pharmacological Research. 113, 796-801 (2016).</li><li>Acin-Perez, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+approach+to+measure+mitochondrial+respiration+in+frozen+biological+samples.">A novel approach to measure mitochondrial respiration in frozen biological samples.</a> EMBO Journal. 39 (13), 104073 (2020).</li><li>Kloner, R. A., Darsee, J. R., DeBoer, L. W., Carlson, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+pathologic+detection+of+acute+myocardial+infarction.">Early pathologic detection of acute myocardial infarction.</a> Archives of Pathology &amp; Laboratory Medicine. 105 (8), 403-406 (1981).</li></ol>

लेखकों ने घोषणा की है कि उनके पास हितों का कोई संघर्ष नहीं है।

दशकों से, हृदय और मस्तिष्क के ऊतकों के नमूनों की फोटोग्राफी और विश्लेषण जीवन विज्ञान प्रयोगों का एक महत्वपूर्ण हिस्सा रहा है। विज्ञान और नवाचार की प्रगति महंगे माइक्रोस्कोप के विकास को संचालित करती है जो सुपररिज़ॉल्यूशन में सक्षम है। फोटोमाइक्रोग्राफ़ विस्तृत निर्देशों का पालन करते हुए एक अच्छी तरह से नियंत्रित प्रकाश वातावरण में प्राप्त किए जाते हैं। इसके विपरीत, मैक्रो फोटोग्राफी (1: 2 या अधिक आवर्धन पर) अक्सर अनुचित इमेजिंग सेटअप का उपयोग करके अनियंत्रित प्रकाश वातावरण में किया जाता है। अक्सर, नमूना तैयारी और कैमरा सेटअप की तकनीकों को काफी हद तक अनुकूलित करने की आवश्यकता होती है। नतीजतन, सीमित गुणवत्ता की मैक्रो तस्वीरें व्यापक रूप से वैज्ञानिक पत्रिकाओं में प्रकाशित की गई हैं। अपर्याप्त छवि संकल्प और इसके विपरीत आईआर अध्ययनों में सटीक छवि परिमाणीकरण की संभावनाओं को सीमित करते हैं।
myocardial1,2 और brain3,4 infarctions की प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं का विस्तार से वर्णन किया गया है। इस अध्ययन का उद्देश्य रोधगलन प्रयोगों के बाद कृंतक हृदय और मस्तिष्क के ऊतकों के नमूनों की फोटोग्राफी और मानकीकृत विश्लेषण के लिए एक प्रणाली स्थापित करने के तरीके पर एक चरण-दर-चरण मार्गदर्शिका प्रदान करना है। इसमें ऊतक स्लाइसिंग, धुंधला, और हृदय और मस्तिष्क के नमूनों की मैक्रो फोटोग्राफी शामिल है। ऊतक नमूनों की तैयारी प्रयोग का एक अनिवार्य हिस्सा है, और प्लानिमेट्रिक छवि विश्लेषण परिणाम प्राप्त छवियों की गुणवत्ता पर अत्यधिक निर्भर करते हैं5।
ये विधियां कृंतक ऊतकों में माप और छवि प्लानिमेट्रिक विश्लेषण करने के लिए विशेष रूप से उपयोगी हैं और सामान्य वैज्ञानिक मैक्रो फोटोग्राफी के लिए मूल्य की हो सकती हैं। इसके अलावा, छवियों की उच्च गुणवत्ता और स्थिरता डिजिटल तस्वीरों के स्वचालित विश्लेषण को निष्पादित करने की अनुमति देती है, जो समय बचाने, उपयोगकर्ता इनपुट से बचने और छवि विश्लेषण के दौरान त्रुटियों या पूर्वाग्रह के जोखिम को कम करने में मदद करती है। इसके परिणामस्वरूप मजबूत और विश्वसनीय डेटा की पीढ़ी होगी और क्लीनिकों में उपन्यास एंटीइस्केमिक उपचारों में प्रीक्लिनिकल खोजों के अनुवाद में वृद्धि होगी।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringe</td>
			<td>Sagimed</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride (TTC)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>298-96-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL syringe</td>
			<td>Sagimed</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL syringe</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adult Rat Brain Slicer Matrix</td>
			<td>Zivic Instruments</td>
			<td>BSRAS001-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aortic cannula for mouse heart</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>SP3787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aortic cannula for rat heart</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>SP3786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate, &#8805;99%</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>207780010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover Glass Forceps, Angled</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11073-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic forceps</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>13008-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoya 62 mm alpha Circular Polarizer Filter</td>
			<td>Hoya</td>
			<td>HOCPA62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride hexahydrate</td>
			<td>Penta</td>
			<td>16330-31000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene Blue</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>M9140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Heart Slicer Matrix</td>
			<td>Zivic Instruments</td>
			<td>HSMS005-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene plastic tubing</td>
			<td>BD Intramedic</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride for biochemistry</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>418205000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate, monobasic, &#8805;99%</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>205920025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Heart Slicer Matrix</td>
			<td>Zivic Instruments</td>
			<td>HSRS001-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors curved with blunt ends</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>14013-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors for cleaning heart</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>14058-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Edge Razor Blades</td>
			<td>Zivic Instruments</td>
			<td>BLADE012.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate for biochemistry, 99.5%</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>447100010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Fisher bioreagents</td>
			<td>BP358-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sony Alpha a6000 Mirrorless Digital Camera</td>
			<td>Sony</td>
			<td>ILCE6000</td>
			<td>Can be repalaced by any up-to-date digiatal camera</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sony FE 90 mm F/ 2.8 Macro G OSS</td>
			<td>Sony</td>
			<td>SEL90M28G</td>
			<td>Important, lens should be compatible with camera</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sony SF32UZ SDHC 32 GB Class 10 UHS</td>
			<td>Sony</td>
			<td>2190246141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical blade</td>
			<td>Heinz Herenz Hamburg Germany</td>
			<td>BS2982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo-Shaker</td>
			<td>BioSan</td>
			<td>PST-60HL-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toothed tissue forceps</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>11021-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toothed tissue forceps for cleaning heart</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>11023-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh tray, 70 mL</td>
			<td>Sarsted</td>
			<td>71,99,23,212</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rodent heart and brain tissue preparation for digital macro photography after ischemia-reperfusion

मैक्रो फोटोग्राफी गुणात्मक और मात्रात्मक विश्लेषण करने के लिए उच्च आवर्धन पर विभिन्न ऊतक नमूनों की इमेजिंग के लिए लागू होती है। ऊतक तैयारी और बाद की छवि पर कब्जा ischemia-reperfusion (आईआर) प्रयोग के तुरंत बाद प्रदर्शन किए गए कदम हैं और समय पर तरीके से और उचित देखभाल के साथ प्रदर्शन किया जाना चाहिए। दिल और मस्तिष्क में आईआर-प्रेरित क्षति के मूल्यांकन के लिए, यह पेपर 2,3,5-ट्राइफिनाइल-2एच-टेट्राज़ोलियम क्लोराइड (टीटीसी) -आधारित धुंधला होने का वर्णन करता है, जिसके बाद मैक्रो फोटोग्राफी होती है। वैज्ञानिक मैक्रो फोटोग्राफी के लिए नियंत्रित प्रकाश व्यवस्था और एक उपयुक्त इमेजिंग सेटअप की आवश्यकता होती है। मानकीकृत पद्धति उच्च गुणवत्ता, विस्तृत डिजिटल छवियों को सुनिश्चित करती है, भले ही एक सस्ती अप-टू-डेट डिजिटल कैमरा और मैक्रो लेंस के संयोजन का उपयोग किया जाता है। नमूना तैयारी और छवि अधिग्रहण में उचित तकनीकों और संभावित गलतियों पर चर्चा की जाती है, और छवि गुणवत्ता पर सही और गलत सेटअप के प्रभाव के उदाहरण प्रदान किए जाते हैं। सामान्य गलतियों से बचने के तरीके के बारे में विशिष्ट सुझाव प्रदान किए जाते हैं, जैसे कि ओवरस्टेनिंग, अनुचित नमूना भंडारण, और सबऑप्टिमल लाइटिंग की स्थिति। यह पेपर चूहे के दिल और मस्तिष्क के ऊतकों को टुकड़ा करने की क्रिया और धुंधला करने के लिए उपयुक्त पद्धति दिखाता है और उच्च-रिज़ॉल्यूशन छवि अधिग्रहण के लिए प्रकाश और कैमरा सेटअप और फोटोग्राफी तकनीकों की स्थापना के लिए दिशानिर्देश प्रदान करता है।

चित्रा 3 ए मायोकार्डियल रोधगलन के बाद एक मेथिलीन नीले और टीटीसी-दाग वाले दिल के टुकड़े की एक तस्वीर है, जिसमें इंफार्क्ट आकार (चित्रा 3 बी) के आगे के प्लानिमेट्रिक विश्लेषण के लिए पर्याप्त विवरण और रंग की जानकारी शामिल है। हमने परीक्षण किया कि 24 घंटे के लिए दिल की ठंड दिल के ऊतकों की अखंडता को कैसे प्रभावित करती है (चित्रा 3 सी)। लंबे समय तक ठंड (>1 ज, चित्रा 3 सी) माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन को कम करता है; इस प्रकार, दिल का टीटीसी धुंधला लाल नहीं है, लेकिन पीला गुलाबी है, और परिगलित और व्यवहार्य ऊतकों के बीच की सीमा धुंधली है (चित्रा 3 सी)।
इसके अलावा, नमूनों में प्रतिबिंबों की कमी के लिए दो तरीकों की तुलना की गई थी। विसर्जन सबसे कुशल विधि है और अच्छे विपरीत (चित्रा 4 ए) के साथ विस्तृत छवियों का उत्पादन करती है। दूसरी विधि लेंस से जुड़े ध्रुवीकरण फिल्टर का उपयोग है। ध्रुवीकरण फ़िल्टर भी प्रभावी है; हालांकि, फ़िल्टर थोड़ा संकल्प और छवि के microcontrast (चित्रा 4B) को कम कर देता है। विसर्जन या फ़िल्टर के बिना दिल के टुकड़े की एक उदाहरण छवि (चित्रा 4 सी) में कई प्रतिबिंब होते हैं और आगे के विश्लेषण के लिए उपयुक्त नहीं है।
स्लाइस प्रबंधन (फ्लोटिंग) समस्याओं के कारण मस्तिष्क स्लाइस विसर्जित नहीं होते हैं। प्लानमेट्रिक विश्लेषण में, मस्तिष्क के अप्रभावित (स्वस्थ) पक्ष (चित्रा 5 ए) की तुलना स्ट्रोक-प्रभावित पक्ष (चित्रा 5 बी) के साथ करना महत्वपूर्ण है। मस्तिष्क स्लाइस एक सूखी प्लेट या ट्रे पर प्रबंधित करना आसान होता है, और प्रतिबिंब को हटाने के लिए एक ध्रुवीकरण फ़िल्टर का उपयोग किया जाता है। नीली पृष्ठभूमि के साथ एक ट्रे का उपयोग मस्तिष्क स्लाइस फोटोग्राफी के लिए किया जाता है (पृष्ठभूमि चयन पहले वर्णित 5)।
मैन्युअल कैमरा सेटिंग्स का उपयोग एक्सपोज़र और सफेद संतुलन के पूर्ण नियंत्रण को सुनिश्चित करने के लिए किया गया था। कैमरा सेटिंग्स को उपलब्ध प्रकाश स्रोत के अनुसार प्रयोग से पहले या शुरुआत में समायोजित किया जाना चाहिए। यह समान विश्लेषण (चित्रा 6 ए) की अनुमति देने के लिए सभी छवियों के इष्टतम जोखिम और सफेद संतुलन को सुनिश्चित करता है। कैमरे की स्वचालित सेटिंग्स सही नहीं हैं और इसके परिणामस्वरूप अलग-अलग कैमरा पैरामीटर हो सकते हैं, जिससे अनुचित परिणाम और छवि-से-छवि परिवर्तनशीलता की शुरुआत हो सकती है।
चित्रा 6 overexposed (चित्रा 6B) और underexposed छवियों (चित्रा 6C) दिल स्लाइस के उदाहरण से पता चलता है. कैमरा-लाइट सेटअप में उपयोग किए जाने वाले एक विशेष प्रकाश स्रोत से मेल खाने के लिए कैमरे की सही सफेद संतुलन सेटिंग्स पर पर्याप्त ध्यान दिया जाना चाहिए। गलत सफेद संतुलन सेटिंग्स के परिणामस्वरूप छवि में नीले या पीले (चित्रा 6 डी) और मैजेंटा या हरे (चित्रा 6 ई) में बदलाव हो सकता है।
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62942/62942fig03.jpg"> चित्रा 3: चूहे कार्डियक स्लाइस की छवियां( A) ताजा दिल के स्लाइस का विश्लेषण ImageProPlus 6.3 सॉफ़्टवेयर में रंग विभाजन (B) का उपयोग करके किया गया था। (सी) टीटीसी धुंधला खराब जमे हुए दिल के टुकड़े में व्यवहार्य और परिगलित ऊतक के बीच भेदभाव करता है (24 घंटे के लिए जमे हुए)। संक्षिप्त रूप: TTC = 2,3,5-triphenyl-2H-tetrazolium क्लोराइड। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62942/62942fig03large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62942/62942fig04.jpg"> चित्रा 4: प्रतिबिंबों की कमी के लिए तकनीक। चूहा दिल टुकड़ा छवि PBS (ए) में विसर्जित पर कब्जा कर लिया और polarizing फिल्टर (बी) का उपयोग कर. (सी) प्रतिबिंब के साथ दिल टुकड़ा जब न तो विसर्जन और न ही फिल्टर का उपयोग किया जाता है। संक्षिप्त नाम = PBS = फॉस्फेट-बफ़र्ड खारा। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62942/62942fig04large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62942/62942fig05.jpg"> चित्रा 5: चूहे के मस्तिष्क स्लाइस की छवियां। चूहे के मस्तिष्क को सात स्लाइस में काट दिया गया था और इस्केमिया-reperfusion के बाद टीटीसी के साथ दाग दिया गया था। ध्रुवीकरण फ़िल्टर का उपयोग करने से प्रतिबिंब-मुक्त छवि के अधिग्रहण में परिणाम होता है। (ए) अक्षतिग्रस्त गोलार्ध से स्लाइस; (बी) स्ट्रोक से प्रभावित गोलार्ध से स्लाइस। संक्षिप्त रूप: TTC = 2,3,5-triphenyl-2H-tetrazolium क्लोराइड। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62942/62942fig05large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62942/62942fig06.jpg"> चित्रा 6: चूहा दिल टुकड़ा छवियों. सही ढंग से (ए) और गलत तरीके से (बी-ई) ने दिल की स्लाइस छवियों पर कब्जा कर लिया। गलत एक्सपोज़र सेटिंग्स के परिणामस्वरूप overexposed (B) और underexposed images (C) होते हैं। गलत सफ़ेद संतुलन सेटिंग्स के परिणामस्वरूप छवि (E) में पीला (D) या हरा कास्ट होता है. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62942/62942fig06large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>

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Rodent Heart and Brain Tissue Preparation for Digital Macro Photography after Ischemia-reperfusion

यहाँ प्रस्तुत ischemia-reperfusion प्रयोग और उच्च संकल्प छवि अधिग्रहण के लिए प्रकाश व्यवस्था और कैमरा setups की स्थापना के लिए दिशानिर्देशों के बाद कृंतक ऊतक की तैयारी के मानकीकृत पद्धति के लिए एक प्रोटोकॉल है. यह विधि सभी प्रयोगात्मक छोटे-पशु अंग फोटोग्राफी पर लागू होती है।

Ischemia-reperfusion के बाद डिजिटल मैक्रो फोटोग्राफी के लिए कृंतक दिल और मस्तिष्क ऊतक तैयारी

Macro photography is applicable for imaging various tissue samples at high magnification to perform qualitative and quantitative analyses. Tissue ...

यह प्रोटोकॉल हृदय और मस्तिष्क के ऊतकों के टुकड़ा करने की क्रिया और धुंधला करने के लिए उपयुक्त पद्धति दिखाता है। यह छवि अधिग्रहण के लिए प्रकाश और कैमरा सेटअप और फोटोग्राफी तकनीकों की स्थापना के लिए दिशानिर्देश भी प्रदान करता है। ये विधियां कृंतक ऊतकों में छवि प्लानिमेट्रिक विश्लेषण में माप करने के लिए विशेष रूप से उपयोगी हैं, और सामान्य वैज्ञानिक मैक्रोफोटोग्राफी के लिए मूल्य का हो सकता है।शुरू करने के लिए, क्रेब्स-हेन्सेलेट समाधान से भरे सिरिंज से दिल की कैनुला को अलग करें और गर्म क्रेब्स-हेन्सेलेट समाधान से भरे एक सिरिंज से जुड़े हों जिसमें 0.1% मेथिलीन नीला होता है। प्रति मिनट चार मिलीलीटर की दर से मेथिलीन नीले समाधान के चार मिलीलीटर के साथ चूहे के दिल को पार करना। सिरिंज से कैनुला को डिस्कनेक्ट करने और कैनुला से दिल को हटाने के बाद, टिशू पेपर पर धीरे से दिल को रोल करके अतिरिक्त मेथिलीन नीले रंग को हटा दें।अतिरिक्त मेथिलीन नीले रंग को हटाने के बाद, हेमोस्टेटिक संदंश को खोलकर और सर्जिकल टांके के चारों ओर प्लास्टिक ट्यूबिंग को हटाकर कोरोनरी धमनी के चारों ओर लिगाचर को ढीला करें। अगला, स्लाइसिंग के लिए स्टेनलेस स्टील मैट्रिक्स में दाग चूहे के दिल को रखें। वेंट्रिकल्स को दो मिलीमीटर मोटी स्लाइस में काटें, एक वयस्क चूहे के दिल से छह से सात स्लाइस के लिए लक्ष्य रखें।काटने के बाद, स्लाइस को 15-मिलीलीटर प्लास्टिक ट्यूब में स्थानांतरित करें। फिर, दिल के स्लाइस के साथ ट्यूब में पीबीएस में भंग 1% ट्राइफिनाइल टेट्राज़ोलियम क्लोराइड के पांच मिलीलीटर जोड़ें और पांच मिनट के बाद कोमल मिश्रण के साथ 37 डिग्री सेल्सियस पर पानी के स्नान में 10 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें। इनक्यूबेशन बाद, पीबीएस के साथ कम से कम दो से तीन बार दिल के स्लाइस को धोएं और छवि कैप्चर के लिए तैयार रहें।मस्तिष्क को हटाने के बाद, मस्तिष्क स्टेम सहित, खोपड़ी से, मस्तिष्क मैट्रिक्स में मस्तिष्क को अपने वेंट्रल पक्ष के साथ रखें। जानवरों के वजन के आधार पर, मस्तिष्क स्टेनलेस स्टील मैट्रिक्स का सही आकार चुनें। ब्लेड का उपयोग करके, मस्तिष्क के ललाट और पुच्छल भागों को प्रतिबंधित करें।फिर, ब्लेड को आंशिक रूप से पहले और अंतिम ब्लेड के बीच चैनलों में डालें। जब सभी ब्लेड डाले जाते हैं और समानांतर में व्यवस्थित होते हैं, तो मस्तिष्क को दो मिलीमीटर कोरोनल स्लाइस में काटने के लिए एक ही समय में हथेली के साथ सभी ब्लेड दबाएं। फिर, दो उंगलियों के साथ पक्षों के साथ ब्लेड को मजबूती से समझें और उन्हें मैट्रिक्स से कटा हुआ मस्तिष्क के साथ एक साथ हटा दें।मस्तिष्क स्लाइस को एक ट्रे में एक-एक करके व्यवस्थित करें, यह सुनिश्चित करते हुए कि प्रत्येक स्लाइस की आंतरिक सतह हमेशा ऊपर की ओर सामना कर रही है। इसके बाद, मस्तिष्क स्लाइस पर गर्म 1% ट्राइफिनाइल टेट्राज़ोलियम क्लोराइड समाधान और पीबीएस डालें और अंधेरे में 37 डिग्री सेल्सियस पर आठ मिनट के लिए इनक्यूबेट करें। इनक्यूबेशन बाद, छवियों को कैप्चर करने के लिए मस्तिष्क स्लाइस को नीले प्लास्टिक ट्रे में स्थानांतरित करें।ललाट से पुच्छल भाग तक अनुक्रमिक क्रम में मस्तिष्क स्लाइस को व्यवस्थित करें और सैगिटल विमान में गोलार्धों को अलग करने के लिए एक स्केलपेल का उपयोग करें। धुंधला होने के तुरंत बाद ऊतक स्लाइस की तस्वीर लें। एक स्टैंड पर एक चार्ज बैटरी, मेमोरी कार्ड और संलग्न लेंस के साथ पसंद का कैमरा सेट करें।उपलब्ध प्रकाश स्रोतों के आधार पर, उपयुक्त सफेद संतुलन सेटिंग्स का चयन करें या कैमरा मैनुअल में दिए गए निर्देशों के अनुसार रंग तापमान अंशांकन करें। पीबीएस के साथ एक कंटेनर में दिल के स्लाइस को पूरी तरह से विसर्जित करें। पीबीएस या अन्य तरल पदार्थों के बिना एक सूखी ट्रे में मस्तिष्क स्लाइस की व्यवस्था करें।मैक्रो लेंस के साथ कैमरे के नीचे स्लाइस के साथ कंटेनर रखें। सुनिश्चित करें कि सभी स्लाइस दृश्य के क्षेत्र में पूरी तरह से फिट होते हैं और एक ही विमान पर होते हैं। कैमरे को पूरी तरह से मैन्युअल मोड पर स्विच करें, आईएसओ 100 और एपर्चर को F10 पर सेट करें।इष्टतम छवि जोखिम के लिए शटर की गति को समायोजित करें और सुनिश्चित करें कि कैमरा फोकल प्लेन उस सतह के समानांतर है जहां नमूना जगह है। नमूना संख्या पर कब्जा करने के बाद, परिपत्र ध्रुवीकरण फ़िल्टर को तब तक घुमाएं जब तक कि प्रतिबिंब गायब न हो जाएं, और शटर जारी होने पर कैमरा शेक को रोकने के लिए एक दूरस्थ ट्रिगर का उपयोग करके ऊतक स्लाइस को छवि दें, फिर स्लाइस को घुमाएं और दूसरी तरफ से छवियों को कैप्चर करें। मायोकार्डियल रोधगलन के बाद एक मेथिलीन नीले और ट्राइफिनाइल टेट्राज़ोलियम क्लोराइड-दाग वाले दिल के टुकड़े की इस तस्वीर में इंफार्क्ट आकार के आगे के प्लानिमेट्रिक विश्लेषण के लिए पर्याप्त विस्तार और रंग की जानकारी शामिल है।24 घंटे के लिए दिल के ऊतकों की ठंड अखंडता को प्रभावित करती है और माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन को कम करती है। इस प्रकार, दिल का ट्राइफिनाइल टेट्राज़ोलियम क्लोराइड धुंधला लाल नहीं है, लेकिन पीला गुलाबी है, और नेक्रोटिक और व्यवहार्य ऊतकों के बीच की सीमा धुंधली है। नमूनों में प्रतिबिंब को कम करने के लिए तुलना में दो तरीकों में से, विसर्जन सबसे कुशल विधि है और अच्छे विपरीत के साथ विस्तृत छवियों का उत्पादन करती है।ध्रुवीकरण फ़िल्टर भी प्रभावी है, हालांकि, यह छवि के रिज़ॉल्यूशन और माइक्रोकॉन्ट्रास्ट को थोड़ा कम कर देता है। विसर्जन या फ़िल्टर के बिना दिल के स्लाइस की एक छवि में कई प्रतिबिंब होते हैं और आगे के विश्लेषण के लिए उपयुक्त नहीं है। प्लानमेट्रिक विश्लेषण में, मस्तिष्क के अप्रभावित पक्ष की तुलना स्ट्रोक-प्रभावित पक्ष के साथ की जानी चाहिए।मैनुअल कैमरा सेटिंग्स इष्टतम जोखिम और सभी छवियों के सफेद संतुलन को सुनिश्चित करते हैं, जिससे समान विश्लेषण की अनुमति मिलती है। दिल के स्लाइस के overexposed और underexposed छवियों के उदाहरण यहाँ दिखाए गए हैं। इसके अलावा, गलत सफेद संतुलन सेटिंग्स के परिणामस्वरूप छवि में नीले या पीले और मैजेंटा या हरे रंग की कास्ट में बदलाव होता है।वैज्ञानिक मैक्रोफोटोग्राफी के लिए नियंत्रित प्रकाश व्यवस्था और एक उपयुक्त इमेजिंग सेटअप की आवश्यकता होती है। मानकीकृत पद्धति उच्च गुणवत्ता, विस्तृत डिजिटल छवियों को सुनिश्चित करती है। यह विधि सभी प्रयोगात्मक छोटे पशु अंग फोटोग्राफी पर लागू होती है।

Research

JoVE Journal

Medicine

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Normothermic कार्डिएक गिरफ्तार और कार्डियोपल्मोनरी resuscitation: Ischemia reperfusion चोट के एक माउस मॉडल

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

Real-time Digital Imaging of Leukocyte-endothelial Interaction in Ischemia-reperfusion Injury (IRI) of the Rat Cremaster Muscle

Real-time Digital Imaging of Leukocyte-endothelial Interaction in Ischemia-reperfusion Injury IRI of the Rat Cremaster Muscle

Ischemia-reperfusion की चोट में ल्युकोसैट - endothelial सहभागिता के वास्तविक समय डिजिटल चूहा cremaster स्नायु की इमेजिंग (IRI)

Ischemia-reperfusion injury (IRI) has been implicated in a large array of pathological conditions such as cerebral stroke, myocardial infarction, ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

वाम पूर्वकाल अवरोही धमनी की ligation के माध्यम से myocardial ischemia-reperfusion चोट के एक murine मॉडल

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Oxygen-Glucose Deprivation and Reoxygenation as an In Vitro Ischemia-Reperfusion Injury Model for Studying Blood-Brain Barrier Dysfunction

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एक के रूप में ऑक्सीजन ग्लूकोज अभाव और Reoxygenation<em&gt; इन विट्रो</em&gt; Ischemia-reperfusion चोट मॉडल का अध्ययन रक्त मस्तिष्क बाधा शिथिलता के लिए

Ischemia-Reperfusion (IR) injury is known to contribute significantly to the morbidity and mortality associated with ischemic strokes. Ischemic ...

Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation

त्वचा माइक्रो Grafts पीढ़ी के लिए एक नई विधि disaggregation के बाद ऊतक विशेषता

Several new methods have been developed in the field of biotechnology to obtain autologous cellular suspensions during surgery, in order to provide one ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

आंतों ischemia-reperfusion की चोट के murine मॉडल

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

चूहों में मायोकार्डियल इस्कीमिया रिपरफ्यूजन के बाद कोरोनरी फ्लो रिजर्व का मूल्यांकन

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model

एक मुरीन मॉडल में इस्केमिया Reperperfusion चोट के बाद स्टेम सेल की विलंबित इंट्रामायोकार्डियल डिलीवरी

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, ...

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

चूहा लिवर प्रत्यारोपण मॉडल में हेमोडायनामिक परिवर्तनों का अनुकरण करके अंग इस्केमिया-रिफ्यूजन इंजरी

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...

Real-Time Assessment of Spinal Cord Microperfusion in a Porcine Model of Ischemia/Reperfusion

इस्केमिया/रिप्रफ्यूजन के एक पोर्सिन मॉडल में रीढ़ की हड्डी माइक्रोपरफ्यूजन का वास्तविक समय मूल्यांकन

Spinal cord injury is a devastating complication of aortic repair. Despite developments for the prevention and treatment of spinal cord injury, its ...