Name: detection of g protein-coupled receptor expression in mouse vagal afferent neurons using multiplex in situ hybridization
Uploaded: 2021-09-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization at JoVE.com

وقد تم دعم هذا العمل من قبل التشريح العصبي / الأنسجة / الدماغ حقن الأساسية الممولة من منحة المعاهد القومية للصحة #5P01DK119130-02. الكتاب يود أن يعترف بمساعدة UT جنوب غرب مرفق تصوير الخلايا الحية (برئاسة الدكتور فيلبس) وموظفيها (Abhijit بوغدي ومارسيل Mettlen) ، بدعم جزئي من منحة NIH #1S10OD021684-01 ، وهو مورد مشترك لمركز هارولد سيمونز للسرطان ، بدعم جزئي من منحة دعم مركز السرطان NCI ، P30 CA142543.

ملاحظة: الفئران المستخدمة في هذه الدراسة كانت من النوع البري الذكور على خلفية C57BL/6J نقية. تم استخدام ما مجموعه 4 فئران لISH متعددة. وكان عمر جميع الفئران حوالي 8 أسابيع في وقت التضحية. كما استخدم فأر ذكر واحد (يبلغ من العمر عاما واحدا تقريبا) لإثبات الفلوروجيني المرتبط بالشيخوخة. تم إيواء الحيو...

اخترعت التقنية من ISH في أواخر 1960s42. ومع ذلك، فإنه ليس حتى منتصف 1980s أنه تم تطبيقه للكشف عن mRNAs في الجهاز العصبي المركزي والمحيطي43،44. وبالنظر إلى عدم تجانس الجهاز العصبي والقضايا المتكررة مع الأجسام المضادة، وتوطين نسخة معينة على المستوى الخلوي ل?...

وترد جثث الخلايا من afferents المبهم في الوداجي، بتروسال، وggallia نودوز1،2،3. محاورهم السفر معا عبر عدة فروع من العصب المبهم إلى القحف والصدر والبطن الأراضي4،5،6،7. من النهايات الحشوية ، يمكن أن تستجيب الطحالب لمجموعة واسعة من المحفزات الفسيولوجية والمضرة8و9و10. ومع ذلك، فإن توزيع جزيئات الإشارات والمستقبلات المشاركة في الاستشعار عن المبهم لا يزال غير مميز. ويرجع ذلك جزئيا إلى أن العقدة المبهمة ، على الرغم من صغر حجمها ، تعبر عن طيف واسع من المستقبلات ، بما في ذلك عدد كبير من GPCRs8،11،12،13. وعلاوة على ذلك، الخلايا العصبية المبهمة غير متجانسة بطبيعتها وعرض ملامح الجزيئية متميزة14. ولتعقيد الأمر، يتم إرفاق العقدة الوداجية والتروسالية والعقيدة في الماوس، وبالتالي تشكيل كتلة واحدة من العقد. وأخيرا ، في مجموعة فرعية من الحيوانات ، يتم إرفاق العقدة العقيدية إلى العقدة العنقية المتفوقة المتعاطفة15.
في الماضي، تحولت المحققين إلى الكيمياء المناعية لدراسة الماكياج الكيميائي العصبي من الخلايا العصبية المبهمة16،17،18. في حين أن الكيمياء المناعية باستخدام الأجسام المضادة المعتمدة مفيدة ، يجب تفسير نتائج الدراسات الكيميائية المناعية بحذر. على سبيل المثال، فشلت العديد من الجهود لتحديد أجسام مضادة محددة ضد GPCRs19و20و21و22و23و24و25، مما دفع المحققين إلى استنتاج أن غالبية الأجسام المضادة ضد GPCRs لا يمكن الاعتماد عليها. للتحايل على هذه القضايا، وقد استخدمت على نطاق واسع PCR الكمية (qPCR) لتقييم التعبير الجيني في كتلة العصابات المبهم القوارض26،27،28،29. ومع ذلك، فإن فحص التعبير الجيني باستخدام qPCR يحدث على حساب فقدان المعلومات المكانية. ولا يمكن التنبؤ على وجه الخصوص بعدد الخلايا أو نوع الخلية (أنواعها) التي تعبر عن جين معين مهم (مثل الخلايا العقدية مقابل الخلايا الوداجية). وتشمل القضايا المتكررة أيضا التلوث مع الأنسجة المجاورة وإدراج أطوال متغيرة من العصب المبهم، عنق الرحم متفوقة، والغانجيليا الوداجية أثناء تشريح15. نتيجة للصعوبات المذكورة أعلاه، الجدل يحيط التعبير وتوزيع العديد من GPCRs في الخلايا العصبية المبهمة. أحد الأمثلة المحيرة بشكل خاص يتعلق بمستقبلات غريلين (Ghsr). في حين وجدت بعض الدراسات على نطاق واسع التعبير عن هذا المستقبل في الخلايا العصبية المبهمة30,31,32, وجدت دراسات أخرى أن GHSR مرنا أن تكون غير قابلة للكشف تقريبا في العقدة العقيدات11,14. ولذلك هناك ما يبرر رسم خرائط مفصلة ل Ghsr mRNA في الكتلة الغنغليونية المبهمة.
في الموقع التهجين (ISH) كما تم استخدامها لتقييم أنماط التعبير الجيني في كتلة ganglionic المبهم7،11،12،33،34،35. لأن التقنيات القائمة على الحمض النووي الريبي لا تزال أكثر موثوقية ومحددة من التقنيات القائمة على الأجسام المضادة في معظم الظروف36،37، أثبتت دراسات ISH قيمة لفهم أفضل للترميز الكيميائي العصبي للخلايا العصبية المبهمة. ومع ذلك، فإن تقنيات ISH التقليدية نفسها لا تخلو من المحاذير. المشعة ISH حساسة ولكن يولد الخلفية ويبقىمرهقة 38. ISH غير المشعة أقل تعقيدا ولكن أيضا أقلحساسية 38. في المقابل، فإن طريقة RNAscope ISH المطورة مؤخرا حساسة للغاية وتولد الحد الأدنى من الخلفية39. الدراسة الحالية تطبيق متعدد الفلورسنت RNAscope للكشف عن GPCRs في الخلايا العصبية المبهمة من الماوس. ركزنا على رسم خرائط لتوزيع Ghsr وقارنا توزيعه بمستقبلات المرارة (Cck1r) ، وهو GPCR آخر معروف جيدا ليتم التعبير عنه في العقدة العقيدية34. وأخيرا، تم استخدام اثنين من عوامل النسخ، وقران مثل homeobox 2b (Phox2b) وبروتين إصبع الزنك المجال العلاقات العامة 12 (Prdm12)، كعلامات انتقائية للخلايا العصبية العقيدة والوداجي afferent، على التوالي14. دون تصور Phox2b أو Prdm12 ، سيكون من الصعب تحديد الوداجي مقابل العقيدات مع اليقين. كما تناقش المزالق التقنية المحتملة في جميع أنحاء المقال.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10x PBS</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP399-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20x SSC</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-80&#176;C freezer</td>
			<td>PHCBI</td>
			<td>MDF-DU901VHA-PA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Photoshop 2021</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td>photo and design software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Baking oven</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>Model:658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM880 Airyscan</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass</td>
			<td>Brain Research Laboratories</td>
			<td>2460-1.5D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM 3050 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11252-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ecomount</td>
			<td>Biocare Medical</td>
			<td>EM 897L</td>
			<td>mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HybEZ oven</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>hybridization oven</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophobic pen</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-4000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ-Fiji</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large scissors</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>100-7561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro centrifuge tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20170-333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minipump variable flow</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-876-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 520</td>
			<td>Akoya biosciences</td>
			<td>FP1 1487001KT</td>
			<td>Fluorescent biomarker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 570</td>
			<td>Akoya biosciences</td>
			<td>FP1 1488001KT</td>
			<td>Fluorescent biomarker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 690</td>
			<td>Akoya biosciences</td>
			<td>FP1 1497001KT</td>
			<td>Fluorescent biomarker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>mounting medium for fluorescently labeled cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope Multiplex Fluorescent Reagent Kit v2</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>323100</td>
			<td>multiplex kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse Cck1r-C3</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>313751-C3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse DapB</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>310043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse Ghsr</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>426141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse Phox2b-C2</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>407861-C2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse Prdm12-C2</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>524371-C2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RnaseZap</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R2020</td>
			<td>Rnase decontaminating solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small dissecting scissors</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>Z265977</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus slides</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>1255015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Tek OCT medium</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>User manual</td>
			<td>ACD</td>
			<td>323100 USM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS 5620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN Imaging Software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of g protein-coupled receptor expression in mouse vagal afferent neurons using multiplex in situ hybridization

تصف هذه الدراسة بروتوكولا للتهجين المتعدد في الموقع (ISH) للجانجليا الوداجية العقيدة الماوسية ، مع التركيز بشكل خاص على الكشف عن التعبير عن مستقبلات G المقترنة بالبروتين (GPCRs). تمت معالجة العقدة الوداجية العقيدات الثابتة بالفورمالين باستخدام تقنية RNAscope للكشف في وقت واحد عن تعبير اثنين من GPCRs التمثيلية (مستقبلات cholecystokinin و ghrelin) بالاشتراك مع جين علامة واحد إما من العقيدات (علبة منزل تشبه الزوج 2b ، Phox2b) أو الخلايا العصبية الأفرنت الوداجية (بروتين إصبع الزنك في مجال PR 12 ، Prdm12). تم تصوير العقدة المسماة باستخدام المجهر confocal لتحديد أنماط التوزيع والتعبير من النصوص المذكورة أعلاه. لفترة وجيزة، تم العثور على الخلايا العصبية Phox2b afferent للتعبير بوفرة مستقبلات cholecystokinin (Cck1r) ولكن ليس مستقبلات غريلين (غسر). تم العثور على مجموعة فرعية صغيرة من الخلايا العصبية Prdm12 afferent أيضا للتعبير عن Ghsr و / أو Cck1r. تتم مناقشة المحاذير التقنية المحتملة في تصميم ومعالجة وتفسير ISH متعددة. النهج الموصوف في هذه المقالة قد يساعد العلماء في توليد خرائط دقيقة للملامح النسخية من الخلايا العصبية المبهمة.

في حين يمكن تطبيق RNAScope على الحيوانات من أي عمر أو جنس أو خلفية وراثية ، فمن المستحسن العمل مع الشباب (<3 أشهر). وذلك لأن التحف الفلورية (على سبيل المثال، ليبوفوسين) هي النتائج الشائعة في الخلايا العصبية من الحيوانات القديمة41. غالبا ما تحتوي العقدة المثبتة بالفورماتين من الفئران ...

Watch this Scientific Journal Video about Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization at JoVE.com

Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization

تم استخدام Multix في التهجين الموقعي (ISH) لتصور النصوص في وقت واحد لمستقبلين مقترنين بالبروتين G وعامل نسخ واحد في مجمع العقدة المبهم بأكمله من الماوس البالغ. ويمكن استخدام هذا البروتوكول لتوليد خرائط دقيقة من ملامح النسخ من الخلايا العصبية المبهمة afferent.

الكشف عن G البروتين إلى جانب مستقبلات التعبير في الخلايا العصبية Vagal الماوس Afferent باستخدام Multix في الموقع التهجين

This study describes a protocol for the multiplex in situ hybridization (ISH) of the mouse jugular-nodose ganglia, with a particular emphasis on detecting ...

هذا الإجراء حساس للغاية ويسمح بتصور العديد من النصوص ذات الخلفية الدنيا. يمكن أن تولد هذه الطريقة خرائط دقيقة للملف الشخصي النسخي لأنواع الخلايا غير المتجانسة للغاية. إثبات الإجراء سيكون أنا وجونسون بوب مانويل، فني أبحاث في المختبر.تبدأ بجمع كتلة ganglionic المبهم كامل من الماوس ثمانية أسابيع من العمر من كل جانب، مع مساعدة من نطاق تشريح والأدوات الجراحية. بعد قطع رأس الفأرة، استخدم ملقط صغير لإزالة الستيرنوهويد والعضلات الأوموهية الجانبية إلى القصبة الهوائية لفضح العظام القذالية. مسح المنطقة بأكملها من العضلات والأنسجة حتى الشريان السباتي، والأعصاب المبهمة والعصب تحت القباني وماغنوم foramen مرئية.ثم قطع العصب تحت القباني بأكمله بمقص ربيعي صغير. حدد موقع العقدة العقيدية ككتلة شفافة بالقرب من ماغنوم foramen. باستخدام مقص صغير، كسر بعناية العظام القذالي.لكشف العقدة الوداجية كذلك، حدد موقع الخلايا الصباغية السوداء على سطح الوداجي كمعلم مرئي. عندما يتم العثور على العقد، وقطع المرفقات العصبية بين كتلة العقدية المبهم وسحب بلطف على الطرف المحيطي من العصب المبهم في حين قطع في وقت واحد العقدة الوداجي نحو جذع الدماغ مع مقص الربيع الصغيرة لاستخراج الكتلة العقدية بأكملها. إزالة الأنسجة الملتحمة، كتلة العقدية والدهون الشائكة إلى العصب المبهم.حفظ ما يقرب من نصف سنتيمتر من العصب المبهم لتسهيل التعامل مع العينات وتوطينها. وضع إزالة إلى ganglia بمساعدة ملقط غرامة في أنابيب الطرد المركزي 1.5 ملليمترات صغيرة. وحضن في أربع درجات مئوية في الفورمولين لمدة 24 ساعة.وبعد ذلك مع 30٪ سكروز لمدة 24 ساعة. بعد الحضانة، وضع العقدة داخل قطر أربعة ملليمتر من متوسط درجة الحرارة قطع الأمثل على قطعة من رقائق الألومنيوم. وعبارة العينة على سرير من الجليد الجاف.قطع العينات المجمدة مع cryostat إلى أقسام من سمك 14 ميكرومتر في ناقص 20 درجة مئوية وجمع أقسام قطع على الشرائح المجهر الزجاجي كما ثلاث سلاسل 42 ميكرومتر وبصرف النظر. شطف الشرائح مع أقسام الأنسجة في برنامج تلفزيوني. ويخبز لمدة 30 دقيقة على حرارة 60 درجة مئوية في فرن الخبز.ثم، postfix الشرائح في 4٪ الفورماتين لمدة 15 دقيقة في أربع درجات مئوية. الجفاف المسلسل الشرائح في 50٪ 70٪ و 100٪ الإيثانول لمدة خمس دقائق لكل منهما. وتطبيق محلول بيروكسيد الهيدروجين على العينات لمدة 10 دقائق قبل الشطف في الماء المقطر المزدوج.بالنسبة للتهجين في الموقع، أو ISH، تعامل مع العينات بمكشف استرجاع الهدف لمدة خمس دقائق. ثم شطف العينات بالتسلسل في الماء المقطر المزدوج والإيثانول 100٪تليها تجفيف الهواء. باستخدام قلم مسعور، قم بإنشاء حاجز حول العينات.في حين يتم التعامل مع العينات مع بروتياز لمدة 30 دقيقة في 40 درجة مئوية وفرن التهجين، قبل الحرب المسابير في 40 درجة مئوية وتبريدها في درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام. بعد الانتقال من الفرن، واحتضان الشرائح مع المزيج المطلوب من المسابير الهدف لمدة ساعتين في 40 درجة مئوية في فرن التهجين. احتضان أنسجة التحكم السلبي مع اختزال ثنائي هيدروبيكولينات أو DapB، الهدف C1 التحقيق لمدة ساعتين في 40 درجة مئوية.شطف الشرائح في عازلة غسل وتخزينها في خمس مرات سيترات الصوديوم المالحة في درجة حرارة الغرفة بين عشية وضحاها. في اليوم التالي، شطف الشرائح مع عازلة غسل قبل الحضانة مع الكواشف تضخيم. والتعامل مع الكواشف قناة محددة كما هو موضح في المخطوطة.غسل الشرائح تليها العلاج مع DapB لمدة 30 ثانية. ثم تطبيق فورا المتوسطة المتصاعدة على كل شريحة ووضع زلة غطاء على قسم الأنسجة. حافظ على الأنسجة أفقية في حامل الشريحة عند أربع درجات مئوية حتى التصوير.إعداد مجهر كونفوجكال للتصوير عن طريق تعيين المعلمات المطلوبة. الحصول على الصور مع خط متوسط من أربعة وحجم بكسل لا يقل عن 1024 بحلول عام 1024 لتحسين نوعية الصور. بمجرد الرضا عن معلمات الاستحواذ ، ابدأ في الحصول على الصور باستخدام نفس الإعدادات.سمة الألوان الزائفة إلى كل قناة لتسهيل التصور. باستخدام الصور الرقمية، قم بإجراء عد الخلايا من خلال تحديد المخطط التفصيلي للملامح الإيجابية لنطاق الحمض النووي الريبي مع نواة واحدة ملطخة بخفة مع DapB. حساب النسبة المئوية للملامح إيجابية نطاق الجيش الملكي النيبالي التعبير عن كل نص.تم اختيار معلمات الاستحواذ المثلى لكل ليزر استنادا إلى الفلورسينس غير المحدد الذي تم الحصول عليه في أنسجة التحكم السلبية. الفلورة الذاتية في العقدة العقيدية لفأر شاب بالغ ضئيلة. والحضانة مع مسبار DapB ، لم تسفر عن إشارات.في زيادة ليزر الطاقة وكسب مع الليزر نانومتر 488، خلفية غير مرغوب فيها والنقاط الفلورية عشوائية تظهر. تم تطبيق تقنية نطاق الحمض النووي الريبي للكشف عن ثلاثة جينات في أقسام الأنسجة من الكتلة العقدية المبهمة. وكان ملف الأنسجة إيجابية لGHSR وCCK1R.وشملت الملف الشخصي كل من Phox2b وCCK1R النصوص في الجزء الوردي من العقدة نودوز. نتيجة لISH متعددة في الخلايا العصبية العقيدة afferent، إشارات Phox2b تراكمت على وجه التحديد في الخلايا العصبية afferent، وتقع في العقدة نودوز. إشارات CCK1R وصفت بشكل مكثف العديد من الخلايا العصبية في العقدة العقيدات.عند التكبير المنخفض، لا يمكن ملاحظة الخلايا التي تعبر عن إشارات CCK1R أو GSHR منخفضة بسهولة. ساعد DapB على تصور الأنسجة وتحديد الخلايا العصبية المبهمة مع نواة كبيرة وملطخة بخفة. في التكبير العالي ، تظهر ملامح إيجابية Phox2b.ملامح اثنين وثلاث خلايا Phox2b مع إشارات CCK1R عالية ومعتدلة. وأعرب الملف الرابع عن كل من GHSR وCCK1R. نتيجة لISH متعددة من الخلايا العصبية الوداجي afferent، يمكن أن ينظر إلى نسخة PRDM12 تراكمت على وجه التحديد في الخلايا العصبية afferent تقع في العقدة الوداجية.عند التكبير العالي، تم الكشف عن إشارات معتدلة لCCK1R في التشكيلات الشخصية 1 و 2. الملف الشخصي الثالث هو ممثل لخلايا PRDM12 السلبية لCCK1R أو GHSR. اتساق تشريح عامل مهم.ومن المهم بنفس القدر التحقق من أن معلمات الحصول على التصوير لا تولد إشارات خلفية غير مرغوب فيها. أصبح تعدد الخلايا في الموقع التهجين المعيار الذهبي في الجزيئية المنشأة، وخاصة في مجال استئصال الأعصاب. يمكن الجمع بين هذه الطريقة بسهولة مع الكيمياء المناعية.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization

Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections

Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections

نقرا الإسفار في الموقع التهجين في أقسام المخ طازجة

Here we describe a modified version of a double fluorescence in situ hybridization (dFISH) method optimized for detecting two mRNAs of interest in fresh ...

Combining Lipophilic dye, in situ Hybridization, Immunohistochemistry, and Histology

Combining Lipophilic dye, in situ Hybridization, Immunohistochemistry, and Histology

الجمع بين صبغ محبة للدهون ، في الموقع التهجين ، المناعية ، والأنسجة

Going beyond single gene function to cut deeper into gene regulatory networks requires multiple mutations combined in a single animal.  Such analysis of ...

Detection of Protein Palmitoylation in Cultured Hippocampal Neurons by Immunoprecipitation and Acyl-Biotin Exchange (ABE)

Detection of Protein Palmitoylation in Cultured Hippocampal Neurons by Immunoprecipitation and Acyl-Biotin Exchange ABE

الكشف عن بروتين Palmitoylation في الخلايا العصبية قرن آمون بواسطة مثقف مناعي والبورصات الأسيل، البيوتين (آبي)

Palmitoylation is a post-translational lipid  modification involving the attachment of a 16-carbon saturated fatty acid,  palmitate, to cysteine residues ...

Detection of the Genome and Transcripts of a Persistent DNA Virus in Neuronal Tissues by Fluorescent In situ Hybridization Combined with Immunostaining

Detection of the Genome and Transcripts of a Persistent DNA Virus in Neuronal Tissues by Fluorescent In situ Hybridization Combined with Immunostaining

الكشف عن الجينوم والنصوص من الفيروسات الحمض النووي في الخلايا العصبية الأنسجة الثابتة التي كتبها نيون في الوضع الطبيعي التهجين جنبا إلى جنب مع المناعية

Single cell codetection of a gene, its RNA product and cellular regulatory proteins is critical to study gene expression regulation. This is a challenge ...

Detection of Axonally Localized mRNAs in Brain Sections Using High-Resolution In Situ Hybridization

Detection of Axonally Localized mRNAs in Brain Sections Using High-Resolution In Situ Hybridization

الكشف عن Axonally المترجمة من mRNAs في أقسام المخ باستخدام عالية الدقة<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين

mRNAs are frequently localized to vertebrate axons and their local translation is required for axon pathfinding or branching during development and for ...

Combining Double Fluorescence In Situ Hybridization with Immunolabelling for Detection of the Expression of Three Genes in Mouse Brain Sections

Combining Double Fluorescence In Situ Hybridization with Immunolabelling for Detection of the Expression of Three Genes in Mouse Brain Sections

الجمع بين نقرا الإسفار<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين مع Immunolabelling للكشف عن التعبير عن ثلاثة جينات في أقسام الدماغ ماوس

Detection of gene expression in different types of brain cells e.g., neurons, astrocytes, oligodendrocytes, oligodendrocyte precursors and microglia, can ...

In Vitro Recording of Mesenteric Afferent Nerve Activity in Mouse Jejunal and Colonic Segments

In Vitro Recording of Mesenteric Afferent Nerve Activity in Mouse Jejunal and Colonic Segments

في المختبر تسجيل من مساريقي وارد آخر الأعصاب في ماوس صائمية وقطاعات القولون

Afferent nerves not only convey information concerning normal physiology, but also signal disturbed homeostasis and pathophysiological processes of the ...

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

توطين الجينات مستقبلات أودورانت في هوائيات الجراد بواسطة الحمض النووي الريبي<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين

Insects have evolved sophisticated olfactory reception systems to sense exogenous chemical signals. These chemical signals are transduced by Olfactory ...

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

تحديد مستقبلات الدوبامين D1-ألفا داخل Accumbens نواة القوارض بالحمض النووي الريبي مبتكرة في الموقع تكنولوجيا الكشف عن

In the central nervous system, the D1-alpha subtype receptor (Drd1&#945;) is the most abundant dopamine (DA) receptor, which plays a vital role in ...

Preparations and Protocols for Whole Cell Patch Clamp Recording of Xenopus laevis Tectal Neurons

Preparations and Protocols for Whole Cell Patch Clamp Recording of Xenopus laevis Tectal Neurons

الأعمال التحضيرية وبروتوكولات "كل خلية التصحيح المشبك تسجيل" ليفيس النمو تيكتال الخلايا العصبية

The Xenopus tadpole retinotectal circuit, comprised of the retinal ganglion cells (RGCs) in the eye which form synapses directly onto neurons in the optic ...