Name: detection of g protein-coupled receptor expression in mouse vagal afferent neurons using multiplex in situ hybridization
Uploaded: 2021-09-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door de Neuroanatomy / Histology / Brain Injection Core gefinancierd door NIH-subsidie #5P01DK119130-02. De auteurs willen graag de hulp erkennen van de UT Southwestern Live Cell Imaging Facility (onder leiding van Dr. Phelps) en zijn personeel (Abhijit Bugde en Marcel Mettlen), gedeeltelijk ondersteund door de NIH Grant #1S10OD021684-01, een gedeelde bron van het Harold C. Simmons Cancer Center, gedeeltelijk ondersteund door een NCI Cancer Center Support Grant, P30 CA142543.

OPMERKING: Muizen die in deze studie werden gebruikt, waren wilde mannetjes met een zuivere C57BL / 6J-achtergrond. In totaal werden 4 muizen gebruikt voor multiplex ISH. Alle muizen waren ongeveer 8 weken oud op het moment van offeren. Eén mannelijke muis (ongeveer een jaar oud) werd ook gebruikt om endogene fluorescentie geassocieerd met veroudering aan te tonen. Dieren werden gehuisvest in geventileerde kooien in een barrièrefaciliteit met ad libitum toegang tot voedsel en water. Het UT Southwestern Medical...

De techniek van ISH werd uitgevonden in de late jaren 196042. Het is echter pas in het midden van de jaren 1980 dat het werd toegepast voor de detectie van mRNA's in het centrale en perifere zenuwstelsel43,44. Gezien de heterogeniteit van het zenuwstelsel en terugkerende problemen met antilichamen, blijft het lokaliseren van een bepaald transcript op cellulair niveau een waardevol hulpmiddel. Niettemin zijn traditionele ISH-methoden bewerk...

De cellichamen van vagale afferente stoffen bevinden zich in de jugulaire, petrosale en nodose ganglia1,2,3. Hun axonen reizen samen via verschillende takken van de nervus vagus naar craniocervicale, thoracale en abdominale territoria4,5,6,7. Vanuit hun viscerale uiteinden kunnen vagale afferente stoffen reageren op een breed scala aan fysiologische en schadelijke stimuli8,9,10. De verdeling van signaalmoleculen en receptoren die betrokken zijn bij vagale detectie blijft echter slecht gekarakteriseerd. Dit komt deels omdat de vagale ganglia, ondanks hun kleine omvang, een breed spectrum van receptoren uitdrukken, waaronder een groot aantal GPCR's8,11,12,13. Bovendien zijn vagale afferente neuronen inherent heterogeen en vertonen ze verschillende moleculaire profielen14. Om de zaak te compliceren, worden de jugulaire, petrosale en nodose ganglia in de muis bevestigd, waardoor een enkele ganglionische massa wordt gevormd. Ten slotte is in een subset van dieren het nodose ganglion bevestigd aan het sympathische superieure cervicale ganglion15.
In het verleden hebben onderzoekers zich tot immunohistochemie gewend om de neurochemische samenstelling van vagale afferente neuronen te bestuderen16,17,18. Hoewel immunohistochemie met behulp van gevalideerde antilichamen nuttig is, moeten de resultaten van immunohistochemische studies met voorzichtigheid worden geïnterpreteerd. Talrijke pogingen om specifieke antilichamen tegen GPCR's te identificeren, zijn bijvoorbeeld mislukt19,20,21,22,23,24,25, waardoor onderzoekers concluderen dat de meerderheid van de antilichamen tegen GPCR's onbetrouwbaar zijn. Om deze problemen te omzeilen, is kwantitatieve PCR (qPCR) op grote schaal gebruikt voor het beoordelen van genexpressie in de vagale ganglionaire massa van knaagdieren26,27,28,29. Het onderzoeken van genexpressie met behulp van qPCR gaat echter ten koste van een verlies van ruimtelijke informatie. In het bijzonder kan niet worden voorspeld hoeveel cellen of welk celtype (s) een bepaald gen van belang uitdrukken (bijv. Nodose vs. jugulaire cellen). Terugkerende problemen omvatten ook de besmetting met aangrenzende weefsels en de opname van variabele lengtes van de nervus vagus, superieure cervicale en jugulaire ganglia tijdens dissectie15. Als gevolg van de bovenstaande moeilijkheden is er controverse rond de expressie en distributie van verschillende GPCR's in vagale afferente neuronen. Een bijzonder raadselachtig voorbeeld heeft betrekking op de ghrelinereceptor (Ghsr). Terwijl sommige studies wijdverspreide expressie van deze receptor hebben gevonden in vagale afferente neuronen30,31,32,hebben anderen vastgesteld dat Ghsr-mRNA bijna niet detecteerbaar is in het nodose ganglion11,14. Gedetailleerde mapping van Ghsr-mRNA in de vagale ganglionaire massa is daarom gerechtvaardigd.
In situ hybridisatie (ISH) is ook gebruikt om genexpressiepatronen in de vagale ganglionaire massa7,11,12,33,34,35te beoordelen. Omdat op RNA gebaseerde technieken onder de meeste omstandigheden betrouwbaarder en specifieker blijven dan op antilichamen gebaseerde technieken36,37, zijn ISH-studies waardevol gebleken voor een beter begrip van de neurochemische codering van vagale afferente neuronen. Toch zijn traditionele ISH-technieken zelf niet zonder kanttekeningen. Radioactieve ISH is gevoelig maar genereert achtergrond en blijft omslachtig38. Niet-radioactieve ISH is minder ingewikkeld maar ook minder gevoelig38. De recent ontwikkelde RNAscope ISH-methode is daarentegen zeer gevoelig en genereert minimale achtergrond39. De huidige studie paste multiplex fluorescerende RNAscope toe op de detectie van GPCR's in vagale afferente neuronen van de muis. We concentreerden ons op het in kaart brengen van de distributie van Ghsr en vergeleken de distributie met die van de cholecystokininereceptor (Cck1r), een andere GPCR waarvan bekend is dat deze tot expressie komt in het nodose ganglion34. Ten slotte werden de twee transcriptiefactoren, gepaard-achtige homeobox 2b (Phox2b) en PR-domein zinkvingereiwit 12 (Prdm12), gebruikt als selectieve markers voor nodose en jugulaire afferente neuronen, respectievelijk14. Zonder Phox2b of Prdm12 te visualiseren, zou het een uitdaging zijn om jugulaire versus nodose afferente stoffen met zekerheid te identificeren. Mogelijke technische valkuilen worden ook in het hele artikel besproken.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10x PBS</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP399-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20x SSC</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-80&#176;C freezer</td>
			<td>PHCBI</td>
			<td>MDF-DU901VHA-PA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Photoshop 2021</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td>photo and design software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Baking oven</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>Model:658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM880 Airyscan</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass</td>
			<td>Brain Research Laboratories</td>
			<td>2460-1.5D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM 3050 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11252-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ecomount</td>
			<td>Biocare Medical</td>
			<td>EM 897L</td>
			<td>mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HybEZ oven</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>hybridization oven</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophobic pen</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-4000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ-Fiji</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large scissors</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>100-7561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro centrifuge tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20170-333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minipump variable flow</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-876-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 520</td>
			<td>Akoya biosciences</td>
			<td>FP1 1487001KT</td>
			<td>Fluorescent biomarker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 570</td>
			<td>Akoya biosciences</td>
			<td>FP1 1488001KT</td>
			<td>Fluorescent biomarker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 690</td>
			<td>Akoya biosciences</td>
			<td>FP1 1497001KT</td>
			<td>Fluorescent biomarker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>mounting medium for fluorescently labeled cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope Multiplex Fluorescent Reagent Kit v2</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>323100</td>
			<td>multiplex kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse Cck1r-C3</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>313751-C3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse DapB</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>310043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse Ghsr</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>426141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse Phox2b-C2</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>407861-C2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse Prdm12-C2</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>524371-C2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RnaseZap</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R2020</td>
			<td>Rnase decontaminating solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small dissecting scissors</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>Z265977</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus slides</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>1255015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Tek OCT medium</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>User manual</td>
			<td>ACD</td>
			<td>323100 USM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS 5620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN Imaging Software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of g protein-coupled receptor expression in mouse vagal afferent neurons using multiplex in situ hybridization

Deze studie beschrijft een protocol voor de multiplex in situ hybridisatie (ISH) van de muis jugulair-nodose ganglia, met een bijzondere nadruk op het detecteren van de expressie van G-eiwit-gekoppelde receptoren (GPCR's). Formaline-gefixeerde jugulaire-nodose ganglia werden verwerkt met de RNAscope-technologie om tegelijkertijd de expressie van twee representatieve GPCR's (cholecystokinine en ghrelinereceptoren) te detecteren in combinatie met één markergen van nodose (gepaarde homeobox 2b, Phox2b) of jugulaire afferente neuronen (PR-domein zinkvingereiwit 12, Prdm12). Gelabelde ganglia werden afgebeeld met behulp van confocale microscopie om de distributie- en expressiepatronen van de bovengenoemde transcripten te bepalen. Kortom, Phox2b afferente neuronen bleken overvloedig de cholecystokininereceptor (Cck1r) tot expressie te brengen, maar niet de ghrelinereceptor (Ghsr). Een kleine subset van Prdm12 afferente neuronen bleek ook Ghsr en/of Cck1r tot expressie te brengen. Mogelijke technische kanttekeningen bij het ontwerp, de verwerking en de interpretatie van multiplex ISH worden besproken. De aanpak die in dit artikel wordt beschreven, kan wetenschappers helpen bij het genereren van nauwkeurige kaarten van de transcriptionele profielen van vagale afferente neuronen.

Hoewel RNAScope kan worden toegepast op dieren van elke leeftijd, geslacht of genetische achtergrond, is het raadzaam om met jonge volwassenen (<3 maanden oud) te werken. Dit komt omdat fluorescerende artefacten (bijv. Lipofuscine) veel voorkomende bevindingen zijn in neuronen van oudere dieren41. De formaline-gefixeerde ganglia van oudere muizen bevatten vaak verrassend intense endogene fluorescentie die gemakkelijk kan worden aangezien voor echte kleuring(Figuur 1A,...

Watch this Scientific Journal Video about Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization at JoVE.com

Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization

Multiplex in situ hybridisatie (ISH) werd gebruikt om tegelijkertijd de transcripten voor twee G-eiwit-gekoppelde receptoren en één transcriptiefactor in het gehele vagale ganglionaire complex van de volwassen muis te visualiseren. Dit protocol kan worden gebruikt om nauwkeurige kaarten van de transcriptionele profielen van vagale afferente neuronen te genereren.

Detectie van G-eiwit-gekoppelde receptorexpressie in vagale afferente neuronen van muizen met behulp van Multiplex In Situ Hybridisatie

This study describes a protocol for the multiplex in situ hybridization (ISH) of the mouse jugular-nodose ganglia, with a particular emphasis on detecting ...

Deze procedure is zeer gevoelig en maakt een visualisatie van verschillende transcripties met minimale achtergrond mogelijk. Deze methode kan nauwkeurige kaarten genereren van het transcriptionele profiel van zeer heterogene celtypen. De procedure wordt gedemonstreerd door mij en Johnson Bob-manuel, een onderzoekstechnicus in het laboratorium.Begin met het verzamelen van de volledige vagale ganglionische massa van de acht weken oude muis van elke kant, met behulp van een ontleedbare scope en chirurgische instrumenten. Gebruik na onthoofding van de muis een kleine tang om het sternohyoïde en de omohyoïde spieren lateraal naar de luchtpijp te verwijderen om het achterhoofdsbeen bloot te leggen. Maak het hele gebied van spieren en weefsels vrij totdat de halsslagader, de vagus en hypoglossale zenuw en foramen magnum zichtbaar zijn.Knip vervolgens de hele hypoglossale zenuw af met een kleine veerschaar. Zoek naar het nodose ganglion als een doorschijnende massa dicht bij het foramen magnum. Breek met een kleine schaar voorzichtig het achterhoofdsbeen.Om het jugulaire ganglion verder bloot te leggen, lokaliseer je zwarte melanocyten aan het oppervlak van de jugular als visueel oriëntatiepunt. Wanneer de ganglionen worden gevonden, snijdt u de zenuwaanhechtingen tussen de vagale ganglionische massa en trekt u zachtjes aan het perifere uiteinde van de nervus vagus terwijl u tegelijkertijd het jugulaire ganglion naar de hersenstam snijdt met een kleine veerschaar voor de extractie van de hele ganglionische massa. Verwijder het bindweefsel, de ganglionaire massa en het vet dat aan de nervus vagus kleeft.Het houden van ongeveer een halve centimeter van de nervus vagus om het hanteren en lokaliseren van monsters te vergemakkelijken. Plaats de remove op ganglia met behulp van een fijne tang in microcentrifugebuizen van 1,5 millimeter. En incubeer bij vier graden celsius in formaline gedurende 24 uur.En dan met 30% sucrose gedurende 24 uur. Plaats na incubatie de ganglia in een druppel van een diameter van vier millimeter van een optimaal snijtemperatuurmedium op een stuk aluminiumfolie. En formuleer het monster op een bed van droogijs.Snijd de bevroren monsters met een cryostaat in secties van 14 micrometer dikte bij min 20 graden Celsius en verzamel de gesneden secties op de glazen microscoopglaasjes als drie series 42 micrometer uit elkaar. Spoel de dia's af met weefselsecties in PBS. En bak 30 minuten op 60 graden Celsius in een bakoven.Plak vervolgens de dia's in 4% formaline gedurende 15 minuten bij vier graden Celsius. Droog de glaasjes serieel uit in 50%70% en 100% ethanol gedurende elk vijf minuten. En breng waterstofperoxide-oplossing gedurende 10 minuten aan op de monsters voordat u in dubbel gedestilleerd water spoelt.Voor In situ hybridisatie, of ISH, behandel de monsters met het doel-ophaalreagens gedurende vijf minuten. Spoel de monsters vervolgens achtereenvolgens in dubbel gedestilleerd water en 100% ethanol, gevolgd door luchtdroging. Maak met behulp van een hydrofobe pen een barrière rond de monsters.Terwijl de monsters gedurende 30 minuten worden behandeld met protease bij 40 graden Celsius en een hybridisatieoven, verwarmt u de sondes voor op 40 graden Celsius en koelt u ze voor gebruik af op kamertemperatuur. Na het verplaatsen uit de oven, incubeer de dia's met de gewenste combinatie van doelsondes gedurende twee uur bij 40 graden Celsius in een hybridisatieoven. Incubeer negatief controleweefsel met het dihydrodipicolinate-reductase of DapB, doel C1-sonde gedurende twee uur bij 40 graden Celsius.Spoel de glaasjes in wasbuffer en bewaar een nacht in vijf keer natriumcitraat bij kamertemperatuur. Spoel de volgende dag de glaasjes af met wasbuffer voordat u ze incubeert met versterkingsreagentia. En behandel met kanaalspecifieke reagentia zoals beschreven in het manuscript.Was de dia's gevolgd door een behandeling met DapB gedurende 30 seconden. Breng vervolgens onmiddellijk het bevestigingsmedium op elke dia aan en plaats een afdekslip over het weefselgedeelte. Houd de weefsels horizontaal in een diahouder op vier graden Celsius totdat ze worden afgebeeld.Bereid een confocale microscoop voor op beeldvorming door de vereiste parameters in te stellen. Verkrijg de afbeeldingen met een lijngemiddelde van vier en een pixelgrootte van ten minste 1024 bij 1024 om de kwaliteit van de afbeeldingen te verbeteren. Zodra u tevreden bent met de acquisitieparameters, begint u met het verwerven van de afbeeldingen met dezelfde instellingen.Wijs valse kleuren toe aan elk kanaal om visualisatie te vergemakkelijken. Gebruik de digitale afbeeldingen om cellen te tellen door de omtrek van RNA-scopepositieve profielen te identificeren met één kern die licht gekleurd is met DapB. Bereken het percentage RNA-scopepositieve profielen dat elk transcript tot expressie brengt.De optimale acquisitieparameters werden voor elke laser gekozen op basis van de niet-specifieke fluorescentie verkregen in het negatieve controleweefsel. De endogene fluorescentie in het nodose ganglion van een jongvolwassen muis is minimaal. En incubatie met een DapB-sonde, het resulteerde niet in signalen.Bij verhoogd vermogen laser en versterking met de 488 nanometer laser, ongewenste achtergrond en willekeurige fluorescerende stippen verschijnen. De RNA scope-techniek werd toegepast om drie genen te detecteren in weefselsecties van de vagale ganglionaire massa. Het weefselprofiel was positief voor GHSR en CCK1R.Het profiel omvatte zowel Phox2b- als CCK1R-transcripties in het rostrale deel van het nodose ganglion. Als gevolg van de multiplex ISH in nodose afferente neuronen, phox2b signalen specifiek opgehoopt in afferente neuronen, gelegen in de nodose ganglion. CCK1R-signalen hebben veel neuronen in het nodose ganglion intens gelabeld.Bij lage vergroting konden cellen die lage CCK1R- of GSHR-signalen tot expressie brachten niet gemakkelijk worden waargenomen. DapB hielp het weefsel te visualiseren en vagale afferente neuronen met een grote en licht bevlekte kern te identificeren. Bij hoge vergroting zijn Phox2b positieve profielen duidelijk.Profiel twee en drie zijn Phox2b-cellen met hoge en matige CCK1R-signalen. Profiel vier drukte zowel GHSR als CCK1R uit. Als gevolg van de multiplex ISH van de jugulaire afferente neuronen, kon het PRDM12-transcript specifiek worden gezien in afferente neuronen in het jugulaire ganglion.Bij hoge vergroting werden matige signalen voor CCK1R gedetecteerd in profiel één en twee. Profiel drie is een vertegenwoordiger van PRDM12-cellen die negatief zijn voor CCK1R of GHSR. Consistentie van dissectie is een belangrijke factor.Het is even belangrijk om te controleren of de parameters voor beeldvormingsacquisitie geen ongewenste achtergrondsignalen genereren. Multiplex In situ hybridisatie is uitgegroeid tot de gouden standaard in moleculaire gevestigde, vooral op het gebied van neuroanatomie. Deze methode kan gemakkelijk worden gecombineerd met immunohistochemie.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization

Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections

Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections

Dubbele Fluorescentie In situ Hybridisatie in Fresh Brain secties

Here we describe a modified version of a double fluorescence in situ hybridization (dFISH) method optimized for detecting two mRNAs of interest in fresh ...

Combining Lipophilic dye, in situ Hybridization, Immunohistochemistry, and Histology

Combining Lipophilic dye, in situ Hybridization, Immunohistochemistry, and Histology

De combinatie van Lipophilic kleurstof, In situ Hybridisatie, immunohistochemie, en Histologie

Going beyond single gene function to cut deeper into gene regulatory networks requires multiple mutations combined in a single animal.  Such analysis of ...

Detection of Protein Palmitoylation in Cultured Hippocampal Neurons by Immunoprecipitation and Acyl-Biotin Exchange (ABE)

Detection of Protein Palmitoylation in Cultured Hippocampal Neurons by Immunoprecipitation and Acyl-Biotin Exchange ABE

Detectie van eiwit palmitoylering in gekweekte hippocampale neuronen door immunoprecipitatie en Acyl-Biotin Exchange (ABE)

Palmitoylation is a post-translational lipid  modification involving the attachment of a 16-carbon saturated fatty acid,  palmitate, to cysteine residues ...

Detection of the Genome and Transcripts of a Persistent DNA Virus in Neuronal Tissues by Fluorescent In situ Hybridization Combined with Immunostaining

Detection of the Genome and Transcripts of a Persistent DNA Virus in Neuronal Tissues by Fluorescent In situ Hybridization Combined with Immunostaining

Detectie van het genoom en de transcripties van een persistente DNA Virus in neuronale weefsels door Fluorescent In situ Hybridisatie Gecombineerd met Immunokleuring

Single cell codetection of a gene, its RNA product and cellular regulatory proteins is critical to study gene expression regulation. This is a challenge ...

Detection of Axonally Localized mRNAs in Brain Sections Using High-Resolution In Situ Hybridization

Detection of Axonally Localized mRNAs in Brain Sections Using High-Resolution In Situ Hybridization

Detectie van Axonally Gelokaliseerde mRNA in Brain secties met behulp van High-Resolution<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie

mRNAs are frequently localized to vertebrate axons and their local translation is required for axon pathfinding or branching during development and for ...

Combining Double Fluorescence In Situ Hybridization with Immunolabelling for Detection of the Expression of Three Genes in Mouse Brain Sections

Combining Double Fluorescence In Situ Hybridization with Immunolabelling for Detection of the Expression of Three Genes in Mouse Brain Sections

De combinatie van Double Fluorescentie<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie met immunolabel voor detectie van de expressie van drie genen in de hersenen van muizen Secties

Detection of gene expression in different types of brain cells e.g., neurons, astrocytes, oligodendrocytes, oligodendrocyte precursors and microglia, can ...

In Vitro Recording of Mesenteric Afferent Nerve Activity in Mouse Jejunal and Colonic Segments

In Vitro Recording of Mesenteric Afferent Nerve Activity in Mouse Jejunal and Colonic Segments

In Vitro Registratie van Mesenteriale afferente zenuw activiteit in het Muis jejunale en Colonic Segmenten

Afferent nerves not only convey information concerning normal physiology, but also signal disturbed homeostasis and pathophysiological processes of the ...

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Lokalisatie van Receptorgenen van Reukstof in Locustantenne door RNA<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisatie

Insects have evolved sophisticated olfactory reception systems to sense exogenous chemical signals. These chemical signals are transduced by Olfactory ...

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

Identificatie van Dopamine D1-Alpha Receptor binnen knaagdier Nucleus Accumbens door een innovatieve RNA In Situ de technologie van de opsporing

In the central nervous system, the D1-alpha subtype receptor (Drd1&#945;) is the most abundant dopamine (DA) receptor, which plays a vital role in ...

Preparations and Protocols for Whole Cell Patch Clamp Recording of Xenopus laevis Tectal Neurons

Preparations and Protocols for Whole Cell Patch Clamp Recording of Xenopus laevis Tectal Neurons

Preparaten en protocollen voor de hele cel Patch klem opname van Xenopus laevis Tectal neuronen

The Xenopus tadpole retinotectal circuit, comprised of the retinal ganglion cells (RGCs) in the eye which form synapses directly onto neurons in the optic ...