Name: detection of g protein-coupled receptor expression in mouse vagal afferent neurons using multiplex in situ hybridization
Uploaded: 2021-09-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization at JoVE.com

Diese Arbeit wurde durch den Neuroanatomy/Histology/Brain Injection Core unterstützt, der durch den NIH-Zuschuss #5P01DK119130-02 finanziert wurde. Die Autoren möchten die Unterstützung der UT Southwestern Live Cell Imaging Facility (unter der Leitung von Dr. Phelps) und ihrer Mitarbeiter (Abhijit Bugde und Marcel Mettlen) würdigen, die zum Teil durch den NIH Grant #1S10OD021684-01, eine gemeinsame Ressource des Harold C. Simmons Cancer Center, unterstützt zum Teil durch einen NCI Cancer Center Support Grant, unterstützt wird. P30 CA142543.

HINWEIS: Mäuse, die in dieser Studie verwendet wurden, waren Wildtyp-Männchen auf einem reinen C57BL / 6J-Hintergrund. Insgesamt wurden 4 Mäuse für Multiplex-ISH verwendet. Alle Mäuse waren zum Zeitpunkt des Opfers etwa 8 Wochen alt. Eine männliche Maus (etwa ein Jahr alt) wurde auch verwendet, um endogene Fluoreszenz im Zusammenhang mit dem Altern nachzuweisen. Die Tiere wurden in belüfteten Käfigen in einer Barriereeinrichtung mit ad libitum Zugang zu Nahrung und Wasser untergebracht. Das UT Southweste...

Die Technik der ISH wurde in den späten 1960er Jahren erfunden42. Erst Mitte der 1980er Jahre wurde es jedoch zum Nachweis von mRNAs im zentralen und peripheren Nervensystem eingesetzt43,44. In Anbetracht der Heterogenität des Nervensystems und wiederkehrender Probleme mit Antikörpern bleibt die Lokalisierung eines bestimmten Transkripts auf zellulärer Ebene ein unschätzbares Werkzeug. Dennoch sind die traditionellen ISH-Methoden müh...

Die Zellkörper der vagalen Afferenzen sind in den Jugular-, Petrosal- und Nodose-Ganglien1,2,3enthalten. Ihre Axone wandern zusammen über mehrere Äste des Vagusnervs zu den kraniozervikalen, thorakalen und abdominalen Territorien4,5,6,7. Von ihren viszeralen Enden aus können vagale Afferenzen auf eine Breite von physiologischen und schädlichen Reizen reagieren8,9,10. Die Verteilung von Signalmolekülen und Rezeptoren, die an der Vaguserfassung beteiligt sind, ist jedoch nach wie vor schlecht charakterisiert. Dies liegt zum Teil daran, dass die Vagusganglien trotz ihrer geringen Größe ein breites Spektrum von Rezeptoren exprimieren, darunter eine große Anzahl von GPCRs8,11,12,13. Darüber hinaus sind vagale afferente Neuronen von Natur aus heterogen und weisen unterschiedliche molekulare Profile auf14. Um die Sache zu komplizieren, sind die Jugular-, Petrosal- und Nodose-Ganglien in der Maus befestigt und bilden dadurch eine einzige ganglionäre Masse. Schließlich ist bei einer Untergruppe von Tieren das Knotenganglion an das sympathische Ganglion cervicalis superior15gebunden.
In der Vergangenheit haben sich die Forscher der Immunhistochemie zugewandt, um die neurochemische Zusammensetzung der vagalen afferenten Neuronen zu untersuchen16,17,18. Während die Immunhistochemie mit validierten Antikörpern nützlich ist, müssen die Ergebnisse immunhistochemischer Studien mit Vorsicht interpretiert werden. Zum Beispiel sind zahlreiche Bemühungen, spezifische Antikörper gegen GPCRs zuidentifizieren,gescheitert 19,20,21,22,23,24,25, was die Forscher zu dem Schluss führte, dass die Mehrheit der Antikörper gegen GPCRs unzuverlässig ist. Um diese Probleme zu umgehen, wurde die quantitative PCR (qPCR) weit verbreitet zur Beurteilung der Genexpression in der vagalen Ganglionmasse des Nagetiers26,27,28,29. Die Untersuchung der Genexpression mittels qPCR erfolgt jedoch auf Kosten eines Verlusts räumlicher Informationen. Insbesondere kann nicht vorhergesagt werden, wie viele Zellen oder welche Zelltypen ein bestimmtes Gen von Interesse exprimieren (z. B. Schlinge vs. Jugularzellen). Zu den wiederkehrenden Problemen gehören auch die Kontamination mit benachbarten Geweben und die Einbeziehung variabler Längen des Vagusnervs, des oberen Gebärmutterhalses und der Jugularganglien während der Dissektion15. Infolge der oben genannten Schwierigkeiten gibt es Kontroversen um die Expression und Verteilung mehrerer GPCRs in vagalen afferenten Neuronen. Ein besonders rätselhaftes Beispiel betrifft den Ghrelin-Rezeptor (Ghsr). Während einige Studien eine weit verbreitete Expression dieses Rezeptors in vagalen afferenten Neuronen30,31,32gefunden haben, haben andere festgestellt, dass Ghsr mRNA im Nodose Ganglion11,14fast nicht nachweisbar ist . Eine detaillierte Kartierung der Ghsr-mRNA in der vagalen ganglionären Masse ist daher gerechtfertigt.
Die In-situ-Hybridisierung (ISH) wurde auch verwendet, um Genexpressionsmuster in der vagalen ganglionären Masse7,11,12,33,34,35zubewerten. Da RNA-basierte Techniken unter den meisten Umständen zuverlässiger und spezifischer bleiben als Antikörper-basierte Techniken36,37, ISH-Studien haben sich als wertvoll für ein besseres Verständnis der neurochemischen Kodierung von vagalen afferenten Neuronen erwiesen. Nichtsdestotrotz sind traditionelle ISH-Techniken selbst nicht ohne Vorbehalte. Radioaktives ISH ist empfindlich, erzeugt aber Hintergrund und bleibt umständlich38. Nicht-radioaktive ISH ist weniger kompliziert, aber auch weniger empfindlich38. Im Gegensatz dazu ist die kürzlich entwickelte RNAscope ISH-Methode hochempfindlich und erzeugt minimalen Hintergrund39. Die aktuelle Studie wandte multiplex fluoreszierendes RNAscope zum Nachweis von GPCRs in vagalen afferenten Neuronen der Maus an. Wir konzentrierten uns auf die Kartierung der Verteilung von Ghsr und verglichen seine Verteilung mit der des Cholecystokinin-Rezeptors (Cck1r), einer anderen GPCR, von der bekannt ist, dass sie im Knotenganglion34exprimiert wird. Schließlich wurden die beiden Transkriptionsfaktoren, die paarartige Homöobox 2b (Phox2b) und das PR-Domänen-Zinkfingerprotein 12 (Prdm12), als selektive Marker für nodose und jugular afferente Neuronen verwendet14. Ohne die Visualisierung von Phox2b oder Prdm12 wäre es schwierig, Jugular vs. Nodose Afferents mit Sicherheit zu identifizieren. Mögliche technische Fallstricke werden ebenfalls im gesamten Artikel diskutiert.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>10x PBS</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP399-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20x SSC</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-80&#176;C freezer</td>
			<td>PHCBI</td>
			<td>MDF-DU901VHA-PA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Photoshop 2021</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td>photo and design software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Baking oven</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>Model:658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM880 Airyscan</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass</td>
			<td>Brain Research Laboratories</td>
			<td>2460-1.5D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM 3050 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11252-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ecomount</td>
			<td>Biocare Medical</td>
			<td>EM 897L</td>
			<td>mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HybEZ oven</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>hybridization oven</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophobic pen</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-4000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ-Fiji</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large scissors</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>100-7561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro centrifuge tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20170-333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minipump variable flow</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-876-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 520</td>
			<td>Akoya biosciences</td>
			<td>FP1 1487001KT</td>
			<td>Fluorescent biomarker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 570</td>
			<td>Akoya biosciences</td>
			<td>FP1 1488001KT</td>
			<td>Fluorescent biomarker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 690</td>
			<td>Akoya biosciences</td>
			<td>FP1 1497001KT</td>
			<td>Fluorescent biomarker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>mounting medium for fluorescently labeled cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope Multiplex Fluorescent Reagent Kit v2</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>323100</td>
			<td>multiplex kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse Cck1r-C3</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>313751-C3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse DapB</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>310043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse Ghsr</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>426141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse Phox2b-C2</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>407861-C2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse Prdm12-C2</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>524371-C2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RnaseZap</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R2020</td>
			<td>Rnase decontaminating solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small dissecting scissors</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>Z265977</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus slides</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>1255015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Tek OCT medium</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>User manual</td>
			<td>ACD</td>
			<td>323100 USM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS 5620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN Imaging Software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of g protein-coupled receptor expression in mouse vagal afferent neurons using multiplex in situ hybridization

Diese Studie beschreibt ein Protokoll für die Multiplex-in-situ-Hybridisierung (ISH) der Maus-Jugular-Nodose-Ganglien, mit besonderem Schwerpunkt auf dem Nachweis der Expression von G-Protein-gekoppelten Rezeptoren (GPCRs). Formalin-fixierte Jugular-Nodose-Ganglien wurden mit der RNAscope-Technologie verarbeitet, um gleichzeitig die Expression von zwei repräsentativen GPCRs (Cholecystokinin- und Ghrelin-Rezeptoren) in Kombination mit einem Markergen entweder der Nodose (paarartige Homöobox 2b, Phox2b) oder jugularen afferenten Neuronen (PR-Domäne Zinkfingerprotein 12, Prdm12) nachzuweisen. Markierte Ganglien wurden mittels konfokaler Mikroskopie abgebildet, um die Verteilungs- und Expressionsmuster der oben genannten Transkripte zu bestimmen. Kurz gesagt, phox2b afferente Neuronen wurden gefunden, um reichlich den Cholecystokinin-Rezeptor (Cck1r) zu exprimieren, aber nicht den Ghrelin-Rezeptor (Ghsr). Es wurde auch festgestellt, dass eine kleine Untergruppe von Prdm12-afferenten Neuronen Ghsr und / oder Cck1r exprimiert. Der in diesem Artikel beschriebene Ansatz kann Wissenschaftlern helfen, genaue Karten der Transkriptionsprofile vagaler afferenter Neuronen zu erstellen.

Während RNAScope bei Tieren jeden Alters, Geschlechts oder genetischen Hintergrunds angewendet werden kann, ist es ratsam, mit jungen Erwachsenen (<3 Monate alt) zu arbeiten. Dies liegt daran, dass fluoreszierende Artefakte (z. B. Lipofuscin) häufige Befunde in Neuronen älterer Tiere sind41. Die formalinfixierten Ganglien älterer Mäuse enthalten oft eine überraschend intensive endogene Fluoreszenz, die leicht mit einer echten Färbung verwechselt werden kann (Abbildung 1...

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Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization

Multiplex in situ Hybridisierung (ISH) wurde verwendet, um gleichzeitig die Transkripte für zwei G-Protein-gekoppelte Rezeptoren und einen Transkriptionsfaktor im gesamten vagalen ganglionären Komplex der erwachsenen Maus zu visualisieren. Dieses Protokoll könnte verwendet werden, um genaue Karten der Transkriptionsprofile von vagalen afferenten Neuronen zu erstellen.

Nachweis der G-Protein-gekoppelten Rezeptorexpression in vagalen afferenten Neuronen der Maus mittels Multiplex-In-situ-Hybridisierung

This study describes a protocol for the multiplex in situ hybridization (ISH) of the mouse jugular-nodose ganglia, with a particular emphasis on detecting ...

Dieses Verfahren ist hochsensibel und ermöglicht eine Visualisierung mehrerer Transkripte mit minimalem Hintergrund. Diese Methode kann genaue Abbildungen des Transkriptionsprofils von hochheterogenen Zelltypen erzeugen. Das Verfahren werden von mir und Johnson Bob-manuel, einem Forschungstechniker im Labor, demonstriert.Beginnen Sie damit, die gesamte vagale ganglionäre Masse von der acht Wochen alten Maus von jeder Seite mit Hilfe eines Sezierfernrohrs und chirurgischer Instrumente zu sammeln. Nach der Enthauptung der Maus verwenden Sie eine kleine Pinzette, um das Sternohyoid und die omohyoiden Muskeln seitlich zur Luftröhre zu entfernen, um den Okzipitalknochen freizulegen. Reinigen Sie die gesamte Region von Muskeln und Geweben, bis die Halsschlagader, der Vagus und der Nervus hypoglossus sowie das Foramen magnum sichtbar sind.Schneiden Sie dann den gesamten Hypoglossusnerv mit einer kleinen Federschere ab. Suchen Sie für das Knotenganglion als durchscheinende Masse in der Nähe des Foramen magnum. Mit einer kleinen Schere den Hinterhauptbein vorsichtig brechen.Um das Jugularganglion weiter freizulegen, lokalisieren Sie schwarze Melanozyten an der Oberfläche des Jugulars als visuelle Landmarke. Wenn die Ganglien gefunden sind, schneiden Sie die Nervenanhänge zwischen der vagalen ganglionischen Masse ab und ziehen Sie sanft am peripheren Ende des Vagusnervs, während Sie gleichzeitig das Jugularganglion mit einer kleinen Federschere in Richtung Hirnstamm schneiden, um die gesamte Ganglionmasse zu extrahieren. Entfernen Sie das Bindegewebe, die ganglionäre Masse und das Fett, das am Vagusnerv haftet.Halten Sie etwa einen halben Zentimeter des Vagusnervs, um die Handhabung und Lokalisierung von Proben zu erleichtern. Legen Sie die Entfernung mit Hilfe einer feinen Pinzette in 1,5 Millimeter Mikrozentrifugenröhrchen auf Ganglien. Und bei vier Grad Celsius in Formalin für 24 Stunden inkubieren.Und dann mit 30% Saccharose für 24 Stunden. Nach der Inkubation positionieren Sie die Ganglien in einem Tropfen von vier Millimeter Durchmesser eines optimalen Schnitttemperaturmediums auf einem Stück Aluminiumfolie. Und formulieren Sie die Probe auf einem Bett aus Trockeneis.Schneiden Sie die gefrorenen Proben mit einem Kryostaten in Abschnitte von 14 Mikrometer Dicke bei minus 20 Grad Celsius und sammeln Sie die geschnittenen Abschnitte auf den Glasmikroskopobjektträgern im Abstand von drei Serien im Abstand von 42 Mikrometern. Spülen Sie die Objektträger mit Gewebeschnitten in PBS. Und 30 Minuten bei 60 Grad Celsius im Backofen backen.Dann fixieren Sie die Folien in 4% Formalin für 15 Minuten bei vier Grad Celsius. Die Objektträger in 50%70% und 100% Ethanol für jeweils fünf Minuten seriell dehydrieren. Und tragen Sie Wasserstoffperoxidlösung für 10 Minuten auf die Proben auf, bevor Sie in doppelt destilliertem Wasser spülen.Für die In-situ-Hybridisierung (ISH) behandeln Sie die Proben fünf Minuten lang mit dem Zielentnahmereagenz. Anschließend werden die Proben nacheinander in doppelt destilliertem Wasser und 100% Ethanol gespült, gefolgt von einer Lufttrocknung. Erzeugen Sie mit einem hydrophoben Pen eine Barriere um die Proben.Während die Proben 30 Minuten lang bei 40 Grad Celsius und einem Hybridisierungsofen mit Protease behandelt werden, sollten die Sonden bei 40 Grad Celsius vorgewärmt und vor Gebrauch bei Raumtemperatur abgekühlt werden. Nach dem Verlassen des Ofens inkubieren Sie die Objektträger mit der gewünschten Kombination von Zielsonden für zwei Stunden bei 40 Grad Celsius in einem Hybridisierungsofen. Inkubieren Sie Negativkontrollgewebe mit der Dihydrodipicolinatreduktase oder DapB, Ziel-C1-Sonde für zwei Stunden bei 40 Grad Celsius.Spülen Sie die Objektträger in Waschpuffer und lagern Sie sie über Nacht in fünfmal salzhaltigem Natriumcitrat bei Raumtemperatur. Am nächsten Tag spülen Sie die Objektträger vor der Inkubation mit Amplifikationsreagenzien mit Waschpuffer ab. Und behandeln Sie mit kanalspezifischen Reagenzien, wie im Manuskript beschrieben.Waschen Sie die Objektträger mit anschließender Behandlung mit DapB für 30 Sekunden. Tragen Sie dann sofort das Befestigungsmedium auf jeden Objektträger auf und legen Sie einen Abdeckschlitten über den Gewebeabschnitt. Halten Sie die Gewebe horizontal in einem Objektträgerhalter bei vier Grad Celsius, bis sie sich abbilden.Bereiten Sie ein konfokales Mikroskop für die Bildgebung vor, indem Sie die erforderlichen Parameter einstellen. Erfassen Sie die Bilder mit einer Liniendurchschnittsgröße von vier und einer Pixelgröße von mindestens 1024 x 1024, um die Qualität der Bilder zu verbessern. Sobald Sie mit den Aufnahmeparametern zufrieden sind, beginnen Sie mit der Aufnahme der Bilder mit den gleichen Einstellungen.Weisen Sie jedem Kanal falsche Farben zu, um die Visualisierung zu erleichtern. Führen Sie mithilfe der digitalen Bilder eine Zellzählung durch, indem Sie die Umrisse positiver RNA-Scope-Profile mit einem Kern identifizieren, der leicht mit DapB gefärbt ist. Berechnen Sie den Prozentsatz der positiven RNA-Scope-Profile, die jedes Transkript exprimieren.Die optimalen Erfassungsparameter wurden für jeden Laser basierend auf der unspezifischen Fluoreszenz im Negativkontrollgewebe ausgewählt. Die endogene Fluoreszenz im Knotenganglion einer jungen erwachsenen Maus ist minimal. Und die Inkubation mit einer DapB-Sonde führte nicht zu Signalen.Bei erhöhter Leistung Laser und Verstärkung mit dem 488-Nanometer-Laser erscheinen unerwünschte Hintergrund- und zufällige fluoreszierende Punkte. Die RNA-Scope-Technik wurde angewendet, um drei Gene in Gewebeabschnitten der vagalen ganglionären Masse nachzuweisen. Das Gewebeprofil war positiv für GHSR und CCK1R.Das Profil umfasste sowohl Phox2b- als auch CCK1R-Transkripte im rostralen Teil des Nodose Ganglion. Als Folge des Multiplex-ISH in nodose afferenten Neuronen akkumulierten phox2b-Signale spezifisch in afferenten Neuronen, die sich im Nodose-Ganglion befinden. CCK1R-Signale markierten intensiv viele Neuronen im Knotenganglion.Bei geringer Vergrößerung konnten Zellen, die niedrige CCK1R- oder GSHR-Signale exprimierten, nicht leicht beobachtet werden. DapB half, das Gewebe zu visualisieren und vagale afferente Neuronen mit einem großen und leicht gefärbten Kern zu identifizieren. Bei hoher Vergrößerung sind Phox2b-positive Profile erkennbar.Die Profile zwei und drei sind Phox2b-Zellen mit hohen und moderaten CCK1R-Signalen. Profil vier drückte sowohl GHSR als auch CCK1R aus. Als Ergebnis des Multiplex-ISH der jugulären afferenten Neuronen konnte das PRDM12-Transkript spezifisch in afferenten Neuronen im Jugularganglion akkumuliert werden.Bei hoher Vergrößerung wurden moderate Signale für CCK1R in den Profilen eins und zwei nachgewiesen. Profil drei ist ein Vertreter von PRDM12-Zellen, die negativ für CCK1R oder GHSR sind. Die Konsistenz der Dissektion ist ein wichtiger Faktor.Ebenso wichtig ist es sicherzustellen, dass die Bilderfassungsparameter keine unerwünschten Hintergrundsignale erzeugen. Die Multiplex-In-situ-Hybridisierung hat sich zum Goldstandard in molekularen Bereichen entwickelt, insbesondere auf dem Gebiet der Neuroanatomie. Diese Methode kann leicht mit der Immunhistochemie kombiniert werden.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization

Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections

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Doppel-Fluoreszenz- In situ Hybridisierung in Fresh Hirnschnitten

Here we describe a modified version of a double fluorescence in situ hybridization (dFISH) method optimized for detecting two mRNAs of interest in fresh ...

Forschung

Neurowissenschaften

Combining Lipophilic dye, in situ Hybridization, Immunohistochemistry, and Histology

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Going beyond single gene function to cut deeper into gene regulatory networks requires multiple mutations combined in a single animal.  Such analysis of ...

Detection of Protein Palmitoylation in Cultured Hippocampal Neurons by Immunoprecipitation and Acyl-Biotin Exchange (ABE)

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Detektion von Protein Palmitoylierung in kultivierten Hippocampus-Neuronen durch Immunopräzipitation und Acyl-Biotin Exchange (ABE)

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Detection of the Genome and Transcripts of a Persistent DNA Virus in Neuronal Tissues by Fluorescent In situ Hybridization Combined with Immunostaining

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Nachweis der Transkripte von Genom und einem Persistent DNA-Virus in einem neuronalen Gewebe Fluorescent In situ Hybridisierung Kombination mit Immunfärbung

Single cell codetection of a gene, its RNA product and cellular regulatory proteins is critical to study gene expression regulation. This is a challenge ...

Detection of Axonally Localized mRNAs in Brain Sections Using High-Resolution In Situ Hybridization

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Nachweis von Axonally lokalisierten mRNAs in Gehirnschnitten mittels hochauflösender<em&gt; In-situ-</em&gt; Hybridization

mRNAs are frequently localized to vertebrate axons and their local translation is required for axon pathfinding or branching during development and for ...

Combining Double Fluorescence In Situ Hybridization with Immunolabelling for Detection of the Expression of Three Genes in Mouse Brain Sections

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Die Kombination von Doppel-Fluoreszenz<em&gt; In Situ</em&gt; Die Hybridisierung mit Immunmarkierung für Nachweis der Expression von drei Gene in Mäusehirnschnitten

Detection of gene expression in different types of brain cells e.g., neurons, astrocytes, oligodendrocytes, oligodendrocyte precursors and microglia, can ...

In Vitro Recording of Mesenteric Afferent Nerve Activity in Mouse Jejunal and Colonic Segments

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In - vitro - Aufnahme von Mesenteriale afferenten Nervenaktivität in Maus - Jejunal und Kolon - Segmente

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Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

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Lokalisierung von Odorant-Rezeptor-Genen in Locust-Antennen durch RNA<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisierung

Insects have evolved sophisticated olfactory reception systems to sense exogenous chemical signals. These chemical signals are transduced by Olfactory ...

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

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Identifizierung von Dopamin-D1-Alpha-Rezeptor im Nagetier Nucleus Accumbens durch eine Innovative RNA- In Situ -Detection-Technologie

In the central nervous system, the D1-alpha subtype receptor (Drd1&#945;) is the most abundant dopamine (DA) receptor, which plays a vital role in ...

Preparations and Protocols for Whole Cell Patch Clamp Recording of Xenopus laevis Tectal Neurons

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Vorbereitungen und Protokolle für die ganze Zelle Patch Clamp Aufnahme von Xenopus Laevis Tectal Neuronen

The Xenopus tadpole retinotectal circuit, comprised of the retinal ganglion cells (RGCs) in the eye which form synapses directly onto neurons in the optic ...