Name: detection of g protein-coupled receptor expression in mouse vagal afferent neurons using multiplex in situ hybridization
Uploaded: 2021-09-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization at JoVE.com

Questo lavoro è stato supportato dal Neuroanatomy/Histology/Brain Injection Core finanziato dalla sovvenzione NIH #5P01DK119130-02. Gli autori desiderano riconoscere l'assistenza della UT Southwestern Live Cell Imaging Facility (guidata dal Dr. Phelps) e del suo staff (Abhijit Bugde e Marcel Mettlen), supportati in parte dal NIH Grant #1S10OD021684-01, una risorsa condivisa dell'Harold C. Simmons Cancer Center, supportata in parte da una sovvenzione di supporto ncI Cancer Center, P30 CA142543.

NOTA: I topi utilizzati in questo studio erano maschi selvatici su uno sfondo C57BL / 6J puro. Un totale di 4 topi sono stati utilizzati per multiplex ISH. Tutti i topi avevano circa 8 settimane al momento del sacrificio. Un topo maschio (di circa un anno) è stato anche usato per dimostrare la fluorescenza endogena associata all'invecchiamento. Gli animali sono stati alloggiati in gabbie ventilate all'interno di una struttura di barriera con accesso ad libitum a cibo e acqua. L'UT Southwestern Medical Center In...

La tecnica di ISH è stata inventata alla fine del 196042. Tuttavia, non è fino alla metà degli anni 1980 che è stato applicato per il rilevamento di mRNA nel sistema nervoso centrale e periferico43,44. Considerando l'eterogeneità del sistema nervoso e i problemi ricorrenti con gli anticorpi, localizzare un particolare trascritto a livello cellulare rimane uno strumento inestimabile. Tuttavia, i metodi ISH tradizionali sono rimasti lab...

I corpi cellulari delle afferenze vagali sono contenuti nei gangli giugulari, petrosali e nodosi1,2,3. I loro assoni viaggiano insieme attraverso diversi rami del nervo vago ai territori craniocervicale, toracico e addominale4,5,6,7. Dalle loro terminazioni viscerali, le afferenze vagali possono rispondere a una vasta gamma di stimoli fisiologici e nocivi8,9,10. Tuttavia, la distribuzione delle molecole di segnalazione e dei recettori coinvolti nel rilevamento vagale rimane scarsamente caratterizzata. Ciò è in parte dovuto al fatto che i gangli vagali, nonostante le loro piccole dimensioni, esprimono un ampio spettro di recettori, tra cui un gran numero di GPCR8,11,12,13. Inoltre, i neuroni afferenti vagali sono intrinsecamente eterogenei e mostrano profili molecolari distinti14. A complicare la questione, i gangli giugulari, petrosali e nodosi sono attaccati al topo, formando così una singola massa gangliare. Infine, in un sottogruppo di animali, il ganglio nodoso è attaccato al ganglio cervicale superiore simpatico15.
In passato, i ricercatori si sono rivolti all'immunoistochimica per studiare la composizione neurochimica dei neuroni afferenti vagali16,17,18. Mentre l'immunoistochimica che utilizza anticorpi convalidati è utile, i risultati degli studi immunoistochimici devono essere interpretati con cautela. Ad esempio, numerosi sforzi per identificare anticorpi specifici contro i GPCR hanno fallito19,20,21,22,23,24,25,portando gli investigatori a concludere che la maggior parte degli anticorpi contro i GPCR sono inaffidabili. Per aggirare questi problemi, la PCR quantitativa (qPCR) è stata ampiamente utilizzata per valutare l'espressione genica nel roditore vagale di massa gangliare26,27,28,29. Tuttavia, l'esame dell'espressione genica utilizzando la qPCR avviene al costo di una perdita di informazioni spaziali. In particolare, non è possibile prevedere quante cellule o quali tipi di cellule esprimono un particolare gene di interesse (ad esempio, nodosi vs cellule giugulari). I problemi ricorrenti includono anche la contaminazione con i tessuti adiacenti e l'inclusione di lunghezze variabili del nervo vago, gangli cervicali e giugulari superiori durante la dissezione15. Come risultato delle difficoltà di cui sopra, la controversia circonda l'espressione e la distribuzione di diversi GPCR nei neuroni afferenti vagali. Un esempio particolarmente sconcertante riguarda il recettore della grelina (Ghsr). Mentre alcuni studi hanno trovato un'espressione diffusa di questo recettore nei neuroni afferenti vagali30,31,32,altri hanno trovato l'mRNA di Ghsr quasi non rilevabile nel ganglio nodoso11,14. È quindi necessaria una mappatura dettagliata dell'mRNA di Ghsr nella massa gangliare vagale.
L'ibridazione in situ (ISH) è stata utilizzata anche per valutare i modelli di espressione genica nella massa gangliare vagale7,11, 12,33,34,35. Poiché le tecniche basate sull'RNA rimangono più affidabili e specifiche rispetto alle tecniche basate sugli anticorpi nella maggior parte delle circostanze36,37,gli studi ISH si sono dimostrati preziosi per una migliore comprensione della codifica neurochimica dei neuroni afferenti vagali. Tuttavia, le stesse tecniche ISH tradizionali non sono prive di avvertimenti. L'ISH radioattivo è sensibile ma genera sfondo e rimane ingombrante38. L'ISH non radioattivo è meno complicato ma anche meno sensibile38. Al contrario, il metodo RNAscope ISH recentemente sviluppato è altamente sensibile e genera uno sfondo minimo39. L'attuale studio ha applicato l'RNAscopio fluorescente multiplex al rilevamento di GPCR nei neuroni afferenti vagali del topo. Ci siamo concentrati sulla mappatura della distribuzione di Ghsr e abbiamo confrontato la sua distribuzione con quella del recettore colecistochinina (Cck1r), un altro GPCR ben noto per essere espresso nel ganglio nodoso34. Infine, i due fattori di trascrizione, l'omeobox 2b accoppiato (Phox2b) e la proteina 12 del dito di zinco del dominio PR (Prdm12), sono stati utilizzati come marcatori selettivi per i neuroni afferenti nodosi e giugulari, rispettivamente14. Senza visualizzare Phox2b o Prdm12, sarebbe difficile identificare con certezza le afferenze giugulari vs nodosi. Potenziali insidie tecniche sono anche discusse in tutto l'articolo.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10x PBS</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP399-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20x SSC</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-80&#176;C freezer</td>
			<td>PHCBI</td>
			<td>MDF-DU901VHA-PA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Photoshop 2021</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td>photo and design software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Baking oven</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>Model:658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM880 Airyscan</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass</td>
			<td>Brain Research Laboratories</td>
			<td>2460-1.5D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM 3050 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11252-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ecomount</td>
			<td>Biocare Medical</td>
			<td>EM 897L</td>
			<td>mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HybEZ oven</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>hybridization oven</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophobic pen</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-4000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ-Fiji</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large scissors</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>100-7561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro centrifuge tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20170-333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minipump variable flow</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-876-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 520</td>
			<td>Akoya biosciences</td>
			<td>FP1 1487001KT</td>
			<td>Fluorescent biomarker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 570</td>
			<td>Akoya biosciences</td>
			<td>FP1 1488001KT</td>
			<td>Fluorescent biomarker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 690</td>
			<td>Akoya biosciences</td>
			<td>FP1 1497001KT</td>
			<td>Fluorescent biomarker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>mounting medium for fluorescently labeled cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope Multiplex Fluorescent Reagent Kit v2</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>323100</td>
			<td>multiplex kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse Cck1r-C3</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>313751-C3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse DapB</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>310043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse Ghsr</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>426141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse Phox2b-C2</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>407861-C2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse Prdm12-C2</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>524371-C2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RnaseZap</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R2020</td>
			<td>Rnase decontaminating solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small dissecting scissors</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>Z265977</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus slides</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>1255015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Tek OCT medium</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>User manual</td>
			<td>ACD</td>
			<td>323100 USM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS 5620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN Imaging Software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of g protein-coupled receptor expression in mouse vagal afferent neurons using multiplex in situ hybridization

Questo studio descrive un protocollo per l'ibridazione multiplex in situ (ISH) dei gangli giugulare-nodosi del topo, con particolare attenzione alla rilevazione dell'espressione dei recettori accoppiati alla proteina G (GPCR). I gangli giugulare-nodosi fissati in formalina sono stati elaborati con la tecnologia RNAscope per rilevare contemporaneamente l'espressione di due GPCR rappresentativi (colecistochinina e recettori della grelina) in combinazione con un gene marcatore di nodosi (omeobox 2b accoppiato, Phox2b) o neuroni afferenti giugulari (PR domain zinc finger protein 12, Prdm12). I gangli etichettati sono stati ripresi utilizzando la microscopia confocale per determinare i modelli di distribuzione ed espressione dei suddetti trascritti. In breve, i neuroni afferenti Phox2b sono stati trovati per esprimere abbondantemente il recettore colecistochinina (Cck1r) ma non il recettore della grelina (Ghsr). È stato anche scoperto che un piccolo sottoinsieme di neuroni afferenti Prdm12 esprime Ghsr e / o Cck1r. Vengono discussi potenziali avvertimenti tecnici nella progettazione, nell'elaborazione e nell'interpretazione dell'ISH multiplex. L'approccio descritto in questo articolo può aiutare gli scienziati a generare mappe accurate dei profili trascrizionali dei neuroni afferenti vagali.

Mentre RNAScope può essere applicato ad animali di qualsiasi età, sesso o background genetico, è consigliabile lavorare con giovani adulti (<3 mesi). Questo perché gli artefatti fluorescenti (ad esempio, lipofuscina) sono risultati comuni nei neuroni di animali più anziani41. I gangli fissati in formalina dei topi più anziani contengono spesso una fluorescenza endogena sorprendentemente intensa che può essere facilmente scambiata per una colorazione genuina (Figura 1A</...

Watch this Scientific Journal Video about Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization at JoVE.com

Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization

L'ibridazione multiplex in situ (ISH) è stata impiegata per visualizzare simultaneamente i trascritti per due recettori accoppiati a proteine G e un fattore di trascrizione nell'intero complesso gangliare vagale del topo adulto. Questo protocollo potrebbe essere utilizzato per generare mappe accurate dei profili trascrizionali dei neuroni afferenti vagali.

Rilevazione dell'espressione del recettore accoppiato alla proteina G nei neuroni afferenti vagali di topo utilizzando l'ibridazione multiplex in situ

This study describes a protocol for the multiplex in situ hybridization (ISH) of the mouse jugular-nodose ganglia, with a particular emphasis on detecting ...

Questa procedura è altamente sensibile e consente una visualizzazione di diverse trascrizioni con uno sfondo minimo. Questo metodo può generare mappe accurate del profilo trascrizionale di tipi cellulari altamente eterogenei. A dimostrare la procedura saremo io e Johnson Bob-manuel, un tecnico di ricerca in laboratorio.Inizia raccogliendo l'intera massa gangliare vagale dal topo di otto settimane da ciascun lato, con l'aiuto di un cannocchiale di dissezione e strumenti chirurgici. Dopo la decapitazione del topo, utilizzare una piccola pinza per rimuovere lo sternoioide e i muscoli omoioidi laterali alla trachea per esporre l'osso occipitale. Liberare l'intera regione di muscoli e tessuti fino a quando l'arteria carotide, il nervo vago e ipoglosso e il forame magno sono visibili.Quindi tagliare l'intero nervo ipoglosso con piccole forbici a molla. Individuare il ganglio nodoso come massa traslucida vicino al forame magno. Usando piccole forbici, rompere con cura l'osso occipitale.Per esporre ulteriormente il ganglio giugulare, individuare i melanociti neri sulla superficie della giugulare come punto di riferimento visivo. Quando i gangli vengono trovati, tagliare gli attacchi nervosi tra la massa gangliare vagale e tirare delicatamente l'estremità periferica del nervo vago mentre contemporaneamente si taglia il ganglio giugulare verso il tronco cerebrale con piccole forbici a molla per l'estrazione dell'intera massa gangliare. Rimuovere il tessuto congiuntivo, la massa gangliare e il grasso che si attaccano al nervo vago.Mantenere circa mezzo centimetro del nervo vago per facilitare la manipolazione e la localizzazione dei campioni. Posizionare il passaggio ai gangli con l'aiuto di pinze fini in tubi micro centrifuga da 1,5 millimetri. E incubare a quattro gradi Celsius in formalina per 24 ore.E poi con il 30% di saccarosio per 24 ore. Dopo l'incubazione, posizionare i gangli all'interno di una goccia di quattro millimetri di diametro di mezzo a temperatura di taglio ottimale su un pezzo di foglio di alluminio. E frase il campione su un letto di ghiaccio secco.Tagliare i campioni congelati con un criostato in sezioni di 14 micrometri di spessore a meno 20 gradi Celsius e raccogliere le sezioni tagliate sui vetrini del microscopio di vetro come tre serie a 42 micrometri di distanza. Risciacquare i vetrini con sezioni di tessuto in PBS. E cuocere per 30 minuti a 60 gradi Celsius in un forno da forno.Quindi, postfiggere le diapositive in formalina al 4% per 15 minuti a quattro gradi Celsius. Disidratare in serie i vetrini in etanolo al 50%70% e al 100% per cinque minuti ciascuno. E applicare la soluzione di perossido di idrogeno ai campioni per 10 minuti prima di risciacquare in acqua doppia distillata.Per l'ibridazione in situ, o ISH, trattare i campioni con il reagente di recupero target per cinque minuti. Quindi risciacquare sequenzialmente i campioni in acqua doppia distillata e 100% etanolo seguito da essiccazione all'aria. Usando una penna idrofoba, crea una barriera attorno ai campioni.Mentre i campioni vengono trattati con proteasi per 30 minuti a 40 gradi Celsius e un forno di ibridazione, preriscaldare le sonde a 40 gradi Celsius e raffreddarle a temperatura ambiente prima dell'uso. Dopo essersi spostati dal forno, incubare i vetrini con la combinazione desiderata di sonde target per due ore a 40 gradi Celsius in un forno di ibridazione. Incubare il tessuto di controllo negativo con la diidrodipicolinato reduttasi o DapB, sonda C1 target per due ore a 40 gradi Celsius.Risciacquare i vetrini nel tampone di lavaggio e conservare in cinque volte il citrato di sodio salino a temperatura ambiente durante la notte. Il giorno successivo, sciacquare i vetrini con tampone di lavaggio prima dell'incubazione con reagenti di amplificazione. E trattare con reagenti specifici del canale come descritto nel manoscritto.Lavare le diapositive seguite dal trattamento con DapB per 30 secondi. Quindi applicare immediatamente il mezzo di montaggio su ogni diapositiva e posizionare un coperchio sulla sezione del tessuto. Mantenere i tessuti orizzontali in un supporto per vetrini a quattro gradi Celsius fino all'imaging.Preparare un microscopio confocale per l'imaging impostando i parametri richiesti. Acquisisci le immagini con una linea media di quattro e una dimensione in pixel di almeno 1024 per 1024 per migliorare la qualità delle immagini. Una volta soddisfatti dei parametri di acquisizione, iniziare ad acquisire le immagini utilizzando le stesse impostazioni.Attribuire falsi colori a ciascun canale per facilitare la visualizzazione. Utilizzando le immagini digitali, eseguire il conteggio delle cellule identificando il contorno dei profili positivi dell'ambito dell'RNA con un nucleo leggermente macchiato di DapB. Calcola la percentuale di profili positivi dell'ambito dell'RNA che esprimono ogni trascrizione.I parametri di acquisizione ottimali sono stati scelti per ciascun laser in base alla fluorescenza aspecifica ottenuta nel tessuto di controllo negativo. La fluorescenza endogena nel ganglio nodoso di un topo giovane adulto è minima. E l'incubazione con una sonda DapB, non ha provocato segnali.Con una maggiore potenza laser e guadagno con il laser a 488 nanometri, appaiono sfondi indesiderati e punti fluorescenti casuali. La tecnica dell'ambito dell'RNA è stata applicata per rilevare tre geni in sezioni tissutali della massa gangliare vagale. Il profilo tissutale è risultato positivo per GHSR e CCK1R.Il profilo includeva entrambi i trascritti Phox2b e CCK1R nella parte rostrale del ganglio nodoso. Come risultato dell'ISH multiplex nei neuroni afferenti nodosi, i segnali Phox2b si accumulano specificamente nei neuroni afferenti, situati nel ganglio nodoso. I segnali CCK1R marcano intensamente molti neuroni nel ganglio nodoso.A basso ingrandimento, le cellule che esprimono bassi segnali CCK1R o GSHR non possono essere osservate facilmente. DapB ha aiutato a visualizzare il tessuto e identificare i neuroni afferenti vagali con un nucleo grande e leggermente macchiato. Ad alto ingrandimento, i profili positivi phox2b sono evidenti.I profili due e tre sono cellule Phox2b con segnali CCK1R alti e moderati. Il profilo quattro esprimeva sia GHSR che CCK1R. Come risultato dell'ISH multiplex dei neuroni afferenti giugulari, la trascrizione PRDM12 potrebbe essere vista specificamente accumulata nei neuroni afferenti situati nel ganglio giugulare.Ad alto ingrandimento, segnali moderati per CCK1R sono stati rilevati nei profili uno e due. Il profilo tre è un rappresentante delle cellule PRDM12 negative per CCK1R o GHSR. La coerenza della dissezione è un fattore importante.È altrettanto importante verificare che i parametri di acquisizione dell'imaging non generino segnali di fondo indesiderati. L'ibridazione multiplex in situ è diventata il gold standard in ambito molecolare stabilito, specialmente nel campo della neuroanatomia. Questo metodo può essere facilmente combinato con l'immunoistochimica.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization

Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections

Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections

Doppia fluorescenza In situ</emIbridazione> nelle sezioni cervello fresco

Here we describe a modified version of a double fluorescence in situ hybridization (dFISH) method optimized for detecting two mRNAs of interest in fresh ...

Ricerca

Neuroscienze

Combining Lipophilic dye, in situ Hybridization, Immunohistochemistry, and Histology

Combining Lipophilic dye, in situ Hybridization, Immunohistochemistry, and Histology

La combinazione di coloranti lipofili, In situ Ibridazione, Immunoistochimica e Istologia

Going beyond single gene function to cut deeper into gene regulatory networks requires multiple mutations combined in a single animal.  Such analysis of ...

Detection of Protein Palmitoylation in Cultured Hippocampal Neurons by Immunoprecipitation and Acyl-Biotin Exchange (ABE)

Detection of Protein Palmitoylation in Cultured Hippocampal Neurons by Immunoprecipitation and Acyl-Biotin Exchange ABE

Rilevamento di palmitoilazione proteina in colture di neuroni ippocampali di immunoprecipitazione e di acil-Biotina Exchange (ABE)

Palmitoylation is a post-translational lipid  modification involving the attachment of a 16-carbon saturated fatty acid,  palmitate, to cysteine residues ...

Detection of the Genome and Transcripts of a Persistent DNA Virus in Neuronal Tissues by Fluorescent In situ Hybridization Combined with Immunostaining

Detection of the Genome and Transcripts of a Persistent DNA Virus in Neuronal Tissues by Fluorescent In situ Hybridization Combined with Immunostaining

La rilevazione del genoma e Trascrizioni di un virus DNA persistente in tessuti neuronali da fluorescente In situ Ibridazione In combinazione con Immunostaining

Single cell codetection of a gene, its RNA product and cellular regulatory proteins is critical to study gene expression regulation. This is a challenge ...

Detection of Axonally Localized mRNAs in Brain Sections Using High-Resolution In Situ Hybridization

Detection of Axonally Localized mRNAs in Brain Sections Using High-Resolution In Situ Hybridization

Rilevazione di assoni localizzato mRNA nelle sezioni del cervello Utilizzando ad alta risoluzione<em&gt; In Situ</em&gt; Ibridazione

mRNAs are frequently localized to vertebrate axons and their local translation is required for axon pathfinding or branching during development and for ...

Combining Double Fluorescence In Situ Hybridization with Immunolabelling for Detection of the Expression of Three Genes in Mouse Brain Sections

Combining Double Fluorescence In Situ Hybridization with Immunolabelling for Detection of the Expression of Three Genes in Mouse Brain Sections

La combinazione di doppio Fluorescenza<em&gt; In Situ</em&gt; Ibridazione con Immunolabelling per il rilevamento della Manifestazione di tre geni nel cervello di topo Sezioni

Detection of gene expression in different types of brain cells e.g., neurons, astrocytes, oligodendrocytes, oligodendrocyte precursors and microglia, can ...

In Vitro Recording of Mesenteric Afferent Nerve Activity in Mouse Jejunal and Colonic Segments

In Vitro Recording of Mesenteric Afferent Nerve Activity in Mouse Jejunal and Colonic Segments

In Vitro registrazione di mesenterica afferenti attività del nervo nel topo digiunale e segmenti del colon

Afferent nerves not only convey information concerning normal physiology, but also signal disturbed homeostasis and pathophysiological processes of the ...

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Localizzazione dei geni del recettore degli odoranti nell&#39;antenna di Locust da RNA<em&gt; In Situ</em&gt; Ibridazione

Insects have evolved sophisticated olfactory reception systems to sense exogenous chemical signals. These chemical signals are transduced by Olfactory ...

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

Identificazione della dopamina D1-alfa del ricevitore all'interno del roditore Nucleus Accumbens da un innovativo RNA In Situ Detection Technology

In the central nervous system, the D1-alpha subtype receptor (Drd1&#945;) is the most abundant dopamine (DA) receptor, which plays a vital role in ...

Preparations and Protocols for Whole Cell Patch Clamp Recording of Xenopus laevis Tectal Neurons

Preparations and Protocols for Whole Cell Patch Clamp Recording of Xenopus laevis Tectal Neurons

Preparazioni e protocolli per l'intera cella Patch Clamp registrazione dei neuroni Tectal Xenopus laevis

The Xenopus tadpole retinotectal circuit, comprised of the retinal ganglion cells (RGCs) in the eye which form synapses directly onto neurons in the optic ...