Name: detection of g protein-coupled receptor expression in mouse vagal afferent neurons using multiplex in situ hybridization
Uploaded: 2021-09-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization at JoVE.com

Bu çalışma NIH grant #5P01DK119130-02 tarafından finanse edilen Nöroanatomi/Histoloji/Beyin Enjeksiyon Çekirdeği tarafından desteklenmiştir. Yazarlar, kısmen NCI Kanser Merkezi Destek Hibesi tarafından desteklenen Harold C. Simmons Kanser Merkezi'nin Ortak Kaynağı olan NIH Grant #1S10OD021684-01 tarafından desteklenen UT Southwestern Canlı Hücre Görüntüleme Tesisi (Dr. Phelps başkanlığındaki) ve personelinin (Abhijit Bugde ve Marcel Mettlen) yardımını kabul etmek istiyor. P30 CA142543.

NOT: Bu çalışmada kullanılan fareler saf C57BL/6J arka plan üzerinde vahşi tip erkeklerdi. Multipleks ISH için toplam 4 fare kullanıldı. Tüm fareler kurban sırasında yaklaşık 8 haftalıktı. Yaşlanma ile ilişkili endojen floresan göstermek için bir erkek fare (yaklaşık bir yaşında) da kullanılmıştır. Hayvanlar, yiyecek ve suya ad libitum erişimi olan bir bariyer tesisi içinde havalandırmalı kafeslerde barındırıldı. UT Southwestern Tıp Merkezi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım...

ISH tekniği 1960'ların sonunda icat edildi42. Ancak, 1980'lerin ortalarına kadar merkezi ve periferik sinir sistemlerinde mRNA'ların tespiti için uygulanmadı43,44. Sinir sisteminin heterojenliği ve antikorlarla ilgili tekrarlayan sorunlar göz önüne alındığında, belirli bir transkriptin hücresel düzeyde lokalize edilmesi paha biçilmez bir araç olmaya devam etmektedir. Bununla birlikte, geleneksel ISH yöntemleri zahmetli v...

Vagal afferentlerin hücre gövdeleri juguler, petrosal ve nodose gangliyon1,2,3'te bulunur. Aksonları vagus sinirinin birkaç dalı aracılığıyla kraniyoserikal, torasik ve abdominal bölgelere birlikte seyahat eder4,5,6,7. İçsel uçlarından, vagal afferentler çok çeşitli fizyolojik ve zararlı uyaranlara yanıt verebilir8,9,10. Bununla birlikte, vagal algılamada yer alan sinyal moleküllerinin ve reseptörlerin dağılımı kötü karakterize olmaya devam etmektedir. Bunun nedeni kısmen vagal gangliyonların, küçük boyutlarına rağmen, çok sayıda GPCR 8 , 11 , 12,13dahil olmak üzere geniş bir reseptör spektrumunu ifade etmeleridir. Ayrıca, vagal afferent nöronlar doğası gereği heterojendir ve farklı moleküler profiller görüntüler14. Konuyu karmaşıklaştırmak için, juguler, petrosal ve nodose gangliyonları fareye bağlanır ve böylece tek bir gangliyonik kütle oluşturur. Son olarak, hayvanların bir alt kümesinde, nodose ganglionu sempatik üstün servikal ganglion15'e bağlanır.
Geçmişte, araştırmacılar vagal afferent nöronların nörokimyasal makyajını incelemek için immünhistokimyaya başvurdular16,17,18. Doğrulanmış antikorların kullanılması immünostokimya yararlı olmakla birlikte, immünohistokimyasal çalışmaların sonuçları dikkatle yorumlanmalıdır. Örneğin, GPCR'lere karşı spesifik antikorları tanımlamaya yönelik çok sayıda çaba başarısız oldu19,20,21 , 22,23,24,25, araştırmacıların GPCR'lere karşı antikorların çoğunluğunun güvenilmez olduğu sonucuna varmasına yol açtı. Bu sorunları atlatmak için, kemirgen vagal gangliyonik kütle26 , 27 , 28,29gen ekspresyonini değerlendirmek için nicel PCR (qPCR) yaygın olarak kullanılmıştır. Bununla birlikte, qPCR kullanılarak gen ekspresyonunun incelenmesi, mekansal bilgi kaybı pahasına gerçekleşir. Özellikle, kaç hücrenin veya hangi hücre tiplerinin belirli bir ilgi genini (örneğin, nodose ve juguler hücreler) ifade ettiği tahmin edilemez. Tekrarlayan sorunlar ayrıca bitişik dokularla kontaminasyon ve diseksiyon sırasında vagus sinirinin değişken uzunluklarının, üstün servikal ve juguler gangliyonların dahil edilmesini içerir15. Yukarıdaki zorlukların bir sonucu olarak, tartışmalar vagal afferent nöronlarda birkaç GPCR'nin ekspresyon ve dağılımını çevreler. Özellikle şaşırtıcı bir örnek ghrelin reseptörü (Ghsr) ile ilgilidir. Bazı çalışmalar vagal afferent nöronlarda bu reseptörün yaygın ekspresyonunun30,31,32, diğerleri Ghsr mRNA'nın nodose ganglion 11,14'teneredeyse tespit edilemediğini bulmuşlardır. Bu nedenle vagal gangliyonik kütlede Ghsr mRNA'nın ayrıntılı haritalandırılması garanti edilir.
In situ hibridizasyon (ISH) vagal gangliyonik kütle7, 11 ,12,33,34,35gen ekspresyon kalıplarını değerlendirmek için de kullanılmıştır. RNA tabanlı teknikler çoğu durumda antikor bazlı tekniklerden daha güvenilir ve spesifik kaldığından36,37, ISH çalışmaları vagal afferent nöronların nörokimyasal kodlamasının daha iyi anlaşılması için değerli olduğunu kanıtlamıştır. Bununla birlikte, geleneksel ISH tekniklerinin kendileri uyarı olmadan değildir. Radyoaktif ISH hassastır, ancak arka plan oluşturur ve hantalkalır 38. Radyoaktif olmayan ISH daha az karmaşık ama aynı zamanda daha az hassas38. Buna karşılık, son zamanlarda geliştirilen RNAscope ISH yöntemi son derece hassastır ve en az arka planoluşturur 39. Mevcut çalışma, farenin vagal afferent nöronlarında GPCR'lerin tespitine multipleks floresan RNAscope uyguladı. Ghsr'nin dağılımını haritalamaya odaklandık ve dağıtımını nodose ganglion34'teifade edildiği bilinen başka bir GPCR olan kolesistokinin reseptörü (Cck1r) ile karşılaştırdık. Son olarak, eşleştirilmiş homeobox 2b (Phox2b) ve PR etki alanı çinko parmak proteini 12 (Prdm12) olmak üzere iki transkripsiyon faktörü, nodose ve juguler afferent nöronlar için seçici belirteçler olarak kullanılmıştır, sırasıyla14. Phox2b veya Prdm12'yi görselleştirmeden, jugular vs. nodose afferentlerini kesin olarak tanımlamak zor olacaktır. Makale boyunca potansiyel teknik tuzaklar da tartışılmaktadır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10x PBS</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP399-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20x SSC</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-80&#176;C freezer</td>
			<td>PHCBI</td>
			<td>MDF-DU901VHA-PA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Photoshop 2021</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td>photo and design software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Baking oven</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>Model:658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM880 Airyscan</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass</td>
			<td>Brain Research Laboratories</td>
			<td>2460-1.5D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM 3050 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11252-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ecomount</td>
			<td>Biocare Medical</td>
			<td>EM 897L</td>
			<td>mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HybEZ oven</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>hybridization oven</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophobic pen</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-4000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ-Fiji</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large scissors</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>100-7561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro centrifuge tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20170-333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minipump variable flow</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-876-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 520</td>
			<td>Akoya biosciences</td>
			<td>FP1 1487001KT</td>
			<td>Fluorescent biomarker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 570</td>
			<td>Akoya biosciences</td>
			<td>FP1 1488001KT</td>
			<td>Fluorescent biomarker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 690</td>
			<td>Akoya biosciences</td>
			<td>FP1 1497001KT</td>
			<td>Fluorescent biomarker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>mounting medium for fluorescently labeled cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope Multiplex Fluorescent Reagent Kit v2</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>323100</td>
			<td>multiplex kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse Cck1r-C3</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>313751-C3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse DapB</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>310043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse Ghsr</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>426141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse Phox2b-C2</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>407861-C2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope probe Mouse Prdm12-C2</td>
			<td>ACD /Bio-Techne</td>
			<td>524371-C2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RnaseZap</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R2020</td>
			<td>Rnase decontaminating solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small dissecting scissors</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>Z265977</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus slides</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>1255015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Tek OCT medium</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>User manual</td>
			<td>ACD</td>
			<td>323100 USM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS 5620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN Imaging Software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of g protein-coupled receptor expression in mouse vagal afferent neurons using multiplex in situ hybridization

Bu çalışmada, fare juguler-nodose gangliyonunun multipleks in situ hibridizasyonu (ISH) için bir protokol açıklanmaktadır ve özellikle G protein bağlantılı reseptörlerin (GPCR) ekspresyonunu tespit etmeye vurgulanmaktadır. Formalin-sabit juguler-nodose gangliyonları, iki temsili GPCR'nin (kolesistokin ve ghrelin reseptörleri) ifadesini nodose (eşleştirilmiş homeobox 2b, Phox2b) veya juguler afferent nöronların (PR etki alanı çinko parmak proteini 12, Prdm12) bir işaret geni ile birlikte aynı anda tespit etmek için RNAscope teknolojisi ile işlendi. Etiketli gangliyonlar, yukarıda belirtilen transkriptlerin dağılım ve ifade kalıplarını belirlemek için konfokal mikroskopi kullanılarak görüntülenmiştir. Kısaca, Phox2b afferent nöronların kolesistokinin reseptörü (Cck1r) bolca ifade edildiği, ancak ghrelin reseptörü (Ghsr) ifade etmediği bulunmuştur. Prdm12 afferent nöronlarının küçük bir alt kümesinin de Ghsr ve/veya Cck1r'i ifade ettiği bulunmuştur. Bu makalede açıklanan yaklaşım, bilim adamlarının vagal afferent nöronların transkripsiyon profillerinin doğru haritalarını oluşturmalarına yardımcı olabilir.

RNAScope herhangi bir yaştan, cinsiyette veya genetik kökenden hayvanlara uygulanabilirken, genç yetişkinlerle (<3 aylık) çalışmanız önerilir. Bunun nedeni, floresan eserlerin (örneğin lipofuscin) yaşlı hayvanların nöronlarında yaygın bulgular olmasıdır41. Yaşlı farelerden formalin-sabit gangliyon genellikle kolayca gerçek boyama ile karıştırılabilecek şaşırtıcı derecede yoğun endojen floresan içerir (Şekil 1A,B). He...

Watch this Scientific Journal Video about Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization at JoVE.com

Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization

Multipleks in situ hibridizasyon (ISH), yetişkin farenin tüm vagal gangliyonik kompleksinde iki G protein bağlantılı reseptör ve bir transkripsiyon faktörü için transkriptleri aynı anda görselleştirmek için kullanıldı. Bu protokol, vagal afferent nöronların transkripsiyon profillerinin doğru haritalarını oluşturmak için kullanılabilir.

Multipleks In Situ Hibridizasyonu Kullanan Fare Vagal Afferent Nöronlarında G Protein Bağlantılı Reseptör ekspresyonunun tespiti

This study describes a protocol for the multiplex in situ hybridization (ISH) of the mouse jugular-nodose ganglia, with a particular emphasis on detecting ...

Bu prosedür son derece hassastır ve minimum arka plana sahip birkaç transkriptin görselleştirilmesine izin verir. Bu yöntem, yüksek heterojen hücre tiplerinin transkripsiyon profilinin doğru haritalarını oluşturabilir. Prosedürü ben ve laboratuvarda araştırma teknisyeni olan Johnson Bob-manuel gösterecek.Diseksiyon kapsamı ve cerrahi aletler yardımıyla, her iki taraftan sekiz haftalık fareden tüm vagal gangliyonik kütleyi toplayarak başlayın. Farenin kafasını kestikten sonra, oksipital kemiği ortaya çıkarmak için sternohyoid ve omohyoid kaslarını nefes borusuna yanal çıkarmak için küçük önkseçimler kullanın. Şahdamarı, vagus ve hipoglossal sinir ve foramen magnum görünene kadar tüm bölgeyi kas ve dokulardan temizleyin.Sonra tüm hipoglossal siniri küçük yay makası ile kesin. Nodose ganglionu için foramen magnum'a yakın yarı saydam bir kütle olarak bulun. Küçük makas kullanarak oksipital kemiği dikkatlice kırın.Şahdamar ganglionunun daha fazla açığa çıkması için, şahdamarının yüzeyindeki siyah melanositleri görsel bir dönüm noktası olarak bulun. Gangliyonlar bulunduğunda, vagal gangliyonik kütle arasındaki sinir bağlantılarını kesin ve tüm gangliyonik kütlenin çıkarılması için küçük yay makası ile beyin sapına doğru şahdamarını keserken vagus sinirinin periferik ucunun hafifçe çekilmesini sağlar. Vagus sinirine yapışan konjonktürel dokuyu, gangliyonik kütleyi ve yağı çıkarın.Numunelerin işlenmesini ve lokalizasyonunu kolaylaştırmak için vagus sinirinin yaklaşık yarım santimetresini tutmak. 1,5 milimetre mikro santrifüj tüplerinde ince tokmaklar yardımıyla çıkarın gangliyona yerleştirin. Formalin'de 24 saat boyunca 4 santigrat derecede kuluçkaya yatır.Ve sonra 24 saat boyunca %30 sakkarozla. Kuluçkadan sonra, gangliyonu bir alüminyum folyo parçası üzerinde dört milimetre çapında optimum kesme sıcaklığı ortamının içine yerleştirin. Ve örneği kuru buz yatağında ifade edin.Kriyostatlı dondurulmuş numuneleri eksi 20 santigrat derecede 14 mikrometre kalınlığında bölümlere ayırın ve cam mikroskop slaytlarındaki kesim bölümlerini üç seri 42 mikrometre olarak toplayın. Slaytları PBS'de doku bölümleriyle durulayın. Ve bir fırın fırınında 60 santigrat derecede 30 dakika pişirin.Ardından, slaytları dört santigrat derecede 15 dakika boyunca %4 formalin olarak postalayın. Slaytları her biri beş dakika boyunca %50%70 ve %100 etanol olarak seri olarak susuz bırakın. Ve çift damıtılmış suda durulamadan önce numunelere 10 dakika hidrojen peroksit çözeltisi uygulayın.In situ hibridizasyon veya ISH için, örnekleri hedef alma reaktifi ile beş dakika boyunca tedavi edin. Daha sonra numuneleri çift damıtılmış suda ve% 100 etanolde ve ardından hava kurutmada sırayla durulayın. Hidrofobik bir kalem kullanarak, numunelerin etrafında bir bariyer oluşturun.Numuneler 40 santigrat derecede 30 dakika boyunca proteaz ve hibridizasyon fırını ile tedavi edilirken, probları 40 santigrat derecede önceden ısıtın ve kullanmadan önce oda sıcaklığında soğutun. Fırından hareket ettikten sonra, bir hibridizasyon fırınında 40 santigrat derecede iki saat boyunca hedef probların istenen kombinasyonu ile slaytları kuluçkaya yatırın. Dihidrodipikolinat redüktaz veya DapB ile negatif kontrol dokusunu kuluçkaya yatırın, hedef C1 probu 40 santigrat derecede iki saat boyunca.Slaytları yıkama tamponunda durulayın ve bir gecede oda sıcaklığında beş kez tuzlu sodyum sitratında saklayın. Ertesi gün, kireçlenme reaktifleri ile inkübasyondan önce slaytları yıkama tamponu ile durulayın. Ve yazıda açıklandığı gibi kanala özgü reaktiflerle tedavi edin.Slaytları yıkayın ve ardından DapB ile 30 saniye boyunca tedavi edin. Ardından montaj ortamını hemen her kaydıraktan uygulayın ve doku bölümünün üzerine bir kapak kayması yerleştirin. Görüntülemeye kadar dokuları bir slayt tutucusunda dört santigrat derecede yatay tutun.Gerekli parametreleri ayarlayarak görüntüleme için bir konfokal mikroskop hazırlayın. Görüntülerin kalitesini artırmak için 1024'e kadar dört satır ortalaması ve en az 1024 piksel boyutuna sahip görüntüleri elde edin. Edinme parametrelerinden memnun olduktan sonra, aynı ayarları kullanarak görüntüleri almaya başlayın.Görselleştirmeyi kolaylaştırmak için her kanala yanlış renkler atfin. Dijital görüntüleri kullanarak, DapB ile hafifçe boyanmış bir çekirdekle RNA kapsamı pozitif profillerinin ana hatlarını tanımlayarak hücre sayımı gerçekleştirin. Her dökümü ifade eden RNA kapsamı pozitif profillerinin yüzdesini hesaplayın.Negatif kontrol dokusunda elde edilen spesifik olmayan floresan baz alınarak her lazer için en uygun alma parametreleri seçildi. Genç bir yetişkin farenin nodose ganglionunda endojen floresan minimaldir. Ve bir DapB probu ile inkübasyon, sinyallerle sonuçlanmamıştır.488 nanometre lazer ile artan güç lazer ve kazançta, istenmeyen arka plan ve rastgele floresan noktalar ortaya çıkar. Vagal gangliyonik kütlenin doku bölümlerindeki üç geni tespit etmek için RNA dürbün tekniği uygulandı. Doku profili GHSR ve CCK1R için pozitifti.Profil, nodose ganglionunun rostral kısmında hem Phox2b hem de CCK1R transkriptlerini içeriyordu. Nodose afferent nöronlarda multipleks ISH'nin bir sonucu olarak, Phox2b sinyalleri özellikle nodose ganglionunda bulunan afferent nöronlarda birikir. CCK1R sinyalleri nodose ganglionunda birçok nöronun yoğun olarak etiketlendiğini işaret eder.Düşük büyütmede, düşük CCK1R veya GSHR sinyallerini ifade eden hücreler kolayca gözlemlenemedi. DapB, dokuyu görselleştirmeye ve büyük ve hafif lekeli bir çekirdeğe sahip vagal afferent nöronları tanımlamaya yardımcı oldu. Yüksek büyütmede, Phox2b pozitif profilleri belirgindir.profiller iki ve üç, yüksek ve orta derecede CCK1R sinyallerine sahip Phox2b hücreleridir. Profil 4 hem GHSR hem de CCK1R'yi ifade etti. Juguler afferent nöronların multipleks ISH'si sonucunda, PRDM12 transkript özellikle juguler ganglion içinde bulunan afferent nöronlarda birikmiş olarak görülebilir.Yüksek büyütmede, bir ve ikinci profillerde CCK1R için orta derecede sinyaller tespit edildi. Profil üç, CCK1R veya GHSR için negatif prdm12 hücrelerinin bir temsilcisidir. Diseksiyonun tutarlılığı önemli bir faktördür.Görüntüleme alma parametrelerinin istenmeyen arka plan sinyalleri oluşturmadığını doğrulamak da aynı derecede önemlidir. Multipleks In situ hibridizasyon, özellikle nöroanatomi alanında moleküler olarak kurulan altın standart haline gelmiştir. Bu yöntem immünostokimya ile kolayca birleştirilebilir.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Detection of G Protein-coupled Receptor Expression in Mouse Vagal Afferent Neurons using Multiplex In Situ Hybridization

Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections

Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections

Çift Floresans In situ Taze Beyin Bölüm Hibridizasyon

Here we describe a modified version of a double fluorescence in situ hybridization (dFISH) method optimized for detecting two mRNAs of interest in fresh ...

Combining Lipophilic dye, in situ Hybridization, Immunohistochemistry, and Histology

Combining Lipophilic dye, in situ Hybridization, Immunohistochemistry, and Histology

Lipofilik boya birleştiren In situ Hibridizasyon, İmmünohistokimya ve Histoloji

Going beyond single gene function to cut deeper into gene regulatory networks requires multiple mutations combined in a single animal.  Such analysis of ...

Detection of Protein Palmitoylation in Cultured Hippocampal Neurons by Immunoprecipitation and Acyl-Biotin Exchange (ABE)

Detection of Protein Palmitoylation in Cultured Hippocampal Neurons by Immunoprecipitation and Acyl-Biotin Exchange ABE

Immünopresipitasyon ve Açil-Biotin Borsası (ABE) tarafından Yetiştirilmiş Hipokampal Nöronlar Protein Palmitoylation tespiti

Palmitoylation is a post-translational lipid  modification involving the attachment of a 16-carbon saturated fatty acid,  palmitate, to cysteine residues ...

Detection of the Genome and Transcripts of a Persistent DNA Virus in Neuronal Tissues by Fluorescent In situ Hybridization Combined with Immunostaining

Detection of the Genome and Transcripts of a Persistent DNA Virus in Neuronal Tissues by Fluorescent In situ Hybridization Combined with Immunostaining

Floresan Nöronal Dokularda Kalıcı DNA Virüs Genomu ve Transkriptlerinin Algılama In situ Melezleme immün ile birlikte

Single cell codetection of a gene, its RNA product and cellular regulatory proteins is critical to study gene expression regulation. This is a challenge ...

Detection of Axonally Localized mRNAs in Brain Sections Using High-Resolution In Situ Hybridization

Detection of Axonally Localized mRNAs in Brain Sections Using High-Resolution In Situ Hybridization

Yüksek Çözünürlük kullanma Beyin bölümlerde Axonally Lokalize mRNA&#39;larının Algılama<em&gt; In Situ</em&gt; Melezleme

mRNAs are frequently localized to vertebrate axons and their local translation is required for axon pathfinding or branching during development and for ...

Combining Double Fluorescence In Situ Hybridization with Immunolabelling for Detection of the Expression of Three Genes in Mouse Brain Sections

Combining Double Fluorescence In Situ Hybridization with Immunolabelling for Detection of the Expression of Three Genes in Mouse Brain Sections

Çift Floresan birleştiren<em&gt; In Situ</em&gt; Fare Beyin Bölüm Üç Genlerin İfade tespiti için immünoişaretleme ile Hibridizasyon

Detection of gene expression in different types of brain cells e.g., neurons, astrocytes, oligodendrocytes, oligodendrocyte precursors and microglia, can ...

In Vitro Recording of Mesenteric Afferent Nerve Activity in Mouse Jejunal and Colonic Segments

In Vitro Recording of Mesenteric Afferent Nerve Activity in Mouse Jejunal and Colonic Segments

Fare jejunal ve Kolon Segmentlerde Mezenterik Afferent Sinir Faaliyet Vitro kaydedilmesi

Afferent nerves not only convey information concerning normal physiology, but also signal disturbed homeostasis and pathophysiological processes of the ...

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Locust Antenlerinde Odorant Reseptör Genlerinin RNA ile Lokalizasyonu<em&gt; Yerinde</em&gt; Hibridizasyon

Insects have evolved sophisticated olfactory reception systems to sense exogenous chemical signals. These chemical signals are transduced by Olfactory ...

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

Dopamin D1-Alfa reseptör kemirgen Nucleus Accumbens bir yenilikçi RNA Situ içinde hafiye teknoloji tarafından içinde tanımlaması

In the central nervous system, the D1-alpha subtype receptor (Drd1&#945;) is the most abundant dopamine (DA) receptor, which plays a vital role in ...

Preparations and Protocols for Whole Cell Patch Clamp Recording of Xenopus laevis Tectal Neurons

Preparations and Protocols for Whole Cell Patch Clamp Recording of Xenopus laevis Tectal Neurons

Ürünleri ve tüm hücre yama kelepçe kayıt Xenopus laevis Tectal nöronlar için iletişim kuralları

The Xenopus tadpole retinotectal circuit, comprised of the retinal ganglion cells (RGCs) in the eye which form synapses directly onto neurons in the optic ...