Name: dual-color fluorescence cross-correlation spectroscopy to study protein-protein interaction and protein dynamics in live cells
Uploaded: 2021-12-11T14:00:00
Duration: 14 min 12 s
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इस परियोजना को ड्यूश फोर्स्चुंग्सजेमीसचैफ्ट (एसएफबी/टीआर २४०, परियोजना संख्या 374031971, परियोजना आईएनएफ) द्वारा जे.B और केजीएच को समर्थन दिया गया था ।
हम तकनीकी सहायता के लिए वित्तीय सहायता और कोर यूनिट फ्लोरेसेंस इमेजिंग के लिए रुडोल्फ विर्को सेंटर का शुक्रिया अदा करते हैं। इसके अतिरिक्त, हम अश्विन बालाकृष्णन को पूरी तरह से सबूत पढ़ने के लिए धन्यवाद देते हैं ।

लेखकों को घोषित करने के लिए कोई संघर्ष नहीं है ।

फ्लोरेसेंस स्पेक्ट्रोस्कोपी एक सेलुलर संदर्भ में न्यूनतम क्षोभ के साथ प्रोटीन गतिशीलता और प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन की मात्रा निर्धारित करने के लिए मुख्य तरीकों में से एक है। कॉन्फोकल फ्लोरेसेंस सहसंबंध स्पेक्ट्रोस्कोपी (एफसीएस) आणविक गतिशीलता का विश्लेषण करने के लिए शक्तिशाली तरीकों में से एक है क्योंकि यह एकल अणु संवेदनशील, अत्यधिक चयनात्मक और लाइव-सेल संगत1है। अन्य गतिशीलता उन्मुख दृष्टिकोणों की तुलना में, एफसीएस में ~ एनएस से ~ एस तक फैले एक व्यापक औसत दर्जे की समय सीमा है, जो सबसे महत्वपूर्ण रूप से तेजी से समय तराजू को कवर करता है जो अक्सर इमेजिंग-आधारित तरीकों से दुर्गम होते हैं। इसके अलावा, यह स्थानिक चयनशीलता भी प्रदान करता है ताकि झिल्ली, साइटोप्लाज्मिक और नाभिक आणविक गतिशीलता को आसानी से प्रतिष्ठित किया जा सके 2। इस प्रकार, आणविक निमिष, औसत स्थानीय एकाग्रता, और प्रसार गुणांक एफसीएस के साथ मात्रात्मक रूप से विश्लेषण किया जा सकता है। एक दोहरे रंग के दृष्टिकोण में फ्लोरेसेंस क्रॉस-सहसंबंध स्पेक्ट्रोस्कोपी (एफसीसीएस) विश्लेषण3,4,5 में दो आणविक प्रजातियों के सह-प्रसार की जांच करते समय बाध्यकारी जैसी इंटरमॉलिकुलर गतिशीलता आसानी से सुलभ हो जाती है।
सहसंबंध स्पेक्ट्रोस्कोपी में मुख्य अंतर्निहित सिद्धांत फ्लोरोसेंट रूप से लेबल किए गए बायोमॉलिक्यूल्स द्वारा उत्सर्जित तीव्रता के उतार-चढ़ाव का सांख्यिकीय विश्लेषण है और लेजर फोकस(चित्रा 1 ए)में और बाहर फैलाना है। परिणामस्वरूप ऑटो-या क्रॉस-सहसंबंध कार्यों को अंततः ब्याज की दर स्थिरांक प्राप्त करने के लिए वक्र फिटिंग द्वारा आगे विश्लेषण किया जा सकता है। दूसरे शब्दों में, सांख्यिकीय तरीकों FCS और FCCS एकल कण ट्रैकिंग में की तरह एक अणु निशान प्रदान नहीं करते हैं, लेकिन एक गतिशील पैटर्न या उच्च लौकिक संकल्प के साथ एक जांच नमूना के "फिंगरप्रिंट" । जब फॉस्टर अनुनाद ऊर्जा हस्तांतरण (एफआरटी) के साथ संयुक्त किया जाता है, तो एक सामान्य कॉन्फोकल सेटअप5, 6में एक ही समय में इंट्रामोलिकुलर गतिशीलता जैसे अनुरूपपरिवर्तनोंकी निगरानी की जा सकती है। FRET दो फ्लोरोफोरस की दूरी की जांच करता है और अक्सर एक आणविक "नैनोरूलर" के रूप में जाना जाता है। ऊर्जा हस्तांतरण तभी होता है जब अणु निकट क्षेत्र (10 एनएम <) में होते हैं, दाता का उत्सर्जन स्पेक्ट्रम स्वीकारकर्ता अणु के अवशोषण स्पेक्ट्रम के साथ काफी ओवरलैप होता है, और दाता और स्वीकारकर्ता का डाइपोल अभिविन्यास (पर्याप्त रूप से) समानांतर होता है। इस प्रकार, FRET और एफसीसीएस का संयोजन बहुत उच्च स्थानिक-लौकिक संकल्प के साथ एक तकनीक प्रदान करता है। जब स्थानिक चयनशीलता, संवेदनशीलता के साथ-साथ लाइव-सेल अनुकूलता की आवश्यकता होती है, तो यूआरटी-एफसीसीएस में प्रोटीन गतिशीलता और बातचीत को मापने के लिए अन्य तरीकों जैसे आइसोथेमल टिटरेशन कैलोरिमेट्री (आईटीसी)7,सरफेस प्लाजन अनुनाद (एसपीआर)8,या परमाणु चुंबकीय अनुनाद (एनएमआर)9,10 पर स्पष्ट लाभप्रद है।
दोहरी रंग फ्लोरेसेंस क्रॉस-सहसंबंध स्पेक्ट्रोस्कोपी (डीसी-एफसीसीएस) की क्षमताओं और वादे के बावजूद, लाइव कोशिकाओं में डीसी-एफसीसीएस का प्रदर्शन चैनलों3,4केबीच स्पेक्ट्रल ब्लीड-थ्रू या क्रॉसटॉक के कारण तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण है, स्पेक्ट्रली अलग लेजर लाइनों3,4,11,पृष्ठभूमि संकेत, पृष्ठभूमि के कारण कॉन्फोकल वॉल्यूम में अंतर और शोर या नमूनों की सीमित फोटोस्थेपन12, 13,14,15. पल्स इंटरलीव्ड एक्सिटेशन (पाई) का एफसीसीएस में परिचय चैनलों के बीच स्पेक्ट्रल क्रॉसटॉक को कम करने केलिए विभिन्न लेजर उत्तेजन को अस्थायी रूप से अलग करने के लिए एक महत्वपूर्ण ट्विक था। स्पेक्ट्रल ब्लीड-थ्ंड17 , 18,19 और पृष्ठभूमि सुधार का मुकाबला करने के अन्य सुधार तरीकों को भी17,18, 19के माध्यम से अच्छीतरहसे स्वीकार किया गया है। एफसीएस, पाई या एफईटी पर विवरण और मूल बातों के लिए पाठक को निम्नलिखित संदर्भों 2,4, 6,16,20,21,22,23,24केसंदर्भोंमें संदर्भित कियाजाताहै।
यहां, सभी आवश्यक अंशांकन प्रयोगों और विश्लेषण के साथ एक प्रोटोटाइप जी प्रोटीन युग्मित रिसेप्टर के प्रयोगात्मक परिणामों के साथ, β 2-adrenergic रिसेप्टर (β2एआर), तीन अलग परिदृश्यों के लिए प्रस्तुत कर रहे हैं: (1) एकल लेबल अणुओं या तो एक "ग्रीन" (eGFP) या एक "लाल" (स्नैप टैग आधारित लेबल)25 फ्लोरो (2) एक डबल लेबल निर्माण, जो एक एन टर्मिनल स्नैप टैग और इंट्रासेल्युलर eGFP (एनटी-स्नैप) किया जाता है [इस मामले में, दोनों लेबल एक ही प्रोटीन पर हैं । इस प्रकार 100% सह-प्रसार की उम्मीद है]; और (3) एक डबल लेबल नमूना है, जहां दोनों फ्लोरोफोरस कोशिका झिल्ली (सीटी-स्नैप) के एक ही पक्ष पर हैं । इसमें सी-टर्मिनल स्नैप-टैग और इंट्रासेल्युलर ईजीएफपी दिया गया है । यहां, फिर से दोनों लेबल फिर से १००% सह प्रसार की उम्मीद के साथ एक ही प्रोटीन पर हैं । चूंकि दोनों लेबल एक दूसरे के बहुत करीब हैं, सेल झिल्ली के एक ही तरफ, यह FRET और विरोधी व्यवहार का निरीक्षण करने की क्षमता दिखाता है। सभी निर्माण चीनी हम्सटर अंडाशय (चो) कोशिकाओं में संक्रमित थे और बाद में एक लाल फ्लोरोसेंट सब्सट्रेट के साथ लेबल किए गए थे जो एनटी-स्नैप निर्माण और सीटी-स्नैप निर्माण के लिए झिल्ली-पारगम्य के लिए झिल्ली-अभेद्य है। अंत में, नकली डेटा FRET-प्रेरित एंटीकोरिएलेशन पर प्रयोगात्मक मापदंडों के प्रभाव और सह-प्रसार आयाम पर प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन के प्रभाव का उदाहरण देता है।
इस प्रकार, यह प्रोटोकॉल तकनीकी/भौतिक कलाकृतियों, चुनौतियों और संभावित समाधानों के बारे में जागरूक करते हुए प्रोटीन गतिशीलता और प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन को समझने के लिए जीवित कोशिकाओं में संयुक्त FRET-एफसीसीओं का प्रदर्शन करने के लिए एक पूर्ण गाइड प्रदान करता है ।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1x Telescope in 4f configuration with five lenses</td>
			<td>Qioptiq, Rhyl, UK</td>
			<td>G063126000</td>
			<td>Optics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2x Band pass filters Brightline</td>
			<td>AHF, T&#252;bingen, Germany</td>
			<td>HC 525/50 and HC 600/52</td>
			<td>Filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2x Dichroic beam splitter</td>
			<td>AHF, T&#252;bingen, Germany</td>
			<td>HC BS F38-573</td>
			<td>Filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well culture plate Nunc</td>
			<td>Thermo Scientific (Waltham, USA)</td>
			<td>140675</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 NHS Ester (green calibration standard)</td>
			<td>Invitrogen, Life Technologies (Carlsbad, USA)</td>
			<td>A20000</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 NHS Eater (red calibration standard)</td>
			<td>Invitrogen, Life Technologies (Carlsbad, USA)</td>
			<td>A20003</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ASI stage PZ-2000 XYZ</td>
			<td>Visitron Systems GmbH, Puchheim, Germany</td>
			<td>WK-XYB-PZ-IX71</td>
			<td>Microscope Parts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Attofluor Cell Chamber, 35 mm diameter for&#160; 25 mm round coverslips</td>
			<td>Invitrogen, Life Technologies (Carlsbad, USA)</td>
			<td>A7816</td>
			<td>Glass coverslip holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avalanche photodiode Perkin Elmer (SPCM-AQR-14)</td>
			<td>Laser Components GmbH, Olching, Germany</td>
			<td>SPCM-AQR-14</td>
			<td>Single photon counting detector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beamsplitter</td>
			<td>Newport, Darmstadt, Germany</td>
			<td>10FC16PB.3</td>
			<td>Filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biorender (Software)</td>
			<td>Science Suite Inc - o/a BioRender (Toronto, Canada)</td>
			<td>---</td>
			<td>Software used to create GPCR sketch, https://app.biorender.com/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chinese hamster ovary (CHO) cell line</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-61</td>
			<td>Cell lines</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ChiSurf (Data analysis Software)</td>
			<td>Thomas-Otavio Peulen, Department of Bioengineering and Therapeutic Sciences, University of California, San Francisco, USA</td>
			<td>---</td>
			<td>tttrlib-based software to analyze fluorescence correlation data and fluorescence decay histograms, https://github.com/Fluorescence-Tools/chisurf 
			Tutorial: https://www.youtube.com/watch?v=k9NgYbyLyXk&#38;t=2s 
			Ref: Peulen et al. J Phys Chem B. 121 (35), 8211-8241, (2017)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Sigma-Aldrich (St. Louis, USA)</td>
			<td>472476-2.5L</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>AppliChem GmbH (Darmstadt, Germany)</td>
			<td>A3672,0250</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA strand (40 bp fluorophore distance)</td>
			<td>IBA Lifesciences GmbH (G&#246;ttingen, Germany)</td>
			<td>---</td>
			<td>Reagent, 5&#8217; CGC ACT GAA CAG CAT ATG ACA CGC GAT AGG CTA TCC TGC AGT ACG CT(Alexa568)C AGG 3&#8217;, 3&#8217; GCG TGA CT(Alexa488)T GTC GTA TAC TGT GCG CTA TCC GAT AGG ACG TCA TGC GAG TCC 5&#8217;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle Medium: Nutrient Mixture F12 (with and without phenol red)</td>
			<td>GIBCO, Life Technologies (Carlsbad, USA)</td>
			<td>P04-41250, P04-41650</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol (absolute)</td>
			<td>Sigma-Aldrich (St. Louis, USA)</td>
			<td>34852-1L-M</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erythrosin B,Dye content &#62;=95 %</td>
			<td>Sigma-Aldrich (St. Louis, USA)</td>
			<td>200964-5G</td>
			<td>Reagent, Instrument Response function, solve in EtOH to 10 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Biochrom&#160; (Berlin, Germany)</td>
			<td>S 0615</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence Light Source X-Cite 120 Q</td>
			<td>Excelitas Technologies, Ontario, Canada</td>
			<td>XI120-Q-5060</td>
			<td>Microscope Parts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent SNAP-substrate cell : SNAP Cell TMR- STAR</td>
			<td>New England BioLabs (Frankfurt am Main, Germany)</td>
			<td>S9105S</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent SNAP-substrate surface : DY-549</td>
			<td>New England BioLabs (Frankfurt am Main, Germany)</td>
			<td>S9112S</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverslips (Dimensions: diameter 24 mm, thickness 0.13 - 0.16 mm)</td>
			<td>Marienfeld-Superior (Lauda-K&#246;nigshofen, Germany)</td>
			<td>111640</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser Controller</td>
			<td>Picoquant, Berlin, Germany</td>
			<td>910020 (PDL 828-S &#34;SEPIA II&#34;)</td>
			<td>Optics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser lines (480 nm and 560 nm)</td>
			<td>Picoquant, Berlin, Germany</td>
			<td>912485 (LDH-D-C-485), 912561 (LDH-D-TA-560)</td>
			<td>Optics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td>Invitrogen, Life Technologies (Carlsbad, USA)</td>
			<td>11668-019</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MFD suite (Software)</td>
			<td>AG Seidel, Heinrich-Heine-University Duesseldorf, Germany</td>
			<td>---</td>
			<td>Software package for analysis of single-molecule fluorescence experiments including e.g. Kristine (correlation of tttr data), Burbulator (simulation of single-molecule experiment), https://www.mpc.hhu.de/software/3-software-package-for-mfd-fcs-and-mfis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounted Achromatic Doublet, ARC: 400-700 nm, f=150 mm, D=25.4 mm</td>
			<td>Thorlabs, Bergkirchen, Germany</td>
			<td>AC254-150-A-ML</td>
			<td>Second part of Beam expander</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neubauer Chamber (deepness 0.1 mm)</td>
			<td>Marienfeld-Superior (Lauda-K&#246;nigshofen, Germany)</td>
			<td>640110</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus IX 71 stand</td>
			<td>Olympus, Hamburg, Germany</td>
			<td>IX2-ILL100</td>
			<td>Microscope Parts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM (Reduced-Serum Medium)</td>
			<td>GIBCO, Life Technologies (Carlsbad, USA)</td>
			<td>31985-047</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich (St. Louis, USA)</td>
			<td>049M4857V</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered Saline (PBS)</td>
			<td>GIBCO, Life Technologies (Carlsbad, USA)</td>
			<td>14190144</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pinhole (50 &#181;M)</td>
			<td>Newport, Darmstadt, Germany</td>
			<td>PNH-50</td>
			<td>Pinhole</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMT Hybrid-40</td>
			<td>Picoquant, Berlin, Germany</td>
			<td>932200 (PMA Hybrid 40)</td>
			<td>Single photon counting detector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Python scripts (Software)</td>
			<td>Katherina Hemmen, Rudolf-Virchow Center for Integrative and Translational Imaging, University Wuerzburg, Germany</td>
			<td>---</td>
			<td>Collection of self-written Python scripts based on tttrlib (https://github.com/Fluorescence-Tools/tttrlib) used to (1) determine the average count rates, (2) correlate the data and (3) build fluorescence decay histograms, https://github.com/HeinzeLab/JOVE-FCS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quad band beamsplitter (zt405/473-488/561/640 rpc phase r uf1)</td>
			<td>AHF, T&#252;bingen, Germany</td>
			<td>F73-421PH</td>
			<td>Filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single mode fiber polarization keeping, NA = 0.08 with collimator</td>
			<td>Picoquant, Berlin, Germany</td>
			<td>02126</td>
			<td>Optics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide (NaOH)</td>
			<td>Carl Roth (Karlsruhe, Germany)</td>
			<td>6771.1</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SymPhotime x64 Software (Data collection and data export software)</td>
			<td>Picoquant, Berlin, Germany</td>
			<td>931073 (SPT64-1+2 single user )</td>
			<td>Time-tag time-resolved (tttr) data collection at the self-built FCCS setup, data export</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Time-Correlated Single Photon Counting (TCSPC) system Hydraharp 400</td>
			<td>Picoquant, Berlin, Germany</td>
			<td>930010 (Hydraharp 400)</td>
			<td>Optics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Sigma-Aldrich (St. Louis, USA)</td>
			<td>T4299-100ml</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unmounted Achromatic Doublets, ARC: 400 - 700 nm, D=12.7 mm, F=-20 mm</td>
			<td>Thorlabs, Bergkirchen, Germany</td>
			<td>ACN127-020-A</td>
			<td>First part of Beam expander</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water immersion objective (UPlanSApo 60x/1.20 W)</td>
			<td>Olympus, Hamburg, Germany</td>
			<td>UPLSAPO60XW</td>
			<td>Objective</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dual-color fluorescence cross-correlation spectroscopy to study protein-protein interaction and protein dynamics in live cells

हम आधुनिक फ्लोरेसेंस लेबलिंग तकनीकों का उपयोग करके लाइव कोशिकाओं में झिल्ली रिसेप्टर गतिशीलता का अध्ययन करने के लिए फ्लोरेस्टर अनुनाद ऊर्जा हस्तांतरण (एफआरटी) के साथ संयुक्त लाइव सेल ड्यूल-कलर फ्लोरेसेंस क्रॉस-सहसंबंध स्पेक्ट्रोस्कोपी (एफसीसीएस) का प्रदर्शन करने के लिए एक प्रोटोकॉल और कार्यप्रवाह प्रस्तुत करते हैं। दोहरे रंग के एफसीसीएस में, जहां फ्लोरेसेंस तीव्रता में उतार-चढ़ाव संबंधित फ्लोरोसेंट बायोमॉलिक्यूल के गतिशील "फिंगरप्रिंट" का प्रतिनिधित्व करते हैं, हम रिसेप्टर्स के सह-प्रसार या बाध्यकारी की जांच कर सकते हैं। FRET, आणविक दूरी के लिए अपनी उच्च संवेदनशीलता के साथ, इंट्रामोलिकुलर परिवर्तनों की निगरानी के लिए एक प्रसिद्ध "नैनोरूलर" के रूप में कार्य करता है । एक साथ लिया गया, अनुरूप परिवर्तन और स्थानीय रिसेप्टर सांद्रता और गतिशीलता स्थिरांक जैसे प्रमुख पैरामीटर सेलुलर सेटिंग्स में सुलभ हो जाते हैं।
मात्रात्मक फ्लोरेसेंस दृष्टिकोण उच्च शोर के स्तर और नमूने की संवेदनशीलता के कारण कोशिकाओं में चुनौतीपूर्ण हैं। यहां हम दिखाते हैं कि इस प्रयोग को कैसे किया जाए, जिसमें 2-एड्रेनेरिक रिसेप्टर (β2एआर) β लेबल वाले दोहरे रंग वाले लेबल का उपयोग करके अंशांकन चरण शामिल हैं, जो eGFP और स्नैप-टैग-TAMRA के साथ लेबल किया गया है। ओपन-सोर्स सॉफ्टवेयर और टेम्पलेट्स का उपयोग करके एक कदम-दर-चरण डेटा विश्लेषण प्रक्रिया प्रदान की जाती है जो अनुकूलित करना आसान है।
हमारा दिशानिर्देश शोधकर्ताओं को लाइव सेल प्रयोगों में सीमित सिग्नल-टू-शोर स्तर के बावजूद उच्च विश्वसनीयता के साथ सीटू में लाइव कोशिकाओं में जैव अणुओं के आणविक बातचीत को जानने में सक्षम बनाता है। कम सांद्रता पर FRET और विशेष रूप से एफसीसीएस की परिचालन खिड़की लगभग शारीरिक स्थितियों पर मात्रात्मक विश्लेषण की अनुमति देती है।

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Dual-Color Fluorescence Cross-Correlation Spectroscopy to Study Protein-Protein Interaction and Protein Dynamics in Live Cells

हम आधुनिक फ्लोरेसेंस लेबलिंग तकनीकों का उपयोग करके लाइव कोशिकाओं में झिल्ली रिसेप्टर गतिशीलता का अध्ययन करने के लिए ओपन सेल ड्यूल-कलर फ्लोरेसेंस क्रॉस सहसंबंध स्पेक्ट्रोस्कोपी (एफसीसीएस) का प्रदर्शन करने के लिए एक प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल और डेटा विश्लेषण कार्यप्रवाह प्रस्तुत करते हैं।

लाइव कोशिकाओं में प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन और प्रोटीन गतिशीलता का अध्ययन करने के लिए ड्यूल-कलर फ्लोरेसेंस क्रॉस-सहसंबंध स्पेक्ट्रोस्कोपी

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