Name: plaquing of herpes simplex viruses
Uploaded: 2021-11-05T13:00:00
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Nous remercions les innombrables étudiants de nos laboratoires (PJD et BJM) qui ont travaillé avec nous au fil des ans pour affiner ces méthodes. Un merci spécial à Stan Person, sous la tutelle duquel cette méthodologie a été développée pour la première fois. Ce travail a été partiellement soutenu par le Towson University Fisher College of Science and Math Undergraduate Research Support fund et NIGMS Bridges to the Baccalaureate grant 5R25GM058264. Ce contenu relève de la seule responsabilité des auteurs et ne représente pas nécessairement les points de vue officiels de l’Institut national des sciences médicales générales des National Institutes of Health.

Toutes les procédures avec les cellules Vero et les herpèsvirus vivants ont été approuvées par le Comité de biosécurité institutionnelle de l’Université Towson. Un schéma généralisé de ces procédures est représenté à la figure 1.
1. Ensemencement des cellules Vero
<ol><li>La veille du début du test de la plaque, essayez les cellules Vero et remettez-les en suspension dans le milieu Modifié Eagles (DMEM) de Dulbecco et compl?...

<ol>
	<li>Dimmock, N., Easton, A., Leppard, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Introduction to Moden Virology. 6th end. , (2007).</li><li>Mahy, B., Collier, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Topley and Wilson's Microbiology and Microbial Infections. 9th edn. 1, (1998).</li><li>Anderson, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enumeration+of+bacteriophage+particles:+Comparative+analysis+of+the+traditional+plaque+assay+and+real-time+QPCR-+and+nanosight-based+assays.">Enumeration of bacteriophage particles: Comparative analysis of the traditional plaque assay and real-time QPCR- and nanosight-based assays.</a> Bacteriophage. 1 (2), 86-93 (2011).</li><li>Earle, W. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+malignancy+in+vitro;+IV.+The+mouse+fibroblast+cultures+and+changes+seen+in+the+living+cells.">Production of malignancy in vitro; IV. The mouse fibroblast cultures and changes seen in the living cells.</a> Journal of the National Cancer Institute. 4 (2), 165-212 (1943).</li><li>Dulbecco, R., Vogt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+problems+of+animal+virology+as+studied+by+the+plaque+technique.">Some problems of animal virology as studied by the plaque technique.</a> Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology. 18, 273-279 (1953).</li><li>Enders, J. F., Weller, T. H., Robbins, F. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fields Virology. 1, 1823-1897 (2013).</li><li>Madavaraju, K., Koganti, R., Volety, I., Yadavalli, T., Shukla, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpes+simplex+virus+cell+entry+mechanisms:+An+update.">Herpes simplex virus cell entry mechanisms: An update.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 10, 617578 (2020).</li><li>Cooper, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plaque+assay+of+animal+viruses.">The plaque assay of animal viruses.</a> Advances in Virus Research. 8, 319-378 (1961).</li><li>Farnham, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+formation+of+microscopic+plaques+by+herpes+simplex+virus+in+HeLa+cells.">The formation of microscopic plaques by herpes simplex virus in HeLa cells.</a> Virology. 6 (2), 317-327 (1958).</li><li>Garabedian, G. A., Scott, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plaque+assay+for+herpes+simplex+virus+in+L-929+(Earle)+mouse+fibroblasts.">Plaque assay for herpes simplex virus in L-929 (Earle) mouse fibroblasts.</a> Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine. 126 (2), 568-571 (1967).</li><li>Lancz, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpes+simplex+viruses+types+1+and+2.+Type+and+strain+specific+characteristics+affecting+virus+plaque+formation.">Herpes simplex viruses types 1 and 2. Type and strain specific characteristics affecting virus plaque formation.</a> Arch Gesamte Virusforsch. 46 (1-2), 36-43 (1974).</li><li>Muratore, O., Tonoli, E. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Hepatitis+B+e+antigen:+A+better+predictor+of+Hepatitis+B+virus+DNA+than+quantitative+Hepatitis+B+surface+antigen.">Quantitative Hepatitis B e antigen: A better predictor of Hepatitis B virus DNA than quantitative Hepatitis B surface antigen.</a> Clinical Laboratory. 64 (4), 443-449 (2018).</li><li>Baltimore, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-dependent+DNA+polymerase+in+virions+of+RNA+tumour+viruses.">RNA-dependent DNA polymerase in virions of RNA tumour viruses.</a> Nature. 226 (5252), 1209-1211 (1970).</li><li>Scolnick, E. M., Aaronson, S. A., Todaro, G. J., Parks, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+dependent+DNA+polymerase+activity+in+mammalian+cells.">RNA dependent DNA polymerase activity in mammalian cells.</a> Nature. 229 (5283), 318-321 (1971).</li><li>Strick, L. B., Wald, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostics+for+herpes+simplex+virus:+is+PCR+the+new+gold+standard.">Diagnostics for herpes simplex virus: is PCR the new gold standard.</a> Molecular Diagnosis and Therapy. 10 (1), 17-28 (2006).</li><li>Ramakrishnan, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+50%+endpoint+titer+using+a+simple+formula.">Determination of 50% endpoint titer using a simple formula.</a> World Jouranl of Virology. 5 (2), 85-86 (2016).</li><li>K&#228;rber, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beitrag+zue+kollektiven+Behandlung+pharmakologischer+pharmakologischer+Reihenversuche.">Beitrag zue kollektiven Behandlung pharmakologischer pharmakologischer Reihenversuche.</a> Archiv for Experimentelle Pathologie und Pharmakologie. 162 (4), 480-487 (1931).</li><li>Reed, L. J., Muench, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+of+estimating+fifty+percent+endpoints.">A simple method of estimating fifty percent endpoints.</a> American Journal of Hygiene. 27 (3), 493-497 (1938).</li><li>Spearman, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Method+of+'Right+and+Wrong+Cases'+(Constant+Stimuli)+without+Gauss's+formula.">The Method of 'Right and Wrong Cases' (Constant Stimuli) without Gauss's formula.</a> British Journal of Psychology. 2 (3), 227-242 (1908).</li><li>Ryu, W. -. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Virology of Human Pathogenic Viruses. 1st edn. , (2017).</li><li>Burrill, C. P., Strings, V. R., Andino, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poliovirus:+generation,+quantification,+propagation,+purification,+and+storage.">Poliovirus: generation, quantification, propagation, purification, and storage.</a> Current Protocols in Microbiology. , (2013).</li><li>Karakus, U., Crameri, M., Lanz, C., Yanguez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propagation+and+titration+of+influenza+viruses.">Propagation and titration of influenza viruses.</a> Methods in Molecular Biology. 1836, 59-88 (2018).</li><li>Baz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus+isolation,+purification,+and+titration.">Zika virus isolation, purification, and titration.</a> Methods in Molecular Biology. 2142, 9-22 (2020).</li><li>Coleman, C. M., Frieman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+quantification+of+MERS-CoV+infection.">Growth and quantification of MERS-CoV infection.</a> Current Protocols in Microbiology. 37 (1), 1-9 (2015).</li></ol>

Bien que les tests de plaque soient presque aussi vieux que la culture cellulaire de mammifères elle-même, il semble que chaque laboratoire ait son propre ensemble de protocoles pour exécuter ce test de base5,6,10,11,12,13,14,15,16,20<sup clas...

Les débuts des tests de plaque virale remontent aux premières découvertes de virus dans les années 18901. Le virus de la mosaïque du tabac a d’abord été isolé et transmis sur les feuilles de tabac, où des taches individuelles d’infection ont pu être reconnues et quantifiées comme provenant d’une seule entité virale vivante2, identifiée plus tard comme un virion2. Des études séminales ultérieures avec des bactéries et des bactériophages ont perfectionné les techniques utilisées pour plaquer ces virus, y compris les bactéries à la phase médiane de croissance logarithmique, la dilution en série d’échantillons de bactériophages et la gélose supérieure avec visualisation ultérieure de trous littéraux (plaques) dans la pelouse bactérienne3.
L’affaissement des virus animaux a pris du retard par rapport aux recherches passionnantes menées avec les bactériophages, principalement parce que les méthodes requises pour la culture de cellules de mammifères n’ont pas été développées avant les années 19404. Cependant, l’avènement de la croissance des cellules murines en l’absence de l’organisme hôte entier4 a engendré une nouvelle ère dans la capacité de cultiver et de compter les virus. Ces travaux ont été étendus pour la propagation et la quantification du virus de l’encéphalomyélite équine occidentale dans les cellules de poulet et du poliovirus dans les cellules humaines5,6. Au fur et à mesure que le domaine des cellules de mammifères cultivables s’est élargi, la multitude de cellules hôtes différentes pour diverses infections virales a donné au monde une corne d’abondance de possibilités d’étudier toutes sortes de virus7. Cela comprenait la propagation et la quantification des herpèsvirus humains, en particulier les virus de l’herpès simplex 1 (HSV-1) et -2 (HSV-2), qui causent des lésions muco-cutanées8. Il est important de noter que tous les tests de plaque dépendent de l’existence de virions vivants, qui peuvent pénétrer dans les cellules hôtes de manière médiée par les récepteurs dans un échantillon9. Indépendamment de l’omniprésence et de la multitude de publications sur l’exécution des tests de plaque5,10,11,12,13,14,15,16, ces méthodes pour HSV-1/-2 sont un mélange d’art et de science; on ne peut pas effectuer le test sans une attention appropriée à chaque détail du protocole, ni exécuter un test réussi sans un œil crticial pour la subtilité dans le processus. Ce manuscrit décrit l’une des méthodes les plus reproductibles pour les tests de plaque HSV-1/-2, avec des détails précis sur l’art du test qui sont rarement discutés.
Ce protocole actuel permet d’obtenir de manière fiable le nombre d’unités formant de la plaque vivante (PFU) pour le HSV-1 et le -2. Les meilleurs résultats sont obtenus à l’aide de cellules Vero (cellules épithéliales rénal de singe vert africain transformées) à faible passage (sous le numéro de passage 155) et couramment cultivées en alpha-MEM17 complété par 10% de sérum de veau fœtal (FCS), L-alanyl-L-glutamine et un mélange antibiotique/antimycotique18. Les cellules Vero sont propagées de manière standard dans ce milieu deux à trois fois par semaine à une dilution de 1/5 à chaque fois.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>12-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alpha-MEM</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>12169F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic/antimycotic</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystal violet</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>B2193214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s PBS (no Mg++ or Ca++)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal calf serum</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>TMS-013-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-alanyl-L-glutamine (Glutamax)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>GS07F161BA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemacytometer</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>02-671-54</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylcellulose</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>27-441-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quaternary agent (Lysol I.C.)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>NC9645698</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25900CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Cytiva</td>
			<td>SH30042.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vero cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-81</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

plaquing of herpes simplex viruses

Il existe de nombreux protocoles publiés pour apposer les virus, y compris des références dans la littérature primaire pour la méthodologie. Cependant, l’affaissement des virus peut être difficile à effectuer, nécessitant de se concentrer sur ses spécifications et son raffinement. C’est une méthode incroyablement difficile à maîtriser pour les nouveaux étudiants, principalement parce qu’elle nécessite une attention méticuleuse aux détails les plus infimes. Cette démonstration d’affaissement des virus de l’herpès simplex devrait aider ceux qui ont eu du mal à visualiser la méthode, en particulier ses nuances, au fil des ans. Bien que ce manuscrit soit basé sur les mêmes principes de la méthodologie de plaquage standard, il diffère en ce qu’il contient une description détaillée de (1) la meilleure façon de manipuler les cellules hôtes pour éviter toute perturbation pendant le processus, (2) un milieu visqueux plus utile que l’agarose pour limiter la diffusion des virions, et (3) une procédure simple de fixation et de coloration qui produit des résultats reproductibles de manière fiable. En outre, la vidéo d’accompagnement aide à démontrer les distinctions les plus fines dans le processus, qui sont souvent manquées lors de l’instruction des autres sur la réalisation des tests de plaque.

Le tableau 1 montre une expérience qui a des résultats optimaux. Toutes les dilutions 10 fois suivent une diminution d’environ 10 fois du nombre de plaques. Ces types de données peuvent également être vus dans la figure 2, un test de plaque réel où le nombre dénombrable de plaques se situait entre 10 et 4 pour les trois répliques. La même chose peut être vue à la figure 3, la rangée du haut, où le nombre dénombrable d...

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Plaquing of Herpes Simplex Viruses

Le plaquage est une méthode de routine utilisée pour quantifier les virus vivants dans une population. Bien que le plaquage soit fréquemment enseigné dans divers programmes de microbiologie avec des bactéries et des bactériophages, l’affaissement des virus des mammifères est plus complexe et prend plus de temps. Ce protocole décrit les procédures qui fonctionnent de manière fiable pour le travail régulier avec les virus de l’herpès simplex.

Affaissement des virus de l’herpès simplex

There are numerous published protocols for plaquing viruses, including references within primary literature for methodology. However, plaquing viruses can ...

Le protocole aide les étudiants à identifier clairement les infections individuelles et à effectuer le test facilement, ce qui rend plus efficace la quantification du titre viral. Ce protocole intègre une procédure simple de fixation et de coloration qui produit des résultats fiables et reproductibles. Cette méthode peut fournir un aperçu de la précision et de l’efficacité des traitements antiviraux contre les maladies.Les obstacles les plus difficiles de ce protocole d’affaissement sont le nombre de cellules pour les plaques d’ensemencement, en s’assurant que les cellules ne se surchargent pas, ne se dessèchent pas ou ne se rayent pas tout au long du processus. On peut aussi éprouver des difficultés dans la nature méticuleuse globale de ce protocole. Cependant, la pratique est un contributeur majeur au succès de cette expérience.Pour commencer, terminez la dilution de l’échantillon en ajoutant du virus aux cellules en une seule séance de laboratoire. Diluer en série chaque échantillon de virus plaquer dans le PBS. Utilisez généralement des dilutions 10 fois pour un suivi plus précis.Conservez toutes les dilutions virales sur la glace jusqu’à ce qu’elles soient prêtes à ajouter ces échantillons de virus dilués aux cellules. Retirer le milieu de culture cellulaire d’un ou deux puits à l’aide d’une pipette. Ajouter soigneusement l’échantillon de virus dilué goutte à goutte à chaque monocouche de cellules goutte à goutte à travers le côté de chaque puits.Répétez le processus pour un ou deux puits jusqu’à ce que toute la plaque soit remplie avec les échantillons de virus en cours de plaque. Bercez doucement toute la plaque à la main. Ensuite, incubez la plaque à 37 degrés Celsius pendant une heure pour permettre l’adsorption du virus.Toutes les 10 minutes, retirez la plaque de l’incubateur, secouez-la doucement à nouveau pour propager le virus plus uniformément dans chaque puits, puis replacez-la dans l’incubateur. Pour réduire la possibilité de compter par inadvertance l’inoculum non absorbé, retirez l’échantillon de virus des puits à l’aide d’une pointe de pipette de 1000 microlitres et jetez l’échantillon dans un bécher à déchets. Placez 2,5 millilitres d’une superposition de méthylcellulose sur la plaque et replacez-la dans l’incubateur.Désinfectez le bécher à déchets, généralement avec l’ajout d’eau de Javel, d’un iodophore ou d’un virucide similaire, avant de le retirer de l’armoire de biosécurité. Après l’incubation de deux jours, retirez la superposition de méthylcellulose d’un ou deux puits à la fois à l’aide d’une pipette et placez-la dans un bécher à déchets. Ajouter environ deux millilitres de violet cristallin à 1 % dans de l’éthanol à 50 % à chaque puits.Incuber la plaque avec tous les puits remplis de la tache pendant 30 minutes à 37 degrés Celsius. À ce stade, désinfectez le bécher à déchets comme démontré précédemment. Lavez vigoureusement les assiettes à l’eau du robinet jusqu’à ce que le ruissellement soit clair.Assurez-vous qu’il y a environ 10 fois plus de différences dans le nombre de plaques dans chaque série de dilution. La figure illustre une diminution de 10 fois du nombre de plaques où le nombre dénombrable de plaques se situait entre 10 et moins quatre pour les trois répétitions. Les trois premières images de la figure représentent des plaques dans la dilution 10 à moins trois.Cependant, la rangée du bas montre les résultats lorsqu’un test de plaque n’est pas bien effectué. Il y a très peu de plaques visibles à partir d’une dilution dans les zones visibles autour du sommet où les cellules Vero se sont entièrement soulevées du substrat. De même, cette figure montre des problèmes de dessèchement ou de mauvaise manipulation des cellules pendant le dosage de la plaque.Cependant, cette figure montre de manière critique un mauvais ensemencement des cellules Vero. Chaque puits montre des taches violettes plus foncées, indiquant que les cellules ne sont pas bien réparties dans le puits et empilées les unes sur les autres en grappes. Pour de meilleurs résultats, assurez-vous que le virus se propage uniformément dans la plaque pour éviter les plaques agglomérées Les tests de plaque sont plus efficaces que d’autres méthodes quantitatives car ils ne comptent que les virus vivants.De cette façon, une véritable efficacité antivirale peut être établie. De plus, cette technique nous a permis de quantifier la présence virale sur les fomites et d’explorer l’efficacité de l’administration de médicaments à partir de nouveaux dispositifs médicaux dans notre secteur de la recherche sur le virus de l’herpès.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Fidelity Variants of RNA Viruses and Characterization of Virus Mutation Frequency

Isolement des variantes des virus à ARN de Fidelity et caractérisation de la fréquence de mutation de virus

RNA viruses use RNA dependent RNA polymerases to replicate their genomes. The intrinsically high error rate of these enzymes is a large contributor to the ...

Recherche

Immunologie et infection

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Un système de neurones primaires de la culture pour l&#39;étude de l&#39;herpès simplex virus de latence et de réactivation

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Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

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L&#39;établissement d&#39;une culture liquide recouvert de Airway humaines épithéliales polarisées cellules Calu-3 pour étudier la réponse cellulaire aux agents pathogènes respiratoires hôte<em&gt; In vitro</em

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Ex Vivo Infection of Murine Epidermis with Herpes Simplex Virus Type 1

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