Name: magnetic isolation of microglial cells from neonate mouse for primary cell cultures
Uploaded: 2022-07-25T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Magnetic Isolation of Microglial Cells from Neonate Mouse for Primary Cell Cultures at JoVE.com

تم إنشاء الأشكال باستخدام BioRender. يتم تمويل البحث من قبل Inserm ، جامعة باريس ، Horizon 2020 (PREMSTEM-874721) ، مؤسسة فرنسا ، مؤسسة ARSEP ، مؤسسة البحوث حول سيرفو ، مؤسسة نعمة موناكو ، ومنحة إضافية من Investissement d'Avenir -ANR-11-INBS-0011-NeurATRIS and Investissement d'Avenir -ANR-17-EURE-001-EUR G.E.N.E.

تمت الموافقة على البروتوكول ، وتم التعامل مع جميع الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية للمعهد الوطني للصحة والبحوث العلمية (Inserm ، فرنسا). يتم تقديم العزل المغناطيسي للخلايا الدبقية الصغيرة من أدمغة 24 من جراء الفئران OF1 (ذكورا وإناثا) في P8 ، مقسمة إلى 6 آبار أو 12 بئرا أو 96 بئرا. تم تنفيذ ?...

يقدم العمل الحالي ثقافة الخلايا الدبقية الصغيرة الأولية باستخدام خلايا CD11b + المصنفة مغناطيسيا. بالإضافة إلى التقييم الوظيفي الدبقي الصغير (RT-qPCR والمقايسات البلعمية) ، تم أيضا تحديد نقاء ثقافة الخلايا الدبقية الصغيرة.
عادة ما يتم إنشاء مزارع الخلايا الدبقية الصغيرة الكلاس?...

الخلايا الدبقية الصغيرة هي الخلايا الشبيهة بالبلاعم المقيمة في الجهاز العصبي المركزي المشتقة من السلائف الكريات الحمر لكيس الصفار التي تهاجر إلى الظهارة العصبية أثناء التطور الجنيني المبكر1. بصرف النظر عن وظائف المناعة ، فإنها تلعب أيضا دورا مهما أثناء النمو العصبي ، خاصة في تكوين المشابك ، والتوازن العصبي ، والميالين2. في مرحلة البلوغ ، تطور الخلايا الدبقية الصغيرة عمليات خلوية طويلة لمسح البيئة بشكل مستمر. في حالة تمزق التوازن مثل إصابة الدماغ أو أمراض الدماغ ، يمكن للخلايا الدبقية الصغيرة تغيير مظهرها المورفولوجي لتبني شكل أميبي ، والهجرة إلى المنطقة المصابة ، وزيادة وإطلاق العديد من العوامل الواقية للخلايا أو السامة للخلايا. الخلايا الدبقية الصغيرة لها حالات تنشيط غير متجانسة اعتمادا على مرحلة نموها ونوع الإصابة التي لحقتبها 3،4،5. في هذه الدراسة ، يتم تصنيف حالات التنشيط هذه على نطاق واسع إلى ثلاثة أنماط ظاهرية مختلفة: مؤيدة للالتهابات / البلعمة ، ومضادة للالتهابات ، ومنظمة مناعية ، مع الأخذ في الاعتبار أنه في الواقع ، من المرجح أن يكون الوضع أكثر تعقيدا6.
يمكن أن تكون الدراسة في الجسم الحي لتنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة وفحص استراتيجيات الحماية العصبية في المراحل المبكرة من نمو الدماغ صعبة بسبب (1) هشاشة الحيوانات قبل الفطام و (2) انخفاض عدد الخلايا الدبقية الصغيرة. لذلك تستخدم الدراسات في المختبر على الخلايا الدبقية الصغيرة على نطاق واسع للسمية7،8،9 ، واستراتيجيات الحماية العصبية5،10،11،12،13،14 ، والثقافات المشتركة15،16،17،18،19،20،21 . يمكن أن تستخدم الدراسات في المختبر إما خطوط الخلايا الدبقية الصغيرة أو الخلايا الدبقية الصغيرة المشتقة من الخلايا الجذعية أو ثقافة الخلايا الدبقية الصغيرة الأولية. كل هذه الأساليب لها مزايا وعيوب ، ويعتمد الاختيار على السؤال البيولوجي الأولي. فوائد استخدام مزارع الخلايا الدبقية الصغيرة الأولية هي الخلفية الوراثية المتجانسة ، والتاريخ الخالي من مسببات الأمراض ، والتحكم في الوقت الذي يتم فيه تحفيز الخلايا الدبقية الصغيرة بعد موت الحيوان22.
على مر السنين، تم تطوير طرق مختلفة (قياس التدفق الخلوي، أو الاهتزاز، أو وضع العلامات المغناطيسية) لزراعة الخلايا الدبقية الصغيرة الأولية من القوارض، سواء حديثي الولادة أو البالغين 23،24،25،26،27،28،29. في العمل الحالي، يتم عزل الخلايا الدبقية الصغيرة من صغار الفئران حديثي الولادة باستخدام تقنية فرز الخلايا المنشطة مغناطيسيا الموصوفة سابقا باستخدام CD11b25،27،29 المضاد للفأر المغلف بالميكروبيدات. CD11b هو مستقبل إنتغرين يتم التعبير عنه على سطح الخلايا النخاعية ، بما في ذلك الخلايا الدبقية الصغيرة. عندما لا يكون هناك تحد التهابي داخل الدماغ ، فإن جميع خلايا CD11b + تقريبا هي الخلايا الدبقية الصغيرة30. بالمقارنة مع الطرق الأخرى المنشورة سابقا 23،24،25،26،27،28،29 ، يوازن البروتوكول الحالي بين تحليلات التنشيط الفوري للخلايا الدبقية الصغيرة خارج الجسم الحي وزراعة الخلايا الدبقية الصغيرة الأولية الشائعة في المختبر. وبالتالي ، فإن الخلايا الدبقية الصغيرة (1) معزولة في يوم ما بعد الولادة (P) 8 دون إزالة المايلين ، (2) مستنبتة بدون مصل ، و (3) تتعرض إما ل siRNA و miRNA و / أو مركب دوائي و / أو محفزات التهابية بعد 48 ساعة فقط من عزل الدماغ. كل جانب من هذه الجوانب الثلاثة يجعل البروتوكول الحالي مناسبا وسريعا. بادئ ذي بدء ، يسمح استخدام الخلايا الدبقية الصغيرة لدى الأطفال بالحصول على خلايا ديناميكية وتفاعلية قابلة للحياة في الثقافة دون الحاجة إلى خطوة إضافية لإزالة الميالين يمكن أن تعدل تفاعل الخلايا الدبقية الصغيرة في المختبر. يهدف البروتوكول الحالي إلى الاقتراب قدر الإمكان من البيئة الفسيولوجية للخلايا الدبقية الصغيرة. في الواقع ، لا تواجه الخلايا الدبقية الصغيرة مصلا أبدا ، ولا يتطلب هذا البروتوكول استخدام المصل أيضا. علاوة على ذلك ، فإن تعريض الخلايا الدبقية الصغيرة في وقت مبكر من 48 ساعة بعد الثقافة يمنعهم من فقدان كلياتهم الفسيولوجية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anti mouse ACSA-2 PE Vio 615</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-116-246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti mouse CD11b BV421</td>
			<td>Sony Biotechnology</td>
			<td>1106255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti mouse CD45 BV510</td>
			<td>Sony Biotechnology</td>
			<td>1115690</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti mouse CX3CR1 PE Cy7</td>
			<td>Sony Biotechnology</td>
			<td>1345075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti mouse NeuN PE</td>
			<td>Milli-Mark</td>
			<td>FCMAB317PE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti mouse O4 Vio Bright B515</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-120-016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Cytofix/Cytoperm permeabilization kit</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>554655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-091-376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11b (Microglia) MicroBeads, h, m</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-634</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Leica TCS SP8</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-PBS (10x)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>14200067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E1644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Cell culture 12-well plate, flat bottom + lid</td>
			<td>Dutscher</td>
			<td>353043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Cell culture 96-well plate, flat bottom + lid</td>
			<td>Dutscher</td>
			<td>353072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon tubes 50 mL</td>
			<td>Dutscher</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fc blocking reagent (Mouse CD16/32)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>553142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Nikon ECLIPSE TE300</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gentleMACS C Tubes (4 x 25 tubes)</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-096-334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gentleMACS Octo Dissociator with Heaters</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-096-427</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#39; Balanced Salt Solution (HBSS) +CaCl2 +MgCl2 10x</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>14065049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#39; Balanced Salt Solution (HBSS) -CaCl2 -MgCl2 10x</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>14185045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iQ SYBR&#160;Green Supermix</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>1725006CUST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iscript c-DNA synthesis</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>1708890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Latex beads, amine-modified polystyrene, fluorescent red</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L2776-1mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipopolysaccharides (LPS) from&#160;Escherichia coli&#160;O55:B5</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L2880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Macrophage-SFM serum-free medium</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>12065074</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS BSA Stock Solution</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-091-376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS SmartStrainers (70 &#956;m), 4 x 25 pcs</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-110-916</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 PE</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MABC002H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG2a PE Cy7</td>
			<td>Sony Biotechnology</td>
			<td>2601265</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IL1 beta</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-101-684</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-24 Column Blocks</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-095-691</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultiMACS Cell24 Separator</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neural Tissue Dissociation Kit - Papain</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-092-628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucleocounter NC-200</td>
			<td>Chemometec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucleospin RNA Plus XS</td>
			<td>Macherey Nagel</td>
			<td>740990.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nun EZFlip Top Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>362694</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPTILUX Petri dish - 100 x 20 mm</td>
			<td>Dutscher</td>
			<td>353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P&#233;nicilline-streptomycine (10 000 U/mL)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat IgG2b, k BV421</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>562603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat IgG2b, k BV510</td>
			<td>Sony Biotechnology</td>
			<td>2603230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>REA control (S) PE vio 615</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-104-616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>REA control (S) Vio Bright B515</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-113-445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse IFN-gamma Protein</td>
			<td>R&#38;D System</td>
			<td>485-MI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse IL-10 Protein</td>
			<td>R&#38;D System</td>
			<td>417-ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse IL-4 Protein</td>
			<td>R&#38;D System</td>
			<td>404-ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RIPA Buffer</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R0278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Viability probe (FVS780)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>565388</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

magnetic isolation of microglial cells from neonate mouse for primary cell cultures

تعتبر الخلايا الدبقية الصغيرة ، باعتبارها بلاعم مقيمة في الدماغ ، أساسية للعديد من الوظائف ، بما في ذلك الاستجابة للإجهاد البيئي وتوازن الدماغ. يمكن أن تتبنى الخلايا الدبقية الصغيرة مجموعة كبيرة من الأنماط الظاهرية للتنشيط. علاوة على ذلك ، ترتبط الخلايا الدبقية الصغيرة التي تؤيد النمط الظاهري المؤيد للالتهابات بكل من اضطرابات النمو العصبي والاضطرابات التنكسية العصبية. تستخدم الدراسات في المختبر على نطاق واسع في البحث لتقييم الاستراتيجيات العلاجية المحتملة في أنواع معينة من الخلايا. في هذا السياق ، تعد دراسة تنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة والالتهاب العصبي في المختبر باستخدام مزارع الخلايا الدبقية الصغيرة الأولية أكثر أهمية من خطوط الخلايا الدبقية الصغيرة أو الخلايا الدبقية الصغيرة المشتقة من الخلايا الجذعية. ومع ذلك ، قد يعاني استخدام بعض الثقافات الأولية من نقص التكاثر. يقترح هذا البروتوكول طريقة قابلة للتكرار وذات صلة لعزل الخلايا الدبقية الصغيرة مغناطيسيا عن صغار حديثي الولادة. يتم هنا توضيح التنشيط الدبقي الصغير باستخدام العديد من المحفزات بعد 4 ساعات و 24 ساعة عن طريق القياس الكمي لتعبير mRNA ومقايسة البلعمة Cy3-bead. من المتوقع أن يوفر العمل الحالي تقنية قابلة للتكرار بسهولة لعزل الخلايا الدبقية الصغيرة ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية عن مراحل نمو الأحداث.

الخلايا الدبقية الصغيرة هي البلاعم المقيمة في الجهاز العصبي المركزي والتي يتم تنشيطها عند تعرضها لتحديات بيئية (صدمة ، جزيئات سامة ، التهاب) 4،5،6،34 (الشكل 3 أ). تستخدم الدراسات في المختبر حول الخلاي?...

Watch this Scientific Journal Video about Magnetic Isolation of Microglial Cells from Neonate Mouse for Primary Cell Cultures at JoVE.com

Magnetic Isolation of Microglial Cells from Neonate Mouse for Primary Cell Cultures

تستخدم مزارع الخلايا الدبقية الصغيرة الأولية بشكل شائع لتقييم الجزيئات الجديدة المضادة للالتهابات. يصف البروتوكول الحالي طريقة قابلة للتكرار وذات صلة لعزل الخلايا الدبقية الصغيرة مغناطيسيا عن صغار حديثي الولادة.

العزل المغناطيسي للخلايا الدبقية الصغيرة من فأر حديث الولادة لمزارع الخلايا الأولية

Microglia, as brain resident macrophages, are fundamental to several functions, including response to environmental stress and brain homeostasis. ...

يسمح لنا هذا البروتوكول بزراعة الخلايا الدبقية الصغيرة في ظروف تحاكي عن كثب الخصائص في الجسم الحي. باستخدام تقنية فرز الخلايا المغناطيسية ، يسمح لنا بروتوكولنا بتحفيز الخلايا الدبقية الصغيرة يومين فقط في المختبر ، دون استخدام أي مصل في وسط الثقافة. للبدء ، استخدم مقصا صغيرا لقطع الجلد من الرقبة إلى الأنف ، بعد الخيط السهمي من 15 إلى 20 ملم.أدخل النصائح مع الثقبة ماغنوم موازية للجمجمة. قطع من كل جانب إلى العينين. قطع بين العينين بمقص صغير لفصل الجمجمة والدماغ عن الرأس.باستخدام ملقطين ، أمسك الجمجمة بالقرب من المصابيح الشمية ، وقم بتمزيق الجمجمة بعناية. باستخدام شفرة حلاقة ، قم بإزالة المخيخ والمصباح الشمي ، وقطع الدماغ إلى قطعتين. ضع قطع الدماغ في طبق بتري يحتوي على 40 ملليلتر من HBSS بدون الكالسيوم والمغنيسيوم.تحضير خليط التفكك وفقا لهذا الجدول. انقل 12 قطعة دماغية إلى أنبوب C بوزن إجمالي يبلغ 1.2 جرام لكل أنبوب تفكك. ثم ضع أنابيب C على جهاز فك الارتباط مع التدفئة.بدء تشغيل برنامج NTDK الأمثل في الانفصال. جهاز طرد مركزي لمدة 20 ثانية. أكمل التفكك الميكانيكي عن طريق السحب ثلاث مرات.نقل الخلايا إلى أربعة أنابيب 15 ملليلتر مع مصافي المرفقة. شطف المصافي مع 10 ملليلتر من HBSS مع الكالسيوم والمغنيسيوم. الطرد المركزي لمدة 10 دقائق ، وإزالة الطافت مع ماصة 10 ملليلتر.أضف بعناية 10 ملليلتر من HBSS مع الكالسيوم والمغنيسيوم ، وأعد تعليق الحبيبات. مرة أخرى ، الطرد المركزي وإزالة المادة الطافية. أعد تعليق الحبيبات بستة ملليلتر من المخزن المؤقت للفرز.كرر الطرد المركزي وتخلص من المادة الطافية. ثم أضف 200 ميكرولتر من محلول حبة الميكروبيدات CD11b واحتضان الأنابيب لمدة 15 إلى 20 دقيقة عند أربع درجات مئوية. بعد الحضانة ، أعد تعليق الحبيبات بستة ملليلتر من المخزن المؤقت للفرز.كرر الطرد المركزي وأعد تعليق الحبيبات بثمانية ملليلتر من المخزن المؤقت للفرز. بعد ذلك ، اتبع برنامج Possel على الفاصل لإعداد ثمانية أعمدة. مرر الخلايا عبر العمود عن طريق إضافة ملليلتر واحد من معلق الخلية في المرة الواحدة.مع ملليلتر واحد من العازلة للفرز ، قم بالتخلص من الخلايا الإيجابية CD11b على لوحة شطف معقمة. تجمع الخلايا في أنبوب 50 ملليلتر. الطرد المركزي وإعادة تعليق بيليه مع 10 ملليلتر من وسط الخلايا الدبقية الصغيرة الباردة.عد الخلايا الموجبة CD11b. أعد تعليق الخلايا في وسط الخلايا الدبقية الصغيرة الباردة للحصول على تركيز نهائي من 650،000 إلى 700،000 خلية لكل ملليلتر. الاستغناء عن التعليق في لوحات زراعة الخلايا.احتضان الأطباق طوال الليل عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون. في اليوم التالي ، استبدل الوسط بوسط الخلايا الدبقية الصغيرة المسخن مسبقا ، وكرر الحضانة بين عشية وضحاها. تحفيز الخلايا قبل هذه الخطوة ، وإجراء اختبار البلعمة خلال الساعات الثلاث الأخيرة من التحفيز.احسب عدد الخرز وفقا لهذا الجدول بنسبة 50 حبة لكل خلية. تحضير خليط الخرز. احتضان الأنبوب لمدة ساعة واحدة في حمام مائي عند 37 درجة مئوية.دوامة كل 10 دقائق. لكل بئر ، أضف الحجم المحسوب لمحلول الخرزة واحتضانه لمدة ثلاث ساعات. باستخدام هذا النهج ، تم تقييم نشاط البلعمة للخلايا الدبقية الصغيرة بعد التحفيز بواسطة عوامل مؤيدة للالتهابات ، مثل إنترلوكين -1 بيتا ، بالإضافة إلى إنترفيرون جاما ، أو عديدات السكاريد الدهنية.بعد التحفيز لمدة ست إلى 24 ساعة ، تم تحليل حبات الخلايا الدبقية الصغيرة Cy3 الفلورية بواسطة المجهر متحد البؤر. بعد ست ساعات ، تبدأ الخلايا الدبقية الصغيرة في ظهور حبات Cy3 البلعمية فقط تحت حالة إنترلوكين -1 بيتا بالإضافة إلى إنترفيرون جاما. بعد 24 ساعة ، كانت هناك زيادة في مضان Cy3 لكلا النوعين من التحفيز ، مما يسلط الضوء على زيادة نشاط البلعمة.تم رفع نقاء ثقافة الخلايا الدبقية الصغيرة عن طريق قياس التدفق الخلوي ، والذي أظهر زيادة في صلاحية الخلية بعد الفرز. تم تحليل استخدام قياس التدفق الخلوي وعلامات تعداد خلايا RT-qPCR قبل وبعد فرز الخلايا الإيجابية CD11b من أدمغة الفئران في اليوم الثامن بعد الولادة. ميزت هذه التحليلات مجموعات مختلفة من خلايا الدماغ ، مثل CX3CR135 للخلايا الدبقية الصغيرة ، O4 ، أو OLIG2 للخلايا قليلة التغصن ، أو NeuN ، أو synaptophysin ، للخلايا العصبية ، و ACSA-2 ، أو GFAP للخلايا النجمية.بعد فرز الخلايا باستخدام الجسم المضاد CD11b ، تم الحصول على الخلايا الدبقية الصغيرة فقط. من المهم أن ماصة بلطف شديد أثناء إضافة التعليق إلى العمود لمنع الانسداد وتجنب موت الخلايا الميكانيكية. بعد هذه الطريقة ، يمكن إجراء البروتينات النسخية ، مثل الدم الغربي ، أو Luminex ، وحتى الكيمياء المناعية من أجل رؤية تأثير التحفيز الدبقي الصغير.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Multiple-mouse Neuroanatomical Magnetic Resonance Imaging

متعددة الماوس تشريحي عصبي التصوير بالرنين المغناطيسي

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

العزلة والثقافة من الخلايا العصبية كريست من الأنبوبة العصبية الجنينية الفئران

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

ماوس واحدة، واثنين من الثقافات: العزلة وثقافة الكبار الخلايا الجذعية العصبية من المناطق العصبية اثنان من الفئران الفردية

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...

Isolation of Primary Murine Brain Microvascular Endothelial Cells

عزل خلايا الدماغ الأولية الفئران الاوعية الدموية الدقيقة غشائي

The blood-brain-barrier is ultrastructurally assembled by a monolayer of brain microvascular endothelial cells (BMEC) interconnected by a junctional ...

Preparation of Primary Mixed Glial Cultures from Adult Mouse Spinal Cord Tissue

إعداد الثقافات الدبقية المختلطة الابتدائية من الكبار ماوس النخاع الشوكي الأنسجة

It has been well-accepted that spinal cord glial responses contribute significantly to the development of neuropathic pain. Tremendous information ...

Rapid and Refined CD11b Magnetic Isolation of Primary Microglia with Enhanced Purity and Versatility

عزل المغناطيسي السريع والمكرر CD11b من الابتدائية الخلايا الدبقية الصغيرة مع الطهارة تعزيز وطلاقة

Microglia are the primary responders to central nervous system insults; however, much remains unknown about their role in regulating neuroinflammation. ...

Isolation and Culture of Embryonic Mouse Neural Stem Cells

العزلة والثقافة من الخلايا الجذعية الجنينية الماوس العصبية

Neural stem cells (NSCs) are multipotent and can give rise to the three major cell types of the central nervous system (CNS). In vitro culture and ...

Isolation of Primary Murine Skeletal Muscle Microvascular Endothelial Cells

عزل خلايا بطانية Microvascular الابتدائي مورين الهيكل العظمى والعضلات

The endothelial cells of skeletal muscle capillaries (muscle microvascular endothelial cells, MMEC) build up the barrier between blood stream and skeletal ...

Primary Culture of Neurons Isolated from Embryonic Mouse Cerebellum

الثقافة الاساسيه للخلايا العصبية معزولة عن المخيخ الفئران الجنينية

The use of primary cell cultures has become one of the major tools to study the nervous system in vitro. The ultimate goal of using this simplified model ...

Isolation of Mouse Primary Microglia by Magnetic-Activated Cell Sorting in Animal Models of Demyelination

عزل الخلايا الدبقية الصغيرة الأولية للفأر عن طريق فرز الخلايا المنشطة مغناطيسيا في النماذج الحيوانية لإزالة الميالين

Microglia, the resident innate immune cells in the brain, are the primary responders to inflammation or injury in the central nervous system (CNS). ...