Name: magnetic isolation of microglial cells from neonate mouse for primary cell cultures
Uploaded: 2022-07-25T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Magnetic Isolation of Microglial Cells from Neonate Mouse for Primary Cell Cultures at JoVE.com

הדמויות נוצרו באמצעות BioRender. המחקר ממומן על ידי Inserm, אוניברסיטת פריז, Horizon 2020 (PREMSTEM-874721), Fondation de France, Fondation ARSEP, Fondation pour la Recherche sur le Cerveau, Fondation Grace de Monaco, ומענק נוסף מ- Investissement d'Avenir -ANR-11-INBS-0011-NeurATRIS and Investissement d'Avenir -ANR-17-EURE-001-EUR G.E.N.E.

הפרוטוקול אושר, וכל בעלי החיים טופלו על פי ההנחיות המוסדיות של המכון הלאומי למחקרי ביטחון לאומי (Inserm, צרפת). בידוד מגנטי של מיקרוגליה ממוחם של 24 גורי עכברי OF1 (זכר ונקבה כאחד) ב-P8, המחולק לצלחות של 6 בארות, 12 בארות, או 96 בארות. העבודה הניסיונית בוצעה מתחת למכסה מנוע כדי לשמור על תנאים סטריליים.</p...

העבודה הנוכחית מציגה תרבית תאים מיקרוגליאלית ראשונית באמצעות תאי CD11b+ ממוינים מגנטית. בנוסף להערכה התפקודית המיקרוגליאלית (RT-qPCR ומבחני פאגוציטים), נקבע גם טוהר התרבית המיקרוגליאלית.
תרביות תאי מיקרוגליה קלאסיות נוצרות בדרך כלל ממוח ילודים של מכרסם P1 או P2 ומתרבית משותפת עם ?...

מיקרוגליה (Microglia) הם תאים דמויי מקרופאגים של מערכת העצבים המרכזית, שמקורם במבשרים אריתרופוייטיים של שק החלמון הנודדים לנוירואפיתל במהלך ההתפתחות העוברית המוקדמת1. מלבד תפקודי החסינות שלהם, הם גם ממלאים תפקיד משמעותי במהלך התפתחות עצבית, במיוחד עבור סינפטוגנזה, הומאוסטזיס עצבי ומיאלינציה2. בבגרות, מיקרוגליה מפתחת תהליכים תאיים ארוכים כדי לסרוק את הסביבה ברציפות. במקרה של קרעים הומאוסטזיס כגון פגיעה מוחית או מחלת מוח, מיקרוגליה יכולה לשנות את המראה המורפולוגי שלהם כדי לאמץ צורה אמבואידית, לנדוד לאזור הפגוע, להגדיל ולשחרר גורמים ציטולוגיים או ציטוטוקסיים רבים. למיקרוגליה יש מצבי הפעלה הטרוגניים בהתאם לשלב ההתפתחותי שלהם ולסוג הפציעהשספג 3,4,5. במחקר זה, מצבי הפעלה אלה מסווגים באופן נרחב לשלושה פנוטיפים שונים: פרו-דלקתיים/פאגוציטיים, נוגדי דלקת ואימונו-רגולטוריים, תוך התחשבות בכך שבמציאות, המצב צפוי להיות מורכב יותר6.
חקר ההפעלה המיקרוגליאלית in vivo וסינון אחר אסטרטגיות הגנה עצבית בשלבים מוקדמים של התפתחות המוח יכול להיות מאתגר בשל (1) שבריריותם של בעלי חיים לפני הגמילה ו-(2) המספר הנמוך של תאים מיקרוגליאליים. לכן מחקרים במבחנה על מיקרוגליה נמצאים בשימוש נרחב לרעילות 7,8,9, אסטרטגיות הגנה עצבית5,10,11,12,13,14, ותרביות משותפות 15,16,17,18,19,20,21 . מחקרים במבחנה יכולים להשתמש בקווי תאים מיקרוגליאליים, במיקרוגליה שמקורה בתאי גזע או בתרבית מיקרוגליה ראשונית. לכל הגישות הללו יש יתרונות וחסרונות, והבחירה תלויה בשאלה הביולוגית הראשונית. היתרונות של שימוש בתרביות מיקרוגליה ראשוניות הם הרקע הגנטי ההומוגני, היסטוריה נטולת פתוגנים ושליטה בזמן שבו המיקרוגליה מגורה לאחר מות בעלי חיים22.
במהלך השנים פותחו שיטות שונות (ציטומטריה של זרימה, טלטול או תיוג מגנטי) לגידול מיקרוגליה ראשונית ממכרסמים, הן יילודים והן בוגרים 23,24,25,26,27,28,29. בעבודה הנוכחית, בידוד מיקרוגליה מגורי עכברים מבוצע באמצעות טכנולוגיית מיון תאים המופעלים על ידי מגנט שתוארה קודם לכן באמצעות CD11b 25,27,29 מצופה מיקרובאד נגד עכברים. CD11b הוא קולטן אינטגרין המתבטא על פני השטח של תאים מיאלואידים, כולל מיקרוגליה. כאשר אין אתגר דלקתי במוח, כמעט כל תאי CD11b+ הם מיקרוגליה30. בהשוואה לשיטות אחרות שפורסמו בעבר 23,24,25,26,27,28,29, הפרוטוקול הנוכחי מאזן ניתוחי הפעלה מיקרוגליאליים מיידיים ex vivo ותרבית מיקרוגליאלית ראשונית נפוצה במבחנה. לפיכך, מיקרוגליה (1) מבודדת ביום שלאחר הלידה (P)8 ללא הסרת מיאלין, (2) מבודדת ללא סרום, ו-(3) נחשפת ל-siRNA, miRNA, תרכובת פרמקולוגית ו/או גירויים דלקתיים רק 48 שעות לאחר בידוד המוח. כל אחד משלושת ההיבטים הללו הופך את הפרוטוקול הנוכחי לרלוונטי ומהיר. ראשית, השימוש במיקרוגליה ילדים מאפשר קבלת תאים בני קיימא דינמיים ותגובתיים בתרבית ללא צורך בצעד נוסף של דה-מיאלינציה שעשוי לשנות את תגובתיות המיקרוגליה במבחנה. הפרוטוקול הנוכחי נועד להתקרב ככל האפשר לסביבה הפיזיולוגית של המיקרוגליה. ואכן, מיקרוגליה לעולם אינה נתקלת בסרום, וגם פרוטוקול זה אינו דורש שימוש בסרום. יתר על כן, חשיפת מיקרוגליה כבר 48 שעות לאחר התרבית מונעת מהם לאבד את יכולותיהם הפיזיולוגיות.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anti mouse ACSA-2 PE Vio 615</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-116-246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti mouse CD11b BV421</td>
			<td>Sony Biotechnology</td>
			<td>1106255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti mouse CD45 BV510</td>
			<td>Sony Biotechnology</td>
			<td>1115690</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti mouse CX3CR1 PE Cy7</td>
			<td>Sony Biotechnology</td>
			<td>1345075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti mouse NeuN PE</td>
			<td>Milli-Mark</td>
			<td>FCMAB317PE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti mouse O4 Vio Bright B515</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-120-016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Cytofix/Cytoperm permeabilization kit</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>554655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-091-376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11b (Microglia) MicroBeads, h, m</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-634</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Leica TCS SP8</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-PBS (10x)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>14200067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E1644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Cell culture 12-well plate, flat bottom + lid</td>
			<td>Dutscher</td>
			<td>353043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Cell culture 96-well plate, flat bottom + lid</td>
			<td>Dutscher</td>
			<td>353072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon tubes 50 mL</td>
			<td>Dutscher</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fc blocking reagent (Mouse CD16/32)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>553142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Nikon ECLIPSE TE300</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gentleMACS C Tubes (4 x 25 tubes)</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-096-334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gentleMACS Octo Dissociator with Heaters</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-096-427</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#39; Balanced Salt Solution (HBSS) +CaCl2 +MgCl2 10x</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>14065049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#39; Balanced Salt Solution (HBSS) -CaCl2 -MgCl2 10x</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>14185045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iQ SYBR&#160;Green Supermix</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>1725006CUST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iscript c-DNA synthesis</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>1708890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Latex beads, amine-modified polystyrene, fluorescent red</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L2776-1mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipopolysaccharides (LPS) from&#160;Escherichia coli&#160;O55:B5</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L2880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Macrophage-SFM serum-free medium</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>12065074</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS BSA Stock Solution</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-091-376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS SmartStrainers (70 &#956;m), 4 x 25 pcs</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-110-916</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 PE</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MABC002H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG2a PE Cy7</td>
			<td>Sony Biotechnology</td>
			<td>2601265</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IL1 beta</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-101-684</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-24 Column Blocks</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-095-691</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultiMACS Cell24 Separator</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neural Tissue Dissociation Kit - Papain</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-092-628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucleocounter NC-200</td>
			<td>Chemometec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucleospin RNA Plus XS</td>
			<td>Macherey Nagel</td>
			<td>740990.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nun EZFlip Top Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>362694</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPTILUX Petri dish - 100 x 20 mm</td>
			<td>Dutscher</td>
			<td>353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P&#233;nicilline-streptomycine (10 000 U/mL)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat IgG2b, k BV421</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>562603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat IgG2b, k BV510</td>
			<td>Sony Biotechnology</td>
			<td>2603230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>REA control (S) PE vio 615</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-104-616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>REA control (S) Vio Bright B515</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-113-445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse IFN-gamma Protein</td>
			<td>R&#38;D System</td>
			<td>485-MI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse IL-10 Protein</td>
			<td>R&#38;D System</td>
			<td>417-ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse IL-4 Protein</td>
			<td>R&#38;D System</td>
			<td>404-ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RIPA Buffer</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R0278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Viability probe (FVS780)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>565388</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

magnetic isolation of microglial cells from neonate mouse for primary cell cultures

מיקרוגליה, כמקרופאגים תושבי המוח, הם חיוניים למספר תפקודים, כולל תגובה ללחץ סביבתי והומאוסטזיס מוחי. מיקרוגליה יכולה לאמץ ספקטרום גדול של פנוטיפים של הפעלה. יתר על כן, מיקרוגליה התומכת בפנוטיפ מרובה דלקת קשורה הן להפרעות נוירו-התפתחותיות והן להפרעות נוירודגנרטיביות. מחקרים במבחנה נמצאים בשימוש נרחב במחקר להערכת אסטרטגיות טיפוליות פוטנציאליות בסוגי תאים ספציפיים. בהקשר זה חקר הפעלה מיקרוגליאלית ודלקת עצבית במבחנה באמצעות תרביות מיקרוגליאליות ראשוניות רלוונטי יותר מאשר קווי תאים מיקרוגליאליים או מיקרוגליה שמקורה בתאי גזע. עם זאת, השימוש בכמה תרבויות ראשוניות עלול לסבול מחוסר שכפול. פרוטוקול זה מציע שיטה ניתנת לשחזור ורלוונטית לבידוד מגנטי של מיקרוגליה מגורים יילודים. הפעלה מיקרוגליאלית באמצעות מספר גירויים לאחר 4 שעות ו-24 שעות על ידי כימות ביטוי mRNA ובדיקה פאגוציטית של חרוזי Cy3 מודגמת כאן. העבודה הנוכחית צפויה לספק טכניקה הניתנת לשחזור בקלות לבידוד מיקרוגליה רלוונטית מבחינה פיזיולוגית משלבי התפתחות צעירים.

מיקרוגליה היא מקרופאג' תושב CNS שמופעל כאשר הוא נחשף לאתגרים סביבתיים (טראומה, מולקולות רעילות, דלקת)4,5,6,34 (איור 3A). מחקרים במבחנה על מיקרוגליה משמשים בדרך כלל להערכת מנגנונים אוטונומיים תאיים הקשורי?...

Watch this Scientific Journal Video about Magnetic Isolation of Microglial Cells from Neonate Mouse for Primary Cell Cultures at JoVE.com

Magnetic Isolation of Microglial Cells from Neonate Mouse for Primary Cell Cultures

תרביות מיקרוגליה ראשוניות משמשות בדרך כלל להערכת מולקולות נוגדות דלקת חדשות. הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה ניתנת לשחזור ורלוונטית לבידוד מגנטי של מיקרוגליה מגורים יילודים.

בידוד מגנטי של תאים מיקרוגליאליים מעכבר ניאונאט עבור תרביות תאים ראשוניים

Microglia, as brain resident macrophages, are fundamental to several functions, including response to environmental stress and brain homeostasis. ...

פרוטוקול זה מאפשר לנו לתרבת מיקרוגליה בתנאים המחקים באופן הדוק את מאפייני ה- in vivo. באמצעות טכנולוגיית מיון תאים מגנטיים, הפרוטוקול שלנו מאפשר לנו לעורר מיקרוגליה רק יומיים במבחנה, מבלי להשתמש בסרום כלשהו במדיום התרבית. כדי להתחיל, להשתמש מספריים קטנים כדי לחתוך את העור מן הצוואר אל האף, בעקבות תפר sagittal של 15 עד 20 מ"מ.הכנס את הקצוות עם מגנום foramen במקביל לגולגולת. חותכים מכל צד לעיניים. חותכים בין העיניים עם מספריים קטנים כדי לנתק את הגולגולת והמוח מהראש.בעזרת שני מלקחיים, תפסו את הגולגולת קרוב לנורות חוש הריח, וקרעו בזהירות את הגולגולת. בעזרת סכין גילוח, הסר את המוח הקטן ואת הנורה olfactive, לחתוך את המוח לשני חלקים. מניחים את חלקי המוח בצלחת פטרי המכילה 40 מיליליטר של HBSS ללא סידן ומגנזיום.הכינו תערובת דיסוציאציה לפי טבלה זו. העבירו 12 חלקי מוח לצינור C במשקל כולל של 1.2 גרם לכל צינור דיסוציאציה. לאחר מכן מניחים צינורות C על הדיסוציאציה עם חימום.הפעל את תוכנית NTDK הממוטבת בדיסוציאציה. צנטריפוגה למשך 20 שניות. השלם את הדיסוציאציה המכנית על ידי פיפטינג שלוש פעמים.מעבירים את התאים לארבעה צינורות 15 מיליליטר עם מסננים מחוברים. שוטפים את המסננים עם 10 מיליליטר של HBSS עם סידן ומגנזיום. צנטריפוגה במשך 10 דקות, ולהסיר את supernatant עם פיפטה 10 מיליליטר.בזהירות להוסיף 10 מיליליטר של HBSS עם סידן ומגנזיום, ולהשעות מחדש את הכדור. שוב, צנטריפוגה ולהסיר את supernatant. להשעות מחדש את הכדור עם שישה מיליליטר של חיץ מיון.חזור על הצנטריפוגה והשלך את הסופרנטנט. לאחר מכן מוסיפים 200 מיקרוליטרים של תמיסת מיקרובאד CD11b ומדגרים את הצינורות במשך 15 עד 20 דקות בארבע מעלות צלזיוס. לאחר הדגירה, להשעות מחדש את הכדור עם שישה מיליליטר של חיץ מיון.חזור על הצנטריפוגה והשעה מחדש את הכדור עם שמונה מיליליטר של חיץ מיון. לאחר מכן, בצע את תוכנית Possel על המפריד כדי להכין שמונה עמודות. העבר את התאים דרך העמודה על-ידי הוספת מיליליטר אחד של השעיית תאים בכל פעם.עם מיליליטר אחד של חיץ מיון, תאים חיוביים CD11b על צלחת elution סטרילית. איחד את התאים בצינור של 50 מיליליטר. צנטריפוגה ולהשעות מחדש את הכדור עם 10 מיליליטר של מיקרוגליה קר בינוני.ספירת התאים החיוביים ל-CD11b. להשעות מחדש את התאים במדיום מיקרוגליה קר כדי לקבל ריכוז סופי של 650, 000 עד 700, 000 תאים למיליליטר. מחלקים את ההשעיה בלוחות תרבית תאים.לדגום את הצלחות למשך הלילה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני. למחרת, להחליף את המדיום עם מדיום microglia מחומם מראש, ולחזור על הדגירה לילה. לעורר את התאים לפני שלב זה, ולבצע בדיקה phagocytic במהלך שלוש השעות האחרונות של הגירוי.חשב את מספר החרוזים לפי טבלה זו ביחס של 50 חרוזים לתא. מכינים את תערובת החרוזים. לדגור את הצינור במשך שעה אחת באמבט מים ב 37 מעלות צלזיוס.מערבולת כל 10 דקות. לכל באר, מוסיפים את הנפח המחושב של תמיסת החרוזים ומדגרים במשך שלוש שעות. באמצעות גישה זו, הפעילות הפאגוציטית של מיקרוגליה הוערכה לאחר גירוי על ידי גורמים מעודדי דלקת, כגון אינטרלוקין-1 בטא, בתוספת אינטרפרון גמא, או ליפופוליסכרידים.לאחר גירוי במשך שש עד 24 שעות, חרוזי מיקרוגליה פלואורסצנטיים של Cy3 נותחו על ידי מיקרוסקופ קונפוקלי. לאחר שש שעות, מיקרוגליה מתחילה לקבל חרוזי פאגוציטים Cy3 רק במצב אינטרלוקין-1 בטא בתוספת אינטרפרון גמא. לאחר 24 שעות, חלה עלייה של Cy3 פלואורסצנטיות לשני סוגי הגירוי, מה שמדגיש פעילות פאגוציטית מוגברת.טוהר התרבית המיקרוגליאלית הועלה על ידי ציטומטריה של זרימה, שהראתה עלייה בכדאיות התאים לאחר המיון. באמצעות ציטומטריה של זרימה וסמני אוכלוסיית תאי RT-qPCR נותחו לפני ואחרי מיון תאים חיוביים ל-CD11b ממוחות של עכברים ביום השמיני שלאחר הלידה. ניתוחים אלה הבחינו בין אוכלוסיות שונות של תאי מוח, כגון CX3CR135 עבור מיקרוגליה, O4, או OLIG2 עבור אוליגודנדרוציטים, NeuN, או סינפטופיזין, עבור נוירונים, ו-ACSA-2, או GFAP עבור אסטרוציטים.לאחר מיון תאים באמצעות נוגדן CD11b, התקבלו רק מיקרוגליה. חשוב לבצע פיפטה עדינה מאוד בעת הוספת המתלים לעמודה כדי למנוע סתימה ומניעת מוות מכני של תאים. לאחר שיטה זו, פרוטאומיקה תעתיקית, כגון דם מערבי, או Luminex, ואפילו אימונוכימיה ניתן לבצע על מנת לראות את ההשפעה של גירוי microglial.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Multiple-mouse Neuroanatomical Magnetic Resonance Imaging

מרובה עכבר Neuroanatomical תהודה מגנטית

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

בידוד והתרבות של תאים עצביים לפסגה מהצינור עובריים עצבית Murine

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

עכבר אחד, שתי תרבויות: בידוד והתרבות של תאי גזע עצביים למבוגרים משני האזורים העצביים של עכברים בודדים

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...

Isolation of Primary Murine Brain Microvascular Endothelial Cells

בידוד של תאים הראשוניים Murine מוח כלי הדם האנדותל

The blood-brain-barrier is ultrastructurally assembled by a monolayer of brain microvascular endothelial cells (BMEC) interconnected by a junctional ...

Preparation of Primary Mixed Glial Cultures from Adult Mouse Spinal Cord Tissue

הכנת תרבויות גליה מעורבת ראשיים מרקמות קורד למבוגרים עכבר השדרה

It has been well-accepted that spinal cord glial responses contribute significantly to the development of neuropathic pain. Tremendous information ...

Rapid and Refined CD11b Magnetic Isolation of Primary Microglia with Enhanced Purity and Versatility

בידוד ראפיד ומעודן CD11b מגנטי של Microglia הראשי עם טוהר משופר רבגוני

Microglia are the primary responders to central nervous system insults; however, much remains unknown about their role in regulating neuroinflammation. ...

Isolation and Culture of Embryonic Mouse Neural Stem Cells

בידוד והתרבות של תאי גזע עצביים עובריים בעכבר

Neural stem cells (NSCs) are multipotent and can give rise to the three major cell types of the central nervous system (CNS). In vitro culture and ...

Isolation of Primary Murine Skeletal Muscle Microvascular Endothelial Cells

בידוד של תאי אנדותל Microvascular ראשי שריר השלד מאתר

The endothelial cells of skeletal muscle capillaries (muscle microvascular endothelial cells, MMEC) build up the barrier between blood stream and skeletal ...

Primary Culture of Neurons Isolated from Embryonic Mouse Cerebellum

התרבות הראשית של הנוירונים מבודדים מתוך עכבר ממוח עובריים

The use of primary cell cultures has become one of the major tools to study the nervous system in vitro. The ultimate goal of using this simplified model ...

Isolation of Mouse Primary Microglia by Magnetic-Activated Cell Sorting in Animal Models of Demyelination

בידוד של מיקרוגליה ראשונית של עכבר על ידי מיון תאים המופעלים מגנטית במודלים של בעלי חיים של Demyelination

Microglia, the resident innate immune cells in the brain, are the primary responders to inflammation or injury in the central nervous system (CNS). ...