Name: multiphoton intravital imaging for monitoring leukocyte recruitment during arteriogenesis in a murine hindlimb model
Uploaded: 2021-09-30T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Multiphoton Intravital Imaging for Monitoring Leukocyte Recruitment during Arteriogenesis in a Murine Hindlimb Model at JoVE.com

이 연구는 Deutsche Forschungsgemeinschaft SFB 914(HI-A/SM, 프로젝트 Z01)의 자금 지원을 받았습니다. 원고를 읽어주신 Susanne Stutte 박사님께 감사드립니다.

이 연구는 바이에른 동물 관리 및 사용 위원회(윤리 강령: ROB-55.2Vet-2532.Vet_02-17-99에 의해 승인됨)의 승인을 받았습니다. 이 실험은 독일 동물 법규 지침에 따라 엄격하게 수행되었습니다.
1. 동물 및 대퇴 동맥 결찰술(FAL)
참고: 무균 염증 및 동맥 형성을 유도하기 위해 8-10주령의 수컷 C57BL/6J 마우스를 사용했습니다. 마우스들 중 어느 마우스도 각각 FAL 또는 ?...

<ol>
	<li>The top 10 causes of death. World Health Organization Available from: <a target="_blank" href="https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/the-top-10-causes-of-death">https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/the-top-10-causes-of-death</a> (2020)</li><li>Deindl, E., Schaper, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+art+of+arteriogenesis.">The art of arteriogenesis.</a> Cell Biochemistry and Biophysics. 43 (1), 1-15 (2005).</li><li>Lasch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+RNA+released+due+to+shear+stress+controls+natural+bypass+growth+by+mediating+mechanotransduction+in+mice.">Extracellular RNA released due to shear stress controls natural bypass growth by mediating mechanotransduction in mice.</a> Blood. 134 (17), 1469-1479 (2019).</li><li>Kumaraswami, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+effective+flow+Ccytometry-based+method+for+identification+and+quantification+of+tissue+infiltrated+leukocyte+subpopulations+in+a+mouse+model+of+peripheral+arterial+disease.">A simple and effective flow Ccytometry-based method for identification and quantification of tissue infiltrated leukocyte subpopulations in a mouse model of peripheral arterial disease.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (10), 3593 (2020).</li><li>Padgett, M. E., McCord, T. J., McClung, J. M., Kontos, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+acute+and+subacute+murine+hindlimb+ischemia.">Methods for acute and subacute murine hindlimb ischemia.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (112), e54166 (2016).</li><li>Limbourg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+postnatal+arteriogenesis+and+angiogenesis+in+a+mouse+model+of+hind-limb+ischemia.">Evaluation of postnatal arteriogenesis and angiogenesis in a mouse model of hind-limb ischemia.</a> Nature Protocols. 4 (12), 1737 (2009).</li><li>Wagner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+of+monocyte+homing+and+tumor-related+angiogenesis+in+a+murine+model+of+peripheral+arterial+disease.">Intravital microscopy of monocyte homing and tumor-related angiogenesis in a murine model of peripheral arterial disease.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (126), e56290 (2017).</li><li>Ishikawa-Ankerhold, H. C., Ankerhold, R., Drummen, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+fluorescence+microscopy+techniques--FRAP,+FLIP,+FLAP,+FRET+and+FLIM.">Advanced fluorescence microscopy techniques--FRAP, FLIP, FLAP, FRET and FLIM.</a> Molecules. 17 (4), 4047-4132 (2012).</li><li>Vladymyrov, M., Abe, J., Moalli, F., Stein, J. V., Ariga, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+tissue+offset+correction+system+for+intravital+multiphoton+microscopy.">Real-time tissue offset correction system for intravital multiphoton microscopy.</a> Journal of Immunological Methods. 438, 35-41 (2016).</li><li>Chandraratne, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+of+platelet+glycoprotein+ibalpha+in+arterial+remodeling.">Critical role of platelet glycoprotein ibalpha in arterial remodeling.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 35 (3), 589-597 (2015).</li></ol>

백혈구 모집의 다광자 생체내 분석의 설명된 방법은 (면역-) 조직학적 또는 FACS 분석과 같은 백혈구 모집 연구에 일반적으로 사용되는 도구에 대한 추가를 나타냅니다. 이 이미징 방법을 사용하면 동맥 형성 동안 백혈구 부착 및 혈관외 유출의 동적 과정을 더 자세히 시각화할 수 있습니다10. 이 방법의 부가가치에도 불구하고 제공된 프로토콜에는 몇 가지 중요한 단계와 ?...

최근 몇 년 동안 집중적인 연구 관심에도 불구하고 허혈성 심장 질환 및 뇌졸중과 같은 심혈관 질환은 여전히 전 세계적으로 주요 사망 원인입니다1. 이러한 질환에 대한 현재 치료법은 경피적 경혈관 성형술, 경피적 경혈관 관상동맥 성형술 또는 우회 수술과 같은 고도 침습적 치료법이다2. 따라서 대안적인 비침습적 치료 옵션의 개발이 시급합니다. 신체는 협착되거나 폐색된 혈관 주위에 자연적인 우회로를 만들어 중단된 혈류를 협착의 원위 부분으로 리디렉션할 수 있습니다. 이 과정을 동맥 형성2라고 합니다. 최근의 많은 연구에 따르면 증가된 유체 전단은 동맥 형성 동안 중요한 역할을 하는 백혈구 모집에 영향을 미치는 것으로 나타났습니다3. 동맥 형성 중 백혈구 모집을 분석하기 위한 주요 현재 옵션은 생체 외 (면역) 조직학적 분석 또는 형광 활성화 세포 분류(FACS) 방법론입니다4. 동맥 형성 중 백혈구 역학을 평가할 수 있도록 이 논문은 다광자 현미경을 사용한 생체 내 이미징 프로토콜을 제시합니다.
백혈구는 동맥 형성 과정에서 모집되는 주요 혈액 세포이다3. 이 프로토콜은 쥐 뒷다리 허혈 모델 5,6을 사용하여 대퇴 동맥 결찰술(FAL)에 의한 동맥 형성 유도 후 24시간 후에 측부 동맥에 주입된 항-CD45-PE 항체로 표지된 부착 백혈구의 크롤링을 보여주기 위해 다광자 이미징을 사용합니다. 대안적으로, 생체 외에서 면역 세포를 표지하고 생체 내 현미경을 이용한 혈관신생에 관한 연구에서 볼 수 있듯이 생쥐에 조심스럽게 주입할 수 있다7. 혈관 및 동맥 내부의 혈류는 CD41-FITC(혈소판 표지), 덱스트란-FITC(혈장) 또는 혈관 트리의 일부 기저막에 존재하는 콜라겐 유형 1을 시각화하는 2차 고조파 생성(SHG)에 의해 시각화될 수 있습니다. SHG는 다광자 여기의 독특한 자유 라벨링 효과입니다. 다광자 이미징은 조직에 해를 끼치지 않고 레이저 파워 여기로 세포를 활성화하지 않고 장기적인 세포 추적을 가능하게 합니다. 다광자 현미경은 형광단을 최소한의 광독성으로 조직/기관 깊숙이 여기시킬 수 있는 능력으로 인해 살아있는 동물의 형광 표지된 세포 및 구조를 시각화하기 위해 선택되는 이미징 방법입니다8.
펨토초 간격 내에서 전달되는 펄스와 함께 조정된 적외선 레이저를 사용하면 초점면에서만 형광색소를 여기시키고 초점면 위와 아래에는 여기가 없습니다(8). 따라서 다광자 현미경은 장기 내부의 역동적인 생물학적 사건을 연구하기 위해 높은 시공간 해상도, 더 적은 광 손상 및 증가된 조직 침투 이미징을 허용합니다. 살아있는 동물 이미징을 위한 이상적인 현미경 도구입니다. 그러나 다광자 및 기타 생체 내 현미경 기술은 심장 박동, 호흡, 연동 운동, 근육 긴장도 및 기타 생리적 기능으로 인한 조직 운동에 의해 제한되어 이미징 획득 및 분석을 방해합니다. 이러한 움직임은 시간적 및 공간적 해상도를 손상시키고 때로는 후속 분석을 방해하기도 하므로 정확한 데이터 분석 및 해석이 가능하도록 적절하게 해결해야 합니다. 조직 운동으로 인한 인공물을 낮추거나 방지하기 위한 몇 가지 전략이 개발되었습니다. 이 프로토콜은 VivoFollow9라는 현장 드리프트 보정 소프트웨어를 적용하여 이미지 획득 중 조직 드리프트를 교정합니다. 이 접근 방식은 필요한 이미지 안정화를 제공하여 장기 이미징 및 세포 추적 분석을 가능하게 합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.0 mL Syringe</td>
			<td>BD Biosciences, San Jose, CA, USA</td>
			<td>309628</td>
			<td>syringe for injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3M Durapore Surgical Tape 1538-0</td>
			<td>3M, St. Paul, MN, USA</td>
			<td>1538-0</td>
			<td>fixation tape</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezole</td>
			<td>Zoetis, Berlin, Germany</td>
			<td></td>
			<td>antagonize anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Reckitt Benckiser Healthcare, Slough, UK</td>
			<td></td>
			<td>antagonize anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57/B6J mouse</td>
			<td>Charles River, Sulzfeld, Germany</td>
			<td></td>
			<td>used animals for surgery/imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD41-FITC ab</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>133904</td>
			<td>Platelet labeling in vivo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45-PE ab</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>368510</td>
			<td>Leukocytes labelling in vivo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disinfectant Cutasept</td>
			<td>Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Deutschland</td>
			<td>AK64.2</td>
			<td>Disinfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye cream (Bepanthen)</td>
			<td>Bayer Vital GmbH</td>
			<td>5g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl</td>
			<td>CuraMED Pharma, Karlsruhe, Germany</td>
			<td></td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flumazenile</td>
			<td>Inresa Arzneimittel GmbH, Freiburg, Deutschland</td>
			<td></td>
			<td>antagonize anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine bore polythene tubing</td>
			<td>Smiths medical</td>
			<td>Lot 278316</td>
			<td>0.28 mm ID and 0.61 mm OD, tubing for the vein catheter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoacryl flexible</td>
			<td>BRAUM</td>
			<td>1050052</td>
			<td>tissue glue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris software</td>
			<td>Oxford Instruments</td>
			<td>version 9.2</td>
			<td>Used for cell tracking, cell speed analysis, 3D projection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser Doppler Imaging instrument</td>
			<td>Moor LDI 5061 and Moor Software Version 3.01, Moor Instruments, Remagen, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEICA KL300 LED</td>
			<td>Leica, Solms, Germany</td>
			<td></td>
			<td>light for microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica M60</td>
			<td>Leica, Solms, Germany</td>
			<td></td>
			<td>microscope for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEICA MC120 HD</td>
			<td>Leica, Solms, Germany</td>
			<td></td>
			<td>camera for microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine</td>
			<td>Pfizer Pharma, Berlin, Germany</td>
			<td></td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>Ratiopharm GmbH, Ulm, Germany</td>
			<td></td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiphoton microscope</td>
			<td>Lavision</td>
			<td>TRIMScope II</td>
			<td>WL 820 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl 0.9%</td>
			<td>Braun, Melsungen, Deutschland</td>
			<td>3570310</td>
			<td>saline for pocket</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naloxone</td>
			<td>Inresa Arzneimittel GmbH, Freiburg, Deutschland</td>
			<td></td>
			<td>antagonize anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle 30 G</td>
			<td>BD Biosciences, San Jose, CA, USA</td>
			<td>305128</td>
			<td>needle for i.v. catheter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk braided suture (0/7)</td>
			<td>Pearsalls Ltd., Taunton, UK</td>
			<td>SUT-S&#160;103</td>
			<td>suture for femoral artery ligation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrason Gel</td>
			<td>SONOSID-ASID BONZ 250 mL</td>
			<td>782012</td>
			<td>gel for imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl 6.0 suture</td>
			<td>Vicryl, Johnson&#38;Johnson, New Brunswick, NJ, USA</td>
			<td>NW-2347</td>
			<td>suture to build pocket</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VivoFollow drift correction software</td>
			<td>Developed by Mykhailo Vladymyrov</td>
			<td></td>
			<td>Reference 9</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

multiphoton intravital imaging for monitoring leukocyte recruitment during arteriogenesis in a murine hindlimb model

동맥 형성은 성장하는 측부 혈관의 혈관 주위 공간으로의 백혈구 및 혈소판 모집에 크게 의존합니다. 동맥 형성에서 측부 동맥 및 백혈구를 분석하기 위한 표준 접근법은 생체 외 (면역-) 조직학적 방법론입니다. 그러나 이 기술은 혈류, 전단 응력, 세포-세포 상호 작용 및 입자 속도와 같은 동적 과정을 측정할 수 없습니다. 이 논문은 생체 내 이미징을 활용하여 동맥 형성 동안 성장하는 측부 동맥의 생체 내 과정을 모니터링하는 프로토콜을 제시합니다. 여기에 설명된 방법은 역학 측정을 위한 신뢰할 수 있는 도구이며 다광자 여기 현미경으로 제공하는 광세포 독성을 최소화하면서 고대비 분석을 제공합니다. 성장하는 측부 동맥을 분석하기 전에, 대퇴 동맥의 일측성 결찰에 의해 마우스의 내전근에서 동맥 형성이 유도되었습니다.
결찰 후, 기존의 측부 동맥은 전단 응력 증가로 인해 성장하기 시작했습니다. 수술 24시간 후, 측부 동맥 위의 피부와 피하 지방을 제거하여 추가 분석을 위한 주머니를 만들었습니다. 생체 내 이미징 동안 혈류와 면역 세포를 시각화하기 위해 CD41-플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC)(혈소판) 및 CD45-피코에리트린(PE)(백혈구) 항체를 마우스의 꼬리 정맥에 삽입된 카테터를 통해 정맥내(i.v.) 주사했습니다. 이 기사에서는 동맥 형성과 관련된 과정을 연구하기 위해 일반적으로 사용되는 정적 생체 외(면역) 조직학적 분석에 대한 대안 또는 생체 내 보완으로 생체 내 다광자 이미징을 소개합니다. 요약하면, 이 논문은 동맥 형성의 뒷다리 모델에서 면역 세포 이동, 혈류 및 전단 응력을 조사하기 위한 새롭고 역동적인 생체 내 방법을 설명하며, 이는 평가 가능성을 현저하게 향상시킵니다.

다광자 현미경은 백혈구 추적을 위한 높은 시공간 분해능을 제공하며, 세포 이동 단계와 속도를 추적하고 모니터링할 수 있습니다(그림 4A,B). 그러나 샘플의 생리학적 움직임은 특히 장기간의 생체 내 현미경 이미지 획득에 어려움을 야기합니다. 따라서, 조직 드리프트에 대한 실시간 이미징 보정과 같은 좋은 조직 준비 및 조직 고정 도구 및 홀더가 성공적이고 ...

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Multiphoton Intravital Imaging for Monitoring Leukocyte Recruitment during Arteriogenesis in a Murine Hindlimb Model

백혈구와 혈소판의 모집은 동맥 형성 동안 측부 동맥의 효과적인 성장에 필요한 필수 구성 요소를 구성합니다. 다광자 현미경은 동맥 형성 중 백혈구 모집 및 유출을 연구하기 위해 생체 내에서 높은 시공간 분해능과 더 적은 광독성으로 세포 역학을 추적하는 효율적인 도구입니다.

쥐 뒷다리 모델에서 동맥 형성 중 백혈구 모집을 모니터링하기 위한 다광자 생체 내 이미징

Arteriogenesis strongly depends on leukocyte and platelet recruitment to the perivascular space of growing collateral vessels. The standard approach for ...

우리의 프로토콜을 통해 연구자들은 성장하는 측부 동맥에서 면역 세포 부착 및 혈관외 유출을 실시간으로 추적하여 생체 내 동맥 형성 과정을 분석할 수 있습니다. 다광자 현미경 기술을 사용하면 광독성이 낮고 시공간 해상도가 높은 살아있는 마우스 모델의 심부 조직에서 세포 역학을 시각화할 수 있습니다. 현미경 절차는 Helen Ishikawa-Ankerhold 박사 실험실의 다광자 이미징 플랫폼의 기술 조교인 Dominic van den Heuvel이 시연합니다.수술 과정을 시연하겠습니다. 시작하려면 마취 된 마우스를 앙와위 자세로 놓습니다. 그런 다음 내전근의 평면 위치를 보장하기 위해 마우스의 상부 뒷다리 아래에 두 개의 성형 점토 조각을 놓습니다.마우스를 실체 현미경 아래에 놓습니다. 양쪽 다리에서 털을 제거한 후 오른쪽 뒷다리의 초기 대퇴 동맥 결찰의 흉터 주위에 원을 그리며 피부를 소독하고 자릅니다. 다리 상단에서 피부와 지방층을 제거하고 봉합사를 사용하여 나머지 피부를 옆으로 당겨 측부 혈관으로 내전근 주위에 주머니를 만듭니다.다음으로, 피하 지방을 제거하여 내전근, 프로 툰다 동맥 및 정맥, 측부 혈관의 명확한 시야를 확보하십시오. 미세한 집게를 사용하여 측부 혈관 상단의 표면 근육층을 제거합니다. 조직이 건조되는 것을 방지하기 위해 준비된 주머니에 식염수를 채우고 가짜 수술 왼쪽 뒷다리에 대해 동일한 절차를 계속하십시오.이미징하기 전에 두 주머니에 초음파 젤을 추가하여 건조를 방지하고 대물렌즈와의 광학 결합을 위한 침지 매체 역할을 합니다. 티타늄 사파이어 레이저 상자, 전자 인터페이스 상자, 인큐베이터 챔버의 가열 장치, 형광등 및 컴퓨터의 키를 켭니다. 획득 소프트웨어를 실행합니다.파장을 800나노미터로 설정하고 현미경 셔터를 엽니다. 측정 마법사 대화 상자에서 기기 모드를 단일 빔으로, 측정 모드를 3D 스캔 타임랩스로 선택합니다. 그런 다음 마취된 마우스를 현미경의 예열된 배양 챔버로 옮기고 초음파 젤이 대물 렌즈와 직접 접촉하는 영역을 배치합니다.에피형광 현미경 셔터를 엽니다. 그런 다음 FTSE 시각화를 위한 적절한 필터 또는 이색성 설정을 선택합니다. epifluorescence 조명 하에서 혈류를 추적하여 관심 영역을 정의합니다.관심 영역을 중앙 시야로 가져온 후 epifluorescence 현미경 셔터를 닫습니다. XY 스캐너 대화 상자에서 이미지 크기, 픽셀, 빈도, 라인 평균에 필요한 매개 변수를 설정합니다. 레이저 출력을 조정하고 채널 녹색, 빨간색 및 파란색에 대한 사진 배율 게인을 설정합니다.생체 내 이미징 및 드리프트 보정 설정을 위한 적절한 대물렌즈를 선택합니다. 측정 마법사 대화 상자 창에서 빨간색 버튼을 눌러 미리보기 수집 모드를 시작하여 이미지 스택 범위를 정의합니다. 좋은 이미지를 얻으려면 초점을 맞춰 관심 영역과 구조를 정의하십시오.화면을 관찰하면서 이미지가 사라질 때까지 대물렌즈를 움직여 초점을 변경하고 0으로 설정합니다. 목표 위치를 축 방향의 마지막 위치로 설정합니다. 그런 다음 이미지가 화면에서 다시 사라질 때까지 대물렌즈를 아래로 이동하여 반대 방향으로 초점을 변경합니다.측정 마법사 대화 상자의 왼쪽 상단 모서리에 있는 중지 버튼을 클릭하고 스텝 크기를 2마이크로미터로 설정합니다. 측정 마법사 대화 상자에서 python 축을 첫 번째 축 장치로 선택하고 자동 저장 모드를 활성화하지 않음을 선택합니다. 그런 다음 시간 축에서만 자동 저장 상자를 선택합니다.그런 다음 사용 가능한 장치 창에서 Python 아이콘을 눌러 Python 대화 상자 창을 엽니다. Python 대화 상자 축 설정에서 from 및 to 섹션을 입력한 다음 단계 수를 입력합니다. XYZ 스테이지 Z 대화상자 창으로 이동하여 양쪽 끝에서 스캔 범위를 200마이크로미터로 확대합니다.이렇게 하려면 시작 부분에 200마이크로미터를 입력하고 끝에 마이너스 240마이크로미터를 입력하면 범위가 자동으로 마이너스 440마이크로미터로 설정됩니다. VivoFollow 프런트 엔드 대화 상자를 엽니다. 측정 마법사 대화 상자의 왼쪽 상단 모서리에 있는 녹색 화살표를 눌러 이미지 수집을 시작합니다.실시간 드리프트 보정을 사용하는 경우 드리프트 보정 구성이 표시되도록 대화상자를 찾습니다. 그런 다음 모바일 랜드마크 참조에서와 같이 사용되는 획득 채널을 설정합니다. 첫 번째 및 마지막 Z 위치에 추가된 최대 보정 오프셋(마이크로미터)을 입력하고 [확인]을 클릭합니다. 생체 흐름 프런트 엔드 대화 창에서 이미지 획득 중에 X, Y 및 Z의 현재 드리프트 오프셋을 실시간으로 모니터링하고 또 다른 마취 재주입 주기가 필요한 경우 35분 후에 이미징 획득을 중지합니다.MMF 믹스의 절반 용량을 주입하고 실험이 끝날 때까지 이미징 획득을 다시 시작합니다. 이 도구는 장기적인 이미지 획득을 가능하게 하고 고품질 데이터 수집을 가능하게 하며 속도 측정을 위해 셀을 추적하는 데 적합합니다. 드리프트 보정 없이 표시된 것처럼 관심 영역은 기록 보기에서 점진적으로 멀어지며 속도 분석을 위해 셀을 추적하는 기능에 영향을 줍니다.그러나 드리프트 보정 소프트웨어로 안정적인 동영상을 녹화할 수 있으며 장기간에 걸쳐 더 많은 셀을 추적할 수 있습니다. 드리프트 보정 소프트웨어는 시스템 보정된 시간 경과에 따른 X, Y 및 Z 오프셋의 시각화도 제공할 수 있습니다. 다광자 현미경은 백혈구 추적을 위한 높은 시공간 분해능을 제공하여 세포 이동 단계와 속도를 추적하고 모니터링할 수 있습니다.다광자 이미징을 위한 측부 혈관을 준비함으로써 측부 동맥의 손상을 방지하는 것이 필수적입니다. 영상을 촬영하기 전에 올바른 측부 동맥을 안전하게 식별하는 것이 중요합니다. 측부 동맥의 생체 내 다광자 이미징의 이 새로운 절차를 통해 항체 라벨을 변경하여 생체 내 모든 혈액 세포의 부착 및 유출을 분석할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

재 협착의 연구에 대한 경동맥 스텐트 시술의 쥐과 모형

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

연구

의학

An Orthotopic Glioblastoma Mouse Model Maintaining Brain Parenchymal Physical Constraints and Suitable for Intravital Two-photon Microscopy

소성을 Glioblastoma의 마우스 모델은 뇌 실질 물리적 제약 조건을 유지하고의 intravital 두 광자 현미경에 적합

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology ...

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

순차<em&gt; 생체 내</em&gt; 골절 치료시 골 형성 줄기 / 전구 세포의 이미징

Bone turns over continuously and is highly regenerative following injury. Osteogenic stem/progenitor cells have long been hypothesized to exist, but in ...

Evaluation of Tumor-infiltrating Leukocyte Subsets in a Subcutaneous Tumor Model

피하 종양 모델에서 종양 침투 백혈구 하위 집합의 평가

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or ...

Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia

급성 및 아 급성 쥐 뒷다리 국소 빈혈하는 방법

Peripheral artery disease (PAD) is a leading cause of cardiovascular morbidity and mortality in developed countries, and animal models that reliably ...

Combined Intravital Microscopy and Contrast-enhanced Ultrasonography of the Mouse Hindlimb to Study Insulin-induced Vasodilation and Muscle Perfusion

Intravital 현미경 검사 법 및 대비 향상 된 초음파 마우스 Hindlimb의 인슐린 유도 된 혈관과 근육 관류 결합

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate ...

Inducing Ischemia-reperfusion Injury in the Mouse Ear Skin for Intravital Multiphoton Imaging of Immune Responses

면역 반응의 생체 내에 다중 광자 이미징을위한 마우스 귀 피부에 유도 허혈 - 재관류 손상

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Light Sheet Microscopy에 의한 심근 성 심근염의 Murine 모델에서의 백혈구 침윤의 정량적 시각화

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

Intravital Microscopy of Monocyte Homing and Tumor-Related Angiogenesis in a Murine Model of Peripheral Arterial Disease

Intravital 현미경 Monocyte 유도 및 주변 동맥 질병의 Murine 모델에서 종양 관련 신생의

The therapeutic goal for peripheral arterial disease and ischemic heart disease is to increase blood flow to ischemic areas caused by hemodynamic ...

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

힌들보 리 허 혈의 뮤린 모델에서 치료 혈관 신생 평가

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...