Name: multiphoton intravital imaging for monitoring leukocyte recruitment during arteriogenesis in a murine hindlimb model
Uploaded: 2021-09-30T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Multiphoton Intravital Imaging for Monitoring Leukocyte Recruitment during Arteriogenesis in a Murine Hindlimb Model at JoVE.com

Studien ble finansiert av Deutsche Forschungsgemeinschaft SFB 914 (HI-A/SM, prosjekt Z01). Vi takker Dr. Susanne Stutte for å ha lest manuskriptet.

Denne studien ble godkjent av den bayerske dyrepleie- og brukskomiteen (godkjent av etisk kode: ROB-55.2Vet-2532.Vet_02-17-99); Disse forsøkene ble utført i strengt samsvar med den tyske dyrelovgivningens retningslinjer.
1. Dyr og lårarterieligering (FAL)
MERK: For å indusere steril betennelse og arteriogenese ble 8-10 uker gamle mannlige C57BL/6J-mus brukt. Ingen av musene døde eller led av sårinfeksjon eller sårhelingsforstyrrelser under henholdsvis FAL eller...

<ol>
	<li>The top 10 causes of death. World Health Organization Available from: <a target="_blank" href="https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/the-top-10-causes-of-death">https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/the-top-10-causes-of-death</a> (2020)</li><li>Deindl, E., Schaper, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+art+of+arteriogenesis.">The art of arteriogenesis.</a> Cell Biochemistry and Biophysics. 43 (1), 1-15 (2005).</li><li>Lasch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+RNA+released+due+to+shear+stress+controls+natural+bypass+growth+by+mediating+mechanotransduction+in+mice.">Extracellular RNA released due to shear stress controls natural bypass growth by mediating mechanotransduction in mice.</a> Blood. 134 (17), 1469-1479 (2019).</li><li>Kumaraswami, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+effective+flow+Ccytometry-based+method+for+identification+and+quantification+of+tissue+infiltrated+leukocyte+subpopulations+in+a+mouse+model+of+peripheral+arterial+disease.">A simple and effective flow Ccytometry-based method for identification and quantification of tissue infiltrated leukocyte subpopulations in a mouse model of peripheral arterial disease.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (10), 3593 (2020).</li><li>Padgett, M. E., McCord, T. J., McClung, J. M., Kontos, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+acute+and+subacute+murine+hindlimb+ischemia.">Methods for acute and subacute murine hindlimb ischemia.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (112), e54166 (2016).</li><li>Limbourg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+postnatal+arteriogenesis+and+angiogenesis+in+a+mouse+model+of+hind-limb+ischemia.">Evaluation of postnatal arteriogenesis and angiogenesis in a mouse model of hind-limb ischemia.</a> Nature Protocols. 4 (12), 1737 (2009).</li><li>Wagner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+of+monocyte+homing+and+tumor-related+angiogenesis+in+a+murine+model+of+peripheral+arterial+disease.">Intravital microscopy of monocyte homing and tumor-related angiogenesis in a murine model of peripheral arterial disease.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (126), e56290 (2017).</li><li>Ishikawa-Ankerhold, H. C., Ankerhold, R., Drummen, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+fluorescence+microscopy+techniques--FRAP,+FLIP,+FLAP,+FRET+and+FLIM.">Advanced fluorescence microscopy techniques--FRAP, FLIP, FLAP, FRET and FLIM.</a> Molecules. 17 (4), 4047-4132 (2012).</li><li>Vladymyrov, M., Abe, J., Moalli, F., Stein, J. V., Ariga, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+tissue+offset+correction+system+for+intravital+multiphoton+microscopy.">Real-time tissue offset correction system for intravital multiphoton microscopy.</a> Journal of Immunological Methods. 438, 35-41 (2016).</li><li>Chandraratne, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+of+platelet+glycoprotein+ibalpha+in+arterial+remodeling.">Critical role of platelet glycoprotein ibalpha in arterial remodeling.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 35 (3), 589-597 (2015).</li></ol>

Den beskrevne metoden for multifoton in vivo-analyse av leukocyttrekruttering representerer et tillegg til vanlige verktøy for leukocyttrekrutteringsstudier som (immun-) histologiske eller FACS-analyser. Med denne avbildningsmetoden er det mulig å visualisere i større detalj de dynamiske prosessene i leukocyttadherens og ekstravasasjon under arteriogenese10. Til tross for merverdien av denne metoden, inneholder den tilbudte protokollen noen kritiske trinn og begrensninger. Se t...

Til tross for intensiv forskningsinteresse de siste årene, er kardiovaskulære sykdommer, for eksempel iskemisk hjertesykdom og hjerneslag, fortsatt den ledende globale dødsårsaken1. Nåværende behandlinger for disse sykdommene er svært invasive terapier som perkutan transluminal angioplastikk, perkutan transluminal koronar angioplastikk eller bypassoperasjon2. Derfor er det et presserende behov for utvikling av alternative, ikke-invasive terapeutiske alternativer. Kroppen kan skape naturlige bypass rundt et stenosert eller okkludert kar for å omdirigere den avbrutte blodstrømmen til den distale delen av stenose. Denne prosessen kalles arteriogenese2. Mange nyere studier har vist at økt væskeskjær påvirker leukocyttrekruttering, som spiller en viktig rolle under arteriogenese3. De viktigste nåværende alternativene for å analysere rekrutteringen av leukocytter under arteriogenese er ex vivo (immun-) histologiske analyser eller fluorescensaktivert cellesortering (FACS) metodikk4. For å muliggjøre vurdering av leukocyttdynamikk under arteriogenese, presenterer denne artikkelen en intravital avbildningsprotokoll med multifotonmikroskopi.
Leukocytter er de viktigste blodcellene som rekrutteres under prosessen med arteriogenese3. Denne protokollen bruker multifotonavbildning for å vise gjennomgang av adherente leukocytter merket med injiserte anti-CD45-PE-antistoffer i kollaterale arterier, 24 timer etter induksjon av arteriogenese ved femoral arterieligering (FAL) ved bruk av en murine baklemmeiskemi modell 5,6. Alternativt kan immunceller merkes ex vivo og injiseres forsiktig i mus, som vist i studier på angiogenese ved bruk av intravital mikroskopi7. Blodstrømmen i kar og arterier kan visualiseres av CD41-FITC (for å merke blodplater), dextran-FITC (plasma), eller ved den andre harmoniske generasjonen (SHG), som visualiserer kollagen type 1 tilstede i kjellermembranen til en del av det vaskulære treet. SHG er en unik gratis merkingseffekt av multifotoneksitasjonen. Multifotonavbildning tillater langsiktig cellesporing uten å skade vevet og aktivere cellene ved laserkrafteksitasjon. Multifotonmikroskopi er den valgte avbildningsmetoden for visualisering av fluorescerende merkede celler og strukturer i levende dyr på grunn av sin evne til å opphisse fluoroforene dypere inn i vevet / organene med minimal fototoksisitet8.
Bruken av innstilte infrarøde lasere med pulser levert innen femtosekundintervaller eksiterer fluorokromet bare ved fokalplanet, uten eksitasjon over og under fokalplanet8. Dermed tillater multifotonmikroskopi høy spatio-temporal oppløsning, mindre fotoskade og økt vevpenetrasjonsavbildning for å studere dynamiske biologiske hendelser inne i organene. Det er et ideelt mikroskopiverktøy for levende dyravbildning. Imidlertid er multifoton og annen kunst av intravital mikroskopi begrenset av vevsbevegelse på grunn av hjerteslag, respirasjon, peristaltiske bevegelser, muskeltonalitet og andre fysiologiske funksjoner, noe som forstyrrer bildeoppkjøp og analyse. Siden disse bevegelsene svekker tidsmessig og romlig oppløsning og noen ganger til og med forbyr etterfølgende analyse, må de adresseres på riktig måte for å muliggjøre nøyaktig dataanalyse og tolkning. Flere strategier har blitt utviklet for å senke eller forhindre gjenstander fra vevsbevegelse. Denne protokollen bruker en in situ drift korreksjon programvare kalt VivoFollow9 for å korrigere vev drift under bildeopptak. Denne tilnærmingen gir den nødvendige bildestabiliseringen, noe som muliggjør langsiktig bildebehandling og cellesporingsanalyse.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.0 mL Syringe</td>
			<td>BD Biosciences, San Jose, CA, USA</td>
			<td>309628</td>
			<td>syringe for injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3M Durapore Surgical Tape 1538-0</td>
			<td>3M, St. Paul, MN, USA</td>
			<td>1538-0</td>
			<td>fixation tape</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezole</td>
			<td>Zoetis, Berlin, Germany</td>
			<td></td>
			<td>antagonize anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Reckitt Benckiser Healthcare, Slough, UK</td>
			<td></td>
			<td>antagonize anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57/B6J mouse</td>
			<td>Charles River, Sulzfeld, Germany</td>
			<td></td>
			<td>used animals for surgery/imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD41-FITC ab</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>133904</td>
			<td>Platelet labeling in vivo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45-PE ab</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>368510</td>
			<td>Leukocytes labelling in vivo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disinfectant Cutasept</td>
			<td>Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Deutschland</td>
			<td>AK64.2</td>
			<td>Disinfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye cream (Bepanthen)</td>
			<td>Bayer Vital GmbH</td>
			<td>5g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl</td>
			<td>CuraMED Pharma, Karlsruhe, Germany</td>
			<td></td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flumazenile</td>
			<td>Inresa Arzneimittel GmbH, Freiburg, Deutschland</td>
			<td></td>
			<td>antagonize anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine bore polythene tubing</td>
			<td>Smiths medical</td>
			<td>Lot 278316</td>
			<td>0.28 mm ID and 0.61 mm OD, tubing for the vein catheter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoacryl flexible</td>
			<td>BRAUM</td>
			<td>1050052</td>
			<td>tissue glue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris software</td>
			<td>Oxford Instruments</td>
			<td>version 9.2</td>
			<td>Used for cell tracking, cell speed analysis, 3D projection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser Doppler Imaging instrument</td>
			<td>Moor LDI 5061 and Moor Software Version 3.01, Moor Instruments, Remagen, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEICA KL300 LED</td>
			<td>Leica, Solms, Germany</td>
			<td></td>
			<td>light for microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica M60</td>
			<td>Leica, Solms, Germany</td>
			<td></td>
			<td>microscope for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEICA MC120 HD</td>
			<td>Leica, Solms, Germany</td>
			<td></td>
			<td>camera for microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine</td>
			<td>Pfizer Pharma, Berlin, Germany</td>
			<td></td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>Ratiopharm GmbH, Ulm, Germany</td>
			<td></td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiphoton microscope</td>
			<td>Lavision</td>
			<td>TRIMScope II</td>
			<td>WL 820 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl 0.9%</td>
			<td>Braun, Melsungen, Deutschland</td>
			<td>3570310</td>
			<td>saline for pocket</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naloxone</td>
			<td>Inresa Arzneimittel GmbH, Freiburg, Deutschland</td>
			<td></td>
			<td>antagonize anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle 30 G</td>
			<td>BD Biosciences, San Jose, CA, USA</td>
			<td>305128</td>
			<td>needle for i.v. catheter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk braided suture (0/7)</td>
			<td>Pearsalls Ltd., Taunton, UK</td>
			<td>SUT-S&#160;103</td>
			<td>suture for femoral artery ligation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrason Gel</td>
			<td>SONOSID-ASID BONZ 250 mL</td>
			<td>782012</td>
			<td>gel for imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl 6.0 suture</td>
			<td>Vicryl, Johnson&#38;Johnson, New Brunswick, NJ, USA</td>
			<td>NW-2347</td>
			<td>suture to build pocket</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VivoFollow drift correction software</td>
			<td>Developed by Mykhailo Vladymyrov</td>
			<td></td>
			<td>Reference 9</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

multiphoton intravital imaging for monitoring leukocyte recruitment during arteriogenesis in a murine hindlimb model

Arteriogenese er sterkt avhengig av leukocytt- og blodplaterekruttering til det perivaskulære rommet av voksende sikkerhetsfartøy. Standard tilnærming for analyse av kollaterale arterier og leukocytter i arteriogenese er ex vivo (immun-) histologisk metodikk. Denne teknikken tillater imidlertid ikke måling av dynamiske prosesser som blodstrøm, skjærspenning, celle-celle-interaksjoner og partikkelhastighet. Dette papiret presenterer en protokoll for å overvåke in vivo-prosesser i voksende sikkerhetsarterier under arteriogenese ved bruk av intravital bildebehandling. Metoden beskrevet her er et pålitelig verktøy for dynamisk måling og tilbyr en høykontrastanalyse med minimal fotocytotoksisitet, levert ved multifotoneksitasjonsmikroskopi. Før analyse av voksende kollaterale arterier ble arteriogenese indusert i adduktormuskelen hos mus ved ensidig ligering av lårarterien.
Etter ligeringen begynte de eksisterende sikkerhetsarteriene å vokse på grunn av økt skjærspenning. Tjuefire timer etter operasjonen ble huden og subkutant fett over kollaterale arterier fjernet, og konstruerte en lomme for videre analyser. For å visualisere blodstrøm og immunceller under in vivo-avbildning, ble CD41-fluoresceinisotiocyanat (FITC) (blodplater) og CD45-phycoerythrin (PE) (leukocytter) antistoffer injisert intravenøst (i.v.) via et kateter plassert i halevenen til en mus. Denne artikkelen introduserer intravital multifotonavbildning som et alternativ eller in vivo komplement til de vanlige statiske ex vivo (immun-) histologiske analysene for å studere prosesser som er relevante for arteriogenese. Oppsummert beskriver dette papiret en ny og dynamisk in vivo-metode for å undersøke immuncellehandel, blodstrøm og skjærspenning i en bakkroppsmodell av arteriogenese, noe som forbedrer evalueringsmulighetene spesielt.

Multifotonmikroskopi gir en høy spatio-temporal oppløsning for leukocyttsporing, hvor cellemigrasjonstrinn og hastighet kan spores og overvåkes (figur 4A, B). Prøvens fysiologiske bevegelse er imidlertid en utfordring, spesielt ved langvarige intravitale mikroskopibilder. Derfor er det nødvendig med et godt vevspreparat og holdere for å fikse vevet og verktøyene, for eksempel sanntids bildekorreksjon for vevsdrift, for vellykket og stabil bildebehandling. Her ble et l...

Watch this Scientific Journal Video about Multiphoton Intravital Imaging for Monitoring Leukocyte Recruitment during Arteriogenesis in a Murine Hindlimb Model at JoVE.com

Multiphoton Intravital Imaging for Monitoring Leukocyte Recruitment during Arteriogenesis in a Murine Hindlimb Model

Rekrutteringen av leukocytter og blodplater utgjør en viktig komponent som er nødvendig for effektiv vekst av sikkerhetsarterier under arteriogenese. Multifotonmikroskopi er et effektivt verktøy for sporing av celledynamikk med høy spatio-temporal oppløsning in vivo og mindre fototoksisitet for å studere leukocyttrekruttering og ekstravasasjon under arteriogenese.

Multifoton intravital avbildning for overvåking av leukocyttrekruttering under arteriogenese i en murine baklemmodell

Arteriogenesis strongly depends on leukocyte and platelet recruitment to the perivascular space of growing collateral vessels. The standard approach for ...

Vår protokoll tillater forskere å analysere prosessen med arteriogenese in vivo ved å spore immuncelleadherens og ekstravasasjon i voksende sikkerhetsarterier i sanntid. Multifotonmikroskopiteknikken muliggjør visualisering av celledynamikk i dypvevet til levende musemodeller med lav fototoksisitet og med høy spatiotemporal oppløsning. Mikroskopprosedyren vil bli demonstrert av Dominic van den Heuvel, en teknisk assistent fra multifotonbildeplattformen fra laboratoriet til Dr. Helen Ishikawa-Ankerhold.Jeg vil demonstrere den kirurgiske prosedyren. For å begynne, plasser den bedøvede musen i den bakre posisjonen. Legg deretter to stykker støpt leire under musens øvre baklem for å sikre en planposisjon av adduktormuskelen.Plasser musen under stereomikroskopet. Etter å ha fjernet håret fra begge bena, desinfiser og kutt huden i en sirkel rundt arret på den tidligere lårarterieligeringen av høyre bakben. Fjern hud- og fettlaget fra toppen av benet og trekk til side den gjenværende huden ved hjelp av suturer for å lage en lomme rundt adduktormuskelen med sikkerhetskarene.Fjern deretter det subkutane fettet for å få en klar visjon av adduktormuskelen, profunda-arterien og venen, samt sikkerhetskarene. Fjern det overfladiske muskellaget på toppen av sikkerhetskarene ved hjelp av fine tang. Fyll den forberedte lommen med saltvann for å forhindre at vevet tørker og fortsett samme prosedyre for den narreopererte venstre baklemmen.Før avbildning, legg ultralydgel i begge lommer som forhindrer tørking og fungerer som et nedsenkningsmedium for optisk kobling med objektivet. Slå på nøkkelen til safirlaserboksen, den elektroniske grensesnittboksen, varmeenheten til inkubatorkammeret, lysrøret og datamaskinen. Start anskaffelsesprogramvaren.Sett bølgelengden til 800 nanometer og åpne mikroskoplukkeren. I dialogboksen for måleveiviseren velger du instrumentmodus som enkeltstråle og målemodus som tidsforløp for 3D-skanning. Overfør deretter den bedøvede musen inn i mikroskopets forvarmede inkubasjonskammer og plasser området med ultralydgelen direkte i kontakt med objektivets frontlinse.Åpne lukkeren for epifluorescensmikroskopet. Velg deretter en tilstrekkelig filter- eller dikroisk innstilling for FTSE-visualisering. Definer området av interesse ved å følge blodstrømmen under epifluorescens belysning.Etter å ha brakt interesseområdet inn i midtfeltet, lukker du epifluorescensmikroskoplukkeren. I dialogboksen XY-skanner angir du de nødvendige parametrene for bildestørrelse, piksel, frekvens, linjegjennomsnitt. Juster lasereffekten og still inn fotomultiplikatorforsterkningen for kanalene grønn, rød og blå.Velg et tilstrekkelig mål for intravital avbildning og driftkorreksjonsinnstillinger. Definer bildestakkområdet ved å starte modus for forhåndsanskaffelse ved å trykke den røde knappen i dialogvinduet i måleveiviseren. For å få gode bilder, definer området og strukturen av interesse ved å fokusere.Mens du observerer skjermen, endre fokus ved å flytte objektivet til bildet forsvinner og sett det som null. Sett objektivposisjonen som den siste posisjonen i aksial retning. Endre deretter fokus i motsatt retning ved å flytte objektivet ned til bildet forsvinner fra skjermen igjen.Klikk på stoppknappen øverst til venstre i dialogboksen for måleveiviseren, og angi trinnstørrelsen til to mikrometer. Velg python-aksen som den første akseenheten i dialogboksen for måleveiviseren, og velg ikke aktiver automatisk lagringsmodus. Merk deretter av for automatisk lagring bare på tidsaksen.Deretter trykker du på Python-ikonet i vinduet tilgjengelige enheter for å åpne Python-dialogvinduet. I innstillingene for Python-dialogaksen skriver du inn fra- og til-seksjoner, og deretter angir du antall trinn. Gå til XYZ trinn Z-dialogvinduet og forstørr skanneområdet med 200 mikrometer i begge ender.For å gjøre det, skriv inn 200 mikrometer i start og skriv inn minus 240 mikrometer til slutt, og rekkevidden blir automatisk satt til minus 440 mikrometer. Åpne frontdialogboksen VivoFollow. Start bilderegistrering ved å trykke på det grønne pilhodet øverst til venstre i dialogboksen for måleveiviseren.Hvis live drift-korreksjon brukes, ser du etter en dialogboks for at konfigurasjonen for avdriftkorreksjon vises. Deretter angir du brukeranskaffelseskanalen som brukes som i en mobil landemerkereferanse. Angi maksimal korrigeringsforskyvning i mikrometer lagt til i første og siste Z-posisjon, og klikk OK. Overvåk gjeldende avdriftforskyvning i X, Y og Z i sanntid under bildeopptaket i vivo-flytfrontdialogvinduet, og stopp bildeinnsamlingen etter 35 minutter når en ny syklus med anestesiinjeksjon er nødvendig.Injiser en halv dose av MMF-blandingen og start bildeopptaket på nytt til eksperimentet er ferdig. Dette verktøyet tillater langsiktig bildeinnsamling, muliggjør datainnsamling av høy kvalitet og er egnet for sporing av cellene for hastighetsmålinger. Som vist uten driftkorreksjon, går interesseområdet gradvis bort fra opptaksvisningen, noe som påvirker muligheten til å spore celler for hastighetsanalyse.Imidlertid kan stabile filmer spilles inn med driftkorreksjonsprogramvaren, og flere celler kan spores over en lang periode. Programvaren for driftkorreksjon kan også gi en visualisering av X-, Y- og Z-forskyvningene over tid som ble systemkorrigert. Multifotonmikroskopi gir en høy spatiotemporal oppløsning for leukocyttsporing, hvor cellemigrasjonstrinn og hastighet kan spores og overvåkes.Ved å forberede sikkerhetsfartøyene for multifotonavbildning, er det viktig å unngå skade på sikkerhetsarteriene. Før avbildning er det viktig å trygt identifisere riktig sikkerhetsarterie. Med denne nye prosedyren for intravital multifoton avbildning av sikkerhetsarteriene, er det mulig å analysere adherens og ekstravasasjon av alle blodceller in vivo ved å endre antistoffetiketten.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

En murine modell av stent i halspulsåren for studier av Restenosis

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

An Orthotopic Glioblastoma Mouse Model Maintaining Brain Parenchymal Physical Constraints and Suitable for Intravital Two-photon Microscopy

En orthotopic Glioblastoma Mouse Model Opprettholde Brain Parenkymalt fysiske begrensninger og Egnet for Intravital To-foton mikroskopi

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology ...

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

Sekvensiell<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging av osteogent Stem / stamceller under brudd Repair

Bone turns over continuously and is highly regenerative following injury. Osteogenic stem/progenitor cells have long been hypothesized to exist, but in ...

Evaluation of Tumor-infiltrating Leukocyte Subsets in a Subcutaneous Tumor Model

Evaluering av Tumor-infiltrere Leukocytt Delsett i en Subkutan Tumor Model

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or ...

Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia

Metoder for Akutt og subakutt Murine bakben iskemi

Peripheral artery disease (PAD) is a leading cause of cardiovascular morbidity and mortality in developed countries, and animal models that reliably ...

Combined Intravital Microscopy and Contrast-enhanced Ultrasonography of the Mouse Hindlimb to Study Insulin-induced Vasodilation and Muscle Perfusion

Kombinert Intravital mikroskopi og kontrast forbedret Ultrasonography av mus-Hindlimb for å studere Insulin-indusert vasodilatasjon og muskel perfusjon

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate ...

Inducing Ischemia-reperfusion Injury in the Mouse Ear Skin for Intravital Multiphoton Imaging of Immune Responses

Induserende iskemi-reperfusjon Injury i Mouse Ear Skin for intra multiphoton avbildning av immunrespons

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Kvantitativ visualisering av leukocytinfiltrat i en murin modell av Fulminant myokarditt ved lysarkmikroskopi

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

Intravital Microscopy of Monocyte Homing and Tumor-Related Angiogenesis in a Murine Model of Peripheral Arterial Disease

Intravital mikroskopi Monocyte Homing og svulst-relaterte angiogenese i en Murine modell av perifere Arterial sykdom

The therapeutic goal for peripheral arterial disease and ischemic heart disease is to increase blood flow to ischemic areas caused by hemodynamic ...

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Vurdering av terapeutiske angiogenese i en murine modell av Hindlimb bentap ischemia

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...