Name: multiphoton intravital imaging for monitoring leukocyte recruitment during arteriogenesis in a murine hindlimb model
Uploaded: 2021-09-30T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Multiphoton Intravital Imaging for Monitoring Leukocyte Recruitment during Arteriogenesis in a Murine Hindlimb Model at JoVE.com

Studien finansierades av Deutsche Forschungsgemeinschaft SFB 914 (HI-A/SM, projekt Z01). Vi tackar Dr. Susanne Stutte för att ha läst manuskriptet.

Denna studie godkändes av den bayerska djurvårds- och användningskommittén (godkänd av etisk kod: ROB-55.2Vet-2532.Vet_02-17-99); Dessa försök utfördes i strikt överensstämmelse med de tyska riktlinjerna för djurlagstiftning.
1. Djur och lårbensartärligering (FAL)
OBS: För att inducera steril inflammation och arteriogenes användes 8-10 veckor gamla manliga C57BL / 6J-möss. Ingen av mössen dog eller led av sårinfektion eller sårläkningsstörning und...

<ol>
	<li>The top 10 causes of death. World Health Organization Available from: <a target="_blank" href="https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/the-top-10-causes-of-death">https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/the-top-10-causes-of-death</a> (2020)</li><li>Deindl, E., Schaper, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+art+of+arteriogenesis.">The art of arteriogenesis.</a> Cell Biochemistry and Biophysics. 43 (1), 1-15 (2005).</li><li>Lasch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+RNA+released+due+to+shear+stress+controls+natural+bypass+growth+by+mediating+mechanotransduction+in+mice.">Extracellular RNA released due to shear stress controls natural bypass growth by mediating mechanotransduction in mice.</a> Blood. 134 (17), 1469-1479 (2019).</li><li>Kumaraswami, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+effective+flow+Ccytometry-based+method+for+identification+and+quantification+of+tissue+infiltrated+leukocyte+subpopulations+in+a+mouse+model+of+peripheral+arterial+disease.">A simple and effective flow Ccytometry-based method for identification and quantification of tissue infiltrated leukocyte subpopulations in a mouse model of peripheral arterial disease.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (10), 3593 (2020).</li><li>Padgett, M. E., McCord, T. J., McClung, J. M., Kontos, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+acute+and+subacute+murine+hindlimb+ischemia.">Methods for acute and subacute murine hindlimb ischemia.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (112), e54166 (2016).</li><li>Limbourg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+postnatal+arteriogenesis+and+angiogenesis+in+a+mouse+model+of+hind-limb+ischemia.">Evaluation of postnatal arteriogenesis and angiogenesis in a mouse model of hind-limb ischemia.</a> Nature Protocols. 4 (12), 1737 (2009).</li><li>Wagner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+of+monocyte+homing+and+tumor-related+angiogenesis+in+a+murine+model+of+peripheral+arterial+disease.">Intravital microscopy of monocyte homing and tumor-related angiogenesis in a murine model of peripheral arterial disease.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (126), e56290 (2017).</li><li>Ishikawa-Ankerhold, H. C., Ankerhold, R., Drummen, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+fluorescence+microscopy+techniques--FRAP,+FLIP,+FLAP,+FRET+and+FLIM.">Advanced fluorescence microscopy techniques--FRAP, FLIP, FLAP, FRET and FLIM.</a> Molecules. 17 (4), 4047-4132 (2012).</li><li>Vladymyrov, M., Abe, J., Moalli, F., Stein, J. V., Ariga, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+tissue+offset+correction+system+for+intravital+multiphoton+microscopy.">Real-time tissue offset correction system for intravital multiphoton microscopy.</a> Journal of Immunological Methods. 438, 35-41 (2016).</li><li>Chandraratne, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+of+platelet+glycoprotein+ibalpha+in+arterial+remodeling.">Critical role of platelet glycoprotein ibalpha in arterial remodeling.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 35 (3), 589-597 (2015).</li></ol>

Den beskrivna metoden för multifotonanalys in vivo av leukocytrekrytering representerar ett tillägg till vanliga verktyg för leukocytrekryteringsstudier såsom (immun-) histologiska eller FACS-analyser. Med denna avbildningsmetod är det möjligt att visualisera mer detaljerat de dynamiska processerna vid leukocytvidhäftning och extravasering under arteriogenes10. Trots mervärdet av denna metod innehåller det erbjudna protokollet några kritiska steg och begränsningar. Se t...

Trots intensivt forskningsintresse under de senaste åren är hjärt-kärlsjukdomar, t.ex. ischemisk hjärtsjukdom och stroke, fortfarande den ledande globala dödsorsaken1. Nuvarande behandlingar för dessa sjukdomar är mycket invasiva terapier såsom perkutan transluminal angioplastik, perkutan transluminal koronarangioplastik eller bypassoperation2. Därför är det angeläget att utveckla alternativa, icke-invasiva behandlingsalternativ. Kroppen kan skapa naturliga förbikopplingar runt ett stenoserat eller ockluderat kärl för att omdirigera det avbrutna blodflödet till den distala delen av stenosen. Denna process kallas arteriogenes2. Många nya studier har visat att ökad vätskeskjuvning påverkar leukocytrekrytering, vilket spelar en viktig roll under arteriogenes3. De viktigaste nuvarande alternativen för att analysera rekryteringen av leukocyter under arteriogenes är ex vivo (immun-) histologiska analyser eller fluorescensaktiverad cellsortering (FACS) metodik4. För att möjliggöra bedömning av leukocytdynamik under arteriogenes presenterar denna artikel ett intravitalt avbildningsprotokoll med multifotonmikroskopi.
Leukocyter är de viktigaste blodkropparna som rekryteras under processen med arteriogenes3. Detta protokoll använder multifotonavbildning för att visa krypning av vidhäftande leukocyter märkta med injicerade anti-CD45-PE-antikroppar i kollaterala artärer, 24 timmar efter induktion av arteriogenes genom lårbensartärligering (FAL) med användning av en murin bakbensischemi modell 5,6. Alternativt kan immunceller märkas ex vivo och försiktigt injiceras i möss, vilket visas i studier på angiogenes med intravital mikroskopi7. Blodflödet inuti kärl och artärer kan visualiseras av CD41-FITC (för att märka blodplättar), dextran-FITC (plasma) eller av den andra harmoniska generationen (SHG), som visualiserar kollagen typ 1 närvarande i basalmembranet i någon del av kärlträdet. SHG är en unik fri märkningseffekt av multifotonexcitationen. Multifotonavbildning möjliggör långsiktig cellspårning utan att skada vävnaden och aktivera cellerna genom lasereffektexcitation. Multifotonmikroskopi är den avbildningsmetod som valts för att visualisera fluorescerande märkta celler och strukturer hos levande djur på grund av dess förmåga att excitera fluoroforerna djupare in i vävnaden / organen med minimal fototoxicitet8.
Användningen av avstämda infraröda lasrar med pulser som levereras inom femtosekundintervall exciterar fluorokromen endast vid fokalplanet, utan excitation över och under fokalplanet8. Således möjliggör multifotonmikroskopi hög spatio-temporal upplösning, mindre fotoskador och ökad vävnadspenetrationsavbildning för att studera dynamiska biologiska händelser inuti organen. Det är ett idealiskt mikroskopiverktyg för avbildning av levande djur. Multifoton och någon annan konst av intravital mikroskopi begränsas emellertid av vävnadsrörelse på grund av hjärtslag, andning, peristaltiska rörelser, muskeltonalitet och andra fysiologiska funktioner, vilket stör bildförvärv och analys. Eftersom dessa rörelser försämrar tids- och rumsupplösningen och ibland till och med förbjuder efterföljande analys, måste de hanteras på lämpligt sätt för att möjliggöra korrekt dataanalys och tolkning. Flera strategier har utvecklats för att sänka eller förhindra artefakter från vävnadsrörelse. Detta protokoll tillämpar en in situ-avdriftskorrigeringsprogramvara som heter VivoFollow9 för att korrigera vävnadsdrift under bildförvärv. Detta tillvägagångssätt ger den nödvändiga bildstabiliseringen, vilket möjliggör långsiktig avbildning och cellspårningsanalys.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.0 mL Syringe</td>
			<td>BD Biosciences, San Jose, CA, USA</td>
			<td>309628</td>
			<td>syringe for injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3M Durapore Surgical Tape 1538-0</td>
			<td>3M, St. Paul, MN, USA</td>
			<td>1538-0</td>
			<td>fixation tape</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezole</td>
			<td>Zoetis, Berlin, Germany</td>
			<td></td>
			<td>antagonize anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Reckitt Benckiser Healthcare, Slough, UK</td>
			<td></td>
			<td>antagonize anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57/B6J mouse</td>
			<td>Charles River, Sulzfeld, Germany</td>
			<td></td>
			<td>used animals for surgery/imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD41-FITC ab</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>133904</td>
			<td>Platelet labeling in vivo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45-PE ab</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>368510</td>
			<td>Leukocytes labelling in vivo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disinfectant Cutasept</td>
			<td>Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Deutschland</td>
			<td>AK64.2</td>
			<td>Disinfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye cream (Bepanthen)</td>
			<td>Bayer Vital GmbH</td>
			<td>5g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl</td>
			<td>CuraMED Pharma, Karlsruhe, Germany</td>
			<td></td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flumazenile</td>
			<td>Inresa Arzneimittel GmbH, Freiburg, Deutschland</td>
			<td></td>
			<td>antagonize anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine bore polythene tubing</td>
			<td>Smiths medical</td>
			<td>Lot 278316</td>
			<td>0.28 mm ID and 0.61 mm OD, tubing for the vein catheter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoacryl flexible</td>
			<td>BRAUM</td>
			<td>1050052</td>
			<td>tissue glue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris software</td>
			<td>Oxford Instruments</td>
			<td>version 9.2</td>
			<td>Used for cell tracking, cell speed analysis, 3D projection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser Doppler Imaging instrument</td>
			<td>Moor LDI 5061 and Moor Software Version 3.01, Moor Instruments, Remagen, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEICA KL300 LED</td>
			<td>Leica, Solms, Germany</td>
			<td></td>
			<td>light for microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica M60</td>
			<td>Leica, Solms, Germany</td>
			<td></td>
			<td>microscope for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEICA MC120 HD</td>
			<td>Leica, Solms, Germany</td>
			<td></td>
			<td>camera for microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine</td>
			<td>Pfizer Pharma, Berlin, Germany</td>
			<td></td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>Ratiopharm GmbH, Ulm, Germany</td>
			<td></td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiphoton microscope</td>
			<td>Lavision</td>
			<td>TRIMScope II</td>
			<td>WL 820 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl 0.9%</td>
			<td>Braun, Melsungen, Deutschland</td>
			<td>3570310</td>
			<td>saline for pocket</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naloxone</td>
			<td>Inresa Arzneimittel GmbH, Freiburg, Deutschland</td>
			<td></td>
			<td>antagonize anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle 30 G</td>
			<td>BD Biosciences, San Jose, CA, USA</td>
			<td>305128</td>
			<td>needle for i.v. catheter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk braided suture (0/7)</td>
			<td>Pearsalls Ltd., Taunton, UK</td>
			<td>SUT-S&#160;103</td>
			<td>suture for femoral artery ligation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrason Gel</td>
			<td>SONOSID-ASID BONZ 250 mL</td>
			<td>782012</td>
			<td>gel for imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl 6.0 suture</td>
			<td>Vicryl, Johnson&#38;Johnson, New Brunswick, NJ, USA</td>
			<td>NW-2347</td>
			<td>suture to build pocket</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VivoFollow drift correction software</td>
			<td>Developed by Mykhailo Vladymyrov</td>
			<td></td>
			<td>Reference 9</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

multiphoton intravital imaging for monitoring leukocyte recruitment during arteriogenesis in a murine hindlimb model

Arteriogenes beror starkt på leukocyt- och trombocytrekrytering till det perivaskulära utrymmet hos växande säkerhetskärl. Standardmetoden för analys av kollaterala artärer och leukocyter i arteriogenes är ex vivo (immun-) histologisk metodik. Denna teknik tillåter emellertid inte mätning av dynamiska processer såsom blodflöde, skjuvspänning, cell-cellinteraktioner och partikelhastighet. Detta dokument presenterar ett protokoll för att övervaka in vivo-processer i växande kollaterala artärer under arteriogenes med användning av intravital avbildning. Metoden som beskrivs här är ett tillförlitligt verktyg för dynamisk mätning och erbjuder en högkontrastanalys med minimal fotocytotoxicitet, tillhandahållen genom multifotonexcitationsmikroskopi. Före analys av växande kollateralartärer inducerades arteriogenes i adduktormuskeln hos möss genom ensidig ligering av lårbensartären.
Efter ligeringen började de redan existerande säkerhetsartärerna växa på grund av ökad skjuvspänning. Tjugofyra timmar efter operationen avlägsnades huden och subkutant fett ovanför kollateralartärerna och byggde en ficka för ytterligare analyser. För att visualisera blodflödet och immunceller under in vivo-avbildning injicerades CD41-fluoresceinisotiocyanat (FITC) (trombocyter) och CD45-fykoerytrin (PE) (leukocyter) antikroppar intravenöst (i.v.) via en kateter placerad i svansvenen på en mus. Denna artikel introducerar intravital multifotonavbildning som ett alternativ eller in vivo-komplementering till de vanliga statiska ex vivo (immuno-) histologiska analyserna för att studera processer som är relevanta för arteriogenes. Sammanfattningsvis beskriver denna artikel en ny och dynamisk in vivo-metod för att undersöka immuncellshandel, blodflöde och skjuvspänning i en bakbensmodell av arteriogenes, vilket förbättrar utvärderingsmöjligheterna avsevärt.

Multifotonmikroskopi erbjuder en hög spatio-temporal upplösning för leukocytspårning, där cellmigrationssteg och hastighet kan spåras och övervakas (figur 4A, B). Provets fysiologiska rörelse utgör emellertid en utmaning, särskilt för långsiktiga intravitala mikroskopibildförvärv. Därför krävs en bra vävnadsberedning och hållare för att fixera vävnaden och verktygen, såsom realtidsbildkorrigering för vävnadsdrift, för framgångsrik och stabil bildins...

Watch this Scientific Journal Video about Multiphoton Intravital Imaging for Monitoring Leukocyte Recruitment during Arteriogenesis in a Murine Hindlimb Model at JoVE.com

Multiphoton Intravital Imaging for Monitoring Leukocyte Recruitment during Arteriogenesis in a Murine Hindlimb Model

Rekryteringen av leukocyter och blodplättar utgör en väsentlig komponent som är nödvändig för effektiv tillväxt av kollaterala artärer under arteriogenesen. Multifotonmikroskopi är ett effektivt verktyg för att spåra celldynamik med hög spatio-temporal upplösning in vivo och mindre fototoxicitet för att studera leukocytrekrytering och extravasering under arteriogenesen.

Multifotonintravital avbildning för övervakning av leukocytrekrytering under arteriogenes i en murin bakbensmodell

Arteriogenesis strongly depends on leukocyte and platelet recruitment to the perivascular space of growing collateral vessels. The standard approach for ...

Vårt protokoll gör det möjligt för forskare att analysera processen för arteriogenes in vivo genom att spåra immuncellsvidhäftning och extravasering i växande kollaterala artärer i realtid. Multifotonmikroskopitekniken möjliggör visualisering av celldynamik i djupvävnaden hos levande musmodeller med låg fototoxicitet och med hög spatiotemporal upplösning. Mikroskopproceduren kommer att demonstreras av Dominic van den Heuvel, en teknisk assistent från multifotonavbildningsplattformen från laboratoriet hos Dr.Helen Ishikawa-Ankerhold.Jag kommer att demonstrera det kirurgiska ingreppet. För att börja, placera den bedövade musen i ryggläge. Placera sedan två bitar gjuten lera under musens övre bakben för att säkerställa en plan position för adduktormuskeln.Placera musen under stereomikroskopet. Efter att ha tagit bort håret från båda benen, desinficera och skära huden i en cirkel runt ärret i den tidigare lårbensartären ligering av höger bakben. Ta bort huden och fettlagret från toppen av benet och dra åt sidan den återstående huden med suturer för att skapa en ficka runt adduktormuskeln med säkerhetskärlen.Ta sedan bort det subkutana fettet för att få en tydlig syn på adduktormuskeln, profundaartären och venen samt säkerhetskärlen. Ta bort det ytliga muskelskiktet ovanpå säkerhetskärlen med fina pincett. Fyll den förberedda fickan med saltlösning för att förhindra att vävnaden torkar och fortsätt samma procedur för den falska vänstra bakbenet.Innan du bildar, tillsätt ultraljudsgel i båda fickorna som förhindrar torkning och fungerar som ett nedsänkningsmedium för optisk koppling med målet. Slå på nyckeln till titansafirlaserboxen, den elektroniska gränssnittsboxen, inkubatorkammarens värmeenhet, lysröret och datorn. Starta förvärvsprogramvaran.Ställ in våglängden på 800 nanometer och öppna mikroskopslutaren. I dialogrutan för mätguiden väljer du instrumentläge som enkelstråle och mätläge som 3D-skanningstimelapse. Överför sedan den bedövade musen till mikroskopets förvärmda inkubationskammare och placera området med ultraljudsgelen direkt i kontakt med objektivets främre lins.Öppna epifluorescensmikroskopslutaren. Välj sedan ett lämpligt filter eller dikroisk inställning för FTSE-visualisering. Definiera intresseområdet genom att följa blodflödet under epifluorescensbelysning.När du har tagit intresseområdet in i mittfältet, stäng epifluorescensmikroskopslutaren. I dialogrutan XY-skanner ställer du in önskade parametrar för bildstorlek, pixel, frekvens, linjemedelvärde. Justera lasereffekten och ställ in fotomultiplikatorförstärkningen för kanalerna grönt, rött och blått.Välj ett lämpligt mål för intravital avbildning och driftkorrigeringsinställningar. Definiera bildstapelområdet genom att starta förhandsgranskningshämtningsläget genom att trycka på den röda knappen i mätguidens dialogruta. För att få bra bilder, definiera området och strukturen av intresse genom att fokusera.När du observerar skärmen ändrar du fokus genom att flytta målet tills bilden försvinner och ställa in det som noll. Ställ in objektivpositionen som den sista positionen i axiell riktning. Ändra sedan fokus i motsatt riktning genom att flytta målet nedåt tills bilden försvinner från skärmen igen.Klicka på stoppknappen i det övre vänstra hörnet av dialogrutan för mätguiden och ställ in stegstorleken till två mikrometer. Välj python-axeln som den första axelenheten i dialogrutan för mätningsguiden och välj aktivera inte läget för automatisk sparning. Markera sedan rutan för automatisk sparning endast på tidsaxeln.Tryck sedan på Python-ikonen i fönstret tillgängliga enheter för att öppna Python-dialogfönstret. I axelinställningarna för Python-dialogrutan anger du avsnitten från och till och anger sedan antalet steg. Gå till dialogrutan XYZ steg Z och förstora skanningsområdet med 200 mikrometer i båda ändarna.För att göra det, ange 200 mikrometer i start och ange minus 240 mikrometer i slutet och intervallet kommer automatiskt att ställas in som minus 440 mikrometer. Öppna dialogrutan VivoFollow frontend. Starta bildinsamlingen genom att trycka på den gröna pilspetsen i det övre vänstra hörnet av dialogrutan för mätningsguiden.Om korrigering av levande avdrift används letar du efter en dialogruta där konfigurationen för avdriftskorrigering visas. Ange sedan den förvärvskanal som används som i en mobil landmärkereferens. Ange den maximala korrigeringsförskjutningen i mikrometer som läggs till i den första och sista Z-positionen och klicka på OK. Övervaka strömförskjutningen i X, Y och Z i realtid under bildinsamlingen i vivo-flödets frontend-dialogfönster och stoppa bildinsamlingen efter 35 minuter när ytterligare en anestesiinjektion krävs.Injicera en halv dos av MMF-blandningen och starta om bildtagningen tills experimentet är klart. Detta verktyg möjliggör långsiktig bildinsamling, möjliggör datainsamling av hög kvalitet och är lämplig för att spåra cellerna för hastighetsmätningar. Som visas utan driftkorrigering driver intresseområdet gradvis bort från inspelningsvyn, vilket påverkar möjligheten att spåra celler för hastighetsanalys.Stabila filmer kan dock spelas in med driftkorrigeringsprogramvaran och fler celler kan spåras under en lång period. Driftkorrigeringsprogramvaran kan också ge en visualisering av X-, Y- och Z-förskjutningarna över tid som systemkorrigerades. Multifotonmikroskopi erbjuder en hög spatiotemporal upplösning för leukocytspårning där cellmigrationssteg och hastighet kan spåras och övervakas.Genom att förbereda säkerhetskärlen för multifotonavbildning är det viktigt att undvika skador på säkerhetsartärerna. Innan avbildning är det viktigt att säkert identifiera rätt säkerhetsartär. Med denna nya procedur för intravital multifotonavbildning av kollateralartärerna är det möjligt att analysera vidhäftning och extravasering av alla blodkroppar in vivo genom att ändra antikroppsetiketten.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

En mus modell av stentimplantation i halspulsådern för studier av restenos

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

An Orthotopic Glioblastoma Mouse Model Maintaining Brain Parenchymal Physical Constraints and Suitable for Intravital Two-photon Microscopy

En Orthotopic Glioblastoma musmodell Underhålla hjärnan parenkymal fysiska begränsningar och Passar Intravital Två-foton mikroskopi

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology ...

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

Sekventiell<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging av Osteogena Stem / progenitorceller Under Fracture Repair

Bone turns over continuously and is highly regenerative following injury. Osteogenic stem/progenitor cells have long been hypothesized to exist, but in ...

Evaluation of Tumor-infiltrating Leukocyte Subsets in a Subcutaneous Tumor Model

Utvärdering av tumörinfiltrerande Leukocyte Subsets i en subkutan tumör Model

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or ...

Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia

Metoder för akut och subakut Murin bakdelen ischemi

Peripheral artery disease (PAD) is a leading cause of cardiovascular morbidity and mortality in developed countries, and animal models that reliably ...

Combined Intravital Microscopy and Contrast-enhanced Ultrasonography of the Mouse Hindlimb to Study Insulin-induced Vasodilation and Muscle Perfusion

Kombinerade Intravital mikroskopi och kontrastförstärkt ultraljud av mus bakbenet för att studera Insulin-inducerad vasodilatation och muskel Perfusion

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate ...

Inducing Ischemia-reperfusion Injury in the Mouse Ear Skin for Intravital Multiphoton Imaging of Immune Responses

Induktion ischemi-reperfusionsskada i musen Ear Skin för Intravital multifoton avbildning av immunsvar

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Kvantitativ visualisering av leukocytinfiltrat i en murinmodell av Fulminant-myokardit genom ljusarkmikroskopi

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

Intravital Microscopy of Monocyte Homing and Tumor-Related Angiogenesis in a Murine Model of Peripheral Arterial Disease

Intravital mikroskopi av monocyt Homing och tumör-relaterade angiogenes i en murin modell av perifer arteriell sjukdom

The therapeutic goal for peripheral arterial disease and ischemic heart disease is to increase blood flow to ischemic areas caused by hemodynamic ...

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Bedömning av terapeutisk angiogenes i en murin modell av Hindlimb ischemia

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...