Name: induction and assessment of levodopa-induced dyskinesias in a rat model of parkinson's disease
Uploaded: 2021-10-14T14:30:00
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우리는 파킨슨 병을 앓고있는 모든 사람들의 투쟁과 그들이 매일 보여주는 힘과 탄력성, 특히 KSC의 사랑하는 아버지 인 Mark Steece를 인정하고 싶습니다. 여기에 대표 된 연구는 국립 신경 장애 및 뇌졸중 연구소 (NS090107, NS110398)와 파킨슨 병 재단 국제 연구 보조금 프로그램, 현재 파킨슨 재단의 지원을 받았다. 우리는 또한 Molly VanderWerp가 그녀의 훌륭한 편집 지원에 대해 인정하고 싶습니다.

여기에 제시된 동물들은 제도적 지침에 따라 유지되고 처리되었습니다. 모든 동물 절차는 연방 및 주 규정에 따라 미시간 주립 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인을 받았습니다.
1. 6-OHDA 병변 상태의 약물 없는 확인
<ol><li>자세 꼬리 걸이 검사11,12,13 참고: 실험 대상자(예: 남?...

여기에 제시된 것은 nigrostriatal DA 시스템의 일방적 인 6-OHDA 병변에 이어 파킨슨 쥐 모델에서 LID의 재현 가능한 유도 및 등급에 대한 세부 사항입니다. 설치류가 LID를 개발하지 않았고 회전 비대칭이 쥐 31에서 LID의 아날로그 일 수 있다고 생각되었지만, 쥐와 마우스 모델은 지난 20 년 동안 특징 지어 졌으며 LID 연구 15,32,33,34에 잘 받아 들여지는 도구입니다</su...

레보도파 (L-DOPA)가 PD 1,2를 가진 개인을위한 치료법으로 처음 도입 된 지 50 년이 넘었지만 파킨슨 병 운동 증상에 대한 가장 효과적인 치료법으로 남아 있습니다. PD와 관련된 임상 운동 증상은 흑질(SN) 파콤파에서 도파민(DA) 뉴런의 손실로부터 비롯되며, 선조체에서 이용가능한 도파민의 극적인 감소를 초래한다. L-DOPA는 삼중항 DA 수준을 효과적으로 회복시켜 질병 초기에 운동 효과를 가져옵니다 3,4. 부적절하게, 장기간 치료로, PD를 가진 대부분의 개인은 무도병, 근긴장 이상증 및 무취증을 포함하여 L-DOPA 유도 운동 장애 (LID)를 개발할 것이며, 이는 종종 일상 생활의 활동에 큰 영향을 미칩니다 5,6,7.
설치류에서 LID의 여러 행동 모델이 존재하지만, LID의 모델링 및 행동 평가의 차이는 실험실 간의 결과의 재현성과 전임상 PD 연구를위한 이러한 실험 도구의 신뢰성에 의문을 제기했습니다. 임상 운동 장애 전문가8과 공동으로 개발 된 현재의 프로토콜은 LID 유도 및 등급을위한 간단한 방법이며 6-하이드록시도파민 (6-OHDA)을 활용한 PD의 래트 모델에 사용하기에 적합합니다 9,10 유도 일측성 니그랄 병변. 여기에 제공된 LID 등급 척도에는 다양한 개별 신체 부위에서 운동 장애 행동의 강도와 빈도에 대한 점수가 포함됩니다. 실험의 워크플로우 최적화와 파킨슨병 및 운동장애 동물의 적절한 관리 및 취급에 관한 관련 정보도 제공됩니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1376px;" width="1375">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">&#160;100 Minutes Digital Timer</td>
			<td style="width:193px;">Staples</td>
			<td style="width:182px;">1111764</td>
			<td style="width:559px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">&#160;Compass CX Compact Scale</td>
			<td style="width:193px;">Ohaus</td>
			<td style="width:182px;">30428202</td>
			<td style="width:559px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">5-(2-aminoethyl)-1,2,4-benzenetriol, monohydrobromide</td>
			<td style="width:193px;">Cayman Chemicals</td>
			<td style="width:182px;">25330</td>
			<td style="width:559px;">6-OHDA is a catecholaminergic neurotoxin that is used to induce dopaminergic lesions and parkinsonian symptoms in rodents.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Allentown cages</td>
			<td style="width:193px;">Allentown, LLC</td>
			<td style="width:182px;">Rat900</td>
			<td style="width:559px;">Allentown cages provide the ability to view the rats from all sides.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">BD Allergist Trays with Permanently Attached Needle</td>
			<td style="width:193px;">BD</td>
			<td style="width:182px;">BD 305540</td>
			<td style="width:559px;">For subcutaneous L-DOPA injections</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:441px;">Benserazide hydrochloride</td>
			<td style="width:193px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:182px;">B7283</td>
			<td style="width:559px;">Benserazide is a peripheral decarboxylase inhibitor used with L-DOPA to to induce dyskinesia in rodent models of PD.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Glass amber scintillation vials</td>
			<td style="width:193px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:182px;">B7921</td>
			<td style="width:559px;">Used for storage of L-DOPA/benserazide at -20 &#176;C until mixed with sterile saline.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">L-3,4-Dihydroxyphenylalanine methyl ester hydrochloride</td>
			<td style="width:193px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:182px;">D1507</td>
			<td style="width:559px;">L-3,4-Dihydroxyphenylalanine methyl ester is a precursor to&#160;L-DOPA that crosses the blood-brain barrierand use to treat parkinsonian symptoms in rodents.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Paper Mate Sharpwriter Mechanical Pencils</td>
			<td style="width:193px;">Staples</td>
			<td style="width:182px;">107250</td>
			<td style="width:559px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Rodent nutritionally complete enrichment treats</td>
			<td style="width:193px;">Bio-Serv</td>
			<td style="width:182px;">F05478</td>
			<td style="width:559px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Round Ice Bucket with Lid, 2.5 L</td>
			<td style="width:193px;">Corning</td>
			<td style="width:182px;">432129</td>
			<td style="width:559px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Standard Plastic Clipboard</td>
			<td style="width:193px;">Staples</td>
			<td style="width:182px;">1227770</td>
			<td style="width:559px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Steel wired 6&#39; long movable shelving units</td>
			<td style="width:193px;">Uline</td>
			<td style="width:182px;">H9488</td>
			<td style="width:559px;">Width/Height can be adjusted to need/number of rats per experiment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:441px;">Sterile Saline 0.9%</td>
			<td style="width:193px;">Covidien/Argyle</td>
			<td style="width:182px;">1020</td>
			<td style="width:559px;">For mixing with L-DOPA/benserazide prior to subcutaneous injections.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction and assessment of levodopa-induced dyskinesias in a rat model of parkinson's disease

레보도파 (L-DOPA)는 파킨슨 병 (PD) 운동 증상을 치료하는 데 사용되는 황금 표준 치료법으로 남아 있습니다. 그러나 L-DOPA-유도 운동 장애 (LIDs)로 알려진 원치 않는 비자발적 운동은이 도파민 전구체를 장기간 사용하면 발생합니다. LID의 발생률은 치료 후 10-15 년 이내에 PD를 가진 개인의 약 90 %로 확대되는 것으로 추정됩니다. 이 질병의 메커니즘을 이해하고 새롭고 효과적인 항 운동 장애 치료법을 개발하려면 치료 중재의 전임상 테스트를위한 일관되고 정확한 모델링이 필요합니다. PD의 래트 모델에서 6-OHDA-유도된 니그랄 병변에 이어 LIDs의 신뢰할 수 있는 유도 및 포괄적인 평가를 위한 상세한 방법이 여기에 제시된다. 쥐의 신뢰할 수있는 LID 평가는 PD를 가진 개인에 대한이 일반적인 치료 유발 부담을 줄이거 나 제거하는 데 중점을 둔 새로운 치료법을 테스트하기 위해 실험실 전체에서 쉽게 활용할 수있는 강력한 도구를 제공합니다.

파킨슨 쥐의 LID는 근긴장 이상, 운동 과다 및 고정 관념 행동을 포함한 비정상적인 비자발적 운동 (AIMs)의 범위로 나타날 수 있습니다. 이러한 거동에 대한 LID 등급 기준은 강도(표 1) 및 빈도(표 2)를 모두 포함하도록 여기에 제시되어 있다. 이것은 각 평가 시점에서 이러한 행동에 참여한 데 소요된 시간의 양(빈도)과 품질(강도)을 모두 반영하는 각 래트에 대한 전반적인 LI...

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Induction and Assessment of Levodopa-induced Dyskinesias in a Rat Model of Parkinson's Disease

이 글은 파킨슨병의 래트 모델에서 레보도파로 인한 운동이상증을 유도하고 평가하는 방법을 설명한다. 이 프로토콜은 운동 이상과 운동 장애 행동의 범위, 둘 다 강도와 빈도에 관한 자세한 정보를 제공하여이 충족되지 않은 의학적 필요를 목표로하는 치료법을 테스트 할 수있는 신뢰할 수있는 도구를 제공합니다.

파킨슨 병의 쥐 모델에서 레보도파 유도 운동 장애의 유도 및 평가

Levodopa (L-DOPA) remains the gold-standard therapy used to treat Parkinson&#39;s disease (PD) motor symptoms. However, unwanted involuntary movements ...

우리의 프로토콜은 파킨슨 병의 쥐 모델에서 레보도파 유도 운동 이상증의 신뢰할 수있는 유도 및 포괄적 인 평가를위한 상세한 방법을 제공합니다. 우리의 운동 장애 등급 척도의 가장 큰 장점은 주어진 비정상적인 비자발적 운동의 강도와 그 행동을 나타내는 데 소요 된 시간을 정량화 할 수 있다는 것입니다. 레보도파로 인한 운동 이상증의 신뢰할 수있는 동물 모델은 파킨슨 병 환자의 부작용을 줄이거 나 제거하는 효과적인 치료법을 찾는 최종 목표를 실현하는 데 중요합니다.매주 쥐를 칭량하여 실험을 위한 준비를 시작하여 체중 변화에 기초하여 적절한 약물 양을 계산한다. 쥐에게 영양학적으로 완전하고 맛이 좋은 음식을 제공하십시오. L-DOPA 치료 첫날, 쥐를 기관 동물 관리 및 사용위원회가 승인 한 농축과 함께 제공되는 단일 주택으로 옮깁니다.그리고 행동 평가에 대한 동료 간섭을 피하기 위해 연구 전반에 걸쳐 쥐를 단일 주택으로 유지하십시오. 운동 장애 등급 일에는 행동 평가에 대한 간섭을 피하기 위해 물병, 음식 랙 및 케이지의 농축을 제거하고 케이지를 약 45도 각도로 강철 와이어 랙에 놓은 다음 식별 태그를 위쪽으로 뒤집습니다. L-DOPA 주사 전에, 적절한 부피의 멸균 식염수를 호박색 바이알에 미리 칭량된 동결건조된 L-DOPA 및 벤세라지드 혼합물에 첨가하고 10초 동안 잘 진탕시킨다.준비 직후, 각 동물에 대해 필요한 부피의 L-DOPA-Benserazide 믹스를 26 게이지 바늘로 장착된 개별 주사기에 채우고 각 주사기에 개별 동물 식별부로 라벨을 붙인다. 첫 번째 케이지를 주입 벤치로 가져온 후 새장에서 쥐를 제거하여 주입 표면에 놓습니다. 비 지배적 인 손을 사용하여 손바닥으로 쥐의 머리와 어깨를 표면에 대고 제지하고 견갑골 위에 엄지 손가락과 검지로 뒤의 피부를 비웃습니다.지배적 인 손을 사용하여 손가락 사이의 피하 공간에 L-DOPA 볼륨을 주입하고 바늘을 신체와 평행하게 유지하여 근육 주사를 피하십시오. 주사 후 쥐를 새장으로 옮깁니다. 다음으로, 타이머를 하나 내지 두 분 동안 설정하고, 모든 래트가 주입될 때까지 한 두 분마다 한 마리의 쥐를 주입하는 절차를 반복한다.평가 당일에, 케이지 옆에 타이머를 위치시켜 레보도파-유도된 운동이상증 또는 LID 거동 강도를 관찰하면서 평가 기간 동안 임의의 주어진 행동의 빈도를 추정한다. LID 거동, 피크 거동 및 원하는 수의 시점에서 쇠퇴의 단계를 포함하는 운동 이상증 및 운동 이상증 운동의 강도와 빈도를 평가하십시오. 일분 평가 간격을 사용하는 경우, 첫 번째 쥐를 평가하도록 타이머를 1분 동안 설정하고 일분 간격으로 모든 래트를 통해 등급을 계속하십시오.파킨슨병 쥐의 비정상적인 비자발적 행동에 대한 LID 등급은 행동의 강도와 빈도를 포함하도록 분류되었다. 긴장 이상, 운동 이상, 고정 관념 행동을 포함한 다양한 비정상적인 비자발적 운동이 쥐에서 관찰되었습니다. 대표적인 분석은 전체 실험 타임라인 및 투여량 스케줄에 걸쳐 피크 용량 LID로서 제시된 데이터의 예를 제공한다.피크 용량 LID는 그룹 평균 LID 점수가 가장 큰 시간으로 정의되었다. 추가적으로, LID 등급 데이터는 상이한 L-DPOA 농도에서 각각의 일일 등급 시간 과정에 걸쳐 조사되었고, 그룹들은 개별 동물로서 조합되고 플롯팅되었다. 행동적으로 평가된 피험자로부터의 사후 조직은 레보도파-유도된 운동이상증과 관련된 분자 메카니즘, 및 이러한 분자 메카니즘에 대한 치료적 개입의 영향을 탐구하는데 사용될 수 있다.레보도파-유도된 운동이상증의 동물 모델은 이러한 행동 병의 기초가 되는 것으로 생각되는 몇 가지 메커니즘을 밝히는데 유용하였다. 이러한 이해는 여러 표적에 대한 전임상 및 임상 평가를 이끌어 냈습니다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Methods to Characterize Spontaneous and Startle-induced Locomotion in a Rotenone-induced Parkinson's Disease Model of Drosophila

Methods to Characterize Spontaneous and Startle-induced Locomotion in a Rotenone-induced Parkinson's Disease Model of Drosophila

방법은 자발적인 특성화 및 놀라게 유도 로코을의 로테 논에 의한 파킨슨 병 모델에서합니다<em&gt; 초파리</em

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연구

신경과학

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An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

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