Name: whole ovary immunofluorescence, clearing, and multiphoton microscopy for quantitative 3d analysis of the developing ovarian reserve in mouse
Uploaded: 2021-09-03T14:45:00
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इस काम को राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान अनुदान (R01 HD093778 से E.B-F और T32 HD007065 से R.B. तक) द्वारा समर्थित किया गया था। हम विकिरण प्रयोग के साथ उनकी सहायता के लिए Zachary Boucher धन्यवाद. हम पांडुलिपि के महत्वपूर्ण पढ़ने के लिए मैरी एन हैंडेल को धन्यवाद देते हैं। हम कृतज्ञतापूर्वक इस प्रकाशन में वर्णित माइक्रोस्कोपी काम के साथ विशेषज्ञ सहायता के लिए जैक्सन प्रयोगशाला में सोनिया इराटुपुझा और माइक्रोस्कोपी कोर सेवा के योगदान को स्वीकार करते हैं और 3 डी-मुद्रित एडेप्टर स्लाइड को डिजाइन करने के लिए जैक्सन प्रयोगशाला में वैज्ञानिक साधन सेवाओं से जारेक ट्रैप्सजो।

उपयोग किए जाने वाले सभी चूहे आनुवंशिक तनाव C57BL / 6J के थे ( सामग्री की तालिका देखें)। इस तनाव को पूरी तरह से अनुक्रमित किया गया है और डिम्बग्रंथि संरचना और कार्य पर कई अध्ययनों के लिए मानक है। चूहों को ?...

यह लेख उच्च-थ्रूपुट और रोगाणु कोशिका परिमाणीकरण और प्रोटीन स्थानीयकरण के लिए तुलनात्मक अध्ययन के लिए प्रसवपूर्व और प्रसवोत्तर अंडाशय के लिए एक विस्तृत 3 डी इम्यूनोस्टेनिंग और इमेजिंग प्रोटोकॉल प्र?...

अधिकांश स्तनधारी मादाएं आदिम रोम के भीतर संग्रहीत अर्धसूत्रीविभाजनित रूप से गिरफ्तार ओसाइट्स की एक सीमित संख्या के साथ पैदा होती हैं, जो डिम्बग्रंथि रिजर्व (OR)1,2 का गठन करती हैं। OR समग्र महिला प्रजनन जीवनकाल और स्वास्थ्य3 निर्धारित करता है। OR आमतौर पर उम्र बढ़ने के साथ आकार में गिरावट आती है और कुछ genotoxic एजेंटों (विकिरण / कीमोथेरेपी) और पर्यावरणीय तनाव (कुपोषण) के संपर्क में आने पर समय से पहले समाप्त हो सकती है, जिससे बांझपन 4,5,6 हो सकता है। अज्ञातहेतुक महिला बांझपन को अक्सर ओआर से विकसित होने वाले अंडे की आनुवंशिक और शारीरिक गुणवत्ता के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है और खराब रूप से समझा जाताहै 7,8। क्योंकि महिला कूप बंदोबस्ती काफी हद तक जन्म से पूर्व निर्धारित है, इसलिए ओआर स्थापना और रखरखाव में शामिल नियामक तंत्र को समझना आवश्यक है।
चूहों में, या गठन भ्रूण दिवस (ई) 7.5 2 के आसपास आदिम रोगाणु कोशिकाओं (PGCs) के विनिर्देश के साथ शुरू होताहै। PGCs जननांग लकीरें, जहां वे लगभग E10.59 द्वारा निवास करेंगे करने के लिए माइग्रेट। निम्नलिखित व्यापक प्रसार अपूर्ण साइटोकिनेसिस के साथ होता है जिसके परिणामस्वरूप अल्सर का गठन होता है जो बाद में विकास10,11 में टूट जाएगा। लगभग E12.5 पर, गोनाडल सेक्स निर्धारित किया जाता है, और पीजीसी प्रसार अंडाशय में रुक जाता है। महिलाओं में, PGCs, अब ocytes, लगभग E13.512,13 पर meiotic prophase I (MPI) दर्ज करें। विस्तारित एमपीआई के माध्यम से ओसाइट प्रगति करते हैं और जन्म के समय के आसपास डिक्टिएट चरण में गिरफ्तारी करते हैं। जन्म के बाद पहले सप्ताह के दौरान, प्रत्येक गिरफ्तार ओसाइट ग्रैनुलोसा कोशिकाओं से घिरा होता है, जिससे एक आदिम कूप बनता है।
एक महिला के OR में आदिम follicles की संख्या इस बात पर निर्भर करती है कि एपोप्टोसिस, ऑटोफैगी, या नेक्रोसिस14,15 के माध्यम से एमपीआई गिरफ्तारी से पहले और दौरान होने वाली ओसाइट उन्मूलन की तरंगों से कितने ओसाइट बच गए। पहली लहर भ्रूण के विकास के दौरान होती है और इसे एफओए के रूप में जाना जाता है। एफओए मादाओं (स्तनधारी और गैर-स्तनधारी) में एक विकासवादी रूप से संरक्षित प्रक्रिया है, जिससे अनुमानित 50-80% ओसाइटों को मादा प्रजातियों 16,17,18,19 के आधार पर समाप्त कर दिया जाता है। चूहों में, FOA E15.5 से E18.5 के दौरान होता है और इसे रेट्रोट्रांसपोसन LINE-1 अनुक्रमों के पुनर्सक्रियन और अभिव्यक्ति के लिए जिम्मेदार ठहराया गया है जिससे20,21 की मृत्यु हो जाती है। ओसाइट उन्मूलन की दूसरी लहर एक अर्धसूत्रीविभाजन चेकपॉइंट के माध्यम से होती है जो अर्धसूत्रीविभाजन के साथ ओसाइट को समाप्त करती है जैसे कि अनपेयर्ड डीएनए डबल-स्ट्रैंड ब्रेक (डीएसबी) 22,23। ओसाइट उन्मूलन की अगली लहर पुटी टूटने के दौरान होती है, जो आदिम रोम के गठन के दौरान समाप्त होती है, जिनमें से प्रत्येक में एक एकल ओसाइट10,11,24,25 होता है।
चूहों में, आदिम कूप रिजर्व काफी हद तक यौवन द्वारा स्थापित किया जाता है, जिसके बाद यह कम हो जाता है क्योंकि नियमित प्रजनन चक्र के दौरान विकास के लिए आदिम रोम सक्रिय होते हैं। OR आकार व्यक्तिगत महिलाओं के बीच और चूहों के विभिन्न आनुवंशिक उपभेदों के बीच भिन्न होता है; फिर भी, या आकार के आनुवंशिक विनियमन को अच्छी तरह से 26,27,28,29 नहीं समझा गया है। या विनियमन के आनुवांशिक अध्ययन ों को प्रसवपूर्व और प्रसवोत्तर विकास के दौरान ओसाइट उन्मूलन की तरंगों का अध्ययन करने के लिए मानकीकृत प्रोटोकॉल की कमी से बाधित किया जाता है। चूहों में कई ओसाइट परिमाणीकरण के तरीके विकसित किए गए हैं, जिनमें सबसे आम और व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है हिस्टोलॉजिकल वर्गों30,31 के हिस्टोमोर्फोमेट्रिक मूल्यांकन। इस तकनीक में, हिस्टोलॉजिकल दाग के साथ सीरियल वर्गों पर ओसाइटों की पहचान की जाती है, जैसे कि हेमेटोक्सिलिन और ईोसिन (एच एंड ई) और आवधिक एसिड-शिफ (पीएएस) या फ्लोरोसेंट मार्कर। यह तकनीक विश्वसनीय है यदि सभी स्थितियां स्थिर रहती हैं, जिसमें अनुभाग मोटाई, अंडाशय में सभी वर्गों की कुशल वसूली और व्यक्तिगत प्रयोगशालाओं की गिनती की योजनाएं शामिल हैं। हालांकि, विभिन्न प्रयोगशालाओं द्वारा रिपोर्ट की गई संख्याएं अक्सर काफी भिन्न होती हैं और इस प्रकार आसानी से तुलनीय नहीं होती हैं।
इसके अलावा, आनुवांशिक अंतर को देखते हुए, विभिन्न माउस उपभेदों का उपयोग भी ओसाइट गिनती को प्रभावित कर सकता है। हिस्टोमोर्फोमेट्रिक मूल्यांकन के लिए अतिरिक्त कम्प्यूटेशनल दृष्टिकोण विकसित किए गए हैं और इसमें फ्रैक्शनेटर दृष्टिकोण का उपयोग करके ओसाइटों का स्वचालित पता लगाना, कम्प्यूटेशनल एल्गोरिदम का उपयोग करके स्वचालित गणना, और एक ही ओसाइट 31,32,33,34,35,36 की कई गिनती को रोकने के लिए हिस्टोलॉजिकल छवियों का 3 डी पुनर्निर्माण शामिल है। . हिस्टोमोर्फोमेट्रिक मूल्यांकन में इन सुधारों को जोड़ने के साथ भी, तकनीक अपेक्षाकृत श्रम-गहन है, विशेष रूप से बड़े पैमाने पर और उच्च-थ्रूपुट अध्ययनों के लिए। एकत्र किए गए डेटा गणना योजनाओं, कंप्यूटर एल्गोरिदम और उपयोग किए गए सॉफ़्टवेयर में अंतर के कारण अध्ययनों के बीच पुनरुत्पादक और तुलनीय नहीं हो सकते हैं।
हाल ही में, नए मध्यम-रिज़ॉल्यूशन मल्टीफोटॉन और लाइट शीट माइक्रोस्कोपी और ऑप्टिकल ऊतक समाशोधन विधियों के विकास से त्वरित, बरकरार अंडाशय के लिए 3 डी मॉडलिंग और विश्लेषण तकनीकें ओसाइट संख्याओं को कुशलतापूर्वक मापने और प्रोटीन स्थानीयकरण और गतिशीलता का अध्ययन करने के लिए पसंद की विधि बन रही हैं37,38। ये 3 डी विधियां आमतौर पर हिस्टोलॉजिकल विधियों की तुलना में फायदेमंद होती हैं क्योंकि ऊतकों और अंगों को बेहतर ढंग से संरक्षित किया जाता है और बरकरार रखा जाता है। इसके अलावा, 3 डी विश्लेषण और मॉडलिंग अंग के भीतर और उसके भीतर सेल niches या substructures के बीच समारोह और इंटरैक्शन में अतिरिक्त अंतर्दृष्टि प्रदान करते हैं जो 2 डी विश्लेषण में याद किया जा सकता है।
पूरे अंगों के 3 डी विश्लेषण के लिए ऊतक विरूपण या क्षति के बिना, अंडाशय जैसे व्यक्तिगत अंगों के लिए निर्धारण, इम्यूनोस्टेनिंग और ऑप्टिकल क्लियरिंग प्रोटोकॉल के अनुकूलन की आवश्यकता होती है। इमेजिंग के लिए नमूना बढ़ते का अतिरिक्त अनुकूलन उच्च-रिज़ॉल्यूशन माइक्रोस्कोपी के लिए आवश्यक है और उपलब्ध इमेजिंग प्लेटफ़ॉर्म पर निर्भर हो सकता है। अंत में, पूरे बरकरार अंडाशय की इमेजिंग बाद के कम्प्यूटेशनल विश्लेषण के लिए बड़ी मात्रा में डेटा उत्पन्न करती है। इसलिए, तुलनात्मक अध्ययन के लिए और विकास के चरणों में ओसाइटों की गिनती के लिए मानकीकृत 3 डी विधियों को विकसित करने की आवश्यकता है।
यह प्रोटोकॉल मानक इम्यूनोस्टेनिंग और पहले रिपोर्ट किए गए समाशोधन प्रोटोकॉल का उपयोग करता है, जो एक सरल, उपयोगकर्ता के अनुकूल और उच्च-थ्रूपुट दृष्टिकोण 38,39,40,41 पर ध्यान केंद्रित करता है। प्रोटोकॉल को प्रसवोत्तर दिन 28 (पी 28) तक बड़ी संख्या में प्रसवपूर्व और प्रसवोत्तर अंडाशय और विभिन्न माउस आनुवंशिक पृष्ठभूमि से अंडाशय के अलग-अलग आकारों का विश्लेषण करने के लिए अनुकूलित किया गया है। इम्यूनोस्टेनिंग चरण सभी चरणों के लिए समान हैं; हालांकि, समाशोधन प्रोटोकॉल अपने बड़े आकार के कारण प्यूबर्टल अंडाशय के लिए भिन्न होते हैं, स्केलएस 4 (0) और छोटे और बड़े अंडाशय के लिए क्यूबिक, क्रमशः40,41। इसके अलावा, रक्त कोशिकाओं से ऑटोफ्लोरेसेंस को रोकने के लिए निर्धारण से पहले P28 चूहों में पूरे शरीर परफ्यूजन का प्रदर्शन किया जाता है। छवियों को प्राप्त करने के लिए लाइट शीट माइक्रोस्कोपी के विकल्प के रूप में Leica DIVE /4Tune प्लेटफ़ॉर्म पर एक मल्टीफोटॉन माइक्रोस्कोप बनाया गया था, और इस प्रोटोकॉल के लिए विभिन्न विश्लेषणात्मक उपकरणों के साथ IMARIS 3D विज़ुअलाइज़ेशन और विश्लेषण सॉफ़्टवेयर को चुना गया था। यह प्रोटोकॉल का पालन करने के लिए सरल है और कम हाथों पर है, इसलिए समय की बचत। इसके अलावा, अंडाशय के आकार और ओसाइट की व्यवस्था के आधार पर ओसाइट परिमाणीकरण अपेक्षाकृत त्वरित है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Benchtop Incubator</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>H2200-H</td>
			<td>37 &#176;C incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97061-416</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>000664</td>
			<td>mouse inbred strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D1435</td>
			<td>Hazardous material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Sorbitol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S6021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>91150-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FastWells Reagent Barriers</td>
			<td>GraceBio</td>
			<td>664113</td>
			<td>Sticky and flexible silicone gasket (adhesive well)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>91460-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G2025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>BP381-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 647</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21246</td>
			<td>Dilution 1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rat IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 555</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21434</td>
			<td>Dilution 1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G9023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMARIS Software</td>
			<td>Oxford Instruments</td>
			<td>Version 9.7.0</td>
			<td>Image visualization and analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insight X3</td>
			<td>Spectra-Physics</td>
			<td>InSight&#160;X3 Tunable Ultrafast Laser</td>
			<td>Laser for Multiphoton Imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LASX software</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Version 3.5.6</td>
			<td>Image acquisition software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica DIVE/4TUNE/FALCON</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica Dmi8, 2P-M-ready: # 158005406</td>
			<td>Multiphoton Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MaiTai HP</td>
			<td>Spectra-Physics</td>
			<td>Mai Tai DeepSee One Box Ultrafast Laser</td>
			<td>Laser for Multiphoton Imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masterflex Pump Controller</td>
			<td>SPW Industrial</td>
			<td>Model: 7553-50</td>
			<td>Peristaltic pump for perfusion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>14010-17</td>
			<td>5&#8221; &#8211;7&#8221; blunt/blunt scissors for decapitation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Cover Glasses, Square, No. 1.5 25x25mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48366-249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini BioMixer</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>B3D1020</td>
			<td>shaker/nutator for 37 &#176;C incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Ergonomic SMZ1270</td>
			<td>Leica</td>
			<td>&#160;SMZ1270</td>
			<td>stereomicroscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 16% (formaldehyde aqueous solution)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15710</td>
			<td>Hazardous material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS Tablets, Phosphate-buffered Saline</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>BP2944100</td>
			<td>Dissolve in Milli-Q water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin, 200x, Dual Antibiotic Solution</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>ICN1670249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyvinyl alcohol (PVA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quadrol (N,N,N&#8242;,N&#8242;-Tetrakis(2-Hydroxypropylethylenediamine)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>122262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-DDX4/MVH</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab27591</td>
			<td>Dilution 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-LINE-1 ORF1p</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab216324</td>
			<td>Dilution 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat anti-TRA98/GCNA</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab82527</td>
			<td>Dilution 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2002</td>
			<td>Hazardous material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium borohydride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>452882</td>
			<td>Hazardous material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>S0389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tekmar Orbital Shaker</td>
			<td>Bimedis</td>
			<td>VXR-S10</td>
			<td>shaker for room temperature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triethanolamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>90279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>X100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UNOLOK Infusion Set</td>
			<td>MYCO Medical</td>
			<td>7001-23</td>
			<td>needles for perfusion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urea</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>97061-920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-Cite 120LED</td>
			<td>Excelitas</td>
			<td>S/N XT640-W-0147</td>
			<td>low-power LED fluorescence lamp</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

whole ovary immunofluorescence, clearing, and multiphoton microscopy for quantitative 3d analysis of the developing ovarian reserve in mouse

महिला प्रजनन क्षमता और प्रजनन जीवनकाल डिम्बग्रंथि ओसाइट रिजर्व की गुणवत्ता और मात्रा पर निर्भर करता है। Meiotic prophase मैं प्रवेश महिला रोगाणु कोशिकाओं का एक अनुमान 80% भ्रूण ओसाइट एट्रिशन (एफओए) और प्रसवोत्तर जीवन के पहले सप्ताह के दौरान समाप्त कर रहे हैं। तीन प्रमुख तंत्र विकास के दौरान जीवित रहने वाले ओसाइटों की संख्या को विनियमित करते हैं और यौवन में प्रवेश करने वाली महिलाओं में डिम्बग्रंथि रिजर्व स्थापित करते हैं। ओसाइट हानि की पहली लहर में, प्रारंभिक एफओए के दौरान 30-50% ओसाइट को समाप्त कर दिया जाता है, एक ऐसी घटना जिसे उच्च लंबे समय तक अंतर्निहित परमाणु तत्व -1 (LINE-1) अभिव्यक्ति के लिए जिम्मेदार ठहराया जाता है। ओसाइट हानि की दूसरी लहर एक अर्धसूत्रीविभाजन जांच चौकी द्वारा अर्धसूत्रीविभाजन दोषों के साथ ओसाइटों का उन्मूलन है। ओसाइट हानि की तीसरी लहर आदिम कूप गठन के दौरान प्रसवकालीन रूप से होती है जब कुछ ओसाइट रोम बनाने में विफल रहते हैं। यह स्पष्ट नहीं है कि ओसाइट हानि की इन तीन तरंगों में से प्रत्येक को क्या नियंत्रित करता है और वे चूहों या मनुष्यों में डिम्बग्रंथि रिजर्व को कैसे आकार देते हैं।
Immunofluorescence और 3 डी विज़ुअलाइज़ेशन ने कम जानकारीपूर्ण 2 डी वर्गों के बजाय पूरे अंडाशय के संदर्भ में ओसाइट विकास की छवि और विश्लेषण करने के लिए एक नया एवेन्यू खोला है। यह लेख पूरे अंडाशय immunostaining और ऑप्टिकल समाशोधन के लिए एक व्यापक प्रोटोकॉल प्रदान करता है, व्यावसायिक रूप से उपलब्ध सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके मल्टीफोटॉन माइक्रोस्कोपी और 3 डी मॉडलिंग का उपयोग करके इमेजिंग के लिए तैयारी करता है। यह दिखाता है कि इस विधि का उपयोग C57BL / 6J चूहों में डिम्बग्रंथि के विकास के दौरान ओसाइट एट्रिशन की गतिशीलता को दिखाने के लिए कैसे किया जा सकता है और ओसाइट उन्मूलन की तीन तरंगों के दौरान ओसाइट हानि को निर्धारित किया जा सकता है। इस प्रोटोकॉल को ओसाइट विज़ुअलाइज़ेशन और परिमाणीकरण के साथ-साथ अन्य मात्रात्मक दृष्टिकोणों के लिए प्रसवपूर्व और प्रारंभिक प्रसवोत्तर अंडाशय पर लागू किया जा सकता है। महत्वपूर्ण रूप से, प्रोटोकॉल को रणनीतिक रूप से उच्च-थ्रूपुट, विश्वसनीय और दोहराने योग्य प्रसंस्करण को समायोजित करने के लिए विकसित किया गया था जो विष विज्ञान, नैदानिक निदान और डिम्बग्रंथि समारोह के जीनोमिक assays में आवश्यकताओं को पूरा कर सकता है।

पूरे अंडाशय के इम्यूनोस्टेनिंग और इमेजिंग एक ही तकनीक और मार्करों (चित्रा 3) का उपयोग करके विभिन्न विकास ता्मक चरणों में अंडाशय में ओसाइट या प्रोटीन अभिव्यक्ति के विज़ुअलाइज़ेशन और परिमाण?...

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Whole Ovary Immunofluorescence, Clearing, and Multiphoton Microscopy for Quantitative 3D Analysis of the Developing Ovarian Reserve in Mouse

यहां, हम पूरे-माउंट इम्युनोस्टेनिंग, मल्टीफोटॉन माइक्रोस्कोपी और 3 डी विज़ुअलाइज़ेशन और विश्लेषण का उपयोग करके मात्रात्मक और गुणात्मक विश्लेषण के लिए पूरे अंडाशय की इमेजिंग के लिए एक अनुकूलित प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। यह प्रोटोकॉल उच्च-थ्रूपुट, विश्वसनीय और दोहराने योग्य प्रसंस्करण को समायोजित करता है जो विष विज्ञान, नैदानिक निदान और डिम्बग्रंथि समारोह के जीनोमिक assays के लिए लागू होता है।

माउस में डिम्बग्रंथि रिजर्व के विकासशील डिम्बग्रंथि रिजर्व के मात्रात्मक 3 डी विश्लेषण के लिए पूरे अंडाशय Immunofluorescence, समाशोधन, और Multiphoton माइक्रोस्कोपी

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