Name: two peeling methods for the isolation of photoreceptor cell compartments in the mouse retina for protein analysis
Uploaded: 2021-12-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Two Peeling Methods for the Isolation of Photoreceptor Cell Compartments in the Mouse Retina for Protein Analysis at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من قبل NIH Grant EY12155 و EY027193 و EY027387 إلى JC. نحن ممتنون للدكتور سبيريدون ميشالاكيس (معهد كاليفورنيا للتكنولوجيا، باسادينا، الولايات المتحدة الأمريكية) وناتالي تشن (جامعة جنوب كاليفورنيا، لوس أنجلوس، الولايات المتحدة الأمريكية) لتدقيق المخطوطة. نود أيضا أن نشكر الدكتور سيث روفينز (USC ، لوس أنجلوس ، الولايات المتحدة الأمريكية) والدكتور يانوس بيتي بيتردي (USC ، لوس أنجلوس ، الولايات المتحدة الأمريكية) على توفير المعدات اللازمة لجمع اللقطات المقدمة من المؤلف. مادة من: كاسي روز وآخرون ، فصل مقصورات خلايا المستقبلات الضوئية في شبكية العين الفأر لتحليل البروتين ، التنكس العصبي الجزيئي ، نشر [2017] ، [Springer Nature].

تم إجراء جميع التجارب وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية المحلية للجنة رعاية الحيوانات البحثية من جامعة جنوب كاليفورنيا (USC).
1. طريقة تقشير شبكية العين للخلايا الحية
<ol><li>تحضير مخازن أميس المؤقتة، وأوراق التقشير، وطبق التشريح<ol>
<li>باستخدام مقص قزحية العين ذو الطرف ا...

<ol>
	<li>Arshavsky, V. Y., Lamb, T. D., Pugh, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=G+proteins+and+phototransduction.">G proteins and phototransduction.</a> Annual Review of Physiology. 64, 153-187 (2002).</li><li>Molday, R. S., Moritz, O. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoreceptors+at+a+glance.">Photoreceptors at a glance.</a> Journal of Cell Science. 128 (22), 4039-4045 (2015).</li><li>Koch, K. W., Dell'Orco, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+and+signaling+networks+in+vertebrate+photoreceptor+cells.">Protein and signaling networks in vertebrate photoreceptor cells.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 8, 67 (2015).</li><li>Semple-Rowland, S. L., Dawson, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+light+intensity+threshold+for+retinal+damage+in+albino+rats+raised+under+6+lx.">Cyclic light intensity threshold for retinal damage in albino rats raised under 6 lx.</a> Experimental Eye Research. 44 (5), 643-661 (1987).</li><li>Brann, M. R., Cohen, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diurnal+expression+of+transducin+mRNA+and+translocation+of+transducin+in+rods+of+rat+retina.">Diurnal expression of transducin mRNA and translocation of transducin in rods of rat retina.</a> Science. 235 (4788), 585-587 (1987).</li><li>Philp, N. J., Chang, W., Long, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-stimulated+protein+movement+in+rod+photoreceptor+cells+of+the+rat+retina.">Light-stimulated protein movement in rod photoreceptor cells of the rat retina.</a> FEBS Letters. 225 (1-2), 127-132 (1987).</li><li>Broekhuyse, R. M., Tolhuizen, E. F., Janssen, A. P., Winkens, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+induced+shift+and+binding+of+S-antigen+in+retinal+rods.">Light induced shift and binding of S-antigen in retinal rods.</a> Current Eye Research. 4 (5), 613-618 (1985).</li><li>Roof, D. J., Heth, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+transducin+in+retinal+rod+photoreceptor+outer+segments.">Expression of transducin in retinal rod photoreceptor outer segments.</a> Science. 241 (4867), 845-847 (1988).</li><li>Sokolov, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Massive+light-driven+translocation+of+transducin+between+the+two+major+compartments+of+rod+cells:+a+novel+mechanism+of+light+adaptation.">Massive light-driven translocation of transducin between the two major compartments of rod cells: a novel mechanism of light adaptation.</a> Neuron. 34 (1), 95-106 (2002).</li><li>Lobanova, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transducin+translocation+in+rods+is+triggered+by+saturation+of+the+GTPase-activating+complex.">Transducin translocation in rods is triggered by saturation of the GTPase-activating complex.</a> The Journal of Neuroscience. 27 (5), 1151-1160 (2007).</li><li>Strissel, K. J., Sokolov, M., Trieu, L. H., Arshavsky, V. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arrestin+translocation+is+induced+at+a+critical+threshold+of+visual+signaling+and+is+superstoichiometric+to+bleached+rhodopsin.">Arrestin translocation is induced at a critical threshold of visual signaling and is superstoichiometric to bleached rhodopsin.</a> The Journal of Neuroscience. 26 (4), 1146-1153 (2006).</li><li>Nair, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-dependent+redistribution+of+arrestin+in+vertebrate+rods+is+an+energy-independent+process+governed+by+protein-protein+interactions.">Light-dependent redistribution of arrestin in vertebrate rods is an energy-independent process governed by protein-protein interactions.</a> Neuron. 46 (4), 555-567 (2005).</li><li>Strissel, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recoverin+undergoes+light-dependent+intracellular+translocation+in+rod+photoreceptors.">Recoverin undergoes light-dependent intracellular translocation in rod photoreceptors.</a> The Journal of Biological Chemistry. 280 (32), 29250-29255 (2005).</li><li>Calvert, P. D., Strissel, K. J., Schiesser, W. E., Pugh, E. N., Arshavsky, V. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-driven+translocation+of+signaling+proteins+in+vertebrate+photoreceptors.">Light-driven translocation of signaling proteins in vertebrate photoreceptors.</a> Trends in Cell Biology. 16 (11), 560-568 (2006).</li><li>Majumder, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transducin+translocation+contributes+to+rod+survival+and+enhances+synaptic+transmission+from+rods+to+rod+bipolar+cells.">Transducin translocation contributes to rod survival and enhances synaptic transmission from rods to rod bipolar cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (30), 12468-12473 (2013).</li><li>Fain, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+photoreceptors+die+(and+why+they+don't).">Why photoreceptors die (and why they don't).</a> BioEssays. 28 (4), 344-354 (2006).</li><li>Chen, J., Simon, M. I., Matthes, M. T., Yasumura, D., LaVail, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+susceptibility+to+light+damage+in+an+arrestin+knockout+mouse+model+of+Oguchi+disease+(stationary+night+blindness).">Increased susceptibility to light damage in an arrestin knockout mouse model of Oguchi disease (stationary night blindness).</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 40 (12), 2978-2982 (1999).</li><li>Song, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arrestin-1+expression+level+in+rods:+balancing+functional+performance+and+photoreceptor+health.">Arrestin-1 expression level in rods: balancing functional performance and photoreceptor health.</a> Neuroscience. 174, 37-49 (2011).</li><li>McConnell, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolation+of+retinal+outer+segment+fragments.">The isolation of retinal outer segment fragments.</a> The Journal of Cell Biology. 27 (3), 459-473 (1965).</li><li>Tsang, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+for+the+target+enzyme+in+deactivation+of+photoreceptor+G+protein+in+vivo.">Role for the target enzyme in deactivation of photoreceptor G protein in vivo.</a> Science. 282 (5386), 117-121 (1998).</li><li>Walston, S. T., Chow, R. H., Weiland, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patch+clamp+recordings+of+retinal+bipolar+cells+in+response+to+extracellular+electrical+stimulation+in+wholemount+mouse+retina.">Patch clamp recordings of retinal bipolar cells in response to extracellular electrical stimulation in wholemount mouse retina.</a> Annual International Conference of the IEEE Engineering in Medicine and Biology Society. 2015, 3363-3366 (2015).</li><li>Guido, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+to+obtain+retinal+cell+preparations+highly+enriched+in+specific+cell+types.+Suitability+for+lipid+metabolism+studies.">A simple method to obtain retinal cell preparations highly enriched in specific cell types. Suitability for lipid metabolism studies.</a> Brain Research. Brain Research Protocols. 4 (2), 147-155 (1999).</li><li>Hayashi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phosphorylation+by+cyclin-dependent+protein+kinase+5+of+the+regulatory+subunit+of+retinal+cGMP+phosphodiesterase.+II.+Its+role+in+the+turnoff+of+phosphodiesterase+in+vivo.">Phosphorylation by cyclin-dependent protein kinase 5 of the regulatory subunit of retinal cGMP phosphodiesterase. II. Its role in the turnoff of phosphodiesterase in vivo.</a> The Journal of Biological Chemistry. 275 (42), 32958-32965 (2000).</li><li>Wolbring, G., Cook, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+purification+and+characterization+of+protein+kinase+C+from+bovine+retinal+rod+outer+segments.">Rapid purification and characterization of protein kinase C from bovine retinal rod outer segments.</a> European Journal of Biochemistry. 201 (3), 601-606 (1991).</li><li>Williams, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+protein+kinase+C+in+photoreceptor+outer+segments.">Characterization of protein kinase C in photoreceptor outer segments.</a> Journal of Neurochemistry. 69 (4), 1693-1702 (1997).</li><li>Watson, A. J., Aragay, A. M., Slepak, V. Z., Simon, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+form+of+the+G+protein+beta+subunit+Gbeta5+is+specifically+expressed+in+the+vertebrate+retina.">A novel form of the G protein beta subunit Gbeta5 is specifically expressed in the vertebrate retina.</a> The Journal of Biological Chemistry. 271 (45), 28154-28160 (1996).</li><li>Makino, E. R., Handy, J. W., Li, T., Arshavsky, V. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GTPase+activating+factor+for+transducin+in+rod+photoreceptors+is+the+complex+between+RGS9+and+type+5+G+protein+beta+subunit.">The GTPase activating factor for transducin in rod photoreceptors is the complex between RGS9 and type 5 G protein beta subunit.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (5), 1947-1952 (1999).</li><li>Chen, J., Shi, G., Concepcion, F. A., Xie, G., Oprian, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+rhodopsin/arrestin+complex+leads+to+retinal+degeneration+in+a+transgenic+mouse+model+of+autosomal+dominant+retinitis+pigmentosa.">Stable rhodopsin/arrestin complex leads to retinal degeneration in a transgenic mouse model of autosomal dominant retinitis pigmentosa.</a> The Journal of Neuroscience. 26 (46), 11929-11937 (2006).</li><li>Chen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+photoresponses+and+light-induced+apoptosis+in+rods+lacking+rhodopsin+kinase.">Abnormal photoresponses and light-induced apoptosis in rods lacking rhodopsin kinase.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (7), 3718-3722 (1999).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mistrafficking+of+prenylated+proteins+causes+retinitis+pigmentosa+2.">Mistrafficking of prenylated proteins causes retinitis pigmentosa 2.</a> FASEB Journal. 29 (3), 932-942 (2015).</li><li>Weiss, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Species-specific+differences+in+expression+of+G-protein-coupled+receptor+kinase+(GRK)+7+and+GRK1+in+mammalian+cone+photoreceptor+cells:+implications+for+cone+cell+phototransduction.">Species-specific differences in expression of G-protein-coupled receptor kinase (GRK) 7 and GRK1 in mammalian cone photoreceptor cells: implications for cone cell phototransduction.</a> The Journal of Neuroscience. 21 (23), 9175-9184 (2001).</li><li>Zhao, X., Huang, J., Khani, S. C., Palczewski, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+forms+of+human+rhodopsin+kinase+(GRK1).">Molecular forms of human rhodopsin kinase (GRK1).</a> The Journal of Biological Chemistry. 273 (9), 5124-5131 (1998).</li><li>Newton, A. C., Williams, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+protein+kinase+C+in+the+phosphorylation+of+rhodopsin.">Involvement of protein kinase C in the phosphorylation of rhodopsin.</a> The Journal of Biological Chemistry. 266 (27), 17725-17728 (1991).</li><li>Pinzon-Guzman, C., Zhang, S. S., Barnstable, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+protein+kinase+C+isoforms+are+required+for+rod+photoreceptor+differentiation.">Specific protein kinase C isoforms are required for rod photoreceptor differentiation.</a> The Journal of Neuroscience. 31 (50), 18606-18617 (2011).</li><li>Sokal, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+protein+kinase+C+isozymes+responsible+for+the+phosphorylation+of+photoreceptor-specific+RGS9-1+at+Ser475.">Identification of protein kinase C isozymes responsible for the phosphorylation of photoreceptor-specific RGS9-1 at Ser475.</a> The Journal of Biological Chemistry. 278 (10), 8316-8325 (2003).</li><li>Rose, K., Walston, S. T., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+photoreceptor+cell+compartments+in+mouse+retina+for+protein+analysis.">Separation of photoreceptor cell compartments in mouse retina for protein analysis.</a> Molecular Neurodegeneration. 12 (1), 28 (2017).</li><li>Wright, A. F., Chakarova, C. F., Abd El-Aziz, M. M., Bhattacharya, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoreceptor+degeneration:+genetic+and+mechanistic+dissection+of+a+complex+trait.">Photoreceptor degeneration: genetic and mechanistic dissection of a complex trait.</a> Nature Reviews. Genetics. 11 (4), 273-284 (2010).</li></ol>

تؤثر العديد من أمراض الشبكية على خلايا المستقبلات الضوئية للقضيب ، مما يؤدي إلى موت القضيب ، وفي النهاية ، فقدان البصر الكامل37. تم تلخيص جزء كبير من الأصول الجينية والميكانيكية لتنكس الشبكية البشري بنجاح في العديد من نماذج الفئران على مر السنين. وفي هذا السياق، فإن القدرة على...

تعد خلايا المستقبلات الضوئية القضيبية ، المعبأة بإحكام في الطبقة الخارجية من شبكية العين العصبية ، جزءا لا يتجزأ من رؤية الضوء الخافت. للعمل كعدادات فوتون مخلصة ، تستخدم القضبان مسار إشارات قائم على بروتين G ، يسمى النقل الضوئي ، لتوليد استجابات سريعة وتضخيمية وقابلة للتكرار لالتقاط فوتون واحد. تؤدي هذه الاستجابة للضوء في النهاية إلى حدوث تغيير في التيار في غشاء البلازما ويتم الإشارة إليها لاحقا إلى بقية النظام البصري1. كما يوحي اسمها ، فإن كل خلية قضيب لها شكل مميز يشبه القضيب وتظهر مورفولوجيا خلوية شديدة الاستقطاب ، تتكون من جزء خارجي (OS) ، وجزء داخلي (IS) ، وجسم خلية (CB) ، ومحطة متشابكة (ST). تحتوي كل حجرة تحت الخلية على آلات بروتين محددة (مرتبطة بالغشاء وقابلة للذوبان) ، وميزات جزيئية حيوية ، ومجمعات بروتينية تلعب أدوارا حاسمة مثل النقل الضوئي البصري ، والتدبير المنزلي العام وتخليق البروتين ، والانتقال المشبكي 2,3.
منذ أكثر من 30 عاما ، لوحظت لأول مرة الحركة المتبادلة المعتمدة على الضوء للبروتينات دون الخلوية ، وتحديدا transducin (بعيدا عن نظام التشغيل) و arrestin (نحو نظام التشغيل) ، 4،5،6،7. في وقت مبكر، تم استقبال هذه الظاهرة المرصودة بتشكك، ويرجع ذلك جزئيا إلى ضعف الكيمياء النسيجية المناعية لإخفاء الظهارة8. في أوائل عام 2000 ، تم تأكيد نقل البروتين المعتمد على التحفيز باستخدام تقنية تقسيم فيزيائية صارمة وشاقة9. كشف التقسيم العرضي التسلسلي لشبكية القوارض المجمدة المسطحة المثبتة متبوعة بالنشاف المناعي أن transducin9,10 و arrestin11,12 و recoverin13 كلها تخضع لإعادة توزيع تحت الخلايا استجابة للضوء. ويعتقد أن النقل المدفوع بالضوء لبروتينات الإشارات الرئيسية هذه لا ينظم فقط حساسية سلسلة النقل الضوئي9،14،15 ، ولكن قد يكون أيضا واقيا عصبيا ضد تلف الضوء16،17،18. نظرا لأن نقل البروتين المدفوع بالضوء في القضبان يبدو مهما جدا لبيولوجيا الخلية وعلم وظائف الأعضاء ، فإن التقنيات التي تسمح بعزل المقصورات تحت الخلوية المختلفة لتحديد توزيع البروتين هي أدوات بحثية قيمة.
حاليا ، هناك عدد قليل من الطرق التي تهدف إلى عزل المقصورات تحت الخلوية قضيب. ومع ذلك ، يمكن أن تكون هذه الطرق طويلة ويصعب استنساخها ، أو تتطلب كمية كبيرة من عزل الشبكية. على سبيل المثال، تستخدم مستحضرات الجزء الخارجي للقضيب (ROS) عن طريق الطرد المركزي بتدرج الكثافة19 لفصل ROS عن تجانس الشبكية. تستخدم هذه الطريقة على نطاق واسع للبقع الغربية ، ولكن الإجراء يستغرق وقتا طويلا للغاية ويتطلب ما لا يقل عن 8-12 شبكية العين الفئران20. من ناحية أخرى ، تم تنفيذ التقسيم العرضي التسلسلي للفئران المجمدة وشبكية العين الفئران بنجاح في عزل OS ، IS ، CB ، و ST9,11,13. ومع ذلك ، فإن هذه الطريقة صعبة تقنيا بسبب ضرورة تسطيح شبكية العين الفئرانية الصغيرة والمنحنية للغاية بالكامل لمحاذاة طبقات الشبكية قبل التقسيم العرضي. نظرا لوجود عدد كبير من نماذج الفئران والفئران المعدلة وراثيا التي تلخص أمراض الجهاز البصري ، فإن إنشاء تقنية تفصل بشكل موثوق وسريع وسهل بين مقصورات القضبان الفردية يبشر بالخير في الكشف عن العمليات الفسيولوجية التي تحدث في كل حجرة متخصصة والآليات التي تكمن وراء العمليات البصرية في الصحة والمرض.
لتسهيل هذه التحقيقات ، نصف طريقتين للتقشير تعزلان المقصورات تحت الخلوية للقضيب بسهولة أكبر من البروتوكولات الحالية. تستخدم طريقة التقشير الأولى، المقتبسة من تقنية لفضح الخلايا ثنائية القطب المصنفة بالفلورسنت لتسجيل مشبك التصحيح21، ورق ترشيح السليلوز لإزالة ROS بالتتابع من شبكية العين الفئرانية الحية والمعزولة (الشكل 1). الطريقة الثانية، المقتبسة من إجراء يعزل طبقات خلايا الشبكية الأساسية الثلاث من شبكية العين chick22 و frog23، تستخدم شريطا لاصقا لإزالة الجزء الداخلي من ROS وقضيب (RIS) من شبكية العين المجففة بالتجميد (الشكل 2). يمكن إكمال كلا الإجراءين في 1 ساعة وهما سهل الاستخدام إلى حد كبير. نحن نقدم التحقق من فعالية هذين البروتوكولين للفصل للبقع الغربية من خلال استخدام شبكية العين المتكيفة مع الظلام والمعرضة للضوء من الفئران C57BL/6J لإثبات النقل الناجم عن الضوء لترانسدوكين القضيب (GNAT1) والاعتقالين (ARR1). علاوة على ذلك ، باستخدام طريقة تقشير الشريط ، نقدم أدلة إضافية على أنه يمكن استخدام تقنيتنا لفحص ومعالجة التناقضات بين بيانات توطين البروتين التي تم الحصول عليها بواسطة الكيمياء المناعية (ICC) والبقع الغربية. على وجه التحديد ، أظهرت تقنيتنا أن: 1) بروتين كيناز C-alpha (PKCα) isoform موجود ليس فقط في الخلايا ثنائية القطب ، ولكن أيضا في الفئران ROS و RIS ، وإن كان بتركيزات منخفضة24،25 ، و 2) رودوبسين كيناز (GRK1) موجود في الغالب في عينة نظام التشغيل المعزول. توضح هذه البيانات فعالية تقنيتي التقشير لدينا لفصل وتحديد كمية محددة من بروتينات القضيب والشبكية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 mL laboratory or media bottle equipped with a tubing cap adapter</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100% O2 tank</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000mL Bottle Top Filter, PES Filter Material, 0.22 &#956;m</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25-235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4X SDS Sample Buffer</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>70607-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Falcon tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-432-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95% O2 and 5% CO2 tank</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ames&#8217; Medium with L-glutamine, without bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A1420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2 (99%, dihydrate)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C-3881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drierite (Anhydrous calcium sulfate, &#62;98% CaSO4, &#62;2% CoCl2)</td>
			<td>WA Hammond Drierite Co LTD</td>
			<td>21005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Easy-Grip Petri Dish (polystyrene, 35 x 10 mm)</td>
			<td>Falcon-Corning</td>
			<td>08-757-100A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Easy-Grip Tissue Culture Dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Falcon-Corning</td>
			<td>08-772F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Feather Scalpel (No. 10, 40 mm)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100499-578</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Feather Scalpel (No. 11, 40 mm)</td>
			<td>VWT</td>
			<td>100499-580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl (99%)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P-4504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimble Kontes pellet pestle</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>z359971</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labconco Fast-Freeze Flasks</td>
			<td>Labconco</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LN2 (liquid nitrogen) + Dewar flask or similar vacuum flask</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M-9272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Q/de-ionized water</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4 (powder)</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td>4062-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl (crystal)</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>Sx0420-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>0865</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OmniPur EDTA</td>
			<td>EMD</td>
			<td>4005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OmniPur HEPES, Free Acid</td>
			<td>EMD</td>
			<td>5320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7793</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reynolds Wrap Aluminum Foil</td>
			<td>Reynolds Brands</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scotch Magic Tape (12.7 mm x 32.9 m)</td>
			<td>Scotch-3M</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium deoxycholate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D67501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrafuge mini centrifuge</td>
			<td>Labnet International, Inc</td>
			<td>C1301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue incubation chamber (purchased or custom made)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl</td>
			<td>J.T.Baker</td>
			<td>4103-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Signma-Aldrich</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VirTis Benchtop 2K Lyophilizer or equivalent machine</td>
			<td>SP Scientific</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Grade 413 Filer Paper (diameter 5.5 cm, pore size 5 &#956;m)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>28310-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman Grade 1 Qualitative Filter Paper (diameter 9 cm, pore size 11 &#956;m)</td>
			<td>Whatman/GE Healthcare</td>
			<td>1001-090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wide bore transfer pipet, Global Scientific</td>
			<td>VWR</td>
			<td>76285-362</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

two peeling methods for the isolation of photoreceptor cell compartments in the mouse retina for protein analysis

المستقبلات الضوئية رود هي خلايا عصبية حسية عالية الاستقطاب مع مقصورات متميزة. قضبان الماوس طويلة (~ 80 ميكرومتر) ورقيقة (~ 2 ميكرومتر) ويتم تعبئتها أفقيا في الطبقة الخارجية من شبكية العين ، طبقة المستقبلات الضوئية ، مما يؤدي إلى محاذاة المقصورات تحت الخلوية المماثلة. تقليديا ، تم استخدام التقسيم العرضي للشبكية المسطحة المجمدة لدراسة حركة وتوطين البروتينات داخل مقصورات قضيب مختلفة. ومع ذلك ، فإن الانحناء العالي لشبكية العين الفأر المهيمنة على القضيب يجعل التقسيم العرضي أمرا صعبا. بدافع من دراسة انتقال البروتين بين المقصورات ، قمنا بتطوير طريقتين للتقشير تعزلان بشكل موثوق الجزء الخارجي للقضيب (ROS) والمقصورات تحت الخلوية الأخرى للبقع الغربية. توفر تقنياتنا السريعة والبسيطة نسبيا كسور غنية ومحددة تحت الخلايا لقياس توزيع وإعادة توزيع بروتينات المستقبلات الضوئية المهمة في القضبان العادية كميا. علاوة على ذلك ، يمكن أيضا تكييف تقنيات العزل هذه بسهولة لعزل تكوين البروتين للطبقات الخلوية الأخرى والتحقيق فيه كميا داخل كل من شبكية العين السليمة والمتدهورة.

تم تطوير الاستراتيجيات الحالية لتوفير طرق سريعة وبسيطة نسبيا لعزل وتحليل البروتينات بين مقصورات دون خلية قضيب محددة لتحليل اللطخة الغربية. طبقنا تقنيتين متتابعتين للتقشير (الشكل 1 والشكل 2) متبوعتين بالنشاف المناعي لإثبات أنه يمكن استخدام هذه الطرق بشكل م...

Watch this Scientific Journal Video about Two Peeling Methods for the Isolation of Photoreceptor Cell Compartments in the Mouse Retina for Protein Analysis at JoVE.com

Two Peeling Methods for the Isolation of Photoreceptor Cell Compartments in the Mouse Retina for Protein Analysis

يقدم هذا البروتوكول تقنيتين لعزل المقصورات تحت الخلوية للمستقبلات الضوئية لقضيب الفئران لتحليل البروتين. تستخدم الطريقة الأولى الشبكية الحية وورق ترشيح السليلوز لفصل الأجزاء الخارجية للقضيب ، بينما تستخدم الطريقة الثانية شبكية العين المجففة بالتجميد والشريط اللاصق لتقشير طبقات القضبان الداخلية والخارجية.

طريقتان للتقشير لعزل مقصورات خلايا المستقبلات الضوئية في شبكية العين للفأر لتحليل البروتين

Rod photoreceptors are highly polarized sensory neurons with distinct compartments. Mouse rods are long (~80 &#181;m) and thin (~2 &#181;m) and are ...

تعمل تقنيتا التقشير الموجودتان هنا على عزل المقصورات تحت الخلوية الفردية للقضيب ، ويمكن أن تساعد في الكشف عن العمليات الفسيولوجية المهمة التي تحدث في كل حجرة متخصصة في قضبان صحية ومريضة. يمكن أن يكون عزل مقصورات خلايا قضيب مختلفة من شبكية العين الفأر تحديا. تستخدم هذه التقنيات البسيطة مواد مختبرية غير مكلفة وشائعة لعزل المقصورات تحت الخلوية للقضيب بشكل موثوق لتحليل البروتين.للبدء ، ضع قطعة من ورق الترشيح في طبق بتري مملوء بمخزن Ames HEPES العازل بفقاعات مع أكسجين 100٪. ثم، باستخدام ماصة نقل واسعة التجويف، انقل مستطيلا واحدا من شبكية العين تم تشريحه من ماوس C57 Black 6J عمره شهرين إلى ثلاثة أشهر. قم بتوجيه مقعر شبكية العين المقسمة لأعلى وتأكد من أن المستقبلات الضوئية متجهة لأسفل نحو أسفل الطبق.ثم، باستخدام ملاقط، أمسك برفق جوانب شبكية العين المقطعة إلى نصفين وحركها فوق ورقة الترشيح. بمجرد توسيط شبكية العين، حرك ورقة الترشيح لأعلى حتى تلمس شبكية العين المقطعة إلى النصف ورقة الترشيح لإنشاء جزء خارجي من القضيب، أو ROS لتصفية التصاق الورق. ارفع ورقة الترشيح بعناية مع شبكية العين المرفقة خارج المخزن المؤقت Ames HEPES.ضع الجانب السفلي من ورقة الترشيح على منشفة ورقية وربت مرتين إلى ثلاث مرات حتى تجف. أضف قطرة من Ames HEPES على جانب ورق الترشيح مع شبكية العين وضع ورقة الترشيح على منشفة ورقية مرة أخرى حتى تجف. بعد ذلك ، ضع ورقة الترشيح مع شبكية العين مرة أخرى في طبق بتري ، وباستخدام ملاقط ، ادفع بلطف جميع حواف شبكية العين المقطعة إلى النصف لأعلى وبعيدا عن ورق الترشيح من جميع الجوانب.قشر الشبكية بدقة بعيدا عن ورق الترشيح، مع لمس المحيط الأقصى للشبكية فقط للحفاظ على سلامتها الهيكلية. بعد ذلك ، ارفع ورقة الترشيح من طبق بتري وأزل السائل الزائد على منشفة ورقية ، مما يضمن أن الجانب الملامس لشبكية العين لا يتصل بالمنشفة الورقية. ضع ورقة الترشيح مع طبقة ROS الجزئية في أنبوب ملصق على الجليد ، واحتفظ بالشبكية المقشرة مغمورة في مخزن Ames HEPES المؤقت.كرر عملية التقشير لهذه الشبكية المقطعة إلى نصفين حوالي سبع إلى ثماني مرات لإزالة طبقة ROS بأكملها. بعد كل تقشير، ضع ورقة الترشيح في نفس الأنبوب لدمج جميع ROS المعزولة من شبكية العين المقطعة إلى نصفين. احتفظ بالأنبوب الذي يحتوي على جميع قشور ورق الترشيح ل ROS المعزول على الجليد للاستخدام الفوري.باستخدام ملاقط ، انقل الشبكية المقشرة المتبقية إلى أنبوب ملصق بشكل مناسب واحتفظ بالأنبوب على الجليد للاستخدام الفوري. لإعداد عينة الشبكية لتجفيدها، ضع قطعة من ورق الترشيح وانقل شبكية العين المقطعة إلى النصف إلى طبق بتري مملوء بمخزن رينجر البارد. بعد ذلك ، باستخدام ملاقط ، اقلب شبكية العين بعناية بحيث تكون مقعرة وتحركها لتستقر فوق ورقة الترشيح.ارفع ورق الترشيح من الحواف لأعلى حتى تلامس قطعة شبكية العين المقطعة إلى النصف ورقة الترشيح. استمر في رفع ورقة الترشيح من حل Ringer. ثم ضع الجانب السفلي من ورقة الترشيح على منشفة ورقية وربت بعناية مرتين إلى ثلاث مرات لإزالة السائل الزائد.بعد ذلك ، التقط ورقة الترشيح باستخدام ملاقط وأضف قطرة من Ringer البارد على جانب ورق الترشيح مع شبكية العين. مرة أخرى ، ضع ورقة الترشيح على منشفة ورقية لإزالة السائل الزائد. قم بتخزين كل عينة من شبكية العين وورق الترشيح الملتصقة في طبق بتري مملوء بعينات رينجر الباردة حتى تصبح جاهزة لتجميد جميع العينات.بعد ذلك ، باستخدام الملقط ، ارفع كل عينة من المخزن المؤقت ل Ringer البارد ، مما يضمن أن الملقط يلامس حواف ورق الترشيح فقط ، وتجنب شبكية العين المقطعة إلى النصف. ضع الجانب السفلي من كل ورقة ترشيح على منشفة ورقية لإزالة السائل الزائد. ثم ، أضف قطرة من PBS الباردة على جانب ورقة الترشيح حيث يتم التصاق شبكية العين وربت ورقة الترشيح على منشفة الورق مرة أخرى.ضع جميع قطع ورق الترشيح في طبق بتري ، وباستخدام ورق مناديل خالية من الوبر ، قم بإزالة أي سائل زائد يحيط بورق التصفية. بعد ذلك ، لف الطبق بالكامل بإحكام بورق الألومنيوم وتأكد من تأمين حواف رقائق الألومنيوم وضغطها بسلاسة في الجزء السفلي من طبق بتري. ثقب حفنة من الثقوب من 0.1 إلى 0.2 ملم في غطاء رقائق الألومنيوم.بعد ذلك ، باستخدام ملقط معدني ، قم بخفض طبق بتري المغطى بورق الألومنيوم تدريجيا إلى نيتروجين سائل. احتفظ بالعينات في النيتروجين السائل حتى تصبح جاهزة للتجميد. من أجل التجفيد ، ضع طبق بتري المغطى بورق الألومنيوم في قارورة تجفيف بالتجميد وقم بإرفاقه بآلة lyophilizer وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة.تجفيد الشبكية لمدة 30 دقيقة. بعد التجفيد ، قم بجمع الجزء الخارجي والداخلي من القضيب عن طريق وضع قطعة صغيرة من الشريط بعناية فوق شبكية العين المجففة بالتجميد وتطبيق ضغط طفيف مع الملقط لضمان ارتباطه بطبقة المستقبلات الضوئية. قم بتقشير الشريط ببطء وتأكد من التصاق كل من ROS و RIS بالشريط.سيكون هناك فيلم أبيض رقيق على السطح المكسور. هذا هو RIS. لفصل هذا RIS، ضع قطعة أخرى من الشريط وادفع الشريط لأسفل على السطح المكسور.ثم ، ضع قطعة الشريط مع الطبقة البرتقالية الوردية فقط في أنبوب طرد مركزي دقيق يحمل علامة ROS ، وقطع من الشريط مع الطبقة البيضاء الرقيقة في أنبوب آخر يسمى RIS. بعد ذلك ، باستخدام الشريط ، قم بجمع أنسجة الشبكية المتبقية الموجودة على ورقة الترشيح عن طريق تقشير الطبقة البيضاء السميكة. ثم ضع هذا العزل في أنبوب يحمل اسم OIS.إذا كنت تستخدم في نفس اليوم ، فقم بتخزين الطبقات المعزولة من شبكية العين المجففة بالتجميد في درجة حرارة الغرفة. في الحيوانات المتكيفة مع الظلام، تطابق توزيع GNAT1 و ARR1 بشكل وثيق مع توزيعات الحالة المظلمة المعروفة، حيث كانت إشارة GNAT1 أقوى بشكل واضح في عزل ROS، وكانت إشارة ARR1 أكثر قوة في عزل ROS. أظهر التقدير الكمي لإشارات GNAT1 و ARR1 اختلافات كبيرة بين ظروف الضوء الداكن ل GNAT1 و ARR1 في عينات ROS و ROS.في كل من العينات المظلمة والمكيفة مع الضوء ، يتم استبعاد إشارات G beat 5S والسيتوكروم C والأكتين من عينات ROS ، مما يدل على عدم وجود تلوث من الطبقات الخلوية الأخرى. بالإضافة إلى ذلك ، كانت إشارة G beta 5L مرئية بوضوح في عينات ROS. أظهر الفحص المجهري الإلكتروني الماسح لأسطح شبكية العين السليمة والمقشرة بالتجميد أنه قبل التقشير بشريط لاصق ، تطابق سطح الشبكية المجمدة بالتجميد السليم بشكل وثيق مع ROS الأسطواني المميز.بعد تقشير الشريط الأولي ، بدا أن ROS و RIS قد تمت إزالتهما بالكامل ، كما يتضح من الطبقة النووية الموحدة الموجودة على سطح الشبكية المتبقية والمقشرة والمجمدة. أزالت قشور الشريط اللاحقة RIS من السطح الحر للطبقة المقشرة. أظهرت هذه التقنية أيضا أن التفاعل المناعي GRK1 كان الأكثر كثافة في عينات ROS في شبكية العين المعرضة للضوء ، وغائبا في عينات OIS.وعلى العكس من ذلك، أظهرت عينات ROS و RIS إشارة باهتة ل PKC alpha، والتي لا يتم اكتشافها عادة في ROS أو RIS عن طريق تلطيخ التألق المناعي. وأخيرا، يمكن أن يؤدي تقشير الشريط دون المستوى الأمثل إلى إنتاج عينات ملوثة قليلا. كانت عينة RIS ملوثة ببعض عينات OIS ، مما أدى إلى إنتاج كل من نطاقات G beta 5L و G beta 5S ، وإشارة ألفا PKC أعلى.يجب توخي الحذر عند تجميد شبكية العين. إذا تم استخدام تقنية التجفيد غير الصحيحة ، فقد تذوب شبكية العين ، مما يجعل عزل الطبقات دون الخلوية المختلفة للقضيب بواسطة شريط مستحيل. وقد سمح استخدام طريقة تقشير الشريط هذه بالاقتران مع qRT-PCR بفصل نسخ المستقبلات الضوئية عن بقية شبكية العين.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

Electroporation في الجسم الحي من الشبكية ماوس النامية

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Methods for the Modulation and Analysis of NF-&#954;B-dependent Adult Neurogenesis

Methods for the Modulation and Analysis of NF-ÃƒÅ½Ã‚ÂºB-dependent Adult Neurogenesis

طرق لتعديل وتحليل NF كيلوبايت التي تعتمد على تكوين الخلايا العصبية الكبار

The hippocampus plays a pivotal role in the formation and consolidation of episodic memories, and in spatial orientation. Historically, the adult ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

ماوس واحدة، واثنين من الثقافات: العزلة وثقافة الكبار الخلايا الجذعية العصبية من المناطق العصبية اثنان من الفئران الفردية

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

تقييم الأوعية الدموية التجديد في الجهاز العصبي المركزي عن طريق الماوس الشبكية

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

Vibratome Sectioning Mouse Retina to Prepare Photoreceptor Cultures

Vibratome باجتزاء شبكية العين الفأر لإعداد الثقافات مبصرة

The retina is a part of the central nervous system that has organized architecture, with neurons in layers from the photoreceptors, both rods and cones in ...

Methods for Cell-attached Capacitance Measurements in Mouse Adrenal Chromaffin Cell

طرق الخلية المرفقة قياسات السعة في ماوس الكظرية أليف الكروم خلية

Neuronal transmission is an integral part of cellular communication within the brain. Depolarization of the presynaptic membrane leads to vesicle fusion ...

Imaging Ca2+ Dynamics in Cone Photoreceptor Axon Terminals of the Mouse Retina

Imaging Ca2+ Dynamics in Cone Photoreceptor Axon Terminals of the Mouse Retina

التصوير كاليفورنيا<sup&gt; 2+</sup&gt; حيوية في محطات المخروط مبصرة أكسون من شبكية العين الفأر

Retinal cone photoreceptors (cones) serve daylight vision and are the basis of color discrimination. They are subject to degeneration, often leading to ...

In-depth Physiological Analysis of Defined Cell Populations in Acute Tissue Slices of the Mouse Vomeronasal Organ

في التحليل المتعمق الفسيولوجية لبالسكان خلية المعرفة في الحادة الأنسجة شرائح من الميكعي الجهاز ماوس

In most mammals, the vomeronasal organ (VNO) is a chemosensory structure that detects both hetero- and conspecific social cues. Vomeronasal sensory ...

Where You Cut Matters: A Dissection and Analysis Guide for the Spatial Orientation of the Mouse Retina from Ocular Landmarks

حيث قمت بقص المسائل: تشريح وتحليل دليل للتوجه المكاني للشبكية الماوس من معالم بصري

Accurately and reliably identifying spatial orientation of the isolated mouse retina is important for many studies in visual neuroscience, including the ...

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

في فيفو اثنين-فوتون تصوير الخلايا العصبية القشرية في الفئران حديثي الولادة

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging ...