Name: an explant system for time-lapse imaging studies of olfactory circuit assembly in drosophila
Uploaded: 2021-10-13T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Explant System for Time-Lapse Imaging Studies of Olfactory Circuit Assembly in Drosophila at JoVE.com

우리는 N. Özel과 R. Hiesinger에게 explant 문화에 대한 조언에 감사드립니다. M. 이광자 현미경의 기술적 도움을 위한 바그너; D.J. 형질전환 파리를 생성하기 위한 루긴불; D. 피지 소프트웨어 분석의 제안에 대한 프리드만; Y. 비행 작업에 대한 지원을위한 Ge; C. McLaughlin과 K.K.L. Wong 은 원고에 대한 의견을 제시합니다. L.L.은 하워드 휴즈 의학 연구소 연구원입니다. 이 연구는 국립 보건원 보조금 1K99DC01883001 (T.L.) 및 R01-DC005982 (L.L.)에 의해 지원되었습니다.

1. 시약의 제조
참고: 이 프로토콜의 모든 단계는 달리 설명되지 않는 한 실온(20-25°C)에서 수행됩니다.
<ol><li>시간 경과 영상화 동안 외식편을 고정화하기 위한 배양 접시를 준비하기 위해, 0.5 cm 두께의 실가드(사용 전에 10:1 비율로 두 액체 성분을 완전히 혼합)를 60 mm x 15 mm 페트리 접시의 바닥 표면에 놓고 실온에서 48시간 동안 경화시킨다(도 2A</...

<ol>
	<li>Kolodkin, A. L., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+molecules+of+neuronal+wiring:+a+primer.">Mechanisms and molecules of neuronal wiring: a primer.</a> Cold Spring Harbor Perspective Biology. 3 (6), 001727 (2011).</li><li>Vosshall, L. B., Stocker, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+architecture+of+smell+and+taste+in+Drosophila.">Molecular architecture of smell and taste in Drosophila.</a> Annual Review Neuroscience. 30, 505-533 (2007).</li><li>Hong, W., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+control+of+wiring+specificity+in+the+fly+olfactory+system.">Genetic control of wiring specificity in the fly olfactory system.</a> Genetics. 196 (1), 17-29 (2014).</li><li>Bentley, D., Caudy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pioneer+axons+lose+directed+growth+after+selective+killing+of+guidepost+cells.">Pioneer axons lose directed growth after selective killing of guidepost cells.</a> Nature. 304 (5921), 62-65 (1983).</li><li>Godement, P., Wang, L. C., Mason, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+axon+divergence+in+the+optic+chiasm:+dynamics+of+growth+cone+behavior+at+the+midline.">Retinal axon divergence in the optic chiasm: dynamics of growth cone behavior at the midline.</a> Journal of Neuroscience. 14 (11), 7024-7039 (1994).</li><li>Harris, W. A., Holt, C. E., Bonhoeffer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+axons+with+and+without+their+somata,+growing+to+and+arborizing+in+the+tectum+of+Xenopus+embryos:+a+time-lapse+video+study+of+single+fibres+in+vivo.">Retinal axons with and without their somata, growing to and arborizing in the tectum of Xenopus embryos: a time-lapse video study of single fibres in vivo.</a> Development. 101 (1), 123-133 (1987).</li><li>Ozel, M. N., Langen, M., Hassan, B. A., Hiesinger, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Filopodial+dynamics+and+growth+cone+stabilization+in+Drosophila+visual+circuit+development.">Filopodial dynamics and growth cone stabilization in Drosophila visual circuit development.</a> Elife. 4, 10721 (2015).</li><li>Li, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+bases+of+olfactory+circuit+assembly+revealed+by+systematic+time-lapse+imaging.">Cellular bases of olfactory circuit assembly revealed by systematic time-lapse imaging.</a> Cell. 184, 5107-5121 (2021).</li><li>Chen, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lattice+light-sheet+microscopy:+Imaging+molecules+to+embryos+at+high+spatiotemporal+resolution.">Lattice light-sheet microscopy: Imaging molecules to embryos at high spatiotemporal resolution.</a> Science. 346 (6208), 1257998 (2014).</li><li>Liu, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observing+the+cell+in+its+native+state:+Imaging+subcellular+dynamics+in+multicellular+organisms.">Observing the cell in its native state: Imaging subcellular dynamics in multicellular organisms.</a> Science. 360 (6386), (2018).</li><li>Wang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+adaptive+optical+recovery+of+optimal+resolution+over+large+volumes.">Rapid adaptive optical recovery of optimal resolution over large volumes.</a> Nature Methods. 11 (6), 625-628 (2014).</li><li>Kohl, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrafast+tissue+staining+with+chemical+tags.">Ultrafast tissue staining with chemical tags.</a> Proceedings of the National Academy of Science U. S. A. 111 (36), 3805-3814 (2014).</li><li>Sutcliffe, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Second-Generation+Drosophila+Chemical+Tags:+Sensitivity,+Versatility,+and+Speed.">Second-Generation Drosophila Chemical Tags: Sensitivity, Versatility, and Speed.</a> Genetics. 205 (4), 1399-1408 (2017).</li><li>Grimm, J. B., Brown, T. A., English, B. P., Lionnet, T., Lavis, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Janelia+Fluor+HaloTag+and+SNAP-Tag+Ligands+and+Their+Use+in+Cellular+Imaging+Experiments.">Synthesis of Janelia Fluor HaloTag and SNAP-Tag Ligands and Their Use in Cellular Imaging Experiments.</a> Methods Molecular Biology. 1663, 179-188 (2017).</li></ol>

초파리 안테나-뇌 explant는 후각 회로의 정상적인 표적을 유지합니다. 우리는 발달이 생체 내에서보다 2 배 느린 생체 외 발달을 알아 차렸다. explant 시스템은 여섯 가지 유형의 ORN을 호스팅하는 상악 마비를 유지하지 않습니다. 정상적인 발달이 생체 외에서 되풀이되도록하기 위해, 안테나 신경의 스트레칭은 explant 해부 중에 피할 필요가 있습니다. 생체외 배양 동...

뉴런은 뇌의 적절한 기능에 필수적인 회로를 형성하기 위해 정확하게 상호 연결되어 있습니다. 100 년 이상 동안 신경 과학자들은 신경돌기가 극도의 정밀도로 중간 및 최종 목표를 향해 어떻게 확장되는지 이해하려고 노력해 왔습니다. 결과적으로, 그들은 신경 세포 과정을 개발하기위한 안내 단서를 인코딩하는 중요한 유전자를 확인했습니다1. Drosophila 후각 시스템은 후각 수용체 뉴런 (ORNs, 일차 감각 뉴런)이 고정 관념의 크기, 모양 및 상대적 위치를 가진 50 개의 식별 가능한 사구체에 투사하여 50 가지 유형의 2 차 투영 뉴런 (PN)에서 수상 돌기와 시냅스 연결을 형성하기 때문에이 과정을 조사하는 데 탁월한 모델을제공합니다 (그림 1A ). 따라서, 파리 후각 시스템에서 시냅스(사구체) 분해능에서 돌연변이 표현형을 확인하는 것은 비교적 쉽다. 이로 인해 후각 회로 어셈블리를 조절하는 중요한 유전자가 발견되었습니다3.
플라이 후각 회로의 조립은 시간적, 공간적으로 조정 된 발달 과정3에 의존합니다. ORN과 PN은 뚜렷한 세포 운명을 획득하여 배선 특이성에 대한 프로그램을 설정합니다. 다음으로, PN 수상 돌기는 안테나 로브를 미리 패턴화합니다(그림 1B). ORN의 축삭은 동측성 안테나 엽을 우회하고 뇌의 중간 선을 교차하여 대측 안테나 엽에 도달합니다. 그 후, ORN 축삭은 ipsi- 및 대측성 안테나 엽 모두를 침범하고 특정 사구체에서 파트너 PN의 수상 돌기와 함께 시냅스를 형성합니다. 후각 회로 조립을 위한 이 거친 모델은 개발 중 중간 시점으로부터 고정된 샘플의 특성화를 기반으로 제안되었다. 열악한 시간적 분해능과 고정 조직으로부터 발달 전반에 걸쳐 동일한 뉴런 과정을 따를 수 없다는 것은 회로 조립 공정에 대한 기계론적 이해를 제한한다.
안테나 로브가 번데기 케이스 내부의 불투명 한 지방체로 둘러싸여있을 때 번데기 단계의 전반부에서 배선 과정이 발생하기 때문에 생체 내에서 ORN 및 PN 프로세스를 라이브하는 것은 기술적으로 어렵습니다. 따라서 손상되지 않은 번데기에서 발달하는 후각 회로를 직접 이미지화하는 것은 불가능합니다. 생체외에서 배양된 해부된 조직은 조직 불투명도를 회피할 수 있고, 신경 발달4,5,6을 연구하는데 성공적으로 이용되었다. 번데기 뇌에서 뉴런 배선을 연구하기 위해 유사한 생체외 외래 배양 전략을 사용하는 과제는 배양 조건에서 정확한 뉴런 표적화를 되풀이하는지 여부입니다. 플라이 안구-뇌 복합체(7)에 대한 이전에 보고된 생체외 배양 조건에 기초하여, 번데기 전체 뇌, 안테나, 및 연결 안테나 신경을 온전하게 포함하는 외래 식물이 최근에 개발되어 후각 회로의 정확한 표적화를 유지하고 매 20분마다8의 주파수에서 최대 24시간 동안 이광자 현미경 기반 라이브 이미징을 실시할 수 있다. . 여기에서, explant 배양 및 이미징의 상세한 프로토콜이 설명된다. explant 시스템은 후각 회로 및 중앙 뇌의 잠재적으로 다른 회로의 어셈블리를 연구하는 강력한 방법을 제공합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>20-hydroxyecdysone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H5142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chameleon Ti:Sapphire laser</td>
			<td>Coherent</td>
			<td>Coherent MRU X1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10082147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human insulin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12585014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging software</td>
			<td>Prairie</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minutien Pins</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen cylinder</td>
			<td>Praxair</td>
			<td>OX M-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schneider&#8217;s Drosophila Medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>21720024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYLGARD 184 Silicone Elastomer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NC0162601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Two-photon microscopy</td>
			<td>Bruker</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>water immerse objective (20X)</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>421452-9800-000</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an explant system for time-lapse imaging studies of olfactory circuit assembly in drosophila

~ 뉴런은 뇌의 적절한 기능에 필수적인 회로를 형성하기 위해 정확하게 상호 연결되어 있습니다. Drosophila 후각 시스템은 안테나와 상악 마비의 50 가지 유형의 후각 수용체 뉴런 (ORNs)이 안테나 엽의 50 식별 가능한 사구체에 축색돌기를 투사하고 50 가지 유형의 이차 프로젝션 뉴런 (PN)의 수상 돌기와 시냅스 연결을 형성하기 때문에이 과정을 조사하는 훌륭한 모델을 제공합니다. 이전의 연구는 주로 고정 된 조직을 사용하여 후각 회로에서 정확한 표적화를 조절하는 중요한 분자를 확인하는 데 중점을 두었습니다. 여기에서는 문화에서 후각 회로 조립의 주요 발달 이정표를 되풀이하는 안테나 - 뇌 explant 시스템이 설명됩니다. 외부 큐티클을 해부하고 번데기 뇌를 덮고있는 불투명 한 지방체를 청소함으로써 살아있는 뇌에서 단일 뉴런의 고품질 이미지를 이광자 현미경을 사용하여 수집 할 수 있습니다. 이를 통해 살아있는 조직으로부터 단일 ORN 축삭 표적화의 타임랩스 이미징이 가능합니다. 이 접근법은 이전에 확인 된 중요한 유전자의 중요한 세포 생물학적 맥락과 기능을 밝히고 회로 조립의 동적 과정을 뒷받침하는 메커니즘을 식별하는 데 도움이됩니다.

ORN 축삭은 18 h와 36 h APF 사이의 안테나 엽에 도착합니다. 그런 다음 안테나 엽을 탐색하고 미드 라인을 건너 사구체를 신경질합니다. 비디오 1은 24시간 동안 매 20분마다 촬영된 여러 개의 개별적으로 식별 가능한 축삭에 대한 전체 과정을 보여주는 대표적인 비디오 입니다. TurboReg를 사용하여 등록하기 전에, 축삭은 뇌가 발달함에 따라 측면 표류를 나타냅니다 (비디오의 전반부). 등록...

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An Explant System for Time-Lapse Imaging Studies of Olfactory Circuit Assembly in Drosophila

이 프로토콜은 후각 회로 어셈블리의 연구를 위한 안테나-뇌 explant 시스템의 해부 절차, 배양 조건 및 라이브 이미징을 기술한다.

초파리의 후각 회로 어셈블리의 타임랩스 이미징 연구를위한 Explant 시스템

~Neurons are precisely interconnected to form circuits essential for the proper function of the brain. The Drosophila olfactory system provides an ...

이 프로토콜은 살아있는 이미지, 발달하는 두뇌에서 단일 축삭 수준에서 후각 회로 어셈블리를 비행하는 방법을 제시합니다. 개발 뇌를 덮고있는 조직을 청소하기 위해 해부, 우리는 내부 뇌에서 고품질의 이미지를 수집 할 수 있습니다. 이 방법은 회로 개발의 세포 생물학적 기초에 대한 귀중한 통찰력을 제공합니다.다른 회로의 개발을 연구하기 위해 쉽게 수정할 수 있습니다. 사람이 미세 해부에서 안정적인 손 제어를 수행하는 데는 약간의 시간이 걸립니다. 더 많은 연습이 도움이 될 것입니다.먼저 페트리 접시의 바닥면에 0.5cm 두께의 실가드를 깔고 상온에서 48시간 동안 경화시켜 타임랩스 이미징 동안 외식편을 동원하기 위한 배양 접시를 준비한다. 포셉을 사용하여 이 플레이트에 explant를 고정시키기 위한 마이크로 핀을 준비하려면 한쪽에 날카로운 끝이 정렬된 테이프에 여러 개의 마이크로 핀을 붙이고 가위로 두 밀리미터의 날카로운 끝을 자릅니다. 그런 다음 포셉을 사용하여 절단 된 마이크로 핀을 미리 만들어진 Sylgard 플레이트의 Sylgard 층에 삽입하십시오.브러시를 사용하여 한 시간 안에 번데기를 형성하는 흰 번데기를 모아 새 약병으로 옮깁니다. 번데기를 섭씨 37도에서 40분 동안 템퍼링된 수조에서 인큐베이션하여 무작위 유형으로부터 희소 ORN 클론을 유도한다. 열 충격 후, 바이알을 섭씨 25도에 30 시간 동안 두어 번데기 형성 후 30 시간 동안 번데기가 숙성됩니다.그런 다음 텍스트 원고에 설명 된대로 explant를위한 배양 배지를 준비하고 섭씨 네 도에 보관하십시오. 이미징 당일, 태아 소 혈청, 인간 인슐린 원액 및 에탄올에 용해된 20개의 하이드록시에크디손 원액을 슈나이더 초파리 배지 45밀리리터가 들어있는 50밀리리터 바이알에 첨가한다. 잘 섞어서 전체 매체 15 밀리리터를 새로운 50 밀리리터 원뿔형 튜브로 옮기고 나머지 전체 매체를 섭씨 4도에 일주일 동안 보관하십시오.이어서, 전체 배지를 함유하는 튜브 개구부를 파라핀 필름으로 덮고, 20 내지 30분 동안 초당 하나의 기포의 속도로 멸균된 오밀리리터 피펫 팁을 통해 액체 표면 아래에 산소 버블을 펌핑함으로써 배지를 산소화한다. 다음으로, 해부 우물 표면을 살균하고 이전에 준비된 Sylgard 플레이트를 70 % 에탄올로 소독하고 사용 전에 건조시킵니다. 브러시를 사용하여 30 시간 APF 번데기를 티슈 페이퍼로 옮겨 번데기의 외부 표면을 5 분 동안 건조시킵니다.유리 슬라이드에 양면 테이프를 적용한 후 말린 번데기를 등쪽이 위쪽을 향하게하여 테이프의 끈적 끈적한 표면에 조심스럽게 부착했습니다. 번데기를 브러시로 부드럽게 눌러 번데기를 손상시키지 않고 복부 측면을 테이프에 올바르게 부착하십시오. 갈색 번데기 케이스와 번데기 사이에 포셉의 날카로운 팁 하나를 옆쪽에서 삽입하고 번데기의 후부 끝까지의 선을 통해 갈색 번데기 케이스를 조심스럽게 부수십시오.갈색 번데기 케이스가 열리면 포셉을 사용하여 번데기를 부드럽게 잡고 산소가 함유 된 전체 배지 한 밀리리터가 들어있는 해부 우물로 옮깁니다. 번데기를 배지에 담그고 우물 바닥에 가라 앉히십시오. 번데기에서 안테나 뇌를 해부하려면 한 손으로 포셉을 사용하여 번데기를 부드럽게 잡고 한 쌍의 미세 가위를 사용하여 번데기 안쪽에 높은 압력을 방출하는 번데기의 뒤쪽에서 작은 구멍을 만듭니다.구멍에서 시작하여 복부 미드 라인을 통해 목까지 자른 다음 목의 둘레를 잘라 번데기의 몸에서 머리를 분리하고 몸을 다른 우물에 놓습니다. 다음으로, 뇌의 등쪽을 덮고있는 투명한 큐티클을 잘라 뇌의 상부에 지방체를 노출시켜 망막과 안테나가 부착 된 큐티클을 유지하고 유사하게 뇌의 복부 쪽에서 큐티클을 자릅니다. P10 피펫을 사용하여 머리의 등쪽 및 복부 측면의 열린 영역을 향해 매체를 피펫하여 뇌와 안테나를 덮고있는 지방체를 부드럽게 씻어냅니다.PN 수상 돌기 표적화에 대한 양측 ORN 축삭 또는 ORN 축삭의 상호 작용을 연구하기 위해, 큐티클과 뇌 사이에 미세 가위의 블레이드를 조심스럽게 배치하고 관심있는 안테나 신경을 절단하여 단계 동안 안테나 신경을 절단하십시오. 해부된 explant를 Sylgard 플레이트로 옮기려면 산소가 공급된 전체 배지의 약 200 마이크로리터 물방울을 Sylgard 표면에 놓습니다. 해부된 트렁크로부터 유래된 지방체를 200 마이크로리터 피펫 팁을 통해 여러 번 피펫 내부 표면을 코팅하여 해부로부터 실가드 플레이트 상의 배지 액적으로 이송하는 동안 외식편이 피펫 팁에 달라붙는 것을 방지한다.포셉을 사용하여 두 개의 광학 로브의 Sylgard 층에 explant를 고정시킨 다음 Sylgard 플레이트를 이미징 스테이션에 조심스럽게 배치하고 테이프로 플레이트를 고정시킨 다음 P1000 피펫을 사용하여 산소가 공급된 전체 매체 10밀리리터를 Sylgard 플레이트에 천천히 추가합니다. ORN 축삭은 18 시간에서 36 시간 APF 사이에 안테나 엽에 도착한 다음 안테나 엽을 탐색하고 미드 라인을 건너 사구체를 혁신합니다. 등록 전에, 축삭은 뇌가 발달함에 따라 약간의 측면 표류를 나타 냈고, 등록 후 표류가 수정되었습니다.추출된 ORN 축색돌기의 사구체 동일성은 뉴로필 마커 및 카데린의 면역염색에 의해 밝혀졌다. 내부 엽 지도와 비교함으로써, 각 사구체의 정체가 결정될 수 있었다. 생체외 배양 동안, 박테리아 성장은 보통 후각 회로의 휴식 발달을 일으킨다.따라서 영상화 전에 문화용 접시와 핀을 철저히 살균하고 영상실을 깨끗하고 격리된 상태로 유지하는 것이 중요하다. 더 높은 공간 시간 분해능을 달성하기 위해,이 explant 시스템은 적응 광학 격자 광 현미경 인 고급 현미경을 사용하여 이미징 할 수 있습니다. 공장 회로 개발이 예로 여기에 표시되었지만,이 시스템은 잠재적으로 개발 중추 뇌의 다른 회로 및 발달 과정에 대한 연구로 확장 될 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

An Explant System for Time-Lapse Imaging Studies of Olfactory Circuit Assembly in Drosophila

An Optogenetic Approach for Assessing Formation of Neuronal Connections in a Co-culture System

공동 문화 시스템에 신경 연결의 형성을 평가하기위한 Optogenetic 접근

Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are ...

연구

발생학

Capturing Tissue Repair in Zebrafish Larvae with Time-lapse Brightfield Stereomicroscopy

시간 경과 브라이트 실체 현미경으로 Zebrafish의 애벌레에서 조직 복구를 캡처

The zebrafish larval tail fin is ideal for studying tissue regeneration due to the simple architecture of the larval fin-fold, which comprises of two ...

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

분석<em&gt; 생체</em&gt; 셀 마이그레이션 Zebrafish의 배아에서 세포 이식 및 시간 경과 이미징을 사용하여

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

Analysis of Zebrafish Kidney Development with Time-lapse Imaging Using a Dissecting Microscope Equipped for Optical Sectioning

해부 현미경을 사용하여 시간 경과 영상과 Zebrafish의 신장 개발의 분석 광학 단면에 대한 장착

In order to understand organogenesis, the spatial and temporal alterations that occur during development of tissues need to be recorded. The method ...

A Submerged Filter Paper Sandwich for Long-term Ex Ovo Time-lapse Imaging of Early Chick Embryos

A Submerged Filter Paper Sandwich for Long-term Ex Ovo Time-lapse Imaging of Early Chick Embryos

장기를위한 잠수 필터 종이 샌드위치<em&gt; 예 비켜</em초기 병아리 태아의&gt; 시간 경과 영상

Due to its availability, low cost, flat geometry, and transparency, the ex ovo chick embryo has become a major vertebrate animal model for the study of ...

An Ex Vivo Method for Time-Lapse Imaging of Cultured Rat Mesenteric Microvascular Networks

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<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 방법 배양 된 쥐 장간막 미세 혈관 네트워크의 타임 랩스 영상에 대한

Angiogenesis, defined as the growth of new blood vessels from pre-existing vessels, involves endothelial cells, pericytes, smooth muscle cells, immune ...

Multi-Photon Time Lapse Imaging to Visualize Development in Real-time: Visualization of Migrating Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

실시간으로 개발을 시각화 하기 위해 다중 광자 시간 경과 영상: 마이그레이션 Zebrafish 태아 신경 크레스트 셀의 시각화

Congenital eye and craniofacial anomalies reflect disruptions in the neural crest, a transient population of migratory stem cells that give rise to ...

Application of Aorta-gonad-mesonephros Explant Culture System in Developmental Hematopoiesis

대동맥-생식-mesonephros Explant 문화 시스템 개발 조에의 응용

The limitation of using mouse embryos for hematopoiesis studies is the added inconvenience in operations, which is largely due to the intrauterine ...

Preparing Developing Peripheral Olfactory Tissue for Molecular and Immunohistochemical Analysis in Drosophila

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주변 후 각 조직에 대 한 개발 준비 분자와 초파리 의 Immunohistochemical 분석

The olfactory system of Drosophila is a widely used system in developmental neurobiology, systems neuroscience, as well as neurophysiology, behavior, and ...

Analysis of Actomyosin Dynamics at Local Cellular and Tissue Scales Using Time-lapse Movies of Cultured Drosophila Egg Chambers

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배양 된 초파리 계란 챔버의 시간 경과 영화를 사용하여 로컬 세포 및 조직 저울에서 Actomyosin 역학분석

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