Name: real-time monitoring of mitochondrial respiration in cytokine-differentiated human primary t cells
Uploaded: 2021-10-19T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Monitoring of Mitochondrial Respiration in Cytokine-differentiated Human Primary T Cells at JoVE.com

تلقى كاسبر مولغارد وآن راهبيش منحا من Tømmermester Jørgen Holm og Hustru Elisa f. Hansens Mindelegat. كما حصل كاسبر مولغارد على منحة من Børnecancerfonden.

أجريت التجارب بموجب المبادئ التوجيهية من مستشفى هيرليف ومنطقة العاصمة الدنماركية.
ملاحظة: يحتوي هذا البروتوكول على إرشادات لكل من تشغيل التحسين وتشغيل المقايسات. يتم كتابته بوضوح في النص عندما تكون التعليمات لتشغيل التحسين أو تشغيل المقايسة. تشغيل تشغيل التحسين قبل متابع...

<ol>
	<li>vander Windt, G. J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+respiratory+capacity+is+a+critical+regulator+of+CD8++T+cell+memory+development.">Mitochondrial respiratory capacity is a critical regulator of CD8+ T cell memory development.</a> Immunity. 36 (1), 68-78 (2012).</li><li>Krauss, S., Brand, M. D., Buttgereit, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+takes+a+breath--new+quantitative+perspectives+on+bioenergetics+and+signal+transduction.">Signaling takes a breath--new quantitative perspectives on bioenergetics and signal transduction.</a> Immunity. 15 (4), 497-502 (2001).</li><li>vander Windt, G. J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8+memory+T+cells+have+a+bioenergetic+advantage+that+underlies+their+rapid+recall+ability.">CD8 memory T cells have a bioenergetic advantage that underlies their rapid recall ability.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (35), 14336-14341 (2013).</li><li>Chang, C. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Posttranscriptional+control+of+T+cell+effector+function+by+aerobic+glycolysis.">Posttranscriptional control of T cell effector function by aerobic glycolysis.</a> Cell. 153 (6), 1239-1251 (2013).</li><li>vander Windt, G. J. W., Chang, C. -. H., Pearce, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+bioenergetics+in+T+cells+using+a+Seahorse+extracellular+flux+analyzer.">Measuring bioenergetics in T cells using a Seahorse extracellular flux analyzer.</a> Current Protocols in Immunology. 113, 1-14 (2016).</li><li>Buck, M. D., O'Sullivan, D., Pearce, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+metabolism+drives+immunity.">T cell metabolism drives immunity.</a> Journal of Experimental Medicine. 212 (9), 1345-1360 (2015).</li><li>Rivadeneira, D. B., Delgoffe, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumor+T-cell+reconditioning:+Improving+metabolic+fitness+for+optimal+cancer+immunotherapy.">Antitumor T-cell reconditioning: Improving metabolic fitness for optimal cancer immunotherapy.</a> Clinical Cancer Research. 24 (11), 2473-2481 (2018).</li><li>Cieri, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-7+and+IL-15+instruct+the+generation+of+human+memory+stem+T+cells+from+naive+precursors.">IL-7 and IL-15 instruct the generation of human memory stem T cells from naive precursors.</a> Blood. 121 (4), 573-584 (2013).</li><li>Kenwood, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+novel+mitochondrial+uncoupler+that+does+not+depolarize+the+plasma+membrane.">Identification of a novel mitochondrial uncoupler that does not depolarize the plasma membrane.</a> Molecular Metabolism. 3 (2), 114-123 (2013).</li><li>Alizadeh, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL15+enhances+CAR-T+cell+antitumor+activity+by+reducing+mTORC1+activity+and+preserving+their+stem+cell+memory+phenotype.">IL15 enhances CAR-T cell antitumor activity by reducing mTORC1 activity and preserving their stem cell memory phenotype.</a> Cancer Immunology Research. 7 (5), 759-772 (2019).</li></ol>

يعد التحديد الكمي المفصل والصحيح للفسفرة التأكسدية أداة لا غنى عنها عند وصف حالات الطاقة للخلايا التائية. يمكن أن ترتبط حالة لياقة الميتوكوندريا ارتباطا مباشرا بإمكانات تنشيط الخلايا التائية والبقاء على قيد الحياة والتمايز1,5. باستخدام هذا البروتوكول ، من...

يعد تطور الخلايا التائية الصحيحة ووظيفتها ضروريين لقدرة الجهاز المناعي على التعرف على المستضدات والاستجابة لها. تتغير الفسفرة التأكسدية للميتوكوندريا (OxPhos) وفقا لحالة الخلية التائية. تستخدم الخلايا التائية الساذجة في الغالب OxPhos لإنتاج ATP ، في حين تخضع الخلايا التائية المنشطة لانتقال استقلابي حيث يصبح تحلل السكر هو المهيمن1. بعد مرحلة المستجيب ، تعود المجموعة الفرعية الصغيرة المتبقية من خلايا الذاكرة T إلى حالة التمثيل الغذائي التي تهيمن عليها OxPhos2,3. تتبع تغيرات OxPhos تمايز الخلايا التائية لدرجة أنه حتى المجموعات الفرعية من الخلايا التائية يمكن تمييزها من خلال خصائصها المحددة في OxPhos 1. وعلى العكس من ذلك، فإن OxPhos مهم لوظيفة الخلايا التائية، وقد ثبت أن تثبيط OxPhos يمنع انتشار الخلايا التائية وإنتاج السيتوكين4. لذلك ، فإن القدرة على تحديد خصائص الخلايا التائية OxPhos بطريقة دقيقة وقابلة للتكرار هي أداة قوية لأي شخص يعمل مع الخلايا التائية.
في هذا البروتوكول ، يتم قياس خصائص OxPhos للخلايا التائية باستخدام محلل التدفق خارج الخلية. تتمثل الوظيفة الأساسية لهذا المحلل في قياس محتوى الأكسجين في وسائط نمو الخلايا المراد تحليلها باستمرار. يفترض أن الأكسجين الذي تتم إزالته من وسائط النمو يتم تناوله بواسطة الخلايا. من خلال علاج الخلايا بمجموعة متنوعة من مثبطات أو معدلات OxPhos ، يرتبط انخفاض امتصاص الأكسجين بالوظيفة المثبطة أو المعدلة. على سبيل المثال ، سيؤدي تثبيط سينثاز ATP إلى انخفاض امتصاص الخلايا للأكسجين الذي كان يمكن استخدامه لإنتاج ATP عن طريق الفسفرة التأكسدية. توفر المعدات الأخرى ، بما في ذلك قطب كلارك الكهربائي وأداة Oroboros ، وظائف مماثلة ، ولكل أداة مزايا وعيوب مختلفة. يمكن استخدام مجموعة واسعة من أنواع الخلايا للدراسات في هذه الأجهزة، ولكن أحد أنواع الخلايا الصعبة بشكل خاص هو الخلايا الليمفاوية التائية الأولية البشرية5. نظرا لصغر حجمها ، وضعف البقاء على قيد الحياة خارج الجسم الحي ، وخصائصها غير الملتصقة ، يمكن أن تكون الخلايا التائية الأولية البشرية صعبة الدراسة.
هذا بروتوكول لدراسة التنفس الميتوكوندريا للخلايا التائية الأولية البشرية بواسطة محلل خارج الخلية. ينقسم البروتوكول إلى تشغيل التحسين ، حيث يتم تحديد التركيزات المثلى لعدد الخلايا لكل بئر ، وكذلك التركيز الأمثل للأوليغومايسين و FCCP. علاوة على ذلك ، يتم تشغيل الفحص ، حيث يتم استخدام الظروف المحسنة.
باستخدام PBMCs البشرية المشتقة من الدم ومزارع الخلايا التائية الأولية خارج الجسم الحي ، يوضح هذا البروتوكول أهمية التركيز الأمثل للمثبطات وأهمية استخدام حقن منفصل بدلا من الحقن المتسلسل لمثبطات الميتوكوندريا عند العمل مع أنواع الخلايا الحساسة. أخيرا ، ثبت أن هذا الفحص يمكن أن يكتشف بقوة الاختلافات الدقيقة في تنفس الميتوكوندريا عند الاستقطاب مع السيتوكينات IL-2 و IL-15.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>24-well tissue culture plate</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>142485</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD3xCD28 beads</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11161D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antimycin A</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A8674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)-phenylhydrazone (FCCP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C2920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell-Tak</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354240</td>
			<td>For coating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H4522</td>
			<td>Heat inactivated at 56 &#176;C for 30 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-15</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>200-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-2</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>200-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>07801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligomycin</td>
			<td>Merck</td>
			<td>O4876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Gibco-Thermo Fisher</td>
			<td>61870036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse Calibrant</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>102416-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF 1.0 M glucose solution</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>103577-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF 100 mM pytuvate solution</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>103578-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF 200 mM glutamine solution</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>103579-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF RPMI medium, pH7.4</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>103576-100</td>
			<td>XF RPMI media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 Analyser</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td></td>
			<td>Flux analyzer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 cell culture microplates</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>102416-100</td>
			<td>XF cell culture plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 sensor cartridge</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>102416-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate concentrate 0.1 M (NaHCO3)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide solution 1 N (NaOH)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S2770-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-VIVO 15</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE02-060F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T cell beads magnet DynaMag-2 Magnet</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>12321D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse wave</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Flux analyzer software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time monitoring of mitochondrial respiration in cytokine-differentiated human primary t cells

أثناء التنشيط ، يتكيف التمثيل الغذائي للخلايا التائية مع التغييرات التي تؤثر على مصيرها. لا غنى عن زيادة الفسفرة التأكسدية للميتوكوندريا لتنشيط الخلايا التائية ، ويعتمد بقاء الخلايا التائية للذاكرة على إعادة تشكيل الميتوكوندريا. وبالتالي ، يؤثر هذا على النتائج السريرية طويلة الأجل للعلاجات المناعية للسرطان. غالبا ما تتم دراسة التغيرات في جودة الخلايا التائية عن طريق قياس التدفق الخلوي باستخدام علامات سطحية معروفة وليس مباشرة من خلال حالتها الأيضية. هذا بروتوكول محسن لقياس التنفس الميتوكوندريا في الوقت الحقيقي للخلايا التائية البشرية الأولية باستخدام محلل التدفق خارج الخلية والسيتوكينات IL-2 و IL-15 ، والتي تؤثر بشكل مختلف على استقلاب الخلايا التائية. يظهر أن الحالة الأيضية للخلايا التائية يمكن تمييزها بوضوح عن طريق قياس استهلاك الأكسجين عند تثبيط المجمعات الرئيسية في المسار الأيضي وأن دقة هذه القياسات تعتمد بشكل كبير على التركيز الأمثل للمثبط واستراتيجية حقن المثبطات. سيساعد هذا البروتوكول الموحد على تنفيذ التنفس الميتوكوندريا كمعيار للياقة البدنية للخلايا التائية في مراقبة ودراسة العلاجات المناعية للسرطان.

يعد التحديد الصحيح لخصائص OxPhos أداة لا غنى عنها عند دراسة الخلايا التائية. ومع ذلك ، إذا لم يتم تحسين شروط الفحص ، فهناك خطر كبير من النتائج المضللة أو الخاطئة. في هذا البروتوكول ، هناك تركيز قوي على تحسين عدد الخلايا لكل بئر وتركيزات oligomycin و FCCP لاستخدامها. في الإعداد الموصوف ، تتم إضافة oligomyc...

Watch this Scientific Journal Video about Real-time Monitoring of Mitochondrial Respiration in Cytokine-differentiated Human Primary T Cells at JoVE.com

Real-time Monitoring of Mitochondrial Respiration in Cytokine-differentiated Human Primary T Cells

التكيف الأيضي أمر أساسي للخلايا التائية لأنه يملي التمايز والثبات والسمية الخلوية. هنا ، يتم تقديم بروتوكول محسن لمراقبة التنفس الميتوكوندريا في الخلايا التائية الأولية البشرية المتمايزة خارج الجسم الحي السيتوكين .

الرصد في الوقت الحقيقي للتنفس الميتوكوندريا في الخلايا التائية الأولية البشرية المتباينة بالسيتوكين

During activation, the metabolism of T cells adapts to changes that impact their fate. An increase in mitochondrial oxidative phosphorylation is ...

استقلاب الميتوكوندريا هو منظم أساسي لمتانة الخلايا التائية والذاكرة. وبالتالي فإن قياس تنفس الميتوكوندريا يعطي رؤى مهمة حول خصائص الخلايا التائية. يمكن لآلة Seahorse قياس عناصر مختلفة من تنفس الميتوكوندريا ، في الوقت الفعلي ، في الخلايا الليمفاوية الأولية الحية البشرية ، دون الحاجة إلى أي وضع علامات.هذه الطريقة مناسبة جدا لمراقبة لياقة الخلايا التائية وإمكانات الذاكرة ، والتي تعد تنبؤات مهمة بنجاح العلاج المناعي للسرطان. للبدء ، اغسل حبات CD3 / CD28 عن طريق نقل 12.5 ميكرولتر من الخرز لكل مليون خلية إلى أنبوب طرد مركزي دقيق وإضافة 12.5 ميكرولتر من PBS لكل 12.5 ميكرولتر من الخرز في الأنبوب. ثم ، ضع أنبوب الطرد المركزي الدقيق على مغناطيس مناسب لمدة دقيقة واحدة ، وتخلص من المخزن المؤقت ، وأعد تعليق الخرز في الحجم الأصلي لوسط الخلايا التائية.بعد ذلك ، أضف 12.5 ميكرولتر من الخرز لكل مليون خلية بنسبة واحد إلى اثنين من الخرز إلى الخلايا ، وقسم الخلايا إلى حالتين مع حوالي خمسة ملايين خلية في كل منهما. ثم ، أضف الحجم الصحيح من السيتوكينات إلى كل حالة ، وانقل الخلايا إلى لوحات متعددة الآبار. احتضان الخلايا لمدة ثلاثة أيام عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون.بعد ثلاثة أيام من الحضانة ، قم بإعداد وسط الخلايا التائية الطازج بضعف تركيز السيتوكينات. أعد تعليق الخلايا وقسمها عن طريق نقل نصف الحجم من كل بئر إلى بئر جديد. ثم أضف نفس الحجم من وسط الخلايا التائية الطازج إلى كل بئر.لفحص التدفق خارج الخلية ، قم بإعداد محلول طلاء يحتوي على بيكربونات الصوديوم و Cell-Tak وهيدروكسيد الصوديوم. بعد ذلك، افتح لوحة زراعة خلايا XF جديدة، وأضف 12 ميكرولتر من محلول الطلاء المعد حديثا إلى كل بئر، مما يضمن التوزيع المتساوي لمحلول الطلاء في أسفل جميع الآبار. احتضن اللوحة في درجة حرارة الغرفة مع الغطاء لمدة 30 دقيقة.ثم ، تخلص من المحلول السائل المتبقي من جميع الآبار. اغسل اللوحة ب 200 ميكرولتر من الماء المعقم ، وتخلص من السائل. بعد ذلك ، اغسل اللوحة ب 200 ميكرولتر من PBS المعقمة من فئة زراعة الخلايا.بعد التخلص من السائل ، اترك اللوحة لتجف لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. للوحة الخلايا التائية في لوحة زراعة خلايا XF، قم بإعداد 50 ملليلتر من وسائط الفحص عن طريق خلط وسائط XF RPMI المناسبة مع الجلوكوز والبيروفات والجلوتامين وفقا للإعداد التجريبي. سخني الوسائط المحضرة إلى 37 درجة مئوية في حاضنة منظمة غير ثاني أكسيد الكربون ، واضبط الرقم الهيدروجيني على 7.4.ضمان وسائط كافية لزراعة الخلايا وإعداد حلول oligomycin و FCCP. بعد ذلك ، قم بتصميم تخطيط لوحة مع عدد متزايد من الخلايا لكل بئر للتحسين أو تشغيل الفحص. استخدم أربعة آبار مليئة بالوسائط ومحقونة بالوسائط لقياسات الخلفية.بعد حساب الخلايا التائية المعدة مسبقا، قم بماصة عدد مناسب من الخلايا إلى كل بئر من لوحة زراعة خلايا XF المطلية سابقا وفقا لتخطيط اللوحة. لالتصاق الخلايا التائية بالسطح المطلي، قم بالطرد المركزي للوحة زراعة خلايا XF. ثم اغسل الخلايا ب 200 ميكرولتر من وسائط الفحص.تخلص من الوسائط، وأضف 180 ميكرولتر من وسائط الفحص الطازجة. بعد التأكد من توصيل الخلايا وتوزيعها بالتساوي عبر سطح البئر، احتضن لوحة زراعة الخلايا XF عند 37 درجة مئوية في خزانة التسخين غير الخاضعة لثاني أكسيد الكربون لمدة 30 دقيقة. لتشغيل التحسين ، قم بإعداد حلول عمل oligomycin و FCCP في وسائط الفحص.ثم قم بتحميل حلول العمل الخاصة إما ب oligomycin أو FCCP في منافذ الحقن الخاصة بخرطوشة المستشعر. تأكد من عدم احتواء منافذ الحقن على الهواء فقط. املأ جميع المنافذ الفارغة بوسائط الفحص.ثم قم بإزالة الفقاعات المحتملة في منافذ الحقن عن طريق طرق حواف اللوحة برفق على الطاولة. لإجراء الفحص ، قم بإعداد محلول مضاد للمايسين A يحتوي على 20 ميكرومولار. ثم ، وفقا لتخطيط اللوحة ، قم بتحميل 20 ميكرولتر من oligomycin أو FCCP في منفذ الحقن A من خرطوشة المستشعر ، وأضف 22 ميكرولتر من antimycin A إلى منفذ الحقن B لجميع الآبار.في تشغيل تحسين oligomycin التمثيلي ، يتم الوصول إلى هضبة في معدل استهلاك الأكسجين ، أو OCR ، عندما يصل التركيز التراكمي إلى ميكرومول واحد. من هذا التركيز فصاعدا ، لم يتم تخفيض OCR أكثر. بالنسبة للخلايا المعالجة بتركيزات متزايدة من FCCP غير المقترن ، زادت مستويات OCR حتى 0.2 ميكرومولار FCCP ثم وصلت إلى هضبة ، مما يشير إلى أنه تم الحصول على فك الارتباط الكامل.في عملية تحسين تركيز الخلايا التمثيلية ، يكون التعرف الضوئي على الحروف الأولي للتشغيل مع 200،000 خلية ما يقرب من نصف ذلك ، مع 400،000 خلية. بعد علاج FCCP ، الحد الأقصى للالتعرف الضوئي على الحروف هو 61.6 بيكومول في الدقيقة ل 200،000 خلية و 190.4 بيكومول في الدقيقة ل 400،000 خلية. بعد علاج oligomycin ، ينهار OCR في الجري مع 200،000 خلية إلى أرقام مفردة وهو أقل من ذلك في الجري مع 400،000 خلية.كشف التحقيق في تأثير السيتوكينات إنترلوكين-2 وإنترلوكين-15 على عملية التمثيل الغذائي للخلايا التائية أن الخلايا المستزرعة إنترلوكين-15 تمتلك تنفس أقصى أعلى وقدرة تنفسية احتياطية. ومع ذلك ، لم يتأثر التنفس القاعدي وإنتاج ATP. دراسة استقلاب الميتوكوندريا في الخلايا التائية البشرية يعطي أدلة مهمة على متانتها وقدرتها على البقاء على قيد الحياة.وهذا يؤدي إلى زيادة المعرفة باللياقة البدنية للخلايا التائية ويمكن أن يحسن في نهاية المطاف معدلات الاستجابة للعلاج المناعي للسرطان.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

تنبيغ من فيروسات تي خلية المستقبلات في الخلايا التائية ماوس

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human Na&iuml;ve and Memory T Cells

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve and Memory T Cells

جيل من الخلايا المستحثة تي التنظيمية من المرحلة الابتدائية الإنسان خلايا T ساذجة والذاكرة

The development and maintenance of immunosuppressive CD4+ regulatory T cells (Tregs) contribute to the peripheral tolerance needed to remain in ...

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac تعديل النظام الأساسي للخلايا ينقول T الإنسان

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Real-time Live Imaging of T-cell Signaling Complex Formation

في الوقت الحقيقي تصوير لايف تي خلية اشارة تشكيل مجمع

Protection against infectious diseases is mediated by the immune system 1,2. T lymphocytes are the master coordinators of the immune system, regulating ...

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

كمي<em&gt; في المختبر</em&gt; الفحص لقياس التصاق العدلات إلى تنشيط الخلايا البطانية الاوعية الدموية الدقيقة الإنسان الأساسية بموجب الشروط ثابت

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

An Optimized Protocol to Analyze Glycolysis and Mitochondrial Respiration in Lymphocytes

بروتوكول الأمثل لتحليل تحلل السكر والميتوكوندريا التنفس في الخلايا اللمفاوية

Lymphocytes respond to a variety of stimuli by activating intracellular signaling pathways, which in turn leads to rapid cellular proliferation, migration ...

Assessment of the Synaptic Interface of Primary Human T Cells from Peripheral Blood and Lymphoid Tissue

تقييم الواجهة متشابك لخلايا تي البشرية الأولية من الدم والأنسجة اللمفاوية

The current understanding of the dynamics and structural features of T-cell synaptic interfaces has been largely determined through the use of ...

In Vitro Differentiation Model of Human Normal Memory B Cells to Long-lived Plasma Cells

في المختبر التمايز نموذج الذاكرة البشرية العادية ب الخلايا إلى خلايا البلازما المعمرة

Plasma cells (PCs) secrete large amounts of antibodies and develop from B cells that have been activated. PCs are rare cells located in the bone marrow or ...

A Real-time Potency Assay for Chimeric Antigen Receptor T Cells Targeting Solid and Hematological Cancer Cells

فحص فاعليه في الوقت الحقيقي للخلايا التائية لمستقبلات مستضد تشياريك التي تستهدف الخلايا السرطانية الصلبة والدموية

Chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy for cancer has achieved significant clinical benefit for resistant and refractory hematological ...

Pneumococcus Infection of Primary Human Endothelial Cells in Constant Flow

عدوي المكورات الرئوية من خلايا بطانة الإنسان الاساسيه في التدفق المستمر

Interaction of Streptococcus pneumoniae with the surface of endothelial cells is mediated in blood flow via mechanosensitive proteins such as the Von ...