Name: real-time monitoring of mitochondrial respiration in cytokine-differentiated human primary t cells
Uploaded: 2021-10-19T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Monitoring of Mitochondrial Respiration in Cytokine-differentiated Human Primary T Cells at JoVE.com

Kasper Mølgaard en Anne Rahbech ontvingen subsidies van Tømmermester Jørgen Holm og Hustru Elisa f. Hansens Mindelegat. Kasper Mølgaard ontving ook een subsidie van Børnecancerfonden.

Experimenten werden uitgevoerd volgens de richtlijnen van het Herlev-ziekenhuis en de hoofdstedelijke regio van Denemarken.
OPMERKING: Dit protocol bevat instructies voor zowel een optimalisatierun als een assays-run. Het is duidelijk in de tekst geschreven wanneer instructies zijn voor een optimalisatierun of een assay-run. Voer een optimalisatierun uit voordat u doorgaat met de assay-uitvoeringen
1. Menselijke perifere bloed mononucleaire (PBMC) isolatie van...

<ol>
	<li>vander Windt, G. J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+respiratory+capacity+is+a+critical+regulator+of+CD8++T+cell+memory+development.">Mitochondrial respiratory capacity is a critical regulator of CD8+ T cell memory development.</a> Immunity. 36 (1), 68-78 (2012).</li><li>Krauss, S., Brand, M. D., Buttgereit, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+takes+a+breath--new+quantitative+perspectives+on+bioenergetics+and+signal+transduction.">Signaling takes a breath--new quantitative perspectives on bioenergetics and signal transduction.</a> Immunity. 15 (4), 497-502 (2001).</li><li>vander Windt, G. J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8+memory+T+cells+have+a+bioenergetic+advantage+that+underlies+their+rapid+recall+ability.">CD8 memory T cells have a bioenergetic advantage that underlies their rapid recall ability.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (35), 14336-14341 (2013).</li><li>Chang, C. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Posttranscriptional+control+of+T+cell+effector+function+by+aerobic+glycolysis.">Posttranscriptional control of T cell effector function by aerobic glycolysis.</a> Cell. 153 (6), 1239-1251 (2013).</li><li>vander Windt, G. J. W., Chang, C. -. H., Pearce, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+bioenergetics+in+T+cells+using+a+Seahorse+extracellular+flux+analyzer.">Measuring bioenergetics in T cells using a Seahorse extracellular flux analyzer.</a> Current Protocols in Immunology. 113, 1-14 (2016).</li><li>Buck, M. D., O'Sullivan, D., Pearce, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+metabolism+drives+immunity.">T cell metabolism drives immunity.</a> Journal of Experimental Medicine. 212 (9), 1345-1360 (2015).</li><li>Rivadeneira, D. B., Delgoffe, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumor+T-cell+reconditioning:+Improving+metabolic+fitness+for+optimal+cancer+immunotherapy.">Antitumor T-cell reconditioning: Improving metabolic fitness for optimal cancer immunotherapy.</a> Clinical Cancer Research. 24 (11), 2473-2481 (2018).</li><li>Cieri, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-7+and+IL-15+instruct+the+generation+of+human+memory+stem+T+cells+from+naive+precursors.">IL-7 and IL-15 instruct the generation of human memory stem T cells from naive precursors.</a> Blood. 121 (4), 573-584 (2013).</li><li>Kenwood, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+novel+mitochondrial+uncoupler+that+does+not+depolarize+the+plasma+membrane.">Identification of a novel mitochondrial uncoupler that does not depolarize the plasma membrane.</a> Molecular Metabolism. 3 (2), 114-123 (2013).</li><li>Alizadeh, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL15+enhances+CAR-T+cell+antitumor+activity+by+reducing+mTORC1+activity+and+preserving+their+stem+cell+memory+phenotype.">IL15 enhances CAR-T cell antitumor activity by reducing mTORC1 activity and preserving their stem cell memory phenotype.</a> Cancer Immunology Research. 7 (5), 759-772 (2019).</li></ol>

Gedetailleerde en correcte kwantificering van oxidatieve fosforylering is een onmisbaar hulpmiddel bij het beschrijven van de energietoestanden van T-cellen. De toestand van mitochondriale fitheid kan direct verband houden met T-celactivatiepotentieel, overleving en differentiatie1,5. Met dit protocol is het mogelijk om de verschillende eigenschappen van oxidatieve fosforylering te bepalen (zie tabel 4 voor een gedetailleerde uitleg). Nauwkeurige...

Correcte ontwikkeling en functie van T-cellen zijn essentieel voor het vermogen van het immuunsysteem om antigenen te herkennen en erop te reageren. Mitochondriale oxidatieve fosforylering (OxPhos) verandert afhankelijk van de toestand van de T-cel. Naïeve T-cellen gebruiken voornamelijk OxPhos om ATP te produceren, terwijl geactiveerde T-cellen een metabole overgang ondergaan waarbij glycolyse dominant wordt1. Na de effectorfase keert de kleine resterende subset van geheugen-T-cellen terug naar een metabolische toestand die wordt gedomineerd door OxPhos2,3. De veranderingen van OxPhos volgen de differentiatie van T-cellen in zo'n mate dat zelfs subsets van T-cellen kunnen worden gedifferentieerd door hun specifieke OxPhos-eigenschappen1. Omgekeerd is OxPhos belangrijk voor de functie van T-cellen en is aangetoond dat remming van OxPhos proliferatie en cytokineproductie van T-cellen blokkeert4. Daarom is de mogelijkheid om de eigenschappen van T-cel OxPhos op een nauwkeurige en reproduceerbare manier te kwantificeren een krachtig hulpmiddel voor iedereen die met T-cellen werkt.
In dit protocol worden de eigenschappen van T-cel OxPhos gemeten met behulp van een extracellulaire flux analyzer. De kernfunctie van deze analyzer is het continu meten van het zuurstofgehalte van de groeimedia van de te analyseren cellen. Zuurstof verwijderd uit de groeimedia wordt verondersteld te worden opgenomen door de cellen. Door de cellen te behandelen met een verscheidenheid aan OxPhos-remmers of modifiers, wordt een daling van de zuurstofopname geassocieerd met de geremde of gemoduleerde functie. Remming van het ATP-synthase zal bijvoorbeeld leiden tot een verminderde cellulaire opname van zuurstof die anders zou worden gebruikt om ATP te produceren door oxidatieve fosforylering. Andere apparatuur, waaronder de Clark-elektrode en het Oroboros-instrument, biedt vergelijkbare functionaliteit en elk instrument heeft verschillende voordelen en tekortkomingen. Een breed scala aan celtypen kan worden gebruikt voor studies in deze apparaten, maar een bijzonder uitdagend celtype is menselijke primaire T-lymfocyten5. Vanwege hun kleine formaat, slechte overleving ex vivo en niet-adherente eigenschappen, kunnen menselijke primaire T-cellen een uitdaging zijn om te bestuderen.
Dit is een protocol voor het bestuderen van de mitochondriale ademhaling van menselijke primaire T-cellen door een extracellulaire analysator. Het protocol is verdeeld in een Optimalisatie run, waarbij optimale concentraties van celgetal per put, evenals de optimale concentratie van oligomycine en FCCP, worden bepaald. Verder wordt er een Assay uitgevoerd, waarbij de geoptimaliseerde condities worden gebruikt.
Met behulp van bloed-afgeleide menselijke PBMC's en ex vivo primaire T-celculturen, toont dit protocol het belang aan van een optimale remmerconcentratie en de relevantie van het gebruik van afzonderlijke in plaats van een sequentiële injectie van mitochondriale remmers bij het werken met gevoelige celtypen. Ten slotte is aangetoond dat deze test robuuste subtiele verschillen in mitochondriale ademhaling kan detecteren bij polarisatie met cytokines IL-2 en IL-15.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>24-well tissue culture plate</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>142485</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD3xCD28 beads</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11161D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antimycin A</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A8674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)-phenylhydrazone (FCCP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C2920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell-Tak</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354240</td>
			<td>For coating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H4522</td>
			<td>Heat inactivated at 56 &#176;C for 30 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-15</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>200-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-2</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>200-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>07801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligomycin</td>
			<td>Merck</td>
			<td>O4876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Gibco-Thermo Fisher</td>
			<td>61870036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse Calibrant</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>102416-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF 1.0 M glucose solution</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>103577-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF 100 mM pytuvate solution</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>103578-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF 200 mM glutamine solution</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>103579-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF RPMI medium, pH7.4</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>103576-100</td>
			<td>XF RPMI media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 Analyser</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td></td>
			<td>Flux analyzer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 cell culture microplates</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>102416-100</td>
			<td>XF cell culture plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 sensor cartridge</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>102416-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate concentrate 0.1 M (NaHCO3)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide solution 1 N (NaOH)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S2770-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-VIVO 15</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE02-060F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T cell beads magnet DynaMag-2 Magnet</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>12321D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse wave</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Flux analyzer software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time monitoring of mitochondrial respiration in cytokine-differentiated human primary t cells

Tijdens de activering past het metabolisme van T-cellen zich aan aan veranderingen die hun lot beïnvloeden. Een toename van mitochondriale oxidatieve fosforylering is onmisbaar voor T-celactivatie en de overleving van geheugen-T-cellen is afhankelijk van mitochondriale remodellering. Bijgevolg beïnvloedt dit de klinische uitkomst op lange termijn van kankerimmunotherapieën. Veranderingen in T-celkwaliteit worden vaak bestudeerd door flowcytometrie met behulp van bekende oppervlaktemarkers en niet direct door hun metabolische toestand. Dit is een geoptimaliseerd protocol voor het meten van real-time mitochondriale ademhaling van primaire menselijke T-cellen met behulp van een Extracellulaire Flux Analyzer en de cytokines IL-2 en IL-15, die het T-celmetabolisme anders beïnvloeden. Het is aangetoond dat de metabole toestand van T-cellen duidelijk kan worden onderscheiden door het zuurstofverbruik te meten bij het remmen van belangrijke complexen in de metabole route en dat de nauwkeurigheid van deze metingen sterk afhankelijk is van een optimale remmerconcentratie en remmerinjectiestrategie. Dit gestandaardiseerde protocol zal helpen bij het implementeren van mitochondriale ademhaling als een standaard voor T-celfitness bij het monitoren en bestuderen van kankerimmunotherapieën.

Een correcte bepaling van OxPhos eigenschappen is een onmisbaar hulpmiddel bij het bestuderen van T-cellen. Als de testomstandigheden echter niet zijn geoptimaliseerd, bestaat er een aanzienlijk risico op misleidende of onjuiste resultaten. In dit protocol is er een sterke focus op de optimalisatie van het celgetal per put en de te gebruiken concentraties oligomycine en FCCP. In de beschreven opstelling worden oligomycine en FCCP stapsgewijs aan dezelfde put toegevoegd, waardoor de concentratie van de mitochondriale modu...

Watch this Scientific Journal Video about Real-time Monitoring of Mitochondrial Respiration in Cytokine-differentiated Human Primary T Cells at JoVE.com

Real-time Monitoring of Mitochondrial Respiration in Cytokine-differentiated Human Primary T Cells

Metabole aanpassing is fundamenteel voor T-cellen omdat het differentiatie, persistentie en cytotoxiciteit dicteert. Hier wordt een geoptimaliseerd protocol gepresenteerd voor het monitoren van mitochondriale ademhaling in ex vivo cytokine-gedifferentieerde menselijke primaire T-cellen.

Real-time monitoring van mitochondriale ademhaling in cytokine-gedifferentieerde menselijke primaire T-cellen

During activation, the metabolism of T cells adapts to changes that impact their fate. An increase in mitochondrial oxidative phosphorylation is ...

Mitochondriaal metabolisme is een essentiële regulator van de duurzaamheid en het geheugen van T-cellen. Het meten van mitochondriale ademhaling geeft daarom belangrijke inzichten in de eigenschappen van T-cellen. De Seahorse-machine kan verschillende elementen van mitochondriale ademhaling in realtime meten in levende menselijke primaire T-lymfocyten, zonder dat er etikettering nodig is.Deze methode is zeer geschikt voor het monitoren van T-celfitness en geheugenpotentieel, die belangrijke voorspellers zijn van het succes van kankerimmunotherapie. Was om te beginnen CD3/CD28-kralen door 12,5 microliter kralen per miljoen cellen over te brengen naar een microcentrifugebuis en 12,5 microliter PBS per 12,5 microliter van de kralen in de buis toe te voegen. Plaats vervolgens de microcentrifugebuis gedurende één minuut op een geschikte magneet, gooi de buffer weg en resuspend de kralen in het oorspronkelijke volume T-celmedium.Voeg vervolgens 12,5 microliter kralen per miljoen cellen toe met een verhouding van één tot twee kralen en cellen en verdeel de cellen in twee omstandigheden met ongeveer vijf miljoen cellen in elk. Voeg vervolgens het juiste volume cytokines toe aan elke aandoening en breng de cellen over naar multi-well platen. Incubeer de cellen gedurende drie dagen bij 37 graden Celsius en 5% koolstofdioxide.Na drie dagen incubatie, bereid vers T-celmedium met twee keer de concentratie cytokines. Resuspend en splits de cellen door de helft van het volume van elke put over te brengen naar een nieuwe put. Voeg vervolgens hetzelfde volume vers bereid T-celmedium toe aan elke put.Bereid voor de extracellulaire fluxtest een coatingoplossing voor die natriumbicarbonaat, Cell-Tak en natriumhydroxide bevat. Open vervolgens een verse XF-celkweekplaat en voeg 12 microliter van de vers bereide coatingoplossing toe aan elke put, waardoor een gelijkmatige verdeling van de coatingoplossing op de bodem van alle putten wordt gegarandeerd. Incubeer de plaat op kamertemperatuur met het deksel erop gedurende 30 minuten.Gooi vervolgens de resterende vloeibare oplossing uit alle putten weg. Was de plaat met 200 microliter steriel water en gooi de vloeistof weg. Was vervolgens de plaat met 200 microliter steriel PBS van celkweekkwaliteit.Laat de plaat na het weggooien van de vloeistof 30 minuten drogen bij kamertemperatuur. Om T-cellen in de XF-celkweekplaat te plaatsen, bereidt u 50 milliliter testmedia voor door geschikte XF RPMI-media te mengen met glucose, pyruvaat en glutamine volgens de experimentele opstelling. Verwarm de voorbereide media tot 37 graden Celsius in een niet-kooldioxide gereguleerde incubator en stel de pH in op 7,4.Zorg voor voldoende media voor het planten van cellen en het bereiden van de oligomycine- en FCCP-oplossingen. Ontwerp vervolgens een plaatlay-out met een toenemend aantal cellen per put voor de optimalisatie- of testrun. Gebruik vier putjes gevuld met media en geïnjecteerd met media voor achtergrondmetingen.Na het tellen van de eerder bereide T-cellen, pipetteer een passend aantal cellen naar elke put van de eerder gecoate XF-celkweekplaat volgens de plaatlay-out. Om de T-cellen aan het gecoate oppervlak te hechten, centrifugeert u de XF-celkweekplaat. Was vervolgens de cellen met 200 microliter testmedia.Gooi de media weg en voeg 180 microliter verse testmedia toe. Nadat u ervoor hebt gezorgd dat de cellen zijn bevestigd en gelijkmatig over het putoppervlak zijn verdeeld, incubeert u de XF-celkweekplaat bij 37 graden Celsius in de niet-koolstofdioxide gereguleerde verwarmingskast gedurende 30 minuten. Bereid voor de optimalisatierun werkoplossingen van oligomycine en FCCP voor in testmedia.Laad vervolgens de werkoplossingen van oligomycine of FCCP in de injectiepoorten van de sensorcartridge. Zorg ervoor dat geen enkele injectiepoort alleen lucht bevat. Vul alle lege poorten met testmedia.Verwijder vervolgens mogelijke bubbels in de injectiepoorten door voorzichtig op de randen van de plaat op de tafel te kloppen. Bereid voor de testrun een 20-micromolaire antimycine A-oplossing voor. Laad vervolgens, volgens de lay-out van de plaat, 20 microliter oligomycine of FCCP in injectiepoort A van de sensorcartridge en voeg 22 microliter antimycine A toe aan injectiepoort B van alle putten.In een representatieve oligomycine-optimalisatierun wordt een plateau in zuurstofverbruikssnelheid of OCR bereikt wanneer de accumulatieve concentratie één micromol bereikt. Vanaf deze concentratie werd ocr niet verder verlaagd. Voor cellen die werden behandeld met toenemende concentraties van de uncoupler FCCP, stegen de OCR-niveaus tot 0,2 micromolaire FCCP en bereikten vervolgens een plateau, wat aangeeft dat volledige ontkoppeling werd verkregen.In een representatieve celconcentratie-optimalisatierun is de initiële OCR voor een run met 200.000 cellen ongeveer de helft daarvan, met 400.000 cellen. Na FCCP-behandeling is maximale OCR 61,6 picomol per minuut voor 200.000 cellen en 190,4 picomol per minuut voor 400.000 cellen. Na oligomycinebehandeling stort de OCR in de run met 200.000 cellen in enkele cijfers en is lager dan die in de run met 400.000 cellen.Onderzoek naar het effect van cytokines interleukine-2 en interleukine-15 op het metabolisme van T-cellen onthulde dat interleukine-15 gekweekte cellen een hogere maximale ademhaling en reserve ademhalingscapaciteit bezaten. Basale ademhaling en ATP-productie werden echter niet beïnvloed. Het bestuderen van mitochondriaal metabolisme in menselijke T-cellen geeft belangrijke aanwijzingen over hun duurzaamheid en overlevingspotentieel.Dit resulteert in een verhoogde kennis van T-celfitness en kan uiteindelijk de responspercentages van kankerimmunotherapie verbeteren.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Retrovirale Transductie van T-cel-receptoren in Mouse T-cellen

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human Na&iuml;ve and Memory T Cells

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve and Memory T Cells

Genereren van Induced regulatoire T-cellen uit primaire menselijke naïef en geheugen T-cellen

The development and maintenance of immunosuppressive CD4+ regulatory T cells (Tregs) contribute to the peripheral tolerance needed to remain in ...

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon Systeem Wijziging van primaire menselijke T-cellen

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Real-time Live Imaging of T-cell Signaling Complex Formation

Real-time Live beeldvorming van T-cel signaleringscomplex Vorming

Protection against infectious diseases is mediated by the immune system 1,2. T lymphocytes are the master coordinators of the immune system, regulating ...

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Kwantitatief<em&gt; In vitro</em&gt; Assay om neutrofieladhesie Maatregel om Activated primaire humane microvasculaire endotheelcellen onder statische omstandigheden

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

An Optimized Protocol to Analyze Glycolysis and Mitochondrial Respiration in Lymphocytes

Een geoptimaliseerde Protocol Analyseer glycolyse en mitochondriale Ademhaling in lymfocyten

Lymphocytes respond to a variety of stimuli by activating intracellular signaling pathways, which in turn leads to rapid cellular proliferation, migration ...

Assessment of the Synaptic Interface of Primary Human T Cells from Peripheral Blood and Lymphoid Tissue

Beoordeling van de synaptische Interface van primaire menselijke T-cellen uit perifeer bloed en lymfoïde weefsel

The current understanding of the dynamics and structural features of T-cell synaptic interfaces has been largely determined through the use of ...

In Vitro Differentiation Model of Human Normal Memory B Cells to Long-lived Plasma Cells

In Vitro differentiatie Model van menselijke normale B geheugencellen te langlevende plasmacellen

Plasma cells (PCs) secrete large amounts of antibodies and develop from B cells that have been activated. PCs are rare cells located in the bone marrow or ...

A Real-time Potency Assay for Chimeric Antigen Receptor T Cells Targeting Solid and Hematological Cancer Cells

Een real-time potentie test voor Chimerische antigeen receptor T-cellen gericht op vaste en hematologische kankercellen

Chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy for cancer has achieved significant clinical benefit for resistant and refractory hematological ...

Pneumococcus Infection of Primary Human Endothelial Cells in Constant Flow

Pneumococcus-infectie van primaire humane endotheliale cellen in constante stroming

Interaction of Streptococcus pneumoniae with the surface of endothelial cells is mediated in blood flow via mechanosensitive proteins such as the Von ...