Name: real-time monitoring of mitochondrial respiration in cytokine-differentiated human primary t cells
Uploaded: 2021-10-19T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Monitoring of Mitochondrial Respiration in Cytokine-differentiated Human Primary T Cells at JoVE.com

קספר מולגארד ואן רהבך קיבלו מענקים מטומרמסטר יורגן הולם og Hustru Elisa f. Hansens Mindelegat. קספר מולגארדלסו קיבל מענק מבורנקנסורפונדן.

הניסויים בוצעו תחת ההנחיות של בית החולים הרלב ואזור הבירה של דנמרק.
הערה: פרוטוקול זה מכיל הוראות הן עבור הפעלת מיטוב והן עבור הפעלת Assays. הוא כתוב בבירור בטקסט כאשר ההוראות הן עבור הפעלת מיטוב או הפעלת Assay. הפעל הפעלת מיטוב לפני שתמשיך בהפעלות Assay
1. בידוד חד-...

<ol>
	<li>vander Windt, G. J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+respiratory+capacity+is+a+critical+regulator+of+CD8++T+cell+memory+development.">Mitochondrial respiratory capacity is a critical regulator of CD8+ T cell memory development.</a> Immunity. 36 (1), 68-78 (2012).</li><li>Krauss, S., Brand, M. D., Buttgereit, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+takes+a+breath--new+quantitative+perspectives+on+bioenergetics+and+signal+transduction.">Signaling takes a breath--new quantitative perspectives on bioenergetics and signal transduction.</a> Immunity. 15 (4), 497-502 (2001).</li><li>vander Windt, G. J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8+memory+T+cells+have+a+bioenergetic+advantage+that+underlies+their+rapid+recall+ability.">CD8 memory T cells have a bioenergetic advantage that underlies their rapid recall ability.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (35), 14336-14341 (2013).</li><li>Chang, C. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Posttranscriptional+control+of+T+cell+effector+function+by+aerobic+glycolysis.">Posttranscriptional control of T cell effector function by aerobic glycolysis.</a> Cell. 153 (6), 1239-1251 (2013).</li><li>vander Windt, G. J. W., Chang, C. -. H., Pearce, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+bioenergetics+in+T+cells+using+a+Seahorse+extracellular+flux+analyzer.">Measuring bioenergetics in T cells using a Seahorse extracellular flux analyzer.</a> Current Protocols in Immunology. 113, 1-14 (2016).</li><li>Buck, M. D., O'Sullivan, D., Pearce, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+metabolism+drives+immunity.">T cell metabolism drives immunity.</a> Journal of Experimental Medicine. 212 (9), 1345-1360 (2015).</li><li>Rivadeneira, D. B., Delgoffe, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumor+T-cell+reconditioning:+Improving+metabolic+fitness+for+optimal+cancer+immunotherapy.">Antitumor T-cell reconditioning: Improving metabolic fitness for optimal cancer immunotherapy.</a> Clinical Cancer Research. 24 (11), 2473-2481 (2018).</li><li>Cieri, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-7+and+IL-15+instruct+the+generation+of+human+memory+stem+T+cells+from+naive+precursors.">IL-7 and IL-15 instruct the generation of human memory stem T cells from naive precursors.</a> Blood. 121 (4), 573-584 (2013).</li><li>Kenwood, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+novel+mitochondrial+uncoupler+that+does+not+depolarize+the+plasma+membrane.">Identification of a novel mitochondrial uncoupler that does not depolarize the plasma membrane.</a> Molecular Metabolism. 3 (2), 114-123 (2013).</li><li>Alizadeh, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL15+enhances+CAR-T+cell+antitumor+activity+by+reducing+mTORC1+activity+and+preserving+their+stem+cell+memory+phenotype.">IL15 enhances CAR-T cell antitumor activity by reducing mTORC1 activity and preserving their stem cell memory phenotype.</a> Cancer Immunology Research. 7 (5), 759-772 (2019).</li></ol>

כימות מפורט ונכון של זרחן חמצוני הוא כלי הכרחי כאשר מתארים את מצבי האנרגיה של תאי T. מצב הכושר המיטוכונדריאלי יכול להיות קשור ישירות לפוטנציאל הפעלת תאי T, הישרדות ובידול1,5. עם פרוטוקול זה, ניתן לקבוע את המאפיינים השונים של זרחן חמצוני (ראה טבלה 4 להס?...

התפתחות ותפקוד תקינים של תאי T חיוניים ליכולתה של מערכת החיסון לזהות ולהגיב לאנטיגנים. זרחן חמצוני מיטוכונדריאלי (OxPhos) משתנה בהתאם למצב תא ה- T. תאי T נאיביים משתמשים בעיקר באוקספוס כדי לייצר ATP, בעוד שתאי T מופעלים עוברים מעבר מטבולי שבו הגליקוליזה הופכת דומיננטית1. לאחר שלב המשפיע, תת-קבוצה קטנה שנותרה של תאי T זיכרון חוזרת למצב מטבולי הנשלט על ידי OxPhos2,3. השינויים של OxPhos בצע את ההבחנה של תאי T עד כדי כך שאפילו תת קבוצות של תאי T ניתן להבדיל על ידי הספציפי שלהם הוא תכונות OxPhos1. לעומת זאת, OxPhos חשוב לתפקוד תאי T, ועיכוב של OxPhos הוכח לחסום התפשטות וייצור ציטוקינים של תאי T4. לכן, היכולת לכמת את המאפיינים של תא T OxPhos באופן מדויק וניתן לשחזור היא כלי רב עוצמה עבור כל מי שעובד עם תאי T.
בפרוטוקול זה, מאפיינים של תא T OxPhos נמדדים באמצעות מנתח שטף חוץ תאי. תפקיד הליבה של מנתח זה הוא למדוד ברציפות את תכולת החמצן של מדיית הצמיחה של התאים שיש לנתח. חמצן שהוסר ממדיית הצמיחה הוא הניח להיות נלקח על ידי התאים. על ידי טיפול בתאים עם מגוון של מעכבי OxPhos או מכפילים, ירידה בספיגת חמצן קשורה לתפקוד המעכב או המווסת. לדוגמה, עיכוב של סינתאז ATP יוביל לספיגה תאית מופחתת של חמצן שאחרת היה משמש לייצור ATP על ידי זרחן חמצוני. ציוד אחר, כולל האלקטרודה קלארק ומכשיר Oroboros, מציע פונקציונליות דומה, ולכל מכשיר יש יתרונות וחסרונות שונים. מגוון רחב של סוגי תאים יכול לשמש למחקרים במכשירים אלה, אך סוג תא אחד מאתגר במיוחד הוא לימפוציטים T ראשוני אנושיים5. בשל גודלם הקטן, ex vivo הישרדות ירודה, ומאפיינים שאינם חסידים, תאי T ראשוניים אנושיים יכולים להיות מאתגרים ללמוד.
זהו פרוטוקול לחקר הנשימה המיטוכונדריאלית של תאי T ראשוניים אנושיים על ידי מנתח חוץ-תאי. הפרוטוקול מחולק לרוץ אופטימיזציה, שבו ריכוזים אופטימליים של מספר תא לכל באר, כמו גם את הריכוז האופטימלי של oligomycin ו FCCP, נקבעים. יתר על כן, ריצה Assay, שבו התנאים הממוטבים משמשים.
באמצעות PBMCs אנושיים שמקורם בדם ותרביות תאי T ראשיות ex vivo , פרוטוקול זה מדגים את החשיבות של ריכוז מעכב אופטימלי ואת הרלוונטיות של שימוש נפרד במקום הזרקה רציפה של מעכבי מיטוכונדריה בעת עבודה עם סוגי תאים רגישים. לבסוף, הוא הוכיח כי בדיקה זו יכולה לזהות היטב הבדלים עדינים בנשימה מיטוכונדריאלית על קיטוב עם ציטוקינים IL-2 ו IL-15.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>24-well tissue culture plate</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>142485</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD3xCD28 beads</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11161D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antimycin A</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A8674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)-phenylhydrazone (FCCP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C2920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell-Tak</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354240</td>
			<td>For coating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H4522</td>
			<td>Heat inactivated at 56 &#176;C for 30 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-15</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>200-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-2</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>200-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>07801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligomycin</td>
			<td>Merck</td>
			<td>O4876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Gibco-Thermo Fisher</td>
			<td>61870036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse Calibrant</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>102416-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF 1.0 M glucose solution</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>103577-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF 100 mM pytuvate solution</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>103578-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF 200 mM glutamine solution</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>103579-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF RPMI medium, pH7.4</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>103576-100</td>
			<td>XF RPMI media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 Analyser</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td></td>
			<td>Flux analyzer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 cell culture microplates</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>102416-100</td>
			<td>XF cell culture plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 sensor cartridge</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>102416-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate concentrate 0.1 M (NaHCO3)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide solution 1 N (NaOH)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S2770-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-VIVO 15</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE02-060F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T cell beads magnet DynaMag-2 Magnet</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>12321D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse wave</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Flux analyzer software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time monitoring of mitochondrial respiration in cytokine-differentiated human primary t cells

במהלך ההפעלה, חילוף החומרים של תאי T מסתגל לשינויים המשפיעים על גורלם. עלייה בזרחן חמצוני מיטוכונדריאלי היא הכרחית להפעלת תאי T, והישרדותם של תאי T זיכרון T תלויה בשיפוץ מיטוכונדריאלי. כתוצאה מכך, זה משפיע על התוצאה הקלינית ארוכת הטווח של אימונותרפיות סרטן. שינויים באיכות תאי T נחקרים לעתים קרובות על ידי ציטומטריית זרימה באמצעות סמני שטח ידועים ולא ישירות על ידי מצבם המטבולי. זהו פרוטוקול ממוטב למדידת נשימה מיטוכונדריאלית בזמן אמת של תאי T אנושיים ראשוניים באמצעות מנתח שטף חוץ-תאי והציטוקינים IL-2 ו- IL-15, המשפיעים באופן שונה על חילוף החומרים של תאי T. הוכח כי המצב המטבולי של תאי T ניתן להבחין בבירור על ידי מדידת צריכת החמצן בעת עיכוב מתחמי מפתח במסלול המטבולי וכי הדיוק של מדידות אלה תלוי מאוד בריכוז מעכב אופטימלי ואסטרטגיית הזרקת מעכבים. פרוטוקול מתוקנן זה יסייע ליישם נשימה מיטוכונדריאלית כסטנדרט לכושר תאי T בניטור ולמידה של חיסונים לסרטן.

קביעה נכונה של תכונות OxPhos היא כלי הכרחי בעת לימוד תאי T. עם זאת, אם תנאי הבדיקה לא עברו אופטימיזציה, קיים סיכון משמעותי לתוצאות מטעות או שגויות. בפרוטוקול זה, יש דגש חזק על אופטימיזציה של מספר תא לכל באר וריכוזים של oligomycin ו FCCP לשמש. בהתקנה המתוארת, אוליגומיצין ו- FCCP מתווספים בהדרגה לאותה באר, מ...

Watch this Scientific Journal Video about Real-time Monitoring of Mitochondrial Respiration in Cytokine-differentiated Human Primary T Cells at JoVE.com

Real-time Monitoring of Mitochondrial Respiration in Cytokine-differentiated Human Primary T Cells

הסתגלות מטבולית היא בסיסית עבור תאי T כפי שהיא מכתיבה בידול, התמדה, וציטוטוקסיות. כאן, פרוטוקול ממוטב לניטור נשימה מיטוכונדריאלית בתאי T ראשוניים אנושיים מובחנים ex vivo .

ניטור בזמן אמת של נשימה מיטוכונדריאלית בתאי T ראשוניים אנושיים מובחנים בציטוקינים

During activation, the metabolism of T cells adapts to changes that impact their fate. An increase in mitochondrial oxidative phosphorylation is ...

חילוף החומרים המיטוכונדריאלי הוא רגולטור חיוני של עמידות וזיכרון תאי T. מדידת נשימה מיטוכונדריאלית ולכן נותן תובנות חשובות על המאפיינים של תאי T. מכונת סוסון הים יכולה למדוד אלמנטים שונים של נשימה מיטוכונדריאלית, בזמן אמת, בלימפוציטים T ראשוניים אנושיים חיים, ללא צורך בתיוג כלשהו.שיטה זו מתאימה מאוד לניטור כושר תאי T ופוטנציאל הזיכרון, שהם מנבאים חשובים להצלחה אימונותרפית של סרטן. כדי להתחיל, לשטוף חרוזים CD3 / CD28 על ידי העברת 12.5 מיקרוליטרים של חרוזים למיליון תאים לצינור microcentrifuge והוספת 12.5 מיקרוליטרים של PBS לכל 12.5 מיקרוליטרים של החרוזים בצינור. לאחר מכן, מניחים את צינור המיקרוצנטריפוגה על מגנט מתאים למשך דקה אחת, משליכים את המאגר ומנצלים מחדש את החרוזים בנפח המקורי של מדיום תא T.לאחר מכן, הוסיפו 12.5 מיקרוליטרים של חרוזים למיליון תאים ביחס של אחד עד שניים לתאים, וחלקו את התאים לשני תנאים עם כחמישה מיליון תאים בכל אחד מהם. לאחר מכן, הוסיפו את הנפח הנכון של ציטוקינים לכל תנאי, והעבירו את התאים ללוחות מרובי בארות. לדגור על התאים במשך שלושה ימים ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני.לאחר שלושה ימים של דגירה, להכין בינוני תא T טרי עם ריכוז כפול של ציטוקינים. לחדש ולפצל את התאים על ידי העברת חצי נפח מכל באר לבאר חדשה. לאחר מכן, הוסף את אותו נפח של מדיום תא T מוכן טרי לכל באר.לבדיקת השטף החוץ-תאי, הכינו פתרון ציפוי המכיל נתרן ביקרבונט, תא-טאק ונתרן הידרוקסיד. לאחר מכן, פתחו צלחת תרבית תאים XF טרייה, והוסיפו 12 מיקרוליטרים של פתרון הציפוי הטרי לכל באר, מה שמבטיח אפילו הפצה של פתרון הציפוי בתחתית כל הבארות. דגירה את הצלחת בטמפרטורת החדר עם המכסה על במשך 30 דקות.לאחר מכן, להשליך את התמיסה הנוזלית הנותרת מכל הבארות. לשטוף את הצלחת עם 200 microliters של מים סטריליים, ולהשליך את הנוזל. לאחר מכן, לשטוף את הצלחת עם 200 microliters של PBS סטרילי כיתה תרבות התא.לאחר השלכת הנוזל, אפשר לצלחת להתייבש במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. כדי צלחת תאי T בלוח תרבית התא XF, להכין 50 מיליליטר של מדיה לבדיקה על ידי ערבוב מדיה XF RPMI מתאים עם גלוקוז, פירובט, גלוטמין על פי ההתקנה הניסיונית. מחממים את המדיה המוכנה ל-37 מעלות צלזיוס באינקובטור מוסדר שאינו פחמן דו-חמצני, ומגדירים את רמת החומציות ל-7.4.ודאו מספיק מדיה לנטיעת תאים ולהכנת פתרונות האוליגומיצין וה-FCCP. לאחר מכן, עצב פריסת לוח עם מספר גדל והולך של תאים לבאר עבור מיטוב או הפעלת בדיקה. השתמש בארבע בארות מלאות במדיה ומוזרקות עם מדיה למדידות רקע.לאחר ספירת תאי T שהוכנו מוקדם יותר, פיפטה מספר תאים מתאים לכל באר של צלחת תרבית התא XF מצופה בעבר על פי פריסת הלוח. כדי לדבוק בתאי T למשטח המצופה, צנטריפוגה צלחת תרבית התא XF. לאחר מכן, לשטוף את התאים עם 200 microliters של מדיה בדיקה.השלך את המדיה והוסף 180 מיקרוליטרים של מדיה חדשה. לאחר שהבטיחו שהתאים מחוברים ומופצים באופן שווה על פני השטח של הבאר, דגרו את צלחת תרבית התאים XF ב-37 מעלות צלזיוס בארון החימום המוסדר שאינו פחמן דו-חמצני למשך 30 דקות. עבור הפעלת אופטימיזציה, להכין פתרונות עבודה של oligomycin ו FCCP במדיה assay.לאחר מכן, לטעון את פתרונות העבודה של אוליגומיצין או FCCP לתוך יציאות ההזרקה של מחסנית החיישן. ודא כי אין יציאות הזרקה מכילות רק אוויר. מלא את כל היציאות הריקות במדיה של בדיקת מידע.לאחר מכן, להסיר בועות פוטנציאליות ביציאות ההזרקה על ידי דפיקה בעדינות את הקצוות של הצלחת על השולחן. לריצת הבדיקה, להכין פתרון אנטימיצין 20 מיקרומולרי A. לאחר מכן, על פי פריסת הלוח, לטעון 20 microliters של או oligomycin או FCCP לתוך יציאת הזרקה A של מחסנית החיישן, ולהוסיף 22 microliters של אנטימיצין A להזרקת יציאה B של כל הבארות.בריצה אופטימיזציה אוליגומיצין מייצג, רמה בשיעור צריכת חמצן, או OCR, הוא הגיע כאשר הריכוז המצטבר מגיע מיקרומולה אחת. מריכוז זה ואילך, זיהוי התווים האופטי (OCR) לא הצטמצם עוד יותר. עבור תאים שטופלו בריכוזים הולכים וגדלים של FCCP uncoupler, רמות OCR עלו עד 0.2 מיקרומולרי FCCP ולאחר מכן הגיעו לרמה, המציין כי ניתוק מלא הושג.בריצת אופטימיזציה של ריכוז תאים מייצגת, זיהוי התווים האופטי (OCR) ההתחלתי לריצה עם 200,000 תאים הוא כמחצית מזה, עם 400,000 תאים. לאחר טיפול FCCP, OCR מקסימלי הוא 61.6 picomoles לדקה עבור 200, 000 תאים ו 190.4 picomoles לדקה עבור 400, 000 תאים. לאחר טיפול אוליגומיצין, OCR בריצה עם 200, 000 תאים מתמוטט לספרות בודדות והוא נמוך יותר מזה בריצה עם 400, 000 תאים.חקירת ההשפעה של ציטוקינים interleukin-2 ו interleukin-15 על חילוף החומרים של תאי T גילה כי אינטרלוקין-15 תאים בתרבית היה בעל נשימה מקסימלית גבוהה יותר ויכולת נשימה חילוף. עם זאת, נשימה בסיסית וייצור ATP לא הושפעו. לימוד חילוף החומרים המיטוכונדריאלי בתאי T אנושיים נותן רמזים חשובים על עמידותם ופוטנציאל ההישרדות שלהם.התוצאה היא ידע מוגבר של כושר תאי T ובסופו של דבר יכול לשפר את שיעורי התגובה האימונותרפית לסרטן.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

התמרה retroviral של T-cell קולטנים עכבר מתאי T

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human Na&iuml;ve and Memory T Cells

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve and Memory T Cells

דור של מושרה תאים T רגולטוריים של האדם תאים ראשוניים טי נאיביות וזיכרון

The development and maintenance of immunosuppressive CD4+ regulatory T cells (Tregs) contribute to the peripheral tolerance needed to remain in ...

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

שינוי מערכת Transposon piggyBac של תאי T אנושיים ראשוניים

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Real-time Live Imaging of T-cell Signaling Complex Formation

הדמית חיה בזמן אמת של T-תא איתות גיבוש קומפלקס

Protection against infectious diseases is mediated by the immune system 1,2. T lymphocytes are the master coordinators of the immune system, regulating ...

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

כמותי<em&gt; במבחנה</em&gt; Assay כדי למדוד הידבקות נויטרופילים לתאים מופעלים עיקריים אדם אנדותל כלי הדם בתנאים סטטיים

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

An Optimized Protocol to Analyze Glycolysis and Mitochondrial Respiration in Lymphocytes

פרוטוקול אופטימיזציה כדי לנתח הגליקוליזה מיטוכונדריאלי הנשימה לימפוציטים

Lymphocytes respond to a variety of stimuli by activating intracellular signaling pathways, which in turn leads to rapid cellular proliferation, migration ...

Assessment of the Synaptic Interface of Primary Human T Cells from Peripheral Blood and Lymphoid Tissue

הערכה של הממשק סינפטית של תאי T האנושי העיקרי של דם היקפיים ורקמות הלימפה

The current understanding of the dynamics and structural features of T-cell synaptic interfaces has been largely determined through the use of ...

In Vitro Differentiation Model of Human Normal Memory B Cells to Long-lived Plasma Cells

חוץ גופית במודל התמיינות תאי הזיכרון האנושי נורמלי B לתאי פלזמה חיים ארוכים

Plasma cells (PCs) secrete large amounts of antibodies and develop from B cells that have been activated. PCs are rare cells located in the bone marrow or ...

A Real-time Potency Assay for Chimeric Antigen Receptor T Cells Targeting Solid and Hematological Cancer Cells

שיטת העוצמה בזמן אמת עבור שצ אנטיגן קולטן התאים T המיקוד תאים מוצק המטולוגי סרטן

Chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy for cancer has achieved significant clinical benefit for resistant and refractory hematological ...

Pneumococcus Infection of Primary Human Endothelial Cells in Constant Flow

זיהום פנאומטי של תאים אנושיים ראשוניים של האדם בזרימה קבועה

Interaction of Streptococcus pneumoniae with the surface of endothelial cells is mediated in blood flow via mechanosensitive proteins such as the Von ...