Name: real-time monitoring of mitochondrial respiration in cytokine-differentiated human primary t cells
Uploaded: 2021-10-19T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Monitoring of Mitochondrial Respiration in Cytokine-differentiated Human Primary T Cells at JoVE.com

Kasper Mølgaard와 Anne Rahbech는 Tømmermester Jørgen Holm og Hustru Elisa f. Hansens Mindelegat로부터 보조금을 받았습니다. Kasper Mølgaard또한 Børnecancerfonden으로부터 보조금을 받았습니다.

실험은 Herlev Hospital과 덴마크의 수도권의 지침에 따라 수행되었습니다.
참고: 이 프로토콜에는 최적화 실행과 분석 실행에 대한 지침이 포함되어 있습니다. 최적화 실행 또는 어세이 실행에 대한 지침이 있을 때 텍스트에 명확하게 기록됩니다. 분석 실행을 계속하기 전에 최적화 실행 실행
1. 버피 코트로부터의 인간 말초 혈액 단핵 (PBMC) 분리</...

<ol>
	<li>vander Windt, G. J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+respiratory+capacity+is+a+critical+regulator+of+CD8++T+cell+memory+development.">Mitochondrial respiratory capacity is a critical regulator of CD8+ T cell memory development.</a> Immunity. 36 (1), 68-78 (2012).</li><li>Krauss, S., Brand, M. D., Buttgereit, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+takes+a+breath--new+quantitative+perspectives+on+bioenergetics+and+signal+transduction.">Signaling takes a breath--new quantitative perspectives on bioenergetics and signal transduction.</a> Immunity. 15 (4), 497-502 (2001).</li><li>vander Windt, G. J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8+memory+T+cells+have+a+bioenergetic+advantage+that+underlies+their+rapid+recall+ability.">CD8 memory T cells have a bioenergetic advantage that underlies their rapid recall ability.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (35), 14336-14341 (2013).</li><li>Chang, C. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Posttranscriptional+control+of+T+cell+effector+function+by+aerobic+glycolysis.">Posttranscriptional control of T cell effector function by aerobic glycolysis.</a> Cell. 153 (6), 1239-1251 (2013).</li><li>vander Windt, G. J. W., Chang, C. -. H., Pearce, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+bioenergetics+in+T+cells+using+a+Seahorse+extracellular+flux+analyzer.">Measuring bioenergetics in T cells using a Seahorse extracellular flux analyzer.</a> Current Protocols in Immunology. 113, 1-14 (2016).</li><li>Buck, M. D., O'Sullivan, D., Pearce, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+metabolism+drives+immunity.">T cell metabolism drives immunity.</a> Journal of Experimental Medicine. 212 (9), 1345-1360 (2015).</li><li>Rivadeneira, D. B., Delgoffe, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumor+T-cell+reconditioning:+Improving+metabolic+fitness+for+optimal+cancer+immunotherapy.">Antitumor T-cell reconditioning: Improving metabolic fitness for optimal cancer immunotherapy.</a> Clinical Cancer Research. 24 (11), 2473-2481 (2018).</li><li>Cieri, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-7+and+IL-15+instruct+the+generation+of+human+memory+stem+T+cells+from+naive+precursors.">IL-7 and IL-15 instruct the generation of human memory stem T cells from naive precursors.</a> Blood. 121 (4), 573-584 (2013).</li><li>Kenwood, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+novel+mitochondrial+uncoupler+that+does+not+depolarize+the+plasma+membrane.">Identification of a novel mitochondrial uncoupler that does not depolarize the plasma membrane.</a> Molecular Metabolism. 3 (2), 114-123 (2013).</li><li>Alizadeh, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL15+enhances+CAR-T+cell+antitumor+activity+by+reducing+mTORC1+activity+and+preserving+their+stem+cell+memory+phenotype.">IL15 enhances CAR-T cell antitumor activity by reducing mTORC1 activity and preserving their stem cell memory phenotype.</a> Cancer Immunology Research. 7 (5), 759-772 (2019).</li></ol>

산화 인산화의 상세하고 정확한 정량화는 T 세포의 에너지 상태를 설명 할 때 없어서는 안될 도구입니다. 미토콘드리아 적합성의 상태는 T 세포 활성화 잠재력, 생존 및 분화와 직접적으로 관련될 수 있다1,5. 이러한 프로토콜을 이용하면, 산화적 인산화의 다양한 특성을 확인할 수 있다(자세한 설명은 표 4 참조). 산화 인산화의 이러한 특성?...

정확한 T 세포 발달 및 기능은 면역계가 항원을 인식하고 반응하는 능력에 필수적입니다. 미토콘드리아 산화적 인산화(OxPhos)는 T 세포의 상태에 따라 변화한다. Naïve T 세포는 주로 OxPhos를 사용하여 ATP를 생산하는 반면, 활성화 된 T 세포는 글리코 분해가 지배적이되는 대사 전이를 겪습니다1. 이펙터 단계 후에, 기억 T 세포의 작은 잔여 서브세트는 OxPhos2,3에 의해 지배되는 대사 상태로 되돌아간다. OxPhos의 변화는 T 세포의 서브세트조차도 그들의 특이적인 OxPhos 특성1에 의해 분화될 수 있는 정도까지 T 세포의 분화를 따른다. 반대로, OxPos는 T 세포의 기능에 중요하며, OxPhos의 억제는 T 세포의 증식 및 사이토카인 생산을 차단하는 것으로 입증되었습니다4. 따라서, T 세포 OxPhos의 특성을 정확하고 재현 가능한 방식으로 정량화하는 능력은 T 세포로 작업하는 모든 사람들에게 강력한 도구입니다.
이 프로토콜에서, T 세포 OxPhos의 특성은 세포외 플럭스 분석기를 사용하여 측정된다. 이 분석기의 핵심 기능은 분석하고자 하는 세포의 성장 배지의 산소 함량을 지속적으로 측정하는 것이다. 성장 배지로부터 제거된 산소는 세포에 의해 흡수되는 것으로 가정된다. 세포를 다양한 OxPhos 억제제 또는 개질제로 처리함으로써, 산소 흡수의 감소는 억제되거나 변조된 기능과 관련된다. 예를 들어, ATP 신타제의 억제는 산화적 인산화에 의해 ATP를 생산하는데 달리 사용될 산소의 감소된 세포 흡수를 야기할 것이다. Clark 전극 및 Oroboros 장비를 포함한 다른 장비는 유사한 기능을 제공하며 각 장비마다 다른 장점과 단점이 있습니다. 이러한 장치의 연구에 다양한 세포 유형을 사용할 수 있지만, 특히 도전적인 세포 유형 중 하나는 인간 원발성 T 림프구5입니다. 그들의 작은 크기, 열악한 생존 ex 생체 및 비-부착성 특성으로 인해, 인간 일차 T 세포는 연구하기가 어려울 수 있다.
이것은 세포외 분석기에 의한 인간 일차 T 세포의 미토콘드리아 호흡을 연구하기 위한 프로토콜이다. 프로토콜은 최적화 실행으로 나뉘며, 웰 당 세포 수의 최적 농도와 올리고 마이신 및 FCCP의 최적 농도가 결정됩니다. 또한 최적화된 조건이 사용되는 Assay가 실행됩니다.
혈액 유래 인간 PBMCs 및 생체외 일차 T 세포 배양물을 사용하여, 이 프로토콜은 민감한 세포 유형으로 작업할 때 미토콘드리아 억제제의 순차적 주사 대신에 별도의 사용의 최적 저해제 농도와 관련성의 중요성을 입증한다. 마지막으로, 이 검정이 사이토카인 IL-2 및 IL-15와의 분극시 미토콘드리아 호흡의 미묘한 차이를 견고하게 검출할 수 있음이 입증된다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>24-well tissue culture plate</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>142485</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD3xCD28 beads</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11161D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antimycin A</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A8674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)-phenylhydrazone (FCCP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C2920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell-Tak</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354240</td>
			<td>For coating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H4522</td>
			<td>Heat inactivated at 56 &#176;C for 30 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-15</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>200-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-2</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>200-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>07801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligomycin</td>
			<td>Merck</td>
			<td>O4876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Gibco-Thermo Fisher</td>
			<td>61870036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse Calibrant</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>102416-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF 1.0 M glucose solution</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>103577-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF 100 mM pytuvate solution</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>103578-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF 200 mM glutamine solution</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>103579-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF RPMI medium, pH7.4</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>103576-100</td>
			<td>XF RPMI media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 Analyser</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td></td>
			<td>Flux analyzer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 cell culture microplates</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>102416-100</td>
			<td>XF cell culture plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 sensor cartridge</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>102416-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate concentrate 0.1 M (NaHCO3)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide solution 1 N (NaOH)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S2770-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-VIVO 15</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE02-060F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T cell beads magnet DynaMag-2 Magnet</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>12321D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse wave</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Flux analyzer software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time monitoring of mitochondrial respiration in cytokine-differentiated human primary t cells

활성화하는 동안, T 세포의 신진 대사는 그들의 운명에 영향을 미치는 변화에 적응합니다. 미토콘드리아 산화 인산화의 증가는 T 세포 활성화에 필수적이며, 기억 T 세포의 생존은 미토콘드리아 리모델링에 의존한다. 결과적으로, 이것은 암 면역 요법의 장기적인 임상 결과에 영향을 미칩니다. T 세포 질의 변화는 종종 대사 상태에 의한 것이 아니라 잘 알려진 표면 마커를 사용하는 유세포 측정에 의해 연구됩니다. 이것은 세포외 플럭스 분석기와 T 세포 대사에 다르게 영향을 미치는 사이토카인 IL-2 및 IL-15를 사용하여 일차 인간 T 세포의 실시간 미토콘드리아 호흡을 측정하기 위한 최적화된 프로토콜입니다. T 세포의 대사 상태는 대사 경로에서 주요 복합체를 억제할 때 산소 소비량을 측정함으로써 명확하게 구별될 수 있으며, 이러한 측정의 정확도는 최적의 억제제 농도 및 억제제 주입 전략에 크게 의존한다는 것을 보여준다. 이 표준화 된 프로토콜은 암 면역 요법을 모니터링하고 연구하는 T 세포 적합성의 표준으로 미토콘드리아 호흡을 구현하는 데 도움이됩니다.

OxPhos 특성의 올바른 결정은 T 세포를 연구 할 때 없어서는 안될 도구입니다. 그러나 분석 조건이 최적화되지 않은 경우 오해의 소지가 있거나 잘못된 결과가 발생할 위험이 큽니다. 이 프로토콜에서, 사용되는 올리고마이신 및 FCCP의 웰 당 세포 수 및 농도의 최적화에 강한 초점이 있다. 설명된 셋업에서, 올리고마이신 및 FCCP는 동일한 웰에 증분적으로 첨가되어, 미토콘드리아 조절제의 농도를 증?...

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Real-time Monitoring of Mitochondrial Respiration in Cytokine-differentiated Human Primary T Cells

대사 적응은 분화, 지속성 및 세포 독성을 지시하기 때문에 T 세포의 기본입니다. 여기서, 생체외 사이토카인-분화된 인간 일차 T 세포에서 미토콘드리아 호흡을 모니터링하기 위한 최적화된 프로토콜이 제시된다.

사이토카인 분화된 인간 일차 T 세포에서 미토콘드리아 호흡의 실시간 모니터링

During activation, the metabolism of T cells adapts to changes that impact their fate. An increase in mitochondrial oxidative phosphorylation is ...

미토콘드리아 대사는 T 세포 내구성과 기억의 필수 조절자입니다. 따라서 미토콘드리아 호흡을 측정하는 것은 T 세포의 특성에 대한 중요한 통찰력을 제공합니다. Seahorse 기계는 라벨링이 필요없이 살아있는 인간 일차 T 림프구에서 실시간으로 미토콘드리아 호흡의 다양한 요소를 측정 할 수 있습니다.이 방법은 암 면역 요법 성공의 중요한 예측 인자 인 T 세포 적합성 및 기억 잠재력을 모니터링하는 데 매우 적합합니다. 시작하기 위해, 백만 세포 당 12.5 마이크로리터의 비드를 마이크로원심분리 튜브로 옮기고 튜브 내의 비드 12.5 마이크로리터 당 12.5 마이크로리터의 PBS를 첨가함으로써 CD3/CD28 비드를 세척한다. 이어서, 마이크로원심분리 튜브를 적합한 자석 상에 일분 동안 놓고, 완충제를 버리고, 비드를 원래 부피의 T 세포 배지에 재현탁시킨다.다음으로, 백만 세포 당 12.5 마이크로 리터의 비드를 1 ~ 두 개의 비드 대 세포 비율로 첨가하고, 세포를 각각 약 5 백만 개의 세포가있는 두 가지 조건으로 나눕니다. 이어서, 정확한 부피의 사이토카인을 각 조건에 첨가하고, 세포를 다중 웰 플레이트로 옮긴다. 세포를 섭씨 37도 및 5 % 이산화탄소에서 3 일 동안 배양하십시오.사흘간의 배양 후, 사이토카인의 두 배 농도로 신선한 T 세포 배지를 준비한다. 세포를 재현탁시키고 각 웰에서 부피의 절반을 새로운 웰로 옮겨 세포를 분할한다. 이어서, 동일한 부피의 갓 준비된 T 세포 배지를 각 웰에 첨가한다.세포외 플럭스 분석을 위해, 중탄산나트륨, Cell-Tak, 및 수산화나트륨을 함유하는 코팅 용액을 준비한다. 그런 다음 신선한 XF 세포 배양 플레이트를 열고 새로 준비된 코팅 용액 12 마이크로 리터를 각 웰에 첨가하여 모든 웰의 바닥에 코팅 용액의 균일 한 분포를 보장합니다. 플레이트를 뚜껑을 켠 상태에서 실온에서 30분 동안 인큐베이션한다.그런 다음 모든 웰에서 남아있는 액체 용액을 버리십시오. 플레이트를 200 마이크로 리터의 멸균수로 씻고 액체를 버리십시오. 다음에, 플레이트를 200 마이크로리터의 세포 배양 등급 멸균 PBS로 세척한다.액체를 버린 후 플레이트를 실온에서 30 분 동안 건조시킵니다. T 세포를 XF 세포 배양 플레이트에 플레이트하기 위해, 실험 설정에 따라 적합한 XF RPMI 배지와 글루코스, 피루베이트 및 글루타민을 혼합함으로써 50 밀리리터의 분석 배지를 제조하였다. 제조된 배지를 이산화탄소 조절되지 않은 인큐베이터에서 섭씨 37도로 가열하고, pH를 7.4로 설정하였다.세포를 심고 올리고마이신 및 FCCP 용액을 준비하기에 충분한 배지를 확보하십시오. 다음으로, 최적화 또는 분석 실행을 위해 웰당 세포 수가 증가함에 따라 플레이트 레이아웃을 설계한다. 네 개의 웰을 사용하여 미디어를 채우고 배경 측정을 위해 미디어를 주입하십시오.앞서 준비한 T 세포를 계수한 후, 플레이트 레이아웃에 따라 미리 코팅된 XF 세포 배양 플레이트의 각 웰에 적절한 수의 세포를 피펫한다. T 세포를 코팅된 표면에 부착시키기 위해, XF 세포 배양 플레이트를 원심분리한다. 이어서, 세포를 200 마이크로리터의 분석 배지로 세척한다.배지를 버리고 180 마이크로리터의 신선한 분석 배지를 첨가한다. 세포가 부착되고 웰 표면을 가로질러 고르게 분포되도록 한 후, XF 세포 배양 플레이트를 섭씨 37도에서 이산화탄소 조절되지 않은 가열 캐비닛에서 30분 동안 인큐베이션한다. 최적화 실행을 위해, 분석 매질에서 올리고마이신 및 FCCP의 작업 용액을 준비하십시오.그런 다음 올리고마이신 또는 FCCP의 작동 용액을 센서 카트리지의 주입 포트에 로드하십시오. 주입 포트에 공기만 포함되어 있지 않은지 확인하십시오. 모든 빈 포트를 분석 매체로 채웁니다.그런 다음 테이블 위의 플레이트 가장자리를 부드럽게 노크하여 주입 포트의 잠재적 인 기포를 제거하십시오. 분석 실행을 위해, 20-마이크로몰 안티마이신 A 용액을 제조하였다. 그런 다음 플레이트 레이아웃에 따라 20 마이크로 리터의 올리고 마이신 또는 FCCP를 센서 카트리지의 주입 포트 A에로드하고 22 마이크로 리터의 안티마이신 A를 모든 웰의 주입 포트 B에 첨가하십시오.대표적인 올리고마이신 최적화 실행에서, 산소 소모율 또는 OCR의 고원은 누적 농도가 하나의 마이크로몰에 도달할 때 도달한다. 이 농도 이후부터, OCR은 더 이상 감소되지 않았다. 언커플러 FCCP의 증가된 농도로 처리된 세포의 경우, OCR 수준은 0.2 마이크로몰 FCCP까지 증가하였고, 그 후 고원에 도달하여, 완전한 비결합이 얻어졌다는 것을 나타낸다.대표적인 세포 농도 최적화 실행에서, 200, 000 셀로 실행하기 위한 초기 OCR은 400, 000 셀로 그 중 대략 절반이다. FCCP 처리 후, 최대 OCR은 400, 000 세포에 대해 분당 61.6 피코몰, 000 세포 및 190.4 피코몰 400, 000 세포에 대해 분당 피코모이다. 올리고마이신 처리 후, 200, 000 세포로 실행되는 OCR은 한 자릿수로 붕괴되고 400, 000 세포로 실행된 OCR보다 낮다.사이토카인 인터루킨-2와 인터루킨-15가 T 세포의 대사에 미치는 영향을 조사한 결과, 인터루킨-15 배양 세포는 더 높은 최대 호흡 및 예비 호흡 능력을 보유한다는 것이 밝혀졌다. 그러나 기저 호흡 및 ATP 생산은 영향을받지 않았습니다. 인간 T 세포에서 미토콘드리아 대사를 연구하는 것은 내구성과 생존 잠재력에 대한 중요한 단서를 제공합니다.이것은 T 세포 적합성에 대한 지식을 증가시키고 궁극적으로 암 면역 요법 반응률을 향상시킬 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

마우스 T - 세포에서 T - 세포 수용체의 Retroviral 전달

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

연구

면역학 및 감염병학

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human Na&iuml;ve and Memory T Cells

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve and Memory T Cells

기본 인적 나이브 및 메모리 T의 세포로부터 유도된 규제 T 세포의 생성

The development and maintenance of immunosuppressive CD4+ regulatory T cells (Tregs) contribute to the peripheral tolerance needed to remain in ...

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

기본 인간 T 세포 piggyBac Transposon 시스템 변경

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Real-time Live Imaging of T-cell Signaling Complex Formation

T 세포의 실시간 라이브 영상은 복잡한 형성을 신호

Protection against infectious diseases is mediated by the immune system 1,2. T lymphocytes are the master coordinators of the immune system, regulating ...

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

정량<em&gt; 체외</em정적 조건에서 활성화 된 기본 인간의 미세 혈관 내피 세포에 호중구 부착을 측정하는&gt; 분석

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

An Optimized Protocol to Analyze Glycolysis and Mitochondrial Respiration in Lymphocytes

최적화 된 프로토콜은 림프구에 해당 작용과 미토콘드리아 호흡을 분석하는

Lymphocytes respond to a variety of stimuli by activating intracellular signaling pathways, which in turn leads to rapid cellular proliferation, migration ...

Assessment of the Synaptic Interface of Primary Human T Cells from Peripheral Blood and Lymphoid Tissue

말 초 혈액 및 림프 조직에서 기본 인간 T 세포의 시 냅 스 인터페이스의 평가

The current understanding of the dynamics and structural features of T-cell synaptic interfaces has been largely determined through the use of ...

In Vitro Differentiation Model of Human Normal Memory B Cells to Long-lived Plasma Cells

수명이 긴 플라즈마 세포에 인간의 정상적인 메모리 B 세포의 체 외 분화 모델

Plasma cells (PCs) secrete large amounts of antibodies and develop from B cells that have been activated. PCs are rare cells located in the bone marrow or ...

A Real-time Potency Assay for Chimeric Antigen Receptor T Cells Targeting Solid and Hematological Cancer Cells

고체 및 혈액암 세포를 표적으로 하는 키메라 항원 수용체 T 세포를 위한 실시간 힘 분석

Chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy for cancer has achieved significant clinical benefit for resistant and refractory hematological ...

Pneumococcus Infection of Primary Human Endothelial Cells in Constant Flow

일정한 흐름에 있는 1 차적인 인간 내피 세포의 폐렴구균 감염

Interaction of Streptococcus pneumoniae with the surface of endothelial cells is mediated in blood flow via mechanosensitive proteins such as the Von ...