Name: real-time monitoring of mitochondrial respiration in cytokine-differentiated human primary t cells
Uploaded: 2021-10-19T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Monitoring of Mitochondrial Respiration in Cytokine-differentiated Human Primary T Cells at JoVE.com

Kasper Mølgaard ve Anne Rahbech, Tømmermester Jørgen Holm og Hustru Elisa f. Hansens Mindelegat'tan hibe aldı. Kasper Mølgaardayrıca Børnecancerfonden'den hibe aldı.

Deneyler, Herlev Hastanesi ve Danimarka'nın Başkent Bölgesi'nin yönergeleri altında gerçekleştirildi.
NOT: Bu protokol hem Optimizasyon çalıştırması hem de Tahliller çalıştırması için yönergeler içerir. Talimatlar bir Optimizasyon çalıştırması veya bir Tahlil çalıştırması için olduğunda metinde açıkça yazılır. Tahlil çalıştırmalarına devam etmeden önce bir Optimizasyon çalıştırması çalıştırın
1. Buffy paltol...

<ol>
	<li>vander Windt, G. J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+respiratory+capacity+is+a+critical+regulator+of+CD8++T+cell+memory+development.">Mitochondrial respiratory capacity is a critical regulator of CD8+ T cell memory development.</a> Immunity. 36 (1), 68-78 (2012).</li><li>Krauss, S., Brand, M. D., Buttgereit, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+takes+a+breath--new+quantitative+perspectives+on+bioenergetics+and+signal+transduction.">Signaling takes a breath--new quantitative perspectives on bioenergetics and signal transduction.</a> Immunity. 15 (4), 497-502 (2001).</li><li>vander Windt, G. J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8+memory+T+cells+have+a+bioenergetic+advantage+that+underlies+their+rapid+recall+ability.">CD8 memory T cells have a bioenergetic advantage that underlies their rapid recall ability.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (35), 14336-14341 (2013).</li><li>Chang, C. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Posttranscriptional+control+of+T+cell+effector+function+by+aerobic+glycolysis.">Posttranscriptional control of T cell effector function by aerobic glycolysis.</a> Cell. 153 (6), 1239-1251 (2013).</li><li>vander Windt, G. J. W., Chang, C. -. H., Pearce, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+bioenergetics+in+T+cells+using+a+Seahorse+extracellular+flux+analyzer.">Measuring bioenergetics in T cells using a Seahorse extracellular flux analyzer.</a> Current Protocols in Immunology. 113, 1-14 (2016).</li><li>Buck, M. D., O'Sullivan, D., Pearce, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+metabolism+drives+immunity.">T cell metabolism drives immunity.</a> Journal of Experimental Medicine. 212 (9), 1345-1360 (2015).</li><li>Rivadeneira, D. B., Delgoffe, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumor+T-cell+reconditioning:+Improving+metabolic+fitness+for+optimal+cancer+immunotherapy.">Antitumor T-cell reconditioning: Improving metabolic fitness for optimal cancer immunotherapy.</a> Clinical Cancer Research. 24 (11), 2473-2481 (2018).</li><li>Cieri, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-7+and+IL-15+instruct+the+generation+of+human+memory+stem+T+cells+from+naive+precursors.">IL-7 and IL-15 instruct the generation of human memory stem T cells from naive precursors.</a> Blood. 121 (4), 573-584 (2013).</li><li>Kenwood, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+novel+mitochondrial+uncoupler+that+does+not+depolarize+the+plasma+membrane.">Identification of a novel mitochondrial uncoupler that does not depolarize the plasma membrane.</a> Molecular Metabolism. 3 (2), 114-123 (2013).</li><li>Alizadeh, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL15+enhances+CAR-T+cell+antitumor+activity+by+reducing+mTORC1+activity+and+preserving+their+stem+cell+memory+phenotype.">IL15 enhances CAR-T cell antitumor activity by reducing mTORC1 activity and preserving their stem cell memory phenotype.</a> Cancer Immunology Research. 7 (5), 759-772 (2019).</li></ol>

Oksidatif fosforilasyonun ayrıntılı ve doğru bir şekilde ölçülmesi, T hücrelerinin enerji durumlarını tanımlarken vazgeçilmez bir araçtır. Mitokondriyal uygunluk durumu, T hücresi aktivasyon potansiyeli, sağkalım ve farklılaşma ile doğrudan ilişkili olabilir1,5. Bu protokolle, oksidatif fosforilasyonun çeşitli özelliklerini belirlemek mümkündür (ayrıntılı bir açıklama için Tablo 4'e bakınız). Oksidatif fosforil...

Doğru T hücresi gelişimi ve fonksiyonu, bağışıklık sisteminin antijenleri tanıma ve bunlara yanıt verme yeteneği için gereklidir. Mitokondriyal oksidatif fosforilasyon (OxPhos), T hücresinin durumuna göre değişir. Naif T hücreleri ağırlıklı olarak ATP üretmek için OxPhos kullanırken, aktive olmuş T hücreleri glikolizin baskın hale geldiği metabolik bir geçişe uğrar1. Efektör fazından sonra, bellek T hücrelerinin kalan küçük alt kümesi, OxPhos2,3'ün hakim olduğu metabolik bir duruma geri döner. OxPhos'un değişiklikleri, T hücrelerinin farklılaşmasını öyle bir dereceye kadar takip eder ki, T hücrelerinin alt kümeleri bile spesifik OxPhos özellikleri ile ayırt edilebilir1. Tersine, OxPhos, T hücrelerinin işlevi için önemlidir ve OxPhos'un inhibisyonunun, T hücrelerinin proliferasyonunu ve sitokin üretimini bloke ettiği gösterilmiştir4. Bu nedenle, T hücresi OxPhos'un özelliklerini kesin ve tekrarlanabilir bir şekilde ölçme yeteneği, T hücreleri ile çalışan herkes için güçlü bir araçtır.
Bu protokolde, T hücresi OxPhos'un özellikleri, hücre dışı bir akı analizörü kullanılarak ölçülür. Bu analizörün temel işlevi, analiz edilecek hücrelerin büyüme ortamının oksijen içeriğini sürekli olarak ölçmektir. Büyüme ortamından çıkarılan oksijenin hücreler tarafından alındığı varsayılır. Hücreleri çeşitli OxPhos inhibitörleri veya modifiye edicileri ile tedavi ederek, oksijen alımındaki bir düşüş, inhibe edilmiş veya modüle edilmiş fonksiyon ile ilişkilidir. Örneğin, ATP sentazının inhibisyonu, aksi takdirde oksidatif fosforilasyon yoluyla ATP üretmek için kullanılacak olan hücresel oksijen alımının azalmasına yol açacaktır. Clark elektrodu ve Oroboros enstrümanı da dahil olmak üzere diğer ekipmanlar benzer işlevsellik sunar ve her enstrümanın farklı avantajları ve eksiklikleri vardır. Bu cihazlardaki çalışmalar için çok çeşitli hücre tipleri kullanılabilir, ancak özellikle zorlu bir hücre tipi insan primer T lenfositleridir5. Küçük boyutları, zayıf sağkalım ex vivo ve yapışkan olmayan özellikleri nedeniyle, insan birincil T hücrelerinin incelenmesi zor olabilir.
Bu, insan birincil T hücrelerinin mitokondriyal solunumunu hücre dışı bir analizör tarafından incelemek için bir protokoldür. Protokol, kuyu başına optimal hücre sayısı konsantrasyonlarının yanı sıra optimal oligomisin ve FCCP konsantrasyonunun belirlendiği bir Optimizasyon çalışmasına bölünmüştür. Ayrıca, optimize edilmiş koşulların kullanıldığı bir Tahlil çalışması.
Kan kaynaklı insan PBMC'lerini ve ex vivo primer T hücre kültürlerini kullanan bu protokol, optimal inhibitör konsantrasyonunun önemini ve hassas hücre tipleriyle çalışırken mitokondriyal inhibitörlerin sıralı enjeksiyonu yerine ayrı ayrı kullanılmasının önemini göstermektedir. Son olarak, bu tahlilin IL-2 ve IL-15 sitokinleri ile polarizasyon üzerine mitokondriyal solunumdaki ince farklılıkları sağlam bir şekilde tespit edebileceği gösterilmiştir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>24-well tissue culture plate</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>142485</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD3xCD28 beads</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11161D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antimycin A</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A8674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)-phenylhydrazone (FCCP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C2920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell-Tak</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354240</td>
			<td>For coating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H4522</td>
			<td>Heat inactivated at 56 &#176;C for 30 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-15</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>200-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-2</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>200-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>07801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligomycin</td>
			<td>Merck</td>
			<td>O4876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Gibco-Thermo Fisher</td>
			<td>61870036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse Calibrant</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>102416-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF 1.0 M glucose solution</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>103577-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF 100 mM pytuvate solution</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>103578-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF 200 mM glutamine solution</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>103579-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XF RPMI medium, pH7.4</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>103576-100</td>
			<td>XF RPMI media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 Analyser</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td></td>
			<td>Flux analyzer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 cell culture microplates</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>102416-100</td>
			<td>XF cell culture plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 sensor cartridge</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>102416-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate concentrate 0.1 M (NaHCO3)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>36486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide solution 1 N (NaOH)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S2770-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-VIVO 15</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE02-060F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T cell beads magnet DynaMag-2 Magnet</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>12321D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse wave</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Flux analyzer software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time monitoring of mitochondrial respiration in cytokine-differentiated human primary t cells

Aktivasyon sırasında, T hücrelerinin metabolizması, kaderlerini etkileyen değişikliklere adapte olur. Mitokondriyal oksidatif fosforilasyondaki artış, T hücresi aktivasyonu için vazgeçilmezdir ve hafıza T hücrelerinin hayatta kalması mitokondriyal yeniden şekillenmeye bağlıdır. Sonuç olarak, bu kanser immünoterapilerinin uzun vadeli klinik sonuçlarını etkiler. T hücre kalitesindeki değişiklikler genellikle doğrudan metabolik durumlarıyla değil, iyi bilinen yüzey belirteçleri kullanılarak akış sitometrisi ile incelenir. Bu, bir Hücre Dışı Akı Analizörü ve T hücresi metabolizmasını farklı şekilde etkileyen sitokinler IL-2 ve IL-15 kullanarak birincil insan T hücrelerinin gerçek zamanlı mitokondriyal solunumunu ölçmek için optimize edilmiş bir protokoldür. T hücrelerinin metabolik durumunun, metabolik yolaktaki anahtar kompleksleri inhibe ederken oksijen tüketiminin ölçülmesiyle açıkça ayırt edilebileceği ve bu ölçümlerin doğruluğunun optimal inhibitör konsantrasyonuna ve inhibitör enjeksiyon stratejisine büyük ölçüde bağlı olduğu gösterilmiştir. Bu standartlaştırılmış protokol, mitokondriyal solunumun kanser immünoterapilerinin izlenmesinde ve incelenmesinde T hücresi uygunluğu için bir standart olarak uygulanmasına yardımcı olacaktır.

OxPhos özelliklerinin doğru belirlenmesi, T hücrelerini incelerken vazgeçilmez bir araçtır. Bununla birlikte, tahlil koşulları optimize edilmemişse, yanıltıcı veya hatalı sonuçlar elde etme riski vardır. Bu protokolde, kuyu başına hücre sayısının optimizasyonuna ve kullanılacak oligomisin ve FCCP konsantrasyonlarına güçlü bir odaklanma vardır. Tarif edilen kurulumda, oligomisin ve FCCP aynı kuyuya kademeli olarak eklenir ve mitokondriyal modülatörlerin konsantrasyonu arttırılır. Oligomisi...

Watch this Scientific Journal Video about Real-time Monitoring of Mitochondrial Respiration in Cytokine-differentiated Human Primary T Cells at JoVE.com

Real-time Monitoring of Mitochondrial Respiration in Cytokine-differentiated Human Primary T Cells

Metabolik adaptasyon, farklılaşmayı, kalıcılığı ve sitotoksisiteyi belirlediği için T hücreleri için temeldir. Burada, ex vivo sitokin farklılaşmış insan primer T hücrelerinde mitokondriyal solunumu izlemek için optimize edilmiş bir protokol sunulmaktadır.

Sitokin Diferansiye İnsan Primer T Hücrelerinde Mitokondriyal Solunumun Gerçek Zamanlı İzlenmesi

During activation, the metabolism of T cells adapts to changes that impact their fate. An increase in mitochondrial oxidative phosphorylation is ...

Mitokondriyal metabolizma, T hücresi dayanıklılığının ve hafızasının önemli bir düzenleyicisidir. Bu nedenle mitokondriyal solunumun ölçülmesi, T hücrelerinin özellikleri hakkında önemli bilgiler verir. Denizatı makinesi, mitokondriyal solunumun çeşitli elementlerini, gerçek zamanlı olarak, canlı insan birincil T lenfositlerinde, herhangi bir etiketlemeye gerek kalmadan ölçebilir.Bu yöntem, kanser immünoterapi başarısının önemli belirleyicileri olan T hücresi uygunluğunu ve hafıza potansiyelini izlemek için çok uygundur. Başlamak için, CD3 / CD28 boncuklarını, milyon hücre başına 12.5 mikrolitre boncuğu bir mikrosantrifüj tüpüne aktararak ve tüpteki boncukların 12.5 mikrolitresi başına 12.5 mikrolitre PBS ekleyerek yıkayın. Ardından, mikrosantrifüj tüpünü bir dakika boyunca uygun bir mıknatıs üzerine yerleştirin, tamponu atın ve boncukları orijinal T hücresi ortamı hacminde yeniden askıya alın.Daha sonra, bir ila iki boncuk-hücre oranında milyon hücre başına 12.5 mikrolitre boncuk ekleyin ve hücreleri her birinde yaklaşık beş milyon hücre bulunan iki koşula bölün. Daha sonra, her koşula doğru miktarda sitokin ekleyin ve hücreleri çok kuyucuklu plakalara aktarın. Hücreleri üç gün boyunca 37 santigrat derecede ve% 5 karbondioksitte inkübe edin.Üç günlük inkübasyondan sonra, sitokinlerin iki katı konsantrasyonda taze T hücresi ortamı hazırlayın. Her bir kuyucuktan hacmin yarısını yeni bir kuyuya aktararak hücreleri yeniden askıya alın ve bölün. Ardından, her bir oyuğa aynı miktarda taze hazırlanmış T hücresi ortamı ekleyin.Hücre dışı akı testi için, sodyum bikarbonat, Cell-Tak ve sodyum hidroksit içeren kaplama çözeltisi hazırlayın. Ardından, taze bir XF hücre kültürü plakası açın ve her bir kuyucuğa taze hazırlanmış kaplama çözeltisinden 12 mikrolitre ekleyin, böylece kaplama çözeltisinin tüm kuyucukların dibinde eşit dağılımını sağlayın. Plakayı oda sıcaklığında kapağı açık olarak 30 dakika boyunca inkübe edin.Ardından, kalan sıvı çözeltiyi tüm kuyucuklardan atın. Plakayı 200 mikrolitre steril suyla yıkayın ve sıvıyı atın. Daha sonra, plakayı 200 mikrolitre hücre kültürü sınıfı steril PBS ile yıkayın.Sıvıyı attıktan sonra, plakanın oda sıcaklığında 30 dakika kurumasını bekleyin. XF hücre kültürü plakasındaki T hücrelerini plakalamak için, deney düzeneğine göre uygun XF RPMI ortamını glikoz, piruvat ve glutamin ile karıştırarak 50 mililitre tahlil ortamı hazırlayın. Hazırlanan ortamı karbondioksit düzenlemeli olmayan bir inkübatörde 37 santigrat dereceye ısıtın ve pH'ı 7.4'e ayarlayın.Hücrelerin ekilmesi ve oligomisin ve FCCP çözeltilerinin hazırlanması için yeterli ortam sağlayın. Ardından, optimizasyon veya tahlil çalışması için kuyu başına artan sayıda hücreye sahip bir plaka düzeni tasarlayın. Arka plan ölçümleri için medya ile doldurulmuş ve medya enjekte edilmiş dört kuyucuk kullanın.Daha önce hazırlanan T hücrelerini saydıktan sonra, plaka düzenine göre daha önce kaplanmış XF hücre kültürü plakasının her bir kuyucuğuna uygun sayıda hücre pipetin. T hücrelerini kaplanmış yüzeye yapıştırmak için, XF hücre kültürü plakasını santrifüj edin. Ardından, hücreleri 200 mikrolitre tahlil ortamı ile yıkayın.Medyayı atın ve 180 mikrolitre taze tahlil ortamı ekleyin. Hücrelerin kuyu yüzeyine tutturulmasını ve eşit olarak dağıtılmasını sağladıktan sonra, XF hücre kültürü plakasını 37 santigrat derecede karbondioksit düzenlemeli olmayan ısıtma kabininde 30 dakika boyunca inkübe edin. Optimizasyon çalışması için, tahlil ortamında oligomisin ve FCCP'nin çalışma çözümlerini hazırlayın.Ardından, oligomisin veya FCCP'nin çalışma çözeltilerini sensör kartuşunun enjeksiyon portlarına yükleyin. Hiçbir enjeksiyon portunun yalnızca hava içermediğinden emin olun. Tüm boş bağlantı noktalarını tahlil ortamıyla doldurun.Ardından, plakanın kenarlarını masanın üzerine hafifçe vurarak enjeksiyon portlarındaki potansiyel kabarcıkları çıkarın. Tahlil çalışması için, 20 mikromolar antimisin A çözeltisi hazırlayın. Daha sonra, plaka düzenine göre, sensör kartuşunun A enjeksiyon portuna 20 mikrolitre oligomisin veya FCCP yükleyin ve tüm kuyucukların B enjeksiyon portuna 22 mikrolitre antimisin A ekleyin.Temsili bir oligomisin optimizasyon çalışmasında, biriken konsantrasyon bir mikromole ulaştığında oksijen tüketim hızındaki veya OCR'deki bir platoya ulaşılır. Bu konsantrasyondan itibaren, OCR daha fazla azalmadı. Uncoupler FCCP'nin artan konsantrasyonları ile tedavi edilen hücreler için, OCR seviyeleri 0.2 mikromolar FCCP'ye kadar artmış ve daha sonra tam ayrılmanın elde edildiğini gösteren bir platoya ulaşmıştır.Temsili bir hücre konsantrasyonu optimizasyonu çalışmasında, 200.000 hücreli bir çalışma için ilk OCR, 400.000 hücreli bunun yaklaşık yarısıdır. FCCP tedavisinden sonra, maksimum OCR, 200.000 hücre için dakikada 61.6 pikomol ve 400.000 hücre için dakikada 190.4 pikomoldür. Oligomisin tedavisini takiben, 200.000 hücreli OCR tek haneli rakamlara çöker ve 400.000 hücreli koşudakinden daha düşüktür.Sitokinler interlökin-2 ve interlökin-15'in T hücrelerinin metabolizması üzerindeki etkisinin araştırılması, interlökin-15 kültürlü hücrelerin daha yüksek maksimal solunum ve yedek solunum kapasitesine sahip olduğunu ortaya koymuştur. Bununla birlikte, bazal solunum ve ATP üretimi etkilenmedi. İnsan T hücrelerinde mitokondriyal metabolizmayı incelemek, dayanıklılıkları ve hayatta kalma potansiyelleri hakkında önemli ipuçları verir.Bu, T hücresi uygunluğu hakkında daha fazla bilgi ile sonuçlanır ve sonuçta kanser immünoterapi yanıt oranlarını iyileştirebilir.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Fare T-hücrelerinin, T-hücre reseptörleri retroviral İletimi

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human Na&iuml;ve and Memory T Cells

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve and Memory T Cells

İlköğretim İnsan naif ve Bellek T Hücreleri gelen İsteyerek Düzenleyici T Hücreleri Üretimi

The development and maintenance of immunosuppressive CD4+ regulatory T cells (Tregs) contribute to the peripheral tolerance needed to remain in ...

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

Primer insan T hücrelerinin piggyBac Transposon Sistem Modifikasyon

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Real-time Live Imaging of T-cell Signaling Complex Formation

T hücre gerçek zamanlı Canlı Görüntüleme Kompleks Oluşum Sinyal

Protection against infectious diseases is mediated by the immune system 1,2. T lymphocytes are the master coordinators of the immune system, regulating ...

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Nicel<em&gt; In vitro</emStatik Koşullarında Account İlköğretim İnsan mikrovasküler endotel hücreleri için Nötrofil yapışma Tedbir&gt; Testi

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

An Optimized Protocol to Analyze Glycolysis and Mitochondrial Respiration in Lymphocytes

Bir Optimize Protokol Lenfositlerindeki Glikoliz ve Mitokondriyal Solunum Analiz

Lymphocytes respond to a variety of stimuli by activating intracellular signaling pathways, which in turn leads to rapid cellular proliferation, migration ...

Assessment of the Synaptic Interface of Primary Human T Cells from Peripheral Blood and Lymphoid Tissue

Periferik kan ve lenf dokusu birincil insan T hücre sinaptik arabirimi değerlendirilmesi

The current understanding of the dynamics and structural features of T-cell synaptic interfaces has been largely determined through the use of ...

In Vitro Differentiation Model of Human Normal Memory B Cells to Long-lived Plasma Cells

Uzun ömürlü plazma hücreleri insan Normal bellek B hücrelerine vitro farklılaştırma modelinde

Plasma cells (PCs) secrete large amounts of antibodies and develop from B cells that have been activated. PCs are rare cells located in the bone marrow or ...

A Real-time Potency Assay for Chimeric Antigen Receptor T Cells Targeting Solid and Hematological Cancer Cells

Katı ve Hematolojik Kanser Hücrelerini Hedefleyen İmhimik Antijen Reseptör T Hücreleri Için Gerçek Zamanlı Potens Tsay

Chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy for cancer has achieved significant clinical benefit for resistant and refractory hematological ...

Pneumococcus Infection of Primary Human Endothelial Cells in Constant Flow

Sürekli Akışta Birincil İnsan Endotel Hücrelerinin Pnömokok Enfeksiyonu

Interaction of Streptococcus pneumoniae with the surface of endothelial cells is mediated in blood flow via mechanosensitive proteins such as the Von ...