Name: flow cytometric analysis for identification of the innate and adaptive immune cells of murine lung
Uploaded: 2021-11-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Flow Cytometric Analysis for Identification of the Innate and Adaptive Immune Cells of Murine Lung at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من خلال منح المعاهد الوطنية للصحة R01CA238263 و R01CA229784 (VAB).

أجريت جميع الدراسات والتجارب الموصوفة في هذا البروتوكول بموجب مبادئ توجيهية وفقا للجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات (IACUC) التابعة لمركز بيت إسرائيل ديكونيس الطبي. تم استخدام الفئران C57BL / 6 من أي من الجنسين التي يتراوح عمرها بين ستة وعشرة أسابيع لتطوير هذا البروتوكول.
1....

<ol>
	<li>Guilliams, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+macrophages+develop+from+fetal+monocytes+that+differentiate+into+long-lived+cells+in+the+first+week+of+life+via+GM-CSF.">Alveolar macrophages develop from fetal monocytes that differentiate into long-lived cells in the first week of life via GM-CSF.</a> Journal of Experimental Medicine. 210 (10), 1977-1992 (2013).</li><li>Tan, S. Y., Krasnow, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+origin+of+lung+macrophage+diversity.">Developmental origin of lung macrophage diversity.</a> Development. 143 (8), 1318-1327 (2016).</li><li>Schyns, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-classical+tissue+monocytes+and+two+functionally+distinct+populations+of+interstitial+macrophages+populate+the+mouse+lung.">Non-classical tissue monocytes and two functionally distinct populations of interstitial macrophages populate the mouse lung.</a> Nature Communications. 10 (1), 3964 (2019).</li><li>Gibbings, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+unique+interstitial+macrophages+in+the+murine+lung+at+steady+state.">Three unique interstitial macrophages in the murine lung at steady state.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 57 (1), 66-76 (2017).</li><li>Ural, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+nerve-associated,+lung-resident+interstitial+macrophage+subset+with+distinct+localization+and+immunoregulatory+properties.">Identification of a nerve-associated, lung-resident interstitial macrophage subset with distinct localization and immunoregulatory properties.</a> Science Immunology. 5 (45), 8756 (2020).</li><li>Chakarov, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+distinct+interstitial+macrophage+populations+coexist+across+tissues+in+specific+subtissular+niches.">Two distinct interstitial macrophage populations coexist across tissues in specific subtissular niches.</a> Science. 363 (6432), (2019).</li><li>Liegeois, M., Legrand, C., Desmet, C. J., Marichal, T., Bureau, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+interstitial+macrophage:+A+long-neglected+piece+in+the+puzzle+of+lung+immunity.">The interstitial macrophage: A long-neglected piece in the puzzle of lung immunity.</a> Cellular Immunology. 330, 91-96 (2018).</li><li>Stouch, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IkappaB+kinase+activity+drives+fetal+lung+macrophage+maturation+along+a+non-M1/M2+paradigm.">IkappaB kinase activity drives fetal lung macrophage maturation along a non-M1/M2 paradigm.</a> Journal of Immunology. 193 (3), 1184-1193 (2014).</li><li>Kopf, M., Schneider, C., Nobs, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+and+function+of+lung-resident+macrophages+and+dendritic+cells.">The development and function of lung-resident macrophages and dendritic cells.</a> Nature Immunology. 16 (1), 36-44 (2015).</li><li>Plantinga, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conventional+and+monocyte-derived+CD11b(+)+dendritic+cells+initiate+and+maintain+T+helper+2+cell-mediated+immunity+to+house+dust+mite+allergen.">Conventional and monocyte-derived CD11b(+) dendritic cells initiate and maintain T helper 2 cell-mediated immunity to house dust mite allergen.</a> Immunity. 38 (2), 322-335 (2013).</li><li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cell+trafficking+and+function+in+rare+lung+diseases.">Dendritic cell trafficking and function in rare lung diseases.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 57 (4), 393-402 (2017).</li><li>Cook, P. C., MacDonald, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+in+lung+immunopathology.">Dendritic cells in lung immunopathology.</a> Seminars in Immunopathology. 38, 449-460 (2016).</li><li>Guilliams, M., Lambrecht, B. N., Hammad, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Division+of+labor+between+lung+dendritic+cells+and+macrophages+in+the+defense+against+pulmonary+infections.">Division of labor between lung dendritic cells and macrophages in the defense against pulmonary infections.</a> Mucosal Immunology. 6 (3), 464-473 (2013).</li><li>Nobs, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PPAR&#947;+in+dendritic+cells+and+T+cells+drives+pathogenic+type-2+effector+responses+in+lung+inflammation.">PPAR&#947; in dendritic cells and T cells drives pathogenic type-2 effector responses in lung inflammation.</a> Journal of Experimental Medicine. 214 (10), 3015-3035 (2017).</li><li>Aegerter, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza-induced+monocyte-derived+alveolar+macrophages+confer+prolonged+antibacterial+protection.">Influenza-induced monocyte-derived alveolar macrophages confer prolonged antibacterial protection.</a> Nature Immunology. 21 (2), 145-157 (2020).</li><li>Misharin, A. V., Morales-Nebreda, L., Mutlu, G. M., Budinger, G. R., Perlman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+analysis+of+macrophages+and+dendritic+cell+subsets+in+the+mouse+lung.">Flow cytometric analysis of macrophages and dendritic cell subsets in the mouse lung.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 49 (4), 503-510 (2013).</li><li>Hoffmann, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+interaction+of+murine+pulmonary+phagocytes+in+the+naive+and+allergic+lung.">Distribution and interaction of murine pulmonary phagocytes in the naive and allergic lung.</a> Frontiers in Immunology. 9, 1046 (2018).</li><li>Yu, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+the+comprehensive+flow+cytometric+analysis+of+immune+cells+in+normal+and+inflamed+murine+non-lymphoid+tissues.">A protocol for the comprehensive flow cytometric analysis of immune cells in normal and inflamed murine non-lymphoid tissues.</a> PLoS One. 11 (3), 0150606 (2016).</li><li>Mesnil, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung-resident+eosinophils+represent+a+distinct+regulatory+eosinophil+subset.">Lung-resident eosinophils represent a distinct regulatory eosinophil subset.</a> Journal of Clinical Investigation. 126 (9), 3279-3295 (2016).</li><li>Zaynagetdinov, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+myeloid+cell+subsets+in+murine+lungs+using+flow+cytometry.">Identification of myeloid cell subsets in murine lungs using flow cytometry.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 49 (2), 180-189 (2013).</li><li>Tavares, A. H., Colby, J. K., Levy, B. D., Abdulnour, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+self-limited+acute+lung+injury+by+unilateral+intra-bronchial+acid+instillation.">A model of self-limited acute lung injury by unilateral intra-bronchial acid instillation.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (150), e60024 (2019).</li><li>Kreisel, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+two-photon+imaging+reveals+monocyte-dependent+neutrophil+extravasation+during+pulmonary+inflammation.">In vivo two-photon imaging reveals monocyte-dependent neutrophil extravasation during pulmonary inflammation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (42), 18073-18078 (2010).</li><li>Krishnamoorthy, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+cytoplasts+induce+TH17+differentiation+and+skew+inflammation+toward+neutrophilia+in+severe+asthma.">Neutrophil cytoplasts induce TH17 differentiation and skew inflammation toward neutrophilia in severe asthma.</a> Science Immunology. 3 (26), (2018).</li><li>Ascon, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+mouse+kidneys+contain+activated+and+CD3+CD4-+CD8-+double-negative+T+lymphocytes+with+a+distinct+TCR+repertoire.">Normal mouse kidneys contain activated and CD3+CD4- CD8- double-negative T lymphocytes with a distinct TCR repertoire.</a> Journal of Leukocyte Biology. 84 (6), 1400-1409 (2008).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+natural+killer+cells+in+mice:+phenotype+and+response+to+respiratory+infection.">Lung natural killer cells in mice: phenotype and response to respiratory infection.</a> Immunology. 137 (1), 37-47 (2012).</li><li>Cowley, S. C., Meierovics, A. I., Frelinger, J. A., Iwakura, Y., Elkins, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+CD4-CD8-+double-negative+T+cells+are+prominent+producers+of+IL-17A+and+IFN-gamma+during+primary+respiratory+murine+infection+with+Francisella+tularensis+live+vaccine+strain.">Lung CD4-CD8- double-negative T cells are prominent producers of IL-17A and IFN-gamma during primary respiratory murine infection with Francisella tularensis live vaccine strain.</a> Journal of Immunology. 184 (10), 5791-5801 (2010).</li><li>Gibbings, S. L., Jakubzick, C. V., Alper, S., Janssen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+mononuclear+phagocytes+in+the+mouse+lung+and+lymph+nodes.+In+Lung+innate+immunity+and+inflammation.">Isolation and characterization of mononuclear phagocytes in the mouse lung and lymph nodes. In Lung innate immunity and inflammation.</a> Methods in Molecular Biology. 1809, (2018).</li><li>Singer, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow-cytometric+method+for+simultaneous+analysis+of+mouse+lung+epithelial,+endothelial,+and+hematopoietic+lineage+cells.">Flow-cytometric method for simultaneous analysis of mouse lung epithelial, endothelial, and hematopoietic lineage cells.</a> American Journal of Physiology. Lung Cellular and Molecular Physiology. 310 (9), 796-801 (2016).</li><li>Matsushima, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD248+and+integrin+alpha-8+are+candidate+markers+for+differentiating+lung+fibroblast+subtypes.">CD248 and integrin alpha-8 are candidate markers for differentiating lung fibroblast subtypes.</a> BMC Pulmonary Medicine. 20 (1), 21 (2020).</li><li>Cong, J., Wei, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+killer+cells+in+the+lungs.">Natural killer cells in the lungs.</a> Frontiers in Immunology. 10, 1416 (2019).</li><li>Daubeuf, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fast,+easy,+and+customizable+eight-color+flow+cytometric+method+for+analysis+of+the+cellular+content+of+bronchoalveolar+lavage+fluid+in+the+mouse.">A fast, easy, and customizable eight-color flow cytometric method for analysis of the cellular content of bronchoalveolar lavage fluid in the mouse.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 7 (2), 88-99 (2017).</li><li>Yi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eosinophil+recruitment+is+dynamically+regulated+by+interplay+among+lung+dendritic+cell+subsets+after+allergen+challenge.">Eosinophil recruitment is dynamically regulated by interplay among lung dendritic cell subsets after allergen challenge.</a> Nature Communications. 9 (1), 3879 (2018).</li><li>Langlet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD64+expression+distinguishes+monocyte-derived+and+conventional+dendritic+cells+and+reveals+their+distinct+role+during+intramuscular+immunization.">CD64 expression distinguishes monocyte-derived and conventional dendritic cells and reveals their distinct role during intramuscular immunization.</a> Journal of Immunology. 188 (4), 1751-1760 (2012).</li><li>Moran, T. P., Nakano, H., Kondilis-Mangum, H. D., Wade, P. A., Cook, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+control+of+Ccr7+expression+in+distinct+lineages+of+lung+dendritic+cells.">Epigenetic control of Ccr7 expression in distinct lineages of lung dendritic cells.</a> Journal of Immunology. 193 (10), 4904-4913 (2014).</li><li>Schyns, J., Bureau, F., Marichal, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+interstitial+macrophages:+past,+present,+and+future.">Lung interstitial macrophages: past, present, and future.</a> Journal of Immunology Research. 2018, 5160794 (2018).</li><li>Krljanac, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RELMalpha-expressing+macrophages+protect+against+fatal+lung+damage+and+reduce+parasite+burden+during+helminth+infection.">RELMalpha-expressing macrophages protect against fatal lung damage and reduce parasite burden during helminth infection.</a> Science Immunology. 4 (35), (2019).</li><li>Ginhoux, F., Guilliams, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-resident+macrophage+ontogeny+and+homeostasis.">Tissue-resident macrophage ontogeny and homeostasis.</a> Immunity. 44 (3), 439-449 (2016).</li><li>Svedberg, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+lung+environment+controls+alveolar+macrophage+metabolism+and+responsiveness+in+type+2+inflammation.">The lung environment controls alveolar macrophage metabolism and responsiveness in type 2 inflammation.</a> Nature Immunology. 20 (5), 571-580 (2019).</li><li>Yona, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+mapping+reveals+origins+and+dynamics+of+monocytes+and+tissue+macrophages+under+homeostasis.">Fate mapping reveals origins and dynamics of monocytes and tissue macrophages under homeostasis.</a> Immunity. 38 (1), 79-91 (2013).</li><li>Misharin, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte-derived+alveolar+macrophages+drive+lung+fibrosis+and+persist+in+the+lung+over+the+life+span.">Monocyte-derived alveolar macrophages drive lung fibrosis and persist in the lung over the life span.</a> Journal of Experimental Medicine. 214 (8), 2387-2404 (2017).</li><li>Koch, C. M., Chiu, S. F., Misharin, A. V., Ridge, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+Interstitial+Macrophages:+Establishing+Identity+and+Uncovering+Heterogeneity.">Lung Interstitial Macrophages: Establishing Identity and Uncovering Heterogeneity.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 57 (1), 7-9 (2017).</li></ol>

يمكن أن يكون تحديد الخلايا المناعية الرئوية أمرا صعبا بسبب أنواع الخلايا المناعية المتعددة الموجودة في الرئة وخصائصها المناعية الفريدة مقارنة بنظيراتها المقيمة في الأنسجة الأخرى. في العديد من الحالات المرضية ، تظهر الخلايا ذات السمات الظاهرية المميزة في الرئتين. على سبيل المثال ، تؤدي ?...

يحتوي الجهاز التنفسي الفئراني على نظام مناعي فريد مسؤول عن مكافحة مسببات الأمراض والحفاظ على التوازن المناعي. يتكون الجهاز المناعي الرئوي من مجموعات خلوية ذات تباين كبير في نمطها الظاهري ووظيفتها وأصلها وموقعها. توجد البلاعم السنخية المقيمة (AMs) ، التي نشأت بشكل رئيسي من الخلايا الوحيدة الجنينية ، في التجويف السنخي1 ، في حين أن البلاعم الخلالية المشتقة من نخاع العظام (IMs) موجودة في حمة الرئة 2. ويمكن كذلك تصنيف الرسائل الفورية تصنيفا فرعيا من خلال التعبير عن CD206. تملأ CD206+ IMs المنطقة المحيطة بالشعب الهوائية وحول الأوعية الدموية ، بينما تقع CD206- IMs في الخلالي السنخي 3. تم اقتراح بعض التصنيفات الفرعية للرسائل الفورية مؤخرا3،4،5،6. على الرغم من أن IMs أقل دراسة من AMs ، إلا أن الأدلة الحديثة تدعم دورها الحاسم في تنظيم الجهاز المناعي للرئة 7. بالإضافة إلى ذلك ، يتم التعبير عن CD206 أيضا في AMs8 المنشطة بدلا من ذلك.
الخلايا المتغصنة الرئوية (DCs) هي مجموعة أخرى غير متجانسة من الخلايا المناعية الرئوية فيما يتعلق بخصائصها الوظيفية وموقعها وأصلها. تم وصف أربع فئات فرعية من DCs في الرئة: DCs التقليدية CD103 + (المعروفة أيضا باسم cDC1) ، CD11b + DCs التقليدية (المعروفة أيضا باسم cDC2) ، DCs المشتقة من الخلايا الأحادية (MoDCs) ، و DCs9,10,11,12,13. يمكن تعريف الفئات الفرعية الثلاث الأولى على أنها مجمع التوافق النسيجي الرئيسي (MHC) II + CD11c + 9،10،14،15. تعبر DCs البلازما عن MHC II وهي إيجابية بشكل متوسط ل CD11c ولكنها تعبر عن مستويات عالية من B220 و PDCA-19,13,16. في رئتي الفئران الساذجتين ، توجد CD103 DCs و CD11b DCs في الممر الخلالي للمجرى الهوائي ، في حين توجد DCs البلازما في الخلالي السنخي 17.
توجد مجموعتان رئيسيتان من الخلايا الوحيدة في الرئة أثناء الحالة المستقرة: الخلايا الوحيدة الكلاسيكية والخلايا الوحيدة غير الكلاسيكية. الخلايا الوحيدة الكلاسيكية هي Ly6C + وهي حاسمة للاستجابة الالتهابية الأولية. في المقابل ، فإن الخلايا الوحيدة غير الكلاسيكية هي Ly6C - وقد تم النظر إليها على نطاق واسع على أنها خلايا مضادة للالتهابات 3،16،18. في الآونة الأخيرة ، تم وصف مجموعة إضافية من الخلايا الوحيدة CD64 + CD16.2 + ، والتي تنشأ من الخلايا الوحيدة Ly6C وتؤدي إلى CD206 + IMs3.
تظهر الحمضات بشكل رئيسي في الرئتين أثناء عدوى الديدان الطفيلية أو حالات الحساسية. ومع ذلك ، هناك عدد قليل من الحمضات في الحمة الرئوية خلال الحالة المستقرة ، والمعروفة باسم الحمضات المقيمة. على النقيض من الحمضات المقيمة ، توجد الحمضات الالتهابية في الخلالي الرئوي وغسل القصبات السنخية (BAL). في نماذج الفئران من عث غبار المنزل (HDM) ، يتم تجنيد الحمضات الالتهابية في الرئة بعد التحفيز بوساطة المستضد. وقد اقترح أن الحمضات المقيمة قد يكون لها دور تنظيمي في الحساسية عن طريق تثبيط حساسية T helper 2 (Th2) ل HDM19.
على النقيض من بقية الخلايا النخاعية الرئوية ، تعبر العدلات عن Ly6G ولكن ليس CD68 وتتميز بتوقيع النمط الظاهري المناعي CD68-Ly6G + 16,20,21. أظهرت دراسات التصور أنه خلال الحالة المستقرة، تحتفظ الرئة بمجموعة من العدلات في المقصورة داخل الأوعية الدموية وتستضيف عددا كبيرا من العدلات خارج الأوعية الدموية22. على غرار الحمضات ، لا توجد العدلات في BAL في حالة ثابتة. ومع ذلك ، فإن العديد من أشكال التحفيز المناعي ، مثل تحدي LPS أو الربو أو الالتهاب الرئوي ، تدفع العدلات إلى التجويف السنخي ، مما يؤدي إلى وجودها في BAL21،22،23.
يمثل عدد كبير من خلايا CD45+ في الرئة القاتل الطبيعي (NK) والخلايا التائية والخلايا البائية وهي سلبية لمعظم علامات النخاع الشوكي24. في رئتي الفئران الساذجة ، يمكن تحديد هذه الأنواع الثلاثة من الخلايا بناء على تعبير CD11b و MHC II18. حوالي 25٪ من خلايا CD45+ الرئوية هي خلايا بائية ، في حين أن النسبة المئوية لخلايا NK أعلى في الرئة من الأنسجة اللمفاوية وغير اللمفاوية الأخرى24،25،26. بين الخلايا التائية الرئوية ، جزء كبير هو CD4-CD8- ويلعب دورا مهما في التهابات الجهاز التنفسي26.
نظرا لأن الرئة تستضيف جهازا مناعيا معقدا وفريدا للغاية ، فقد تم تطوير العديد من استراتيجيات البوابة لتحديد الخلايا المناعية الرئوية والإبلاغ عنها16،18،20،27. توفر استراتيجية البوابات الموضحة هنا طريقة شاملة وقابلة للتكرار لتحديد ما يصل إلى 12 مجموعة مناعية نخاعية رئوية وغير نخاعية مختلفة باستخدام 9 علامات. تم استخدام علامات إضافية للتحقق من صحة النتائج. علاوة على ذلك ، يتم توفير طريقة مفصلة لإعداد تعليق أحادي الخلية يقلل من موت الخلايا ويسمح بتحديد المظهر الأكثر اكتمالا لحجرة الخلايا المناعية في الرئة. تجدر الإشارة إلى أن تحديد الخلايا غير المناعية في الرئة ، مثل الخلايا الظهارية (CD45-CD326 + CD31-) ، والخلايا البطانية (CD45-CD326-CD31 +) ، والخلايا الليفية يتطلب نهجا مختلفا28,29. ولا يشمل البروتوكول والطريقة الموصوفة هنا تحديد هوية هؤلاء السكان.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10 mL syringe plunger</td>
			<td>EXELINT</td>
			<td>26265</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 G needles</td>
			<td>BD Precision Glide Needle</td>
			<td>305165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>21 G needles</td>
			<td>BD Precision Glide Needle</td>
			<td>305195</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>3520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 &#956;m cell strainer</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>22363548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well plates</td>
			<td>Falcon/corning</td>
			<td>3799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysing Buffer</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A10492-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse CD11b</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>101215</td>
			<td>For details see Table 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse CD11c</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>117339 / 117337</td>
			<td>For details see Table 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse CD45</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>103115</td>
			<td>For details see Table 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse CD64</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>139319</td>
			<td>For details see Table 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse CD68</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>137009</td>
			<td>For details see Table 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse GR-1</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>108433</td>
			<td>For details see Table 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse Siglec F</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>155503</td>
			<td>For details see Table 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AVERTIN</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>240486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B220</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>103228</td>
			<td>For details see Table 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9048-46-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD103</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>121405 / 121419</td>
			<td>For details see Table 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>138503</td>
			<td>For details see Table 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100205</td>
			<td>For details see Table 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type 1</td>
			<td>Worthington Biochemical Corp</td>
			<td>LS004196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CX3CR1</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>149005</td>
			<td>For details see Table 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>10104159001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F4/80</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>123133</td>
			<td>For details see Table 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FcBlock (CD16/32)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>101301</td>
			<td>For details see Table 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Serrated Forceps</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foxp3 / Transcription Factor Staining Buffer Set</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>00-5523-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Futura Safety Scalpel</td>
			<td>Merit Medical Systems</td>
			<td>SMS210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live/Dead Fixable Far Read Dead Cell Stain Kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>L34973</td>
			<td>For details see Table 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MERTK</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>151505</td>
			<td>For details see Table 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MHC-II</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>107621</td>
			<td>For details see Table 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NK1.1</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>108705</td>
			<td>For details see Table 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital Shaker</td>
			<td>VWR</td>
			<td>Model 200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>351029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerated benchtop centrifuge</td>
			<td>SORVAL ST 16R</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small curved scissor</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

flow cytometric analysis for identification of the innate and adaptive immune cells of murine lung

الجهاز التنفسي على اتصال مباشر مع البيئة الخارجية ويتطلب نظام مناعي منظم بدقة لتوفير الحماية مع قمع ردود الفعل غير المرغوب فيها على المستضدات البيئية. تستضيف الرئتين عدة مجموعات من الخلايا المناعية الفطرية والتكيفية التي توفر المراقبة المناعية ولكنها تتوسط أيضا في الاستجابات المناعية الوقائية. هذه الخلايا ، التي تحافظ على توازن الجهاز المناعي الرئوي الصحي ، تشارك أيضا في العديد من الحالات المرضية مثل الربو والالتهابات وأمراض المناعة الذاتية والسرطان. يوفر التعبير الانتقائي للبروتينات السطحية وداخل الخلايا خصائص مناعية فريدة للخلايا المناعية في الرئة. وبالتالي ، فإن قياس التدفق الخلوي له دور أساسي في تحديد مجموعات الخلايا هذه خلال الحالة الثابتة والظروف المرضية. تقدم هذه الورقة بروتوكولا يصف طريقة متسقة وقابلة للتكرار لتحديد الخلايا المناعية الموجودة في رئتي الفئران السليمة في ظل ظروف الحالة الثابتة. ومع ذلك ، يمكن أيضا استخدام هذا البروتوكول لتحديد التغيرات في مجموعات الخلايا هذه في نماذج الأمراض المختلفة للمساعدة في تحديد التغيرات الخاصة بالمرض في المشهد المناعي للرئة.

استراتيجية البوابات الخطوة الأولى من استراتيجيتنا للبوابات هي استبعاد الحطام والمزدوجات (الشكل 1A). يعد الاستبعاد الدقيق للثنائيات أمرا بالغ الأهمية لتجنب المجموعات الإيجابية الكاذبة (الشكل التكميلي S2). بعد ذلك ، يتم تحديد الخلايا المناعية باستخدام CD45...

Watch this Scientific Journal Video about Flow Cytometric Analysis for Identification of the Innate and Adaptive Immune Cells of Murine Lung at JoVE.com

Flow Cytometric Analysis for Identification of the Innate and Adaptive Immune Cells of Murine Lung

في هذه الدراسة ، نقدم بروتوكولا فعالا وقابلا للتكرار لعزل السكان المناعيين للجهاز التنفسي الفئراني. كما نقدم طريقة لتحديد جميع الخلايا المناعية الفطرية والتكيفية التي توجد في رئتي الفئران السليمة ، باستخدام لوحة قياس التدفق الخلوي القائمة على 9 ألوان.

تحليل التدفق الخلوي لتحديد الخلايا المناعية الفطرية والتكيفية للرئة الفخذية

The respiratory tract is in direct contact with the outside environment and requires a precisely regulated immune system to provide protection while ...

نظرا لأن الرئة تستضيف نظاما مناعيا معقدا وفريدا للغاية ، فقد تم تطوير العديد من استراتيجيات البوابة لتحديد الخلايا المناعية الرئوية والإبلاغ عنها. إن وجود العديد من الأساليب المختلفة يجعل من الصعب مقارنة النتائج الناتجة عن المختبرات المختلفة. توفر استراتيجيتنا للبوابات طريقة شاملة وقابلة للتكرار لتحديد ما يصل إلى 12 مجموعة مناعية مختلفة من النخاع الرئوي وغير النخاعي باستخدام تسع علامات.يصف هذا البروتوكول توصيف وتحديد مجموعات المناعة الرئوية في ظل ظروف الحالة الثابتة. ومع ذلك ، يمكن استخدام هذا البروتوكول لتحديد التغيرات في مجموعات الخلايا هذه في نماذج الأمراض المختلفة ، حيث يمكن أن يساعد في تحديد التغيرات الخاصة بالمرض في المشهد المناعي للرئة. يجب على الباحثين الذين يقومون بهذه التقنية لأول مرة الانتباه إلى ظروف الهضم والكواشف ، لأنها تحدث فرقا كبيرا في إطلاق الخلايا المناعية من أنسجة الرئة.ابدأ بإعداد الحيوان الرحيم للجراحة. قم بتثبيت الماوس ظهريا باستخدام إبر أو شريط لاصق على الأطراف الأربعة ، ثم استخدم 70٪ من الإيثانول لتعقيم جلد المنطقة البطنية. قم بعمل شق من الرقبة إلى البطن.إزالة الجلد من منطقة الصدر ، جنبا إلى جنب مع الأضلاع والقص. اغسل الرئتين عن طريق حقن 10 ملليلتر من PBS البارد في البطين الأيمن باستخدام إبرة قياس 18 إلى 21 حتى تصبح بيضاء تماما. ثم قم بإزالة الغدة الصعترية والقلب دون لمس الرئتين.افصل الرئتين عن الأنسجة المحيطة وانقلها إلى أنبوب يحتوي على مخزن مؤقت BSA بارد. انقل الرئة إلى طبق بتري ، وفرمه باستخدام مشرطين ناعمين ، ثم ضعه في أنبوب مخروطي سعة 50 ملليلتر. أضف خمسة ملليلترات من مخزن الهضم العازل لغسل اللوحة.قم بتأمين غطاء الأنبوب وهضم الرئة لمدة 30 دقيقة على شاكر مداري بسرعة 150 دورة في الدقيقة عند 37 درجة مئوية. أوقف التفاعل بإضافة 10 ملليلتر من المخزن المؤقت BSA البارد. بعد الهضم ، اخلط قطع الرئة وقم بإذابتها باستخدام إبرة قياس 18.ضع مصفاة مرشح بسعة 70 ميكرومتر فوق أنبوب مخروطي جديد سعة 50 ملليلتر وانقل خليط الرئة المهضوم إلى المصفاة. استخدم الجانب المطاطي من مكبس حقنة سعة 10 ملليلتر لتحطيم قطع الرئة المتبقية على الفلتر وغسلها باستخدام مخزن BSA المؤقت. الطرد المركزي للتعليق أحادي الخلية عند 350 G لمدة ثماني دقائق عند سبع درجات مئوية.تخلص من السوبرناتانت وأعد تعليق الخلايا في ملليلتر واحد من المخزن المؤقت لتحلل ACK. امزج التعليق باستخدام ماصة سعة ملليلتر واحد واحتضنها لمدة 90 ثانية في درجة حرارة الغرفة. أضف 10 ملليلتر من المخزن المؤقت BSA البارد إلى خليط التفاعل وقم بطرده مركزيا عند 350 جم لمدة سبع دقائق عند أربع درجات مئوية.تخلص من السوبرناتانت ، وأعد تعليق الكريات في مخزن تلطيخ مؤقت ، وقم بحساب الخلايا باستخدام مقياس مفائض الدم. أعد تعليق الخلايا بتركيز 5 ملايين خلية لكل ملليلتر لتلطيخ السطح. انقل مليون خلية في 200 ميكرولتر لكل بئر إلى صفيحة من 96 بئرا وقم بالطرد المركزي للصفيحة عند 350 جم لمدة سبع دقائق عند أربع درجات مئوية.قم بإعداد محلول كتلة قياس التدفق الخلوي عن طريق تخفيف الأجسام المضادة المضادة ل 1632 في المخزن المؤقت للتلطيخ. أعد تعليق الخلايا في 50 ميكرولتر من محلول كتلة قياس التدفق الخلوي. احتضن التعليق لمدة 15 إلى 20 دقيقة عند أربع درجات مئوية أو على الجليد.ثم ، أضف 150 ميكرولتر من المخزن المؤقت للتلطيخ إلى اللوحة وقم بطردها مركزيا 350 جم لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية. تحضير محلول الأجسام المضادة السطحية عن طريق تخفيف الأجسام المضادة السطحية في المخزن المؤقت للتلطيخ. أعد تعليق الخلايا في 50 ميكرولتر من محلول الأجسام المضادة السطحية واحتضن الصفيحة عند أربع درجات مئوية في الظلام.ثم اغسل الخلايا مرتين باستخدام مخزن مؤقت للتلطيخ. قم بإعداد المخزن المؤقت للتثبيت والتخلل عن طريق خلط ثلاثة أجزاء من التثبيت ومخفف التخلل وجزء واحد من المخزن المؤقت للتلطيخ. أعد تعليق الخلايا في 50 ميكرولتر من المخزن المؤقت المعد مسبقا لكل بئر من الصفيحة المكونة من 96 بئرا واحتضنها لمدة 20 إلى 25 دقيقة عند أربع درجات مئوية في الظلام.قم بتخفيف المخزن المؤقت للنفاذية بالماء النقي منزوع الأيونات لإعداد مخزن مؤقت للتخلل مرة واحدة واستخدامه لغسل الخلايا. تحضير محلول الأجسام المضادة داخل الخلايا عن طريق التخفيف مع ملليلتر واحد من المخزن المؤقت permeabilization. أعد تعليق الخلايا في 50 ميكرولتر من محلول الأجسام المضادة داخل الخلايا المخفف لكل بئر من الصفيحة المكونة من 96 بئرا واحتضنها لمدة 40 دقيقة عند أربع درجات مئوية في الظلام.اغسل الخلايا باستخدام المخزن المؤقت للنفاذية ، ثم باستخدام المخزن المؤقت للتلطيخ. بعد الغسيل النهائي ، أعد تعليق الخلايا في 200 ميكرولتر من المخزن المؤقت للتلطيخ. الحصول على ما لا يقل عن 1.5 مليون خلية لكل عينة على مقياس التدفق الخلوي.بعد إجراء عملية جراحية ناجحة وإجراء مناسب بعد العملية الجراحية ، تم استبعاد الحطام والمزدوجات من خلال استراتيجية البوابة. تم تحديد الخلايا المناعية باستخدام علامة CD45 + المكونة للدم عن طريق قياس التدفق الخلوي. تم تمييز الخلايا على أنها حية أو ميتة.تم تصنيف خلايا الرئة المناعية إلى ثلاث مجموعات باستخدام الأجسام المضادة المضادة GR-1 و CD68 المضادة. تم تحديد العدلات والتحقق منها باستخدام Ly6G كعلامة فريدة. يحتوي CD45 + السكان أيضا على خلايا قاتلة طبيعية وخلايا تائية وخلايا بائية.تم تلطيخ هذه الخلايا والتحقق منها بواسطة الأجسام المضادة القاتلة الطبيعية 1.1 و CD3 و B220. حدد غسل القصبات السنخية الحمضات التي كانت إيجابية لعلامة CD11b ، والبلاعم السنخية التي لم تعبر عن مستويات عالية من CD11b. تم العثور على خلايا CD45 + المتغصنة وتأكيدها بواسطة تعبير CD24.أظهرت هذه الخلايا إما استجابة إيجابية أو سلبية تجاه علامات CD103 و CD11b. تم تصنيف الخلايا السالبة CD103 على أنها خلايا تغصنية تقليدية ومشتقة من الخلايا الأحادية بناء على تعبير CD64. كانت الخلايا المتغصنة المشتقة من الخلايا الأحادية إيجابية منخفضة لعلامة تغصن CD24 ، وإيجابية لعلامة البلاعم CD64.تم تمييز البلاعم الخلالية مع الخلايا الوحيدة الكلاسيكية وغير الكلاسيكية على أساس تعبير CD64 و GR-1. أظهرت هذه الخلايا تعبيرا إيجابيا لمستقبلات الكيموكين CX3C الأولى. أهم الخطوات في هذا الإجراء هي حصاد الأنسجة السليم ، والهضم ، وإعداد تعليق الخلية الواحدة ، وبوابة على الخلايا الحية والمفردات.بالإضافة إلى توصيف الخلايا المناعية للرئة عن طريق قياس التدفق الخلوي ، يمكن إجراء زراعة الخلايا والاختبارات الوظيفية في مجموعات الخلايا المعزولة. يمكن لهذه التقنية أن تمهد الطريق للباحثين لاستكشاف أسئلة جديدة في أمراض الرئة ، مثل العدوى وأمراض المناعة الذاتية والسرطان.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

تحليل التدفق الخلوي للخلايا المناعية وفي الفئران Aortas

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Flow Cytometric Isolation of Primary Murine Type II Alveolar Epithelial Cells for Functional and Molecular Studies

عزل تدفق Cytometric من نوع خلايا الفئران الابتدائية السنخية II طلائي للدراسات الوظيفية والجزيئية

Throughout  the last years, the contribution of alveolar type II epithelial cells (AECII)  to various aspects of immune regulation in the lung has been ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

باستخدام الحمض النووي الريبي التدخل للتحقيق في الاستجابة المناعية الفطرية في الفأر الضامة

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

العزلة وتحليل تدفق Cytometric من الخلايا المناعية من الدماغ الدماغية ماوس

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Glioma-infiltrating Peripheral Blood Mononuclear Cells

العزلة وتحليل تدفق Cytometric من-التسلل الورم خلايا الدم المحيطي وحيدة النواة

Our laboratory has recently demonstrated that natural killer (NK) cells are capable of eradicating orthotopically implanted mouse GL26 and rat CNS-1 ...

Isolation and Flow Cytometric Characterization of Murine Small Intestinal Lymphocytes

العزلة وتدفق Cytometric توصيف الفئران الصغيرة المعوية اللمفاويات

The intestines &#8212; which contain the largest number of immune cells of any organ in the body &#8212; are constantly exposed to foreign antigens, both ...

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

تدفق تحليل Cytometric من القاتل الطبيعي خلية التحللي آخر في الدم الجامع البشري

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Gamma Delta T Cells

العزلة وتدفق Cytometric تحليل الإنسان باطن عنق الرحم غاما دلتا الخلايا التائية

The female reproductive tract (FRT) mucosal immune system serves as the first line of defense. Better knowledge of the genital mucosa is therefore ...

Isolation and Identification of Extravascular Immune Cells of the Heart

عزل وتحديد الخلايا المناعية اكسترافاسكولار للقلب

The immune system is an essential component of a healthy heart. The myocardium is home to a rich population of different immune cell subsets with ...

Digestion of the Murine Liver for a Flow Cytometric Analysis of Lymphatic Endothelial Cells

الهضم الكبد مورين لتحليل تدفق سيتوميتريك اللمفاوية خلايا غشائي

Within the liver, lymphatic vessels are found within the portal triad, and their described function is to remove interstitial fluid from the liver to the ...