Name: deep vascular imaging in the eye with flow-enhanced ultrasound
Uploaded: 2021-10-04T14:45:00
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Ce travail a reçu un financement de la Fondation Carlsberg (CF17-0778; CF18-0658), la Fondation Lundbeck (R324-2019-1470; R346-2020-1210), les Fondations Velux (00022458), la Fondation A.P. Møller pour l’avancement des sciences médicales, le programme de recherche et d’innovation Horizon 2020 de l’Union européenne dans le cadre de la convention de subvention Marie Skłodowska-Curie (n° 754513) et la Fondation pour la recherche de l’Université d’Aarhus.

Le protocole ci-dessous a été réalisé avec l’autorisation de l’Inspection danoise de l’expérimentation animale au sein du ministère danois de l’Alimentation, de l’Agriculture et de la Pêche, administration vétérinaire et alimentaire danoise (numéro de permis 2016-15-0201-00835).
1. Anesthésie et milieu échographique
<ol><li>Anesthésier l’animal de recherche. REMARQUE: Le type et la dose d’anesthésie appropriée dépendent fortement de l’espèce. En général,...

<ol>
	<li>Yu, C. Q., Schwab, I. R., Dubielzig, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+the+vertebrate+retina+from+the+Cambrian+to+the+Tertiary.">Feeding the vertebrate retina from the Cambrian to the Tertiary.</a> Journal of Zoology. 278 (4), 259-269 (2009).</li><li>Yu, D. Y., Cringle, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxygen+distribution+and+consumption+within+the+retina+in+vascularised+and+avascular+retinas+and+in+animal+models+of+retinal+disease.">Oxygen distribution and consumption within the retina in vascularised and avascular retinas and in animal models of retinal disease.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 20 (2), 175-208 (2001).</li><li>Country, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+metabolism:+A+comparative+look+at+energetics+in+the+retina.">Retinal metabolism: A comparative look at energetics in the retina.</a> Brain Research. 1672, 50-57 (2017).</li><li>Damsgaard, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+oxygen+supply+shaped+the+functional+evolution+of+the+vertebrate+eye.">Retinal oxygen supply shaped the functional evolution of the vertebrate eye.</a> Elife. , 8 (2019).</li><li>Buttery, R. G., Hinrichsen, C. F. L., Weller, W. L., Haight, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+thick+should+a+retina+be?+A+comparative+study+of+mammalian+species+with+and+without+intraretinal+vasculature.">How thick should a retina be? A comparative study of mammalian species with and without intraretinal vasculature.</a> Vision Research. 31 (2), 169-187 (1991).</li><li>Ames, A., Li, Y., Heher, E., Kimble, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energy+metabolism+of+rabbit+retina+as+related+to+function:+high+cost+of+Na++transport.">Energy metabolism of rabbit retina as related to function: high cost of Na+ transport.</a> The Journal of Neuroscience. 12 (3), 840-853 (1992).</li><li>Chase, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Evolution+of+retinal+vascularization+in+mammals:+A+comparison+of+vascular+and+avascular+retinae.">The Evolution of retinal vascularization in mammals: A comparison of vascular and avascular retinae.</a> Ophthalmology. 89 (12), 1518-1525 (1982).</li><li>Johnson, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ophthalmoscopic+studies+on+the+eyes+of+mammals.">Ophthalmoscopic studies on the eyes of mammals.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 254 (794), 207-220 (1968).</li><li>Johnson, G. L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contributions+to+the+comparative+anatomy+of+the+mammalian+eye,+chiefly+based+on+ophthalmoscopic+examination.">Contributions to the comparative anatomy of the mammalian eye, chiefly based on ophthalmoscopic examination.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 194 (194-206), 1-82 (1901).</li><li>Rodriguez-Ramos Fernandez, J., Dubielzig, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+comparative+anatomy+of+the+family+Rodentia.">Ocular comparative anatomy of the family Rodentia.</a> Veterinary Ophthalmology. 16, 94-99 (2013).</li><li>Copeland, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+vascularization+of+the+teleost+eye.">Functional vascularization of the teleost eye.</a> Current Topics in Eye Research. 3, 219-280 (1980).</li><li>Meyer, D. B., Crescitelli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Visual System in Vertebrates. Handbook of Sensory Physiology. 7, (1977).</li><li>Potier, S., Mitkus, M., Kelber, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+adaptations+of+diurnal+and+nocturnal+raptors.">Visual adaptations of diurnal and nocturnal raptors.</a> Seminars in Cell &amp; Developmental Biology. 106, 116-126 (2020).</li><li>Wittenberg, J. B., Wittenberg, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+secretion+of+oxygen+into+the+eye+of+fish.">Active secretion of oxygen into the eye of fish.</a> Nature. 194, 106-107 (1962).</li><li>Damsgaard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology+and+evolution+of+oxygen+secreting+mechanism+in+the+fisheye.">Physiology and evolution of oxygen secreting mechanism in the fisheye.</a> Comparative Biochemistry and Physiology. 252, 110840 (2021).</li><li>Damsgaard, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+acidification+mechanism+for+greatly+enhanced+oxygen+supply+to+the+fish+retina.">A novel acidification mechanism for greatly enhanced oxygen supply to the fish retina.</a> Elife. 9, (2020).</li><li>Wittenberg, J. B., Haedrich, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+choroid+rete+mirabile+of+the+fish+eye.+II.+Distribution+and+relation+to+the+pseudobranch+and+to+the+swimbladder+rete+mirabile.">The choroid rete mirabile of the fish eye. II. Distribution and relation to the pseudobranch and to the swimbladder rete mirabile.</a> Biological Bulletin. 146 (1), 137-156 (1974).</li><li>Wittenberg, J. B., Wittenberg, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+choroid+rete+mirabile+of+the+fish+eye.+I.+Oxygen+secretion+and+structure:+comparison+with+the+swimbladder+rete+mirabile.">The choroid rete mirabile of the fish eye. I. Oxygen secretion and structure: comparison with the swimbladder rete mirabile.</a> Biological Bulletin. 146 (1), 116-136 (1974).</li><li>Berenbrink, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Historical+reconstructions+of+evolving+physiological+complexity:+O2+secretion+in+the+eye+and+swimbladder+of+fishes.">Historical reconstructions of evolving physiological complexity: O2 secretion in the eye and swimbladder of fishes.</a> Journal of Experimental Biology. 210, 1641-1652 (2007).</li><li>Berenbrink, M., Koldkjaer, P., Kepp, O., Cossins, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+oxygen+secretion+in+fishes+and+the+emergence+of+a+complex+physiological+system.">Evolution of oxygen secretion in fishes and the emergence of a complex physiological system.</a> Science. 307 (5716), 1752-1757 (2005).</li><li>Keane, P. A., Sadda, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+imaging+in+the+twenty-first+century:+State+of+the+art+and+future+directions.">Retinal imaging in the twenty-first century: State of the art and future directions.</a> Ophthalmology. 121 (12), 2489-2500 (2014).</li><li>Yung, M., Klufas, M. A., Sarraf, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+applications+of+fundus+autofluorescence+in+retinal+disease.">Clinical applications of fundus autofluorescence in retinal disease.</a> International Journal of Retina and Vitreous. 2 (1), 12 (2016).</li><li>Ang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+angiography:+a+review+of+current+and+future+clinical+applications.">Optical coherence tomography angiography: a review of current and future clinical applications.</a> Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 256 (2), 237-245 (2018).</li><li>Spaide, R. F., Koizumi, H., Pozonni, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+depth+imaging+spectral-domain+optical+coherence+tomography.">Enhanced depth imaging spectral-domain optical coherence tomography.</a> American Journal of Ophthalmology. 146 (4), 496-500 (2008).</li><li>Shen, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+resonance+imaging+of+tissue+and+vascular+layers+in+the+cat+retina.">Magnetic resonance imaging of tissue and vascular layers in the cat retina.</a> Journal of Magnetic Resonance Imaging. 23 (4), 465-472 (2006).</li><li>Tan, G. X., Jamil, M., Tee, N. G., Zhong, L., Yap, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+reconstruction+of+chick+embryo+vascular+geometries+using+non-invasive+high-frequency+ultrasound+for+computational+fluid+dynamics+studies.">3D reconstruction of chick embryo vascular geometries using non-invasive high-frequency ultrasound for computational fluid dynamics studies.</a> Annals of Biomedical Engineering. 43 (11), 2780-2793 (2015).</li><li>Ho, S., Tan, G. X. Y., Foo, T. J., Phan-Thien, N., Yap, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+dynamics+and+fluid+dynamics+of+the+HH25+chick+embryonic+cardiac+ventricle+as+revealed+by+a+novel+4D+high-frequency+ultrasound+imaging+technique+and+computational+flow+simulations.">Organ dynamics and fluid dynamics of the HH25 chick embryonic cardiac ventricle as revealed by a novel 4D high-frequency ultrasound imaging technique and computational flow simulations.</a> Annals of Biomedical Engineering. 45 (10), 2309-2323 (2017).</li><li>Dittrich, A., Thygesen, M. M., Lauridsen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2D+and+3D+echocardiography+in+the+Axolotl+(Ambystoma+Mexicanum).">2D and 3D echocardiography in the Axolotl (Ambystoma Mexicanum).</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (141), e57089 (2018).</li><li>Jia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Split-spectrum+amplitude-decorrelation+angiography+with+optical+coherence+tomography.">Split-spectrum amplitude-decorrelation angiography with optical coherence tomography.</a> Optics Express. 20 (4), 4710-4725 (2012).</li><li>Clarke, K. W., Trim, C. M., Trim, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Veterinary Anaesthesia E-Book. , (2013).</li><li>Flecknell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laboratory Animal Anaesthesia. , (2015).</li><li>West, G., Heard, D., Caulkett, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Zoo Animal and Wildlife Immobilization and Anesthesia. , (2014).</li><li>Lauridsen, H., Hansen, K., N&#248;rg&#229;rd, M. &. #. 2. 1. 6. ;., Wang, T., Pedersen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+tissue+to+silicon+to+plastic:+three-dimensional+printing+in+comparative+anatomy+and+physiology.">From tissue to silicon to plastic: three-dimensional printing in comparative anatomy and physiology.</a> Royal Society Open Science. 3 (3), 150643 (2016).</li><li>Lauridsen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inside+out:+Modern+imaging+techniques+to+reveal+animal+anatomy.">Inside out: Modern imaging techniques to reveal animal anatomy.</a> PLoS One. 6 (3), 17879 (2011).</li><li>Ruthensteiner, B., He&#223;, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embedding+3D+models+of+biological+specimens+in+PDF+publications.">Embedding 3D models of biological specimens in PDF publications.</a> Microscopy Research and Technique. 71 (11), 778-786 (2008).</li><li>Damsgaard, C., Lauridsen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+vascular+imaging+in+the+eye+with+flow-enhanced+ultrasound.">Deep vascular imaging in the eye with flow-enhanced ultrasound.</a> bioRxiv. , 447055 (2021).</li><li>Mueller, R. L., Ryan Gregory, T., Gregory, S. M., Hsieh, A., Boore, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+size,+cell+size,+and+the+evolution+of+enucleated+erythrocytes+in+attenuate+salamanders.">Genome size, cell size, and the evolution of enucleated erythrocytes in attenuate salamanders.</a> Zoology. 111 (3), 218-230 (2008).</li><li>Greis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+evaluation+of+microvascular+blood+flow+by+contrast-enhanced+ultrasound+(CEUS).">Quantitative evaluation of microvascular blood flow by contrast-enhanced ultrasound (CEUS).</a> Clinical Hemorheology and Microcirculation. 49, 137-149 (2011).</li><li>Urs, R., Ketterling, J. A., Tezel, G., Silverman, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contrast-enhanced+plane-wave+ultrasound+imaging+of+the+rat+eye.">Contrast-enhanced plane-wave ultrasound imaging of the rat eye.</a> Experimental Eye Research. 193, 107986 (2020).</li><li>Walls, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The vertebrate eye and its adaptive radiation. , (1942).</li></ol>

L’imagerie vasculaire utilisant l’échographie améliorée par flux fournit une nouvelle méthode d’imagerie non invasive de la vascularisation de l’œil qui offre plusieurs avantages par rapport aux techniques actuelles, mais qui a ses limites intrinsèques. Le principal avantage de l’échographie à flux amélioré est la capacité de générer des angiographies oculaires avec une profondeur de champ qui dépasse l’épithélium pigmentaire rétinien, ce qui limite la profondeur de champ dans les techniques ...

Le métabolisme élevé de la rétine des vertébrés impose un compromis intrinsèque entre deux besoins opposés; des débits sanguins élevés et un chemin de lumière dépourvu de vaisseaux sanguins. Pour éviter les troubles visuels de la perfusion des globules rouges, la rétine de tous les vertébrés reçoit de l’oxygène et des nutriments via une feuille de capillaires derrière les photorécepteurs, les choriocapillaires1,2,3. Cependant, cette source unique de nutriments et d’oxygène impose une limitation de diffusion à l’épaisseur de la rétine4,5, de sorte que de nombreuses espèces visuellement actives possèdent une variété de réseaux vasculaires élaborés pour fournir un apport sanguin supplémentaire à cet organe métaboliquement actif6. Ces lits vasculaires comprennent des vaisseaux sanguins perfusant les couches internes de la rétine chez les mammifères et certains poissons4,7,8,9,10, des vaisseaux sanguins sur la face interne (orientée vers la lumière) de la rétine que l’on trouve chez de nombreux poissons, reptiles et oiseaux4,11,12,13, et des arrangements vasculaires à contre-courant de la choroïde du poisson, la choroïde rete mirabile, qui permet la génération de pressions partielles d’oxygène super-atmosphérique14,15,16,17,18,19,20. Bien que ces voies non choroïdiennes supplémentaires pour l’apport en nutriments rétiniens jouent un rôle essentiel dans l’alimentation des besoins métaboliques d’une vision supérieure4, l’anatomie tridimensionnelle de ces structures vasculaires est mal comprise, ce qui limite notre compréhension de l’évolution morphologique de l’œil des vertébrés.
Traditionnellement, l’approvisionnement en sang rétinien a été étudié à l’aide de techniques optiques, telles que l’ophtalmoscopie du fond d’œil. Cette catégorie de techniques fournit des informations non destructives à haut débit sur l’anatomie des vaisseaux sanguins non choroïdiens en haute résolution21 et est donc facilement utilisée dans le diagnostic clinique des anomalies de la structure des vaisseaux rétiniens22. Cependant, l’épithélium pigmentaire rétinien absorbe la lumière transmise et limite la profondeur de vue dans ces techniques optiques, fournissant des informations réduites sur la structure et la fonction choroïdiennes sans l’utilisation d’agent de contraste21. Des limites de profondeur similaires sont rencontrées dans la tomographie par cohérence optique (OCT). Cette technique peut générer des angiographies de fond d’œil à haute résolution en utilisant des ondes lumineuses au détriment technique de la pénétration en profondeur23, tandis que l’OCT d’imagerie en profondeur améliorée peut visualiser la choroïde au détriment de la qualité de l’imagerie rétinienne24. L’imagerie par résonance magnétique surmonte les limites optiques de l’ophtalmoscopie et de l’OCT et peut cartographier les couches vasculaires de la rétine, bien qu’à faible résolution25. L’histologie et la microtartographie (μCT) maintiennent la haute résolution des techniques optiques et fournissent des informations sur la morphologie vasculaire de l’œil entier4, mais les deux techniques nécessitent un prélèvement oculaire et ne sont donc pas possibles en clinique ou chez les espèces rares ou menacées. Pour surmonter certaines des limites de ces techniques d’imagerie rétinienne établies, l’étude présente ici un protocole d’échographie sur des animaux anesthésiés, où le mouvement du sang est cartographié in silico sur une série d’échographies bidimensionnelles également espacées couvrant un œil entier en appliquant une technique comparable à celle décrite précédemment pour l’imagerie embryonnaire et cardiovasculaire26,27, 28 et en angiographie octodique29. Cette approche permet de générer des angiographies oculaires profondes tridimensionnelles non invasives sans utiliser d’agent de contraste et ouvre de nouvelles voies pour cartographier la distribution du flux sanguin dans l’œil entre les espèces.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>MS-222</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E10521-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzocaine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E-1501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propofol</td>
			<td>B Braun</td>
			<td> 
			12260470_0320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alfaxalon</td>
			<td>Jurox</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>50019100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound scanner</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo 2100</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

deep vascular imaging in the eye with flow-enhanced ultrasound

La rétine dans l’œil est l’un des tissus les plus énergivores du corps et nécessite donc des taux élevés d’apport d’oxygène à partir d’un apport sanguin riche. La lame capillaire de la choroïde tapisse la surface externe de la rétine et est la source dominante d’oxygène dans la plupart des rétines vertébrées. Cependant, ce lit vasculaire est difficile à imager avec les techniques optiques traditionnelles en raison de sa position derrière la rétine très absorbant la lumière. Nous décrivons ici une technique d’échographie à haute fréquence avec une amélioration ultérieure du débit pour imager les lits vasculaires profonds (0,5-3 cm) de l’œil avec une résolution spatio-temporelle élevée. Cette méthode non invasive fonctionne bien chez les espèces avec des globules rouges nucléés (modèles animaux non mammifères et fœtaux). Il permet la génération d’angiographies tridimensionnelles non invasives sans l’utilisation d’agents de contraste, et il est indépendant des angles de flux sanguin avec une sensibilité plus élevée que les techniques d’imagerie par ultrasons basées sur Doppler.

La technique d’échographie améliorée par écoulement pour imager les lits vasculaires de l’œil peut être appliquée à diverses espèces et a actuellement été utilisée chez 46 espèces de vertébrés différentes (figure 1, tableau 1). La présence de globules rouges nucléés chez les vertébrés de mammifères non adultes offre un contraste positif entre le sang qui coule et les tissus statiques dans les enregistrements cinétiques (dossier supplémenta...

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Deep Vascular Imaging in the Eye with Flow-Enhanced Ultrasound

Nous présentons une technique d’échographie non invasive pour générer des angiographies tridimensionnelles dans l’œil sans utiliser d’agents de contraste.

Imagerie vasculaire profonde dans l’œil avec ultrasons améliorés par flux

The retina within the eye is one of the most energy-demanding tissues in the body and thus requires high rates of oxygen delivery from a rich blood ...

La technique Flow-Enhanced Ultrasound nous permet d’imager la vascularisation de l’œil en trois dimensions, sans utiliser d’agents de contraste. Le principal avantage de cette technique est sa stabilité pour imager le vesture, derrière la rétine pigmentée, ce qui est difficile avec plusieurs techniques d’imagerie optique. Nous démontrons cette technique chez les poissons rouges, mais elle peut être appliquée à toutes les espèces avec des globules rouges nucléés, ce qui permet aux chercheurs de mieux comprendre l’évolution fonctionnelle des yeux.Cette technique peut être appliquée par des chercheurs ayant une formation de base en imagerie échographique et en manipulation d’animaux. Après avoir confirmé un niveau optimal d’anesthésie, positionnez l’animal dans une posture qui permet un accès direct d’en haut, à l’œil. Placez un milieu échographique approprié sur l’œil de l’animal.Si des paupières écailleuses couvrent l’œil, déplacez-les doucement avec un coton-tige. Pour les animaux aquatiques, l’eau fonctionne bien comme milieu ultrasonore, Ensuite, positionnez le transducteur à ultrasons, médial à l’œil, dans une orientation caudale dorsale ventrale ou rostrale, en fonction de l’orientation souhaitée de l’image. En mode B, avec une profondeur de champ maximale, imagez la partie médiale et la plus profonde de l’œil, pour vous assurer que toutes les structures d’intérêt sont visibles dans le champ d’image.Traduisez lentement le transducteur de chaque côté, tout en inspectant les images en temps réel. Assurez-vous que toutes les structures d’intérêt sont visibles dans le champ d’image. Si ce n’est pas le cas, passez à un transducteur avec une fréquence plus basse et une plus grande profondeur de champ.Ajustez la profondeur de l’image, le décalage de profondeur, la largeur de l’image et le nombre de zones focales pour couvrir la région d’intérêt souhaitée dans les trois dimensions spatiales. Ensuite, définissez la fréquence d’images dans la plage de 50 à 120 images par seconde. Ensuite, ajustez le gain 2D à un niveau, de sorte que les structures anatomiques ne soient que juste visibles dans l’acquisition du mode B pour augmenter le rapport signal / bruit dans la reconstruction ultérieure améliorée par le flux.Pour acquérir une image 2D à flux amélioré à une position de tranche unique, traduisez le transducteur à cette position et procédez à la reconstruction d’image améliorée par flux. Pour acquérir un enregistrement 3D d’une région entière d’intérêt, traduisez le transducteur à un extrême de la région d’intérêt. Pour déterminer la position exacte de l’extrémité extrême, augmentez brièvement le gain 2D.Une fois le transducteur placé correctement, abaissez le gain 2D avant l’enregistrement, afin d’assurer un rapport signal/bruit maximal lors de la reconstruction ultérieure améliorée du débit. Pour chaque étape ou tranche de l’enregistrement 3D, acquérez plus de 100 images. Ensuite, à l’aide d’un micro-manipulateur ou d’un moteur de transducteur intégré, traduisez le transducteur dans toute la région d’intérêt, par pas de 25 ou 50 micromètres, et répétez l’acquisition de plus de 100 images pour chaque étape.Pour une construction d’imagerie améliorée par flux, exportez les enregistrements au format de fichier DICOM. Pour produire une image à flux unique améliorée basée sur un enregistrement de scène supérieur à 100 images, calculez l’écart type au niveau d’un pixel à l’aide de cette formule et répétez le calcul pour chaque tranche de l’enregistrement 3D. Pour automatiser le calcul de l’écart type et le processus de reconstruction d’image pour plusieurs tranches dans un enregistrement 3D, effectuez cette opération en mode batch à l’aide d’ImageJ et du script macro fourni dans le manuscrit de texte.Combinez toutes les images reconstruites en une seule pile d’images à l’aide de la commande Images to Stack dans ImageJ. Ensuite, à l’aide de la commande Propriétés, spécifie l’épaisseur de la tranche à partir de la taille d’étape utilisée lors de l’acquisition et enregistre la pile d’images en tant que fichier TIFF 3D. La présence de globules rouges nucléés chez les vertébrés de mammifères adultes non ad fournit un contraste positif du sang qui coule, par rapport aux tissus statiques dans les enregistrements de scène.Cependant, lorsqu’on analyse maintenant image par image, la distinction claire entre le sang et les tissus environnants est moins évidente. Cette procédure d’amélioration du flux sanguin, essentiellement, compile un enregistrement ponctuel multi-temps dans l’espace 2D, en une seule image, où dans la valeur inhérente du signal, la fluctuation en pixels, positionnés dans le sang qui coule, marque un écart-type plus élevé que le tissu statique environnant, produisant un contraste positif. Dans les acquisitions 3D, plusieurs tranches parallèles avec un espacement connu peuvent être combinées en données d’image 3D.Il peut être utilisé pour le rendu de volume tridimensionnel et la modélisation anatomique. L’imagerie échographique basée sur Doppler offre également la possibilité d’imager spécifiquement le flux sanguin, cependant, avec moins de sensibilité que cette méthode. Cette procédure d’échographie améliorée par le flux sanguin permet l’imagerie du flux sanguin dans une gamme d’espèces avec des globules rouges nucléés.Les lits vasculaires oculaires profonds, tels que la choroïde rete mirabile chez certains poissons, peuvent être imagés s’ils sont présents dans l’espèce. La méthode est limitée par l’absence de globules rouges nucléés chez les mammifères, dans laquelle la procédure d’amélioration du flux produit un certain degré de contraste du flux sanguin, mais pas aussi distinct que chez les espèces avec des globules rouges nucléés. Les ultrasons à flux amélioré sont sensibles au bruit de mouvement.Les mouvements respiratoires peuvent causer un flou de l’image et des artefacts, tels que l’amélioration de la bordure tissulaire. La grille prospective ou rétrospective peut être utilisée pour ajuster le bruit de mouvement. Pour les acquisitions 2D et 3D, il est crucial de limiter les artefacts de mouvement causés par le déplacement de l’animal, en raison d’une anesthésie inadéquate sur un transducteur instable.Le développement de cette technique a ouvert la voie à l’examen in vivo non invasif des réseaux vasculaires profonds dans l’œil de la grande majorité des vertébrés, qui possèdent des érythrocytes nucléés.

Research

JoVE Journal

Biology

Labeling hESCs and hMSCs with Iron Oxide Nanoparticles for Non-Invasive in vivo Tracking with MR Imaging

Étiquetage CSEh et hMSCs d&#39;oxyde de fer nanoparticules pour les non-invasives dans le suivi in ​​vivo avec IRM

In recent years, stem cell research has led to a better understanding of developmental biology, various diseases and its potential impact on regenerative ...

Recherche

Biologie

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

Étiquetage des cellules souches avec des colorants fluorescents pour les non-invasive de détection avec l&#39;imagerie optique

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Live Imaging of Glial Cell Migration in the Drosophila Eye Imaginal Disc

Imagerie de la migration en direct des cellules gliales dans le disque Eye drosophile Imaginal

Glial cells of both vertebrate and invertebrate organisms must migrate to final target regions in order to ensheath and support associated neurons.  While ...

In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

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L&#39;imagerie in vivo de Deep couches corticales utilisant un microprisme

We present a protocol for in vivo imaging of cortical tissue using a deep-brain imaging probe in the shape of a microprism.  Microprisms are 1-mm in size ...

Functional Imaging of Brown Fat in Mice with 18F-FDG micro-PET/CT

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Imagerie fonctionnelle de la graisse brune chez les souris avec FDG micro-PET/CT

Brown adipose tissue (BAT) differs from white adipose  tissue (WAT) by its discrete location and a brown-red color due to rich  vascularization and high ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

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Vivre imagerie de dédouanement cellulaire par apoptose au cours<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryogenèse

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

Isolement de murin coronaire vasculaires cellules de muscle lisse

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...

Implantation of Electrospun Vascular Grafts with Optimized Structure in a Rat Model

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Here, we present a protocol to fabricate macroporous PCL vascular graft and describe an evaluation protocol by using a rat model of abdominal aorta ...

Evaluating Vascular Hyperpermeability-inducing Agents in the Skin with the Miles Assay

Évaluation vasculaires hyperperméabilité inducteurs enzymatiques de la peau avec le test de Miles

The primary function of the vascular endothelium in vertebrate organisms is to serve as a barrier between the blood and each tissue of the body, whereby ...

Assessment of Vascular Tone Responsiveness using Isolated Mesenteric Arteries with a Focus on Modulation by Perivascular Adipose Tissues

Évaluation de la réactivité de la tonalité vasculaire à l’aide d’artères mésentériques isolées avec focalisation sur la modulation par les tissus adipeux Perivasculaires