Name: high-resolution respirometry to assess bioenergetics in cells and tissues using chamber- and plate-based respirometers
Uploaded: 2021-10-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about High-Resolution Respirometry to Assess Bioenergetics in Cells and Tissues Using Chamber- and Plate-Based Respirometers at JoVE.com

تم دعم هذا العمل بتمويل من أكاديمية فنلندا (C.B.J) ، ومؤسسة Magnus Ehrnroot (C.B.J) ، وزمالة الدكتوراه من كلية الدراسات العليا المتكاملة لعلوم الحياة (R.A).

يتم إجراء جميع التجارب على الحيوانات وفقا للمجلس الوطني لاستعراض التجارب على الحيوانات والوكالة الإدارية الإقليمية للدولة لجنوب فنلندا. تم استخدام ذكور الفئران C57BL/6JOlaHsd (4-6 أشهر) في هذه الدراسة. تم الحصول على الموافقة على استخدام خطوط الخلايا البشرية من لجنة الأخلاقيات المؤسسية بجامعة هل...

تقليديا ، تمت دراسة الطاقة الحيوية الميتوكوندريا باستخدام أقطاب الأكسجين من نوع كلارك. غير أن الافتقار إلى القرار والإنتاجية يبرر التقدم التكنولوجي. حتى الآن ، تم اعتماد O2k (المشار إليه باسم cHRR) و Seahorse XF96 Flux Analyzer (المشار إليه باسم mHRR) على نطاق واسع في مجال الطاقة الحيوية الخلوية. هنا ، نقدم م...

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2 mL Potter-Elvehjem Glass/PTFE Tissue Grinder/Homogenizer</td>
			<td>Omni International</td>
			<td>07-358029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95% O2, 5% CO2 medical gas mixture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Potter for tissue grinding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ADP</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A 4386</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antimycin A</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A 8674</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>PHR1279-1G</td>
			<td>Chemical, dissolve in ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA (fatty accid free)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A 6003</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCO3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C 4830</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytochrome c</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C 7752</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digitonin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D 5628</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithiothreitol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D 0632</td>
			<td>Chemical, dissolve in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Sucrose</td>
			<td>Roth</td>
			<td>4621.1</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (High glucose)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>41965-039</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium&#160;(No Glucose)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A14430-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E 4378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Etomoxir</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E1905</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 15 ml Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AM12500</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 50 ml Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AM12501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FCCP</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C 2920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7021</td>
			<td>Chemical, dissolve in ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G 1626</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMax&#160;(100x)&#160;(200 nM&#160;L-alanyl-L-glutamine dipeptide)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>35050061</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEK293 cells</td>
			<td>ATTC</td>
			<td>CRL-1573</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>0267151B</td>
			<td>Instrument for cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H 7523</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imidazole</td>
			<td>Fluka</td>
			<td>56750</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.04936</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-carnitine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C0283</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M 1000</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES hydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M8250</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M 9272</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2ATP</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A 2383</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2Phosphocreatine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P 7936</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na-pyruvate&#160;(100 mM)&#160;(100x)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11360070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEAA&#160;(Non-essential amino acids) 100x</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11140035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal FBS&#160;(10x)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10500064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2k-Core: Oxygraph-2k</td>
			<td>Oroboros Instruments</td>
			<td>10000-02</td>
			<td>High-resolution respirometry instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2k-Titration Set</td>
			<td>Oroboros Instruments</td>
			<td>20820-03</td>
			<td>Hamilton syringes for chemical injections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligomycin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>O 4876</td>
			<td>Chemical, dissolve in ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palmitoylcarnitine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P 4509</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce BCA Protein Assay Kit</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyruvate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P 2256</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RIPA-Buffer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>89900</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotenone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R 8875</td>
			<td>Chemical, dissolve in ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S7900</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td> 
			Seahorse XF DMEM assay medium pack, pH 7.4</td>
			<td> 
			Agilent, Santa Clara, CA</td>
			<td>103680-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 Extracellular Flux Analyzer</td>
			<td> 
			Agilent, Santa Clara, CA</td>
			<td></td>
			<td>High-throughput respirometry instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 FluxPak</td>
			<td> 
			Agilent, Santa Clara, CA</td>
			<td></td>
			<td> 
			Includes assay plates, cartridges, loading guides for transferring compounds to the assay cartridge, and calibrant solution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small scissors</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-951-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2002</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Succinate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S 2378</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taurine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T 8691</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TMPD</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T 3134</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue solution</td>
			<td>Merck</td>
			<td>72-57-1</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin 0.25% EDTA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Two thin-edged forceps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-000-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uridine stock (500x)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>U3750</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-resolution respirometry to assess bioenergetics in cells and tissues using chamber- and plate-based respirometers

يسمح قياس التنفس عالي الدقة (HRR) بمراقبة الفسفرة التأكسدية في الوقت الفعلي لتحليل حالات الطاقة الخلوية الفردية وتقييم مجمعات الجهاز التنفسي باستخدام بروتوكولات المعايرة بالتحليل الحجمي المتنوعة بين الركيزة وفك الاقتران (SUIT). هنا ، يتم توضيح استخدام جهازين لقياس التنفس عالي الدقة ، ويتم تقديم مجموعة أساسية من البروتوكولات المطبقة لتحليل الخلايا المستزرعة وألياف الهيكل العظمي وعضلة القلب والأنسجة الرخوة مثل الدماغ والكبد. يتم توفير بروتوكولات للخلايا والأنسجة المستزرعة لمقياس التنفس القائم على الغرفة والخلايا المستزرعة لمقياس التنفس القائم على الصفائح الدقيقة ، وكلاهما يشمل بروتوكولات التنفس القياسية. لأغراض المقارنة، يتم استخدام خلايا HEK293 المصممة من قبل كريسبر والتي تعاني من نقص في ترجمة الميتوكوندريا مما يسبب نقصا في الجهاز التنفسي المتعدد مع كلا الجهازين لإثبات العيوب الخلوية في التنفس. يسمح كل من مقياس التنفس بقياس شامل للتنفس الخلوي مع مزاياه التقنية وملاءمته اعتمادا على سؤال البحث والنموذج قيد الدراسة.

هنا ، نقدم بروتوكولات لتحديد الطاقة الحيوية الميتوكوندريا في الخلايا حقيقية النواة ، والأنسجة غير الليفية (على سبيل المثال ، المخيخ) ، والأنسجة الليفية (على سبيل المثال ، العضلات الهيكلية). بالنسبة للخلايا حقيقية النواة ، تم قياس HEK293 مع ضربة قاضية هندسية من كريسبر من بروتينين مختلفين مرتب...

Watch this Scientific Journal Video about High-Resolution Respirometry to Assess Bioenergetics in Cells and Tissues Using Chamber- and Plate-Based Respirometers at JoVE.com

High-Resolution Respirometry to Assess Bioenergetics in Cells and Tissues Using Chamber- and Plate-Based Respirometers

أصبح تقييم الفسفرة التأكسدية باستخدام مقاييس التنفس عالية الدقة جزءا لا يتجزأ من التحليل الوظيفي للميتوكوندريا واستقلاب الطاقة الخلوية. هنا ، نقدم بروتوكولات لتحليل استقلاب الطاقة الخلوية باستخدام مقاييس التنفس عالية الدقة القائمة على الغرفة والصفائح الدقيقة ونناقش الفوائد الرئيسية لكل جهاز.

قياس التنفس عالي الدقة لتقييم الطاقة الحيوية في الخلايا والأنسجة باستخدام مقاييس التنفس القائمة على الغرفة والصفائح

High-resolution respirometry (HRR) allows monitoring oxidative phosphorylation in real-time for analysis of individual cellular energy states and ...

توفر الميتوكوندريا الطاقة الخلوية من خلال الفسفرة التأكسدية التي تساهم في جميع العمليات داخل الخلية تقريبا. وبالتالي ، ترتبط اختلالات الميتوكوندريا بمجموعة واسعة من الأمراض. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي القياس في الوقت الحقيقي للطاقة الحيوية الميتوكوندريا عن طريق استهلاك الأكسجين ، وبالتالي ، تقييم دقيق لإجمالي استقلاب الطاقة الخلوية.يسمح قياس التنفس عالي الدقة بإجراء تقييم مباشر لما يفشل في نظام الفسفرة التأكسدي ، مما قد يوفر أدلة تشخيصية في أمراض الميتوكوندريا الأولية واختلالات الميتوكوندريا الثانوية المرتبطة بالعديد من الاضطرابات. سيوضح الإجراء ريان عوضبرساد ، طالب الدكتوراه في مختبري. للبدء ، قم بإجراء معايرة الأكسجين عن طريق تشغيل أجهزة قياس التنفس في 2.1 ملليلتر من وسط التنفس الميتوكوندريا عند 37 درجة مئوية لأكثر من 45 دقيقة والمتابعة إذا كان التباين الأساسي في حدود أربعة بيكومولات في الثانية.زراعة خلايا HEK293 في DMEM عالية الجلوكوز تستكمل مع 10٪ FBS المنشط بالحرارة ، GlutaMAX ، الأحماض الأمينية غير الأساسية ، بيروفات الصوديوم ، ويوريدين في حاضنة عند 37 درجة مئوية عند 5٪ ثاني أكسيد الكربون. في يوم التجربة ، قم بجمع الخلايا وعدها وإعادة تعليق 2.5 مليون خلية في وسط تنفس 2.5 ملليلتر. لتقييم التنفس الروتيني ، أضف 2.3 ملليلتر من تعليق الخلايا المتوسطة للتنفس الدافئ إلى الغرفة.قم بتشغيل الغرف عند 37 درجة مئوية وسرعة تحريك تبلغ 700 دورة في الدقيقة. انتظر لمدة ثلاث دقائق على الأقل للسماح للوسائط بتفريغ الغاز، ثم أغلق الغرف عن طريق لف السدادة في حركة دوارة. بعد ذلك ، استنشق السائل الزائد أعلى السدادة.بعد 10 دقائق، احصل على إشارة تدفق أكسجين مستقرة لتسجيل التنفس الروتيني أو الحالة الأولى. لإجراء تحليل OXPHOS في الخلايا السليمة ، أضف ميكرولترين من 0.01-millimolar oligomycin للحصول على تركيز نهائي من 10-nanomolar. معايرة FCCP من مخزون اثنين من الملليمولات عن طريق إضافة 0.6 ميكرولتر في خطوات 0.2 ميكرولتر حتى لا يتم ملاحظة أي زيادة في التنفس والتنفس غير مقترن إلى أقصى حد.بعد ذلك ، أضف ميكرولتر واحد من روتينون مللي مولا واحد للحصول على تركيز نهائي من 0.5-micromolar. ثم ، أضف ميكرولترين من ملليغرام واحد لكل مخزون مضاد للمايسين ملليلتر للحصول على تركيز نهائي قدره ميكروغرام واحد لكل ملليلتر. أعد أكسجة الغرفة إلى نفس مستوى الأكسجين ، حوالي 150 ميكرومولار ، عن طريق رفع المكبس.بعد ذلك ، أضف خمسة ميكرولترات من الأسكوربات المولي 0.8 للحصول على تركيز نهائي من اثنين من الملليمول. ثم ، أضف على الفور خمسة ميكرولترات من TMPD 0.2-molar للحصول على تركيز نهائي قدره 0.5 ملليمولار وتقييم النشاط الوريدي المعقد. عندما يتم الوصول إلى ذروة تدفق الأكسجين باستخدام TMPD ، أضف خمسة ميكرولترات أو أزيد رباعي الأضواء للحصول على تركيز نهائي من 10 ملليمول.بعد ذلك ، استمر في الجري لمدة خمس دقائق على الأقل لفحص الأكسدة التلقائية ل TMPD لحساب المستوى الأساسي IV المعقد. بعد الجري ، اجمع ملليلتر واحد من تعليق العينة من كل غرفة وأجهزة الطرد المركزي عند 1،000 غرام للخلايا المتخلل أو عند 20،000 غرام لتحلل الأنسجة. ثم ، تخلص من supernatant وتجميد الكريات عند 80 درجة مئوية تحت الصفر لمزيد من التحليل في المصب.أولا ، زرع الخلايا وفقا لمعدلات نمو خطوط الخلايا الفردية. تمييع الأوليغومايسين ، FCCP ، الروتينون ، ومضاد المايسين في ثلاثة ميكرولترات من الفحص متوسط إلى تركيز نهائي من 1.5-micromolar ، 1.125-micromolar ، و micromolar واحد ، على التوالي. في وقت لاحق ، املأها في منافذ منفصلة.راقب منافذ الحقن لضمان تحميل متساو للعينات. قم بتشغيل النظام القائم على الصفائح الدقيقة والكمبيوتر وقم بموازنتهما عند 37 درجة مئوية لمدة ثلاث ساعات على الأقل. في يوم الفحص القائم على الصفائح الدقيقة ، تحقق من التقاء صفيحة زراعة الخلايا ، ومورفولوجيا الخلايا ، وتأكد من أن آبار الخلفية فارغة.ثم ، قم بإزالة كل شيء باستثناء 20 ميكرولتر من وسط الثقافة من كل بئر. ثم اغسل كل بئر ب 90 ميكرولتر من متوسط الفحص وأضف 100 ميكرولتر من متوسط الفحص لجعل الحجم النهائي يصل إلى 120 ميكرولتر. بعد ذلك ، احتضن اللوحة عند 37 درجة مئوية في حاضنة بدون ثاني أكسيد الكربون لمدة 60 دقيقة.بعد استرداد اللوحة من الحاضنة ، قم بإزالة الغطاء ووضع اللوحة الدقيقة في الفتحة. انقر فوق متابعة لبدء التشغيل. بعد الانتهاء من الجري ، أخرج اللوحة وأزل وسائط الفحص المتبقية دون إزعاج الخلايا.ثم ، قم بتجميد اللوحة بأكملها عند 80 درجة مئوية تحت الصفر. بعد إجراء تجارب الديجيتونين للترقي والتنفس ، تم تسجيل آثار استهلاك الأكسجين الخام لخلايا HEK293 من النوع البري وخلايا HEK293 مع ضربة قاضية جينية بوساطة كريسبر مما أدى إلى نقص OXPHOS متعدد. تم الحصول على آثار استهلاك الأكسجين المتراكبة التي تم إدخالها بشكل طبيعي.تظهر CRISPR Knockout 1 ضعف التنفس ولا تظهر CRISPR KNOCKOUT 2 أي تنفس مقارنة بالنوع البري عند تطبيعها إلى رقم الخلية. تم تحديد كميات البروتين كميا وتم تطبيع قيم التنفس إلى كمية البروتين من أجل تحديد القيم المطلقة لحالات الجهاز التنفسي ونسب التحكم في التدفق ذات الصلة. تم العثور على معدلات التحمض خارج الخلية لزيادة نقص OXPHOS في CRISPR KNOCKOUT 2 ، مما يشير إلى تعويض نقص الفسفرة المؤكسدة الميتوكوندريا في خلايا HEK293 من خلال زيادة تحلل السكر.بالإضافة إلى ذلك ، تم تحديد قيم التنفس في وجود oligomycin، FCCP، و rotenone، وتم تطبيع القيم التي تم الحصول عليها إلى كمية البروتين. تمت دراسة آثار استهلاك الأكسجين الطبيعي للبروتين لخلايا HEK293 من النوع البري وخلايا HEK293 مع نقص ترجمة الميتوكوندريا بوساطة كريسبر مما تسبب في نقص OXPHOS متعدد. تم الحصول على آثار استهلاك الأكسجين الطبيعية للأنسجة ذات الوزن الرطب من مخيخ الفأر والعضلات الوحيدة للفأر.تظهر عضلات النعل ثلاثة أضعاف OXPHOS وقدرة التنفس من المخيخ. مع قياس التنفس القائم على الغرفة ، من المهم العمل بسرعة ، حيث ستنخفض وظيفة الميتوكوندريا في اللحظة التي تجمع فيها عيناتك ، ومع قياس التنفس القائم على الصفائح ، من الأهمية بمكان الحصول على كثافة بذر مثالية لتقليل التباين. لمزيد من التحليل ، يمكن تحديد كمية البروتين أو النشاف المناعي.هذا يمكن أن يحدد ما إذا كان التغيير في وظيفة الجهاز التنفسي الميتوكوندريا يرجع إلى وفرة مجمعات OXPHOS أو كمية الميتوكوندريا. بالفعل قبل قرن من الزمان ، تم العثور على خلايا سرطانية لإجراء تحلل السكر اللاهوائي بالإضافة إلى OXPHOS الميتوكوندريا. وهذا يؤكد الحاجة إلى فحص الطاقة الحيوية للميتوكوندريا.هنا أظهرنا اثنين من مقاييس التنفس التي تعتبر المعيار الذهبي اليوم.

Research

JoVE Journal

Biology

Solid Plate-based Dietary Restriction in Caenorhabditis elegans

Solid Plate-based Dietary Restriction in Caenorhabditis elegans

اللوحة الصلبة المستندة إلى تقييد الغذائية في انواع معينة ايليجانس</em

Reduction of food intake without malnutrition or starvation is known to increase lifespan and delay the onset of various age-related diseases in a wide ...

Using High Resolution Computed Tomography to Visualize the Three Dimensional Structure and Function of Plant Vasculature

باستخدام التصوير المقطعي عالي الدقة لتصور البنية الثلاثية وظيفة الأوعية الدموية النباتية

High resolution x-ray computed tomography (HRCT) is a non-destructive diagnostic imaging technique with sub-micron resolution capability that is now being ...

Rapid and Efficient Zebrafish Genotyping Using PCR with High-resolution Melt Analysis

سريعة وفعالة الزرد التنميط الجيني باستخدام PCR عالية الدقة مع تحليل نذوب

Zebrafish is a powerful vertebrate model system for studying development, modeling disease, and performing drug screening. Recently a variety of genetic ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

قياس معدل الأيض في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; باستخدام قياس التنفس

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...

Silencing of BRCA2 to Identify Novel BRCA2-regulated Biological Functions in Cultured Human Cells

Silencing of BRCA2 to Identify Novel BRCA2-regulated Biological Functions in Cultured Human Cells

إسكات<em&gt; BRCA2</em&gt; من التعرف على رواية الوظائف البيولوجية التنظيم BRCA2 في الخلايا البشرية المستزرعة

Silencing of the tumor suppressor protein BRCA2 and its detection by conventional biochemical analyses represent a great technical challenge owing to the ...

High Resolution Quantification of Crystalline Cellulose Accumulation in Arabidopsis Roots to Monitor Tissue-specific Cell Wall Modifications

High Resolution Quantification of Crystalline Cellulose Accumulation in Arabidopsis Roots to Monitor Tissue-specific Cell Wall Modifications

قرار الكمي عال من بلوري السليلوز تراكم في<em&gt; نبات الأرابيدوبسيس</em&gt; جذور لرصد الأنسجة محددة جدار الخلية تعديلات

Plant cells are surrounded by a cell wall, the composition of which determines their final size and shape. The cell wall is composed of a complex matrix ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

عالية الدقة التصوير الوقت الفاصل بين وتحليل الآلي للأنيبيب حيوية في المعيشة السري الإنسان خلايا الوريد غشائي

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

High-resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Permeabilized and Intact Cells

عالية الدقة قياس التنفس لتقييم وظيفة الميتوكوندريا في Permeabilized وخلايا سليمة

A high-resolution oxygraph is a device for measuring cellular oxygen consumption in a closed-chamber system with very high resolution and sensitivity in ...

Isolation of Intact Mitochondria from Skeletal Muscle by Differential Centrifugation for High-resolution Respirometry Measurements

عزل الميتوكوندريا سليمة من العضلات الهيكلية التي كتبها التفاضلية الطرد المركزي لقياسات عالية الدقة قياس التنفس

Mitochondria are involved in cellular energy metabolism and use oxygen to produce energy in the form of adenosine triphosphate (ATP). Differential ...

High-resolution Respirometry to Measure Mitochondrial Function of Intact Beta Cells in the Presence of Natural Compounds

ريسبيروميتري عالية الدقة لقياس الوظيفة المتقدرية سليمة من خلايا بيتا حضور المركبات الطبيعية

High-resolution respirometry allows for the measurement of oxygen consumption of isolated mitochondria, cells and tissues. Beta cells play a critical role ...