Name: sample preparation for computed tomography-based three-dimensional visualization of murine hind-limb vessels
Uploaded: 2021-10-07T14:30:00
Duration: 4 min 35 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sample Preparation for Computed Tomography-based Three-dimensional Visualization of Murine Hind-limb Vessels at JoVE.com

Vi tackar Yasuyo Kimura, Megumi Nagahiro och Saeko Tokunaga för det utmärkta tekniska stödet i djurförsök.

Alla ingrepp utfördes i enlighet med Kumamoto Universitys riktlinjer för djurvård (godkännandereferens nr. M30-040/A2020-105), som överensstämmer med US National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (publikation nr 85-23, reviderad 2011).
1. Förberedelse
<ol><li>Förbered perfusionsapparaturen och vasodilatatorbufferten (4 mg/L papaverinhydroklorid, 4 g/L; adenosin, 1 g/L; heparin, 1 U/ml i fosfatbuffrad saltlösning (PBS)). OBS: Refluxanordningen och vasodilatatorreagenserna är desamma som de som rapporteras av Weyers et al.5.</li>
	<li>Anslut 22 G-katetern, förlängningsröret på 2 ml och trevägskranen (figur 1A). OBS: Justera mätaren efter djurets storlek. För vuxna C57BL/6 möss är 22 G optimalt.</li>
	<li>Fyll tryckperfusionsapparaten med vasodilatatorbufferten (figur 1A). OBS: Undvik bildandet av bubblor för att förhindra störningar i fyllningen av kontrastmediet.</li>
</ol>2. Perfusion
<ol><li>Injicera 1 U/g heparin i PBS i intraperitoneal hålighet 30 min före operationen.</li>
	<li>Bedöva musen helt med isofluran och avliva den genom livmoderhalscancer förskjutning.</li>
	<li>Efter halshuggning, gör ett mittlinjesnitt i bröstbenet och fixa den öppna bröstkorgen med stift. OBS: Undvik att skada membranet för att undvika läckage av kontrasten.</li>
	<li>Skär den stigande aortan och ta bort hjärtat.</li>
	<li>Ta bort lungan och exponera den fallande aortan. OBS: Skada inte den fallande aortan.</li>
	<li>Skär den fallande aortan diagonalt för att exponera tvärsnittet (bild 1B). OBS: Skala inte av aortan; en diagonal sektion är bättre för kateterinsättning.</li>
	<li>För in 22 G-katetern i den fallande aortan medan vasodilatationsbufferten körs. OBS: Om katetern sätts in under körningen av vasodilationsbufferten undviks luftföroreningar.</li>
	<li>Fäst kateterns rot (bild 1C).</li>
	<li>Gör en knut för att förhindra läckage på grund av återflöde.</li>
	<li>Perfusera en uppvärmd vasodilateringslösning (papaverinhydroklorid, 4 g/l; adenosin, 1 g/l; heparin, 1 U/ml) i 3 minuter vid ett fast tryck mellan 13 och 15 kPa.</li>
	<li>Perfusera en lösning på 4% paraformaldehyd i (PBS) i 3 min. OBS: Fixeringens framgång kan bekräftas av fotens rörelse (figur 1D).</li>
	<li>Förbered kontrastmediet strax före perfusion. OBS: Justera utspädningshastigheten enligt provet. för vuxna möss, blanda fläcken och spädningsfärgen i ett förhållande av 1:1.</li>
	<li>Stoppa perfusionen och fyll förlängningsröret med 2 ml utspädd kontrastmedium (figur 1E). OBS: Kontrastmediet bör injiceras långsamt för att undvika skador på blodkärlen.</li>
	<li>Perfusera kontrastmediet vid ett fast tryck mellan 13 och 15 kPa.<ol>
<li>För att visualisera artärer, kontrollera tånagelen för att bekräfta att kontrastmediet har nått artären (figur 1F).</li>
		<li>För att visualisera alla kärl, kontrollera den sämre vena cava av membranet för att bekräfta fullständig cirkulation av kontrastmediet. OBS: I början innehåller kontrasten vasodilaterande lösning; Därför är dess korrekta cirkulation nödvändig.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Stäng trevägskranen och ta bort röret (bild 1G). OBS: Om trevägskranen inte är stängd kommer kontrasten att flöda bakåt.</li>
	<li>Inkubera provet över natten vid 4 °C.</li>
	<li>Ta bort huden och fixera den i 10% formaldehydlösning.</li>
</ol>3. Visualisering
Visualiseringsprotokollen varierar beroende på CT-skannern. En mikrofokus röntgen CT skanner användes i detta protokoll. Det är nödvändigt att optimera avbildningsmetoden enligt varje CT-skanner.
<ol><li>Fixera provet i ett 50 ml-rör som innehåller PBS.</li>
	<li>Lägg provröret på bordet.</li>
	<li>Skanna provet med en spänning på 50 kV och en ström på 600 μA, vilket säkerställer ett fokus-till-centrum-avstånd på 75,2 mm. OBS: En dimension på 1 voxel var 28,7 μm x 28,7 μm x 28,7 μm i denna inställning.</li>
	<li>Ladda de förvärvade bilddata med Fiji, en öppen källkodsplattform för biologisk bildanalys.</li>
	<li>Bestäm muskel voxel värdet med hjälp av gastrocnemius muskeln.<ol>
<li>Välj gastrocnemiusmuskeln med hjälp av rektangelverktyget .</li>
		<li>Kontrollera medelvärdet och standardavvikelsen (SD) från histogrammet (Analysera | Histogram).</li>
		<li>Definiera muskel voxel densitet som medelvärde + 2SD av gastrocnemius muskeln.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ställ in muskel voxel densitet som den lägre tröskelvärdet (Bild | justera | Tröskelvärde | Ange | lägre tröskelvärde). OBS: Kärlområdet och benområdet finns kvar i binariserade data efter att tröskelvärdet har angetts.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis.">Angiogenesis.</a> Annual Review of Medicine. 57, 1-18 (2006).</li><li>Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+in+cancer,+vascular,+rheumatoid+and+other+disease.">Angiogenesis in cancer, vascular, rheumatoid and other disease.</a> Nature Medicine. 1 (1), 27-31 (1995).</li><li>Kochi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+arterial+anatomy+of+the+murine+hindlimb:+functional+role+in+the+design+and+understanding+of+ischemia+models.">Characterization of the arterial anatomy of the murine hindlimb: functional role in the design and understanding of ischemia models.</a> PLoS One. 8 (12), 84047 (2013).</li><li>Limbourg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+postnatal+arteriogenesis+and+angiogenesis+in+a+mouse+model+of+hind-limb+ischemia.">Evaluation of postnatal arteriogenesis and angiogenesis in a mouse model of hind-limb ischemia.</a> Nature Protocols. 4 (12), 1737-1746 (2009).</li><li>Weyers, J. J., Carlson, D. D., Murry, C. E., Schwartz, S. M., Mahoney, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+perfusion+and+filling+of+mouse+coronary+vasculature+as+preparation+for+micro+computed+tomography+imaging.">Retrograde perfusion and filling of mouse coronary vasculature as preparation for micro computed tomography imaging.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (60), e3740 (2012).</li><li>Arima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+collateral+source+characteristics+with+3-dimensional+analysis+using+micro-X-ray+computed+tomography.">Evaluation of collateral source characteristics with 3-dimensional analysis using micro-X-ray computed tomography.</a> Journal of the American Heart Association. 7 (6), 007800 (2018).</li><li>Tian, T., Yang, Z., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+clearing+technique:+Recent+progress+and+biomedical+applications.">Tissue clearing technique: Recent progress and biomedical applications.</a> Journal of Anatomy. 238 (2), 489-507 (2021).</li><li>Susaki, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+CUBIC+protocols+for+whole-brain+and+whole-body+clearing+and+imaging.">Advanced CUBIC protocols for whole-brain and whole-body clearing and imaging.</a> Nature Protocols. 10 (11), 1709-1727 (2015).</li><li>Fernandez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+in+liver+disease.">Angiogenesis in liver disease.</a> Journal of Hepatology. 50 (3), 604-620 (2009).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+in+pancreatic+cancer:+current+research+status+and+clinical+implications.">Angiogenesis in pancreatic cancer: current research status and clinical implications.</a> Angiogenesis. 22 (1), 15-36 (2019).</li></ol>

Författarna har inga intressekonflikter att deklarera.

Denna rapport introducerar en sofistikerad metod för att visualisera blodkärl i underkroppen. Det finns flera kritiska steg i denna process: den första är preperfusion före injektionen av kontrastmedium. Om tillräckligt med blod inte avlägsnas kommer kontrasten inte att fylla systemet. Dessutom stör införandet av luftbubblor fyllningen av kontrasten; Luften i kretsen måste därför avlägsnas helt. Eftersom kontrastmediet inte stelnar omedelbart efter injektionen bör provet inte flyttas i alltför hög utsträckning.
Denna metod är användbar för att utvärdera den ökade bildandet av blodkärl och cirkulation, såsom oavsiktlig cirkulation. Omvänt, som en begränsning, är det svårt att utvärdera smala blodkärl, eftersom det är svårt att skilja mellan stenos och en konstgjord minskning av kontrastmediet. Dessutom är det utmanande att utvärdera blodkärl i ben, eftersom separationen av blod och ben är svår.
En alternativ metod för 3D-visualisering är immunstaining. Med hjälp av vävnadsrensningstekniken finns flera metoder tillgängliga för 3D-avbildning7. Immunostaining är fördelaktigt eftersom det möjliggör färgning av specifika proteiner med hjälp av antikroppar. En färsk rapport utmanar helkroppstomografi baserat på immunostaining8; CT-baserad avbildning kräver dock ingen vävnadsrensning.
Denna metod möjliggör visualisering av alla kärl under membranet, inklusive bukorganen. Angiogenes i bukorganen har en stark inverkan på att upprätthålla homeostas och utveckla sjukdomar9,10. Eftersom detta protokoll optimerades för utvärdering av de nedre extremitetskärlen, skulle organ-specifika priming möjliggöra visualisering av angiogenes associeras med någon faktor, såsom inflammation eller tumörer.

Blodkärl är komplexa nätverk med trädliknande strukturer. Angiogenes och ny kärlbildning spelar viktiga roller i upprätthållandet av organhomeostas1. Angiogenes regleras för behandling av ischemiska och maligna sjukdomar2. Det är därför viktigt att förstå de underliggande mekanismerna för angiogenes. Murin bakbenskärl används ofta som en användbar modell för kärlforskning3; ligatur av iliaca eller femorala gatan är en känd hind-limb ischemia modell som används för att bedöma angiogenes och vaskulär ombyggnad i fysiologiska och patologiska angiogenesis4. Utvärderingen av angiogenes utförs dock huvudsakligen genom avsnitt färgning, och metoder för att utvärdera 3D vaskulär morfologi är särskilt begränsade.
Jämfört med sektionsfärgning möjliggör CT 3D-visualisering. Nyligen rapporterade Weyers et al. ett sofistikerat protokoll som är lämpligt för CT imaging, vilket möjliggör visualisering av murine vuxna födans cirkulationssystem5. Vi modifierade deras metod för att skapa en provberedningsmetod lämplig för CT-avbildning av de nedre extremiteterna blodkärlen6. Här injiceras ett strålningsoläskharts genom den fallande aortan, och kärlen i de nedre extremiteterna fylls med färgämne. Genom att justera tidpunkten för färginjektion är arteriell-specifik fyllning också möjlig, och prover kan erhållas med alla mikro-röntgen datortomografi enheter. Denna kontrastmetod ger en grundläggande teknik för 3D-utvärdering av murin blodkärl under membranet och i bukorganen och de nedre extremiteterna.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringe</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>SS-01T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin Solution</td>
			<td>Fujifilm-Wako</td>
			<td>068-03841</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x phosphate-buffered saline (-) (PBS)</td>
			<td>Fujifilm-Wako</td>
			<td>163-25265</td>
			<td>Prepare 1x PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 G catheter (22 G S5 x 1&#34; V(F))</td>
			<td>MEDIKIT</td>
			<td>HP2140</td>
			<td>Only catheter is used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 G needle</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>NN-2325R</td>
			<td>Use as a pin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% paraformaldehyde in PBS</td>
			<td>Fujifilm-Wako</td>
			<td>163-20145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL syringe</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 Suture with needle</td>
			<td>Alfresa Pharma Corporation</td>
			<td>ER1205SB45</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>A9251-5G</td>
			<td>For vasodilating solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #55 Forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>No.11255-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extension tube</td>
			<td>TOP</td>
			<td>X2-FL50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 50 mL tube</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>No.11051-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium 5,000 units/5 mL</td>
			<td>Mochida Co. Ltd.</td>
			<td>224122458</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Fujifilm-Wako</td>
			<td>099-06571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfil Injection Compounds</td>
			<td>Flow Tech Inc.</td>
			<td>MV-117</td>
			<td>Mix liquid MV-Compound (stain) and MV-Diluent 1: 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papaverine hydrochloride</td>
			<td>Fujifilm</td>
			<td>164-18002</td>
			<td>For vasodilating solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Animal Anesthetizer</td>
			<td>Muromachi Kikai Co. Ltd.</td>
			<td>MK-A100ecoW-ST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring Scissors - Angled to Side</td>
			<td>FST</td>
			<td>No.15006-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors - Sharp-Blunt</td>
			<td>FST</td>
			<td>No.14001-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>three-way cock</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>TS-TR1K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette</td>
			<td>SAMCO SCIENTIFIC</td>
			<td>SM262-1S</td>
			<td>Use for mixing contrast medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray CT scanner</td>
			<td>Toshiba IT &#38; Control Systems Corporation</td>
			<td>TOSHIBA TOSCANNER 32300 FPD</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sample preparation for computed tomography-based three-dimensional visualization of murine hind-limb vessels

Blodkärl är komplexa nätverk med trädliknande strukturer, och kärlnätverk är nödvändiga för att upprätthålla både cirkulation och upprätthålla organfunktion. Att klargöra mekanismen för blodkärlsbildning är därför extremt användbart för att klargöra utvecklingsprocesser och patologiska mekanismer. Murine hind-limb fartyg används ofta som en modell för fysiologiska och patologiska angiogenes. Utvärderingen utförs huvudsakligen via en tvådimensionell metod med hjälp av vävnadssektioner. Metoderna för att utvärdera tredimensionell (3D) vaskulär morfologi är dock särskilt begränsade. Detta dokument introducerar en metod för att visualisera murin bakben med hjälp av datortomografi (CT). Strålningsoläsk harts injiceras genom den fallande aortan, och hela kärl är fyllda med färgämne. Genom att justera tidpunkten för färginjektion är arteriell-specifik fyllning också möjlig, och prover kan erhållas med alla mikroröntgen CT-enheter. Denna kontrastmetod ger en grundläggande teknik för 3D-utvärdering av murin blodkärl i de nedre extremiteterna. Dessutom kan denna metod användas för att visualisera alla blodkärl under membranet och utvärdera blodkärl i bukorganen.

Alla kärl i de nedre extremiteterna kan visualiseras om detta protokoll utförs korrekt (figur 2A). I en bakbens ischemi modell, den icke-ligated femorala gatan löper parallellt med lårbens venen (figur 2B), och en ligated femorala gatan kan bekräftas av avbrott i kontrast media (figur 2C). Resultaten visade utvecklingen av säkerhetsfartyg (figur 2D). Säkerhet cirkulation bildas mellan artärer proximal till den ligated artären och artären i nedre benet regionen och på ventrala och dorsala sidor av lårbens gatan. Den sämre gluteal gatan-början på dorsala sidan av bäckenet och körs på den laterala sidan av låret-expanderar robust på den skandinaviska sidan.
Kontrastfyllda kärl är fyllda med kontrastmediet (figur 2E). Störningar i kontrasten indikerar blandning av icke-kontrast media (t.ex. blod, vasodilatatorbuffert eller bubblor) eller otillräcklig perfusion av kontrasten (figur 2F). Vasodilatation och fixering skulle inte fungera bra om blodkärlen har krympt. Även om CT-avbildning endast kan visualisera kontrastmediet, är det möjligt att se artärerna på kroppens yta genom makroskopisk eller stereomikroskopisk observation (figur 2G). Det är således lättare att bedöma defekter med hjälp av kontrastmediet (figur 2H).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63009/63009fig01.jpg"> Bild 1: Disposition av proceduren. (A) Tryckperfusionsapparaten och 22 G-katetern som är ansluten via ett 2 ml förlängningsrör och trevägskran. B) Den stigande aortan skärs diagonalt för att exponera tvärsnittet (gul pil). (C) Katetern fixerades med hjälp av två stift (gula pilar). D) De fasta nedre extremiteterna sträcker sig vid fixering (gula pilar). (E) Injektion av kontrast genom trevägskranen. Injektionsriktningen indikeras med en gul pil. (F) Bakbensspiken är fylld med kontrasten (gul pil). (G) Kranen stängs och avlägsnas från perfusionsapparaten. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63009/63009fig01large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av den här figuren.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63009/63009fig02.jpg"> Figur 2: Bilder på fartyg. A) Hela bilden av bakbenens ben och kärl. B) Lårbensartären (röd pil) och ven (blå pil). C) Ligerad femorala artär (gul pil). Periferin avbryts av obstruktion (gul prickad linje). D) Säkerhetskärl på den ligaerade sidan (gula pilar). Den gula prickade linjen representerar den avbrutna lårbensartären. E) Ett välfyllt prov av den saphenösa artären (röd pil) och ven (blå pil). F) Otillräcklig perfusion leder till avbrott i saphenous fartyg (gul prickad linje). G) Stereomikroskopisk observation av ett representativt prov. Den högra lårbensartären (gul pil) är fylld med kontrastmedium. H) Stereomikroscopeobservation av ett underkänt prov. Den högra lårbensartären (gul pil) saknar kontrastmedium. Skalstänger = 1 mm (B-F), 2 mm (G, H), 10 mm (A). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63009/63009fig02large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av den här figuren.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Sample Preparation for Computed Tomography-based Three-dimensional Visualization of Murine Hind-limb Vessels at JoVE.com

Sample Preparation for Computed Tomography-based Three-dimensional Visualization of Murine Hind-limb Vessels

Här beskriver vi en visualisering och kvantifieringsmetod för murin hind-limb fartyg med hjälp av mikro-röntgen datortomografi.

Provberedning för datortomografibaserad tredimensionell visualisering av Murine Hind-limb Vessels

Blood vessels are complex networks with tree-like structures, and vascular networks are essential for maintaining both circulation and maintaining organ ...

Det är möjligt att ta CT-bilder av blodkärl i nedre extremiteterna och bukorganen med hjälp av stegprotokoll. Metoden möjliggör utvärdering av hela blodkärlen på ett omfattande sätt. Dessutom är det möjligt att utvärdera endast artärer eller samtidigt artärer och vener.Det är mycket viktigt att förhindra blodproppar, läckta eller blodbrunn och undvika luftbubblor. Injicera 1 enhet/gram heparin i PBS i musens intraperitoneala hålighet före operationen. Efter 30 minuter, gör ett mittlinjesnitt i bröstbenet på den avlivade musen och fixa den öppna bröstkorgen med stift.Skär den stigande aortan innan du tar bort hjärtat och ta sedan bort lungan för att exponera den fallande aortan. Skär den fallande aortan diagonalt för att avslöja kärlets tvärsnitt. Sätt sedan in en 22-gauge kateter i den fallande aortan medan du kör vasodilationsbufferten.Fäst kateterns rot och gör en knut för att förhindra läckage på grund av återflödet. När du är klar, starta perfusionen med en uppvärmd vasodilateringslösning vid ett fast tryck mellan 13 och 15 kilopascals. Efter tre minuter, perfusera en lösning av 4% paraformaldehyd i PBS i 3 min.Stoppa perfusionen och fyll förlängningsröret som är anslutet till katetern med 2 ml av det nyberedda kontrastmediet utspädd i förhållandet 1:1 för att perfusera vid en fixerad mellan 13 och 15 kilopascals. För att visualisera artärer, kontrollera munnens upptån för att bekräfta att kontrastmediet har nått artären. På samma sätt, kontrollera den sämre vena cava av membranet för att bekräfta fullständig cirkulation av kontrastmediet och visualisera alla kärl.Om cirkulationen av kontrastmediet är klar, stäng trevägskranen och ta bort röret. Inkubera provet över natten vid 4 grader Celsius. I detta protokoll visualiserades alla kärl i musens nedre extremiteter.Resultaten av en hind-limb ischemia modell bekräftade att den icke-ligated femorala gatan körde parallellt med femorala venen. Avbrottet i kontrastmediet gjorde det också lätt att se en ligerad femorala artär och utvecklingen av säkerhetskärl. Några fartyg fyllda med kontrastmediet kunde ses.Å andra sidan upptäcktes också störningen i kontrastmedierna på grund av blandning av icke-kontraktsmedier, eller otillräcklig perfusion. det var omöjligt att se artärerna på ytan av kroppen genom mikroskopisk av stereomikroskopisk observation av kontrastmediet, vilket gjorde det lättare att bedöma defekter i vaskulaturen. Det är mycket viktigt att undvika luftbubblor när katetern sätts in.Eftersom deras bukorgan också är avslappnade är det möjligt att ta ut ur organen och ta en CT-skanning. Genom att använda denna metod kunde vi identifiera ett nytt kvartal av mättnad.

Research

JoVE Journal

Medicine

Longitudinal Evaluation of Mouse Hind Limb Bone Loss After Spinal Cord Injury using Novel, in vivo, Methodology

Longitudinal Evaluation of Mouse Hind Limb Bone Loss After Spinal Cord Injury using Novel, in vivo, Methodology

Längsgående Utvärdering av Mouse bakbenen benförlust efter ryggmärgsskada med Novel, In vivo, Metodik

Spinal cord injury (SCI) is often accompanied by osteoporosis in the sublesional regions of the pelvis and lower extremities, leading to a higher ...

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

Retrograd perfusion och påfyllning av mus kranskärlen som förberedelse för Micro datortomografi Imaging

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Research

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation VCA Research

En modifierad Heterotopisk Svinbakbenstrans modell för Translational vaskulariserad Composite allotransplantation (VCA) Forskning

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

Tredimensionell Samodling modell för Tumör-stromal Interaktion

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Tredimensionell (3D) Tumör Spheroid invasionsanalys

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

Orthotopic bakbenen Transplantation i musen

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

Three-dimensional Alginate-bead Culture of Human Pituitary Adenoma Cells

Tredimensionell alginat-pärla Culture of Human hypofysadenom Cells

A three-dimensional culture method is described in which primary pituitary adenoma cells are grown in alginate beads. Alginate is a polymer derived from ...

Cone Beam Intraoperative Computed Tomography-based Image Guidance for Minimally Invasive Transforaminal Interbody Fusion

Cone beam intraoperativ datortomografi-baserad bild vägledning för minimalt invasiv transforaminal Interbody fusion

Transforaminal lumbar interbody fusion (TLIF) is commonly used for the treatment of spinal stenosis, degenerative disc disease, and spondylolisthesis. ...

Preclinical Model of Hind Limb Ischemia in Diabetic Rabbits

Prekliniska modell av hind lem ischemia i diabetiska kaniner

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular ...

High-Resolution Three-Dimensional Imaging of the Footpad Vasculature in a Murine Hindlimb Gangrene Model

Högupplöst tredimensionell avbildning av fotplattan Vasculature i en Murine Hindlimb Gangrene Modell

Peripheral arterial disease (PAD) is a significant cause of morbidity resulting from chronic exposure to atherosclerotic risk factors. Patients suffering ...