בדיקה סלולרית מבוססת כתב לניטור יעילות חיבור

2.5K Views

•

08:53 min

•

September 15th, 2021

DOI :

10.3791/63014-v

September 15th, 2021

•

2,490 Views

Jason Wong¹, William Martelly¹, Shalini Sharma¹

¹Department of Basic Medical Sciences, College of Medicine-Phoenix, University of Arizona

Chapters

0:04

Introduction

0:31

Cotransfection of HeLa Cells with the Reporter and U1 Small Nuclear RNA (snRNA) Plasmids

2:00

³²P-Labeling of Oligonucleotides

2:52

Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Primer Extension

3:53

Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Fluorescent RT-PCR

5:08

Analysis of Variant U1 snRNA Expression by RT-qPCR

5:38

Setup and Running of Urea-PAGE Gels

6:27

Results: Reporter Based Splicing Efficiency of U1 snRNA Constructs

8:09

Conclusion

Transcript

פרוטוקול זה מתאר בדיקה סלולרית לניטור יעילות חיבור, באמצעות כתב ניהול הסתגלות. מאמר זה Assay יכול לשמש כדי ללמוד את ההשפעות של מוטציות הקשורות למחלה באתרי אקסון או חיבור, וכדי לעצב טיפול, חלקיק אחד במיוחד, כדי לשפר את ההכרה של מוטציה לאתרי חיבור ח

Summary

פרוטוקול זה מתאר בדיקה עיתונאית minigene כדי לפקח על ההשפעה של מוטציות באתר 5-splice באתר על חיבור ומפתח מדכא U1 snRNA להצלת עיכוב חיבור המושרה מוטציה. הכתב והמדכא U1 snRNA מבנים באים לידי ביטוי בתאי HeLa, ו splicing מנותח על ידי הרחבת פריימר או RT-PCR.

Explore More Videos