Name: radiosynthesis of 1-(2-[18f]fluoroethyl)-l-tryptophan using a one-pot, two-step protocol
Uploaded: 2021-09-21T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Radiosynthesis of 1-2-[18F]Fluoroethyl-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من قبل مركز التشخيص والبحث PET / MRI ، ومن قبل أقسام البحوث الطبية الحيوية والأشعة في مستشفى Nemours / Alfred I. DuPont للأطفال.

تنبيه: يتضمن البروتوكول مواد مشعة. أي جرعة إضافية من المواد المشعة يمكن أن تؤدي إلى زيادة متناسبة في فرصة الآثار الصحية الضارة مثل السرطان. يجب على الباحثين اتباع ممارسات الجرعة "المنخفضة التي يمكن تحقيقها بشكل معقول" (ALARA) لتوجيه بروتوكول التخليق الإشعاعي مع الحماية الكافية في الخلية السا...

التربتوفان هو حمض أميني أساسي للبشر. يلعب دورا مهما في تنظيم المزاج والوظيفة الإدراكية والسلوك. تمت دراسة مشتقات التربتوفان المصنفة إشعاعيا ، وخاصة الكربون 11 المسمى [11C] AMT ، على نطاق واسع بسبب دورها الفريد في رسم خرائط تخليق السيروتونين38،39 ، والكشف عن الأورام وتصنيفها <s...

في البشر ، التربتوفان هو عنصر أساسي في النظام الغذائي اليومي. يتم استقلاب التربتوفان في المقام الأول عبر مسار كينورينين (KP). يتم تحفيز KP بواسطة إنزيمين محددين للمعدل ، إندوليامين 2 ، 3-ثنائي الأكسجين (IDO) وتريبتوفان 2 ، 3-ثنائي أكسجيناز (TDO). يتم تحويل أكثر من 95٪ من التربتوفان إلى كينورينين ومستقلباته النهائية ، مما يؤدي في النهاية إلى توليد نيكوتيناميد الأدينين ثنائي النوكليوتيد ، وهو أمر ضروري لنقل الطاقة الخلوية. KP هو منظم رئيسي للجهاز المناعي ومنظم مهم للمرونة العصبية والآثار السمية العصبية 1,2. وينطوي استقلاب التربتوفان غير الطبيعي في مختلف الاضطرابات العصبية والأورام والنفسية والأيضية. لذلك ، تم استخدام نظائر التربتوفان ذات العلامات المشعة على نطاق واسع في التحقيق السريري. أكثر المقتفيات الإشعاعية التريبتوفان شيوعا التي تم التحقيق فيها سريريا هما 11C-α-methyl-L-tryptophan ([11C]AMT) و 11C-5-hydroxytryptophan (11C-5-HTP)3.
في 1990s ، تم استخدام 11C-5-HTP لتصور الأورام العصبية الصماوية التي تفرز السيروتونين 4 ولتشخيص ومراقبة العلاج من سرطان البروستاتا الغدي البروستاتا النقيلي المقاوم للهرمونات5. في وقت لاحق ، تم استخدامه كأداة تصوير لتحديد كمية نظام السيروتونين في البنكرياس الغدد الصماء6. ١١ كان C-5-HTP أيضا متتبعا واعدا للكشف غير الباضع عن الجزر القابلة للحياة في زرع الجزر داخل البوابة ومرض السكري من النوع 27,8. على مدى العقدين الماضيين ، تقدمت العديد من الأحماض الأمينية ذات العلامات المشعة إلى التحقيق السريري9,10. على وجه الخصوص ، تلقى التريبتوفان التناظري المسمى بالكربون 11 [11C] AMT اهتماما واسعا لرسم خرائط تخليق السيروتونين في الدماغ11،12،13،14 ولتوطين بؤر الصرع ، والأورام الصرعية ، ومجمع التصلب الدرني ، والأورام الدبقية ، وسرطان الثدي15،16،17،18،19،20 ,21,22,23,24,25,26. [11 ج] لدى AMT أيضا إقبال كبير على مختلف الأورام منخفضة وعالية الجودة لدى الأطفال27. علاوة على ذلك، تم استخدام تحليل التتبع الحركي ل [11C] AMT في الأشخاص البشريين للتمييز بين الأورام المختلفة وتصنيفها والتمييز بين الورم الدبقي وإصابة الأنسجة الناجمة عن الإشعاع15. [11 ج] يظهر التصوير الموجه بواسطة AMT فوائد سريرية كبيرة في اضطرابات الدماغ3,25. ومع ذلك ، نظرا لقصر عمر النصف للكربون-11 (20 دقيقة) وإجراءات التخليق الإشعاعي الشاقة ، يقتصر استخدام AMT [11C] على عدد قليل من مراكز PET مع السيكلوترون في الموقع ومرفق الكيمياء الإشعاعية.
يتمتع الفلور-18 بعمر نصف موات يبلغ 109.8 دقيقة ، مقارنة بعمر النصف 20 دقيقة للكربون-11. وتركزت الجهود بشكل متزايد على تطوير أجهزة تتبع إشعاعي تحمل علامة الفلور 18 لاستقلاب التربتوفان3,28. تم الإبلاغ عن ما مجموعه 15 من أجهزة التتبع الإشعاعي الفريدة من نوعها للفلور 18 المراد بها الإشعاعي التربتوفان من حيث وضع العلامات الإشعاعية ، وآليات النقل ، في المختبر وفي الجسم الحي ، والتوزيع البيولوجي ، وامتصاص الورم في xenografts. ومع ذلك، لوحظ إزالة الفلورة السريعة في الجسم الحي للعديد من المقتفيات، بما في ذلك 4-و 5-و 6-[18F]fluorotryptophan، مما حال دون مزيد من الترجمة السريرية29. 5-[18F] فلورو-α-ميثيل تريبتوفان (5-[18F]FAMT) و 1-(2-[18F]فلورو إيثيل)-L-تريبتوفان (L-[18F]FETrp، المعروف أيضا باسم (S)-2-amino-3-(1-(2-[18F]فلورو إيثيل)-1H-indol-3-yl) حمض البروبانويك، الوزن الجزيئي 249.28 جم/مول)، هما أكثر المقتفيات الإشعاعية الواعدة مع الحركيات المواتية في الجسم الحي في النماذج الحيوانية وإمكانات كبيرة لتجاوز [11 C]AMT لتقييم الحالات السريرية مع استقلاب التربتوفان غير المنظم28. 5-[18F] أظهر FAMT امتلاء عاليا في xenografts الورم الإيجابي IDO1 من الفئران التي تعاني من نقص المناعة وهو أكثر تحديدا لتصوير KP من [11C] AMT28,30. ومع ذلك ، فإن الاستقرار في الجسم الحي ل 5-[18F] FAMT لا يزال مصدر قلق محتمل حيث لم يتم الإبلاغ عن بيانات إزالة الفلورة في الجسم الحي بعد 30 دقيقة من حقن التتبع30.
أظهرت دراسة ما قبل السريرية في نموذج فأر الورم الأرومي النخاعي المعدل وراثيا أنه بالمقارنة مع 18F-fluorodeoxyglucose (18F-FDG) ، L-[18F] FETrp كان لديه تراكم عال في أورام الدماغ ، لا يكاد يذكر في إزالة الفلورة في الجسم الحي ، وامتصاص منخفض للخلفية ، مما يدل على نسبة مستهدفة إلى غير مستهدفة متفوقة 31,32. أشارت دراسات قياس الجرعات الإشعاعية في الفئران إلى أن L-[18F] FETrp كان لديه تعرض أقل بنسبة 20٪ تقريبا لقياس الجرعات المواتية من 18F-FDG PET tracer33 السريري. بالاتفاق مع نتائج الباحثين الآخرين ، توفر بيانات الدراسة قبل السريرية أدلة كبيرة لدعم الترجمة السريرية ل L-[18F] FETrp للتحقيق في استقلاب التربتوفان غير الطبيعي لدى البشر الذين يعانون من اضطرابات الدماغ مثل الصرع والأورام العصبية والتوحد والتصلب الدرني28،31،32،33،34،35،36 . ويبين الجدول 1 مقارنة عامة بين المقتفيات الثلاثة الأكثر تحقيقا على نطاق واسع لاستقلاب التربتوفان، وهي 11C-5-HTP و [11C] AMT و L-[18F] FETrp. كل من 11C-5-HTP و [11C] AMT لهما عمر نصف قصير وإجراءات وضع العلامات الإشعاعية الشاقة. يتم وصف بروتوكول للتخليق الإشعاعي ل L-[18F] FETrp باستخدام نهج وعاء واحد من خطوتين هنا. ويتميز البروتوكول باستخدام كمية صغيرة من سلائف وضع العلامات الإشعاعية، وكمية صغيرة من مذيبات التفاعل، وتحميل منخفض من K222 السامة، ومرحلة متنقلة حميدة بيئيا وقابلة للحقن للتنقية والتركيب السهل.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>[18F]Fluoride in [18O]H2O</td>
			<td>PETNET Solutions Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4,7,13,16,21,24-hexaoxa-1,10-diazabicyclo[8.8.8]hexacosane</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>291950010</td>
			<td>Kryptofix 222 or K222, 98%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>222142500</td>
			<td>99.8%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>271004</td>
			<td>anhydrous, 99.8%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1260 HPLC system</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>Agilent 1260</td>
			<td>Agilent 1260 series</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytcial chiral HPLC column</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>12024AST</td>
			<td>Astec CHIROBIOTIC T, 25 cm &#215; 4.6 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide, 60 LBS</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>REFR744R200S</td>
			<td>99.99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-FETrp standard reference</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Empty sterile vial</td>
			<td>Jubilant HollisterStier</td>
			<td>7515</td>
			<td>20 mm closure, 10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>2716</td>
			<td>200 proof, USP grade. &#8805;99.9%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand 13 mm Syringe Filter, 0.22 &#181;m, PVDF, sterile</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-720-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30721</td>
			<td>&#8805;37%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>8316</td>
			<td>70%, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-[18F]FETrp radiolabeling precursor</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-FETrp standard reference</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light C8 cartridge</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT036770</td>
			<td>Sep-Pak&#160; C8 plus light cartridge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 20 G x 1</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 20 G x 1 &#189;</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 21 G x 2</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral aluminum oxide</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT023561</td>
			<td>Sep-Pak alumina N plus light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon membrane (0.20 &#181;m )</td>
			<td>MilliPore</td>
			<td>GNWP04700</td>
			<td>47 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pall Acrodisc 25 mm syringe sterile filter</td>
			<td>Pall Corporation</td>
			<td>4907</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PETCHEM radiochemistry synthesis system</td>
			<td>PETCHEM Solutions Inc. Pinckney, MI</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Radiosynthesizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH strips 2.0 - 9.0</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1.09584.0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium carbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>367877</td>
			<td>99.995%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quaternary methylammonium light cartridge</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186004051</td>
			<td>Sep-Pak QMA light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semi-preparative C18 HPLC column</td>
			<td>Phenomenex</td>
			<td>00D-4253-N0</td>
			<td>100 &#215; 10 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semi-preparative chiral HPLC column</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>12034AST</td>
			<td>Astec CHIROBIOTIC T, 25 cm &#215; 10 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride injection 23.4%</td>
			<td>APP Pharmaceutical, LLC</td>
			<td>18730</td>
			<td>USP grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloridei injection 0.9%</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NDC 0409-4888-10</td>
			<td>USP grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>306576</td>
			<td>99.99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinal needle, 20 G x 3 &#189;</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>405182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile alcohol prep pads</td>
			<td>BioMed Resource Inc.</td>
			<td>PC661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile empty vials, 2 mL</td>
			<td>Hollister Stier</td>
			<td>7505ZA</td>
			<td>13 mm closure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile empty vials, 30 mL</td>
			<td>Jubilant HollisterStier</td>
			<td>7520ZA</td>
			<td>20 mm closure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe PP/PE, 3 mL, Luer Lock</td>
			<td>Air-Tite</td>
			<td>4020-X00V0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe PP/PE, 5 mL, Luer Lock</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe,&#160; PP/PE, 10 mL, NORM-JECT</td>
			<td>Air-Tite</td>
			<td>4100-000V0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 1 mL, Luer Slip</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 3 mL, Luer-Lock</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra high purity argon</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>AR UHP300</td>
			<td>99.999%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>ZRQSVP300</td>
			<td>Direct-Q 3 tap to pure and ultrapure water purification system</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

radiosynthesis of 1-(2-[18f]fluoroethyl)-l-tryptophan using a one-pot, two-step protocol

مسار كينورينين (KP) هو الطريق الرئيسي لاستقلاب التربتوفان. تشير الأدلة بقوة إلى أن مستقلبات KP تلعب دورا حيويا في انتشار الورم والصرع والأمراض العصبية التنكسية والأمراض النفسية بسبب آثارها المناعية المعدلة والعصبية والسمية العصبية. عامل التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني الأكثر استخداما على نطاق واسع (PET) لرسم خرائط استقلاب التربتوفان ، α-[11C] methyl-L-tryptophan ([11C]AMT) ، له عمر نصف قصير يبلغ 20 دقيقة مع إجراءات التخليق الإشعاعي الشاقة. مطلوب سيكلوترون في الموقع للتوليف الإشعاعي [11C] AMT. ينتج عدد محدود فقط من المراكز [11C] AMT للدراسات قبل السريرية والتحقيقات السريرية. وبالتالي ، هناك حاجة ماسة إلى تطوير عامل تصوير بديل له عمر نصف أطول ، ومناسب في الحركيات الحية ، ويسهل أتمتته. تم الإبلاغ عن فائدة وقيمة 1-(2-[18F]fluoroethyl)-L-tryptophan ، وهو نظير تريبتوفان يحمل علامة الفلور 18 ، في التطبيقات قبل السريرية في xenografts المشتقة من خط الخلية ، و xenografts المشتقة من المريض ، ونماذج الأورام المعدلة وراثيا.
تقدم هذه الورقة بروتوكولا للتخليق الإشعاعي ل 1-(2-[18F]fluoroethyl)-L-tryptophan باستخدام استراتيجية من وعاء واحد وخطوتين. باستخدام هذا البروتوكول ، يمكن إنتاج المقتفي الإشعاعي بنسبة 20 ± 5٪ (تم تصحيح الاضمحلال في نهاية التوليف ، n > 20) عائد كيميائي إشعاعي ، مع كل من النقاء الكيميائي الإشعاعي وفائض enantiomeric لأكثر من 95٪. يتميز البروتوكول بكمية سلائف صغيرة لا تزيد عن 0.5 مل من مذيب التفاعل في كل خطوة ، وتحميل منخفض من 4،7،13،16،21،24-hexaoxa-1،10-diazabicyclo [8.8.8] hexacosane (K222) ، ومرحلة متنقلة حميدة بيئيا وقابلة للحقن للتنقية. يمكن تكوين البروتوكول بسهولة لإنتاج 1-(2-[18F]fluoroethyl)-L-tryptophan للتحقيق السريري في وحدة متاحة تجاريا.

يظهر مخطط التفاعل في الشكل 1. يتضمن وضع العلامات الإشعاعية الخطوتين التاليتين: 1) تفاعل سلائف وضع العلامات الإشعاعية مع [18F] يوفر الفلورايد الوسيط المسمى 18F ، و 2) إزالة الحماية من مجموعات حماية tert-butyloxycarbonyl و tert-butyl-protection في الوسيط يوفر المنتج النهائي L-[18F] FETrp....

Watch this Scientific Journal Video about Radiosynthesis of 1-2-[18F]Fluoroethyl-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol at JoVE.com

Radiosynthesis of 1-2-[18F]Fluoroethyl-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol

هنا ، نصف التخليق الإشعاعي ل 1-(2-[18F] Fluoroethyl)-L-tryptophan ، وهو عامل تصوير مقطعي بالإصدار البوزيتروني لدراسة استقلاب التربتوفان ، باستخدام استراتيجية من وعاء واحد ، من خطوتين في نظام تخليق الكيمياء الإشعاعية مع عوائد كيميائية إشعاعية جيدة ، وفائض enantiomeric عالية ، وموثوقية عالية.

التخليق الإشعاعي ل 1-(2-[18F]Fluoroethyl)-L-Tryptophan باستخدام وعاء واحد ، بروتوكول من خطوتين

The kynurenine pathway (KP) is a primary route for tryptophan metabolism. Evidence strongly suggests that metabolites of the KP play a vital role in tumor ...

الهدف العام من هذا البروتوكول هو المزج الإشعاعي لمقتفي التربتوفان المسمى إشعاعيا F18 من خلال نهج من وعاء واحد وخطوتين. قد يجد المقتفي الإشعاعي تطبيقا واسع النطاق لتصوير استقلاب التربتوفان. وتستخدم هذه التقنية النظائر المشعة ذات عمر النصف الأطول، وسلائف تفاعل أقل، وحجم تفاعل أقل، ومرحلة حميدة بيئيا للتنقية.يمكن استخدام المقتفي الإشعاعي لتشخيص الاضطرابات المختلفة التي تؤثر على الدماغ ، بما في ذلك على سبيل المثال لا الحصر الصرع والاضطرابات العصبية والنفسية والأورام العصبية. ويمكن تطبيق هذه الطريقة على وحدات الوسم الإشعاعي الأخرى المتاحة تجاريا. بمجرد استلام محلول فلوريد F18 ، ابدأ بمسح صندوق الرصاص على السطح ، ومن مسافة متر واحد ، سجل الحد الأقصى لمعدلات التعرض للإشعاع.بعد إجراء اختبار المسح للتأكد من أن صندوق الشحن غير ملوث ، سجل جرعة فلوريد F18 والوقت. نقل محلول فلوريد F18 إلى نظام تخليق الكيمياء الإشعاعية. قم بتوصيل خط الأرجون بإبرة قصيرة وخط نقل الفلورايد F18 بإبرة طويلة بقارورة فلوريد F18.ثم ، أغلق الباب الزجاجي للخلية الساخنة وباب الرصاص. قم بتشغيل خط إمداد الأرجون بالنقر فوق توريد الأرجون. قم بزيادة ضغط الأرجون وقم بتشغيل خط دفع فلوريد F18 لدفع فلوريد F18 المائي عبر خرطوشة ضوء QMA.بمجرد أن يتم حبس كل النشاط الإشعاعي في خرطوشة ضوء QMA ، وتكون قراءة كاشف النشاط الإشعاعي ثابتة ، قم بزيادة ضغط الأرجون ونفخ الأرجون من خلال الخرطوشة لمدة خمس دقائق أخرى لإزالة الماء الزائد. بعد إيقاف تشغيل خط دفع الفلورايد F18 ، قم بتقليل ضغط الأرجون إلى الصفر وقم بتبديل الصمام ثنائي المنافذ المكون من ستة منافذ من موضع محاصرة الفلورايد F18 إلى موضع الاستلقاء. افتح قارورة التفاعل ، وقم بتشغيل موضع MVP للإدخال خط أرجون واحد ، وادفع محلول كربونات البوتاسيوم K222 والبوتاسيوم إلى موضع MVP للإدخال قارورة واحدة من خلال خرطوشة ضوء QMA لإخراج النشاط الإشعاعي إلى قارورة التفاعل.قم بتبديل موضع إزالة الفلورايد F18 إلى موضع الاصطياد. انقر فوق الزر "حرارة" لتسخين المفاعل عند 110 درجة مئوية، وقم بتشغيل خط الأرجون MVP MVP الذي يتصل بالمفاعل، وتبخر المذيب في موضع MVP الناتج أربعة قارورة. انقر فوق الزر تبريد لتبريد المفاعل إلى درجة حرارة الغرفة باستخدام ثاني أكسيد الكربون المضغوط.قم بإيقاف تشغيل خط الكنس ، وقم بتبديل موضع MVP للإدخال واحد إلى موضع اثنين ، وأضف الأسيتونيتريل اللامائي في القارورة الثانية. يقوم اثنان بتشغيل الخط الكاسح والسخان لتجفيف فلوريد F18 بشكل أزيوتروبي عند 110 درجة مئوية. بمجرد أن يصل المفاعل إلى درجة حرارة الغرفة ، قم بإيقاف تشغيل خط الكنس ، وقم بتبديل موضع MVP للإدخال اثنين إلى موضع ثلاثة ، وأضف سلائف وضع العلامات الراديوية tosylate في القارورة الثلاثة.أغلق المفاعل وقم بتسخين مخاليط التفاعل عند 100 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. لتبخير مذيب التفاعل ، بمجرد أن يبرد المفاعل ، قم بتشغيل خط الاجتياح وتبخر مذيب التفاعل عند 100 درجة مئوية. بمجرد أن يبرد المفاعل ، قم بإيقاف تشغيل خط الكنس وقم بتبديل موضع MVP للإدخال ثلاثة إلى موضع أربعة.عند إضافة خليط حمض الهيدروكلوريك الأسيتونيتريل ، سخن التفاعل عند 100 درجة مئوية لمدة 10 دقائق لإزالة الحماية من مجموعات حماية tert-butyl و tert-butyloxycarbonyl في سلائف وضع العلامات الإشعاعية. لتحييد التفاعل ، عندما يصل المفاعل إلى درجة حرارة الغرفة ، قم بتبديل موضع MVP للإدخال من أربعة إلى موضع خمسة وأضف اثنين من هيدروكسيد الصوديوم المولي إلى خليط التفاعل وأوقف تشغيل خط الأرجون MVP للإدخال. بعد ذلك ، ابدأ في نقل خليط التفاعل إلى الملف الوسيط بالنقر فوق الزر F في MVP الناتج لتبديل MVP الناتج من موضع التهوية أربعة إلى موضع خمسة ، ثم بالنقر فوق الزر F في MVP الإدخال لتبديل MVP الإدخال من الموضع الخامس إلى الموضع السادس.بعد تشغيل خط الأرجون MVP الناتج ، ادفع خليط التفاعل عبر أكسيد الألومنيوم المحايد المكدس وخراطيش C8 إلى القارورة الوسيطة المثبتة قبل حلقة عينة HPLC. لشطف المفاعل ، قم بتبديل موضع MVP الناتج خمسة إلى موضع ستة ، وادفع محلول الشطف في قارورة الإخراج MVP موضع السادس من خلال قارورة التفاعل والخراطيش والقارورة الوسيطة ، على التوالي. بعد ذلك ، ابدأ في تنقية الخليط عن طريق تبديل حلقة HPLC من موضع الحقن إلى موضع التحميل وتشغيل خط الأرجون MVP للإدخال.عند تحميل الخليط إلى حلقة HPLC التي تبلغ خمسة ملليلترات، قم بتبديل الزر تحميل إلى حقن، وانقر فوق حقن HPLC لبدء كروماتوجرام HPLC بمعدل تدفق قدره ثلاثة ملليلترات في الدقيقة، ثم انقر فوق الزر شاشة HPLC للوصول إلى كروماتوجرام HPLC في الوقت الفعلي. انقر فوق الزر تحويل MVP لتحويل جزء HPLC المستهدف إلى العمود C18 القصير في حوالي 12 دقيقة. بعد جمع النشاط الإشعاعي المستهدف في عمود C18 ، قم بتبديل صمام التحويل ثنائي المنافذ المكون من أربعة منافذ إلى موضع جمع النفايات ، واغسل العمود الدائري بمعدل أربعة ملليلترات في الدقيقة لمدة ست دقائق لإزالة إنانتيومر D F18 FETrp البسيط والشوائب فوق البنفسجية الأخرى.انقر فوق الزر MVP التحويل لتحويل مرحلة HPLC المحمولة مرة أخرى إلى موضع MVP للتركيبة بمعدل ثلاثة ملليلتر في الدقيقة. لاحظ أن المرحلة المتنقلة تمر عبر العمود الدائري والعمود C18 لتنقية L-F18 FETrp المحتفظ به في العمود C18. في حوالي 32 إلى 34 دقيقة ، اجمع الجزء المستهدف في موضع MVP للصياغة قارورتين.ثم ادفع التركيبة MVP موضع اثنين من محلول القارورة من خلال خط التسليم والمرشح المعقم في قارورة الجرعة النهائية. فحص نشاط الجرعة النهائية وحجمها بعد إزالة المرشح المعقم. اغسل النظام بالماء فائق النقاء متبوعا بالإيثانول بمعدل تدفق قدره أربعة ملليلتر في الدقيقة لمدة 15 دقيقة على الأقل لكل غسلة.قم بإيقاف تشغيل مضخة HPLC وصندوق PLC ، وأغلق البرنامج ، وأغلق شركة الطيران المضغوطة ، وخط الأرجون ، وخط ثاني أكسيد الكربون ، والطاقة الرئيسية للوحدة. اسحب ما يقرب من 0.1 ملليلتر من الجرعة النهائية إلى إدراج 0.2 ملليلتر من قارورة مراقبة الجودة. قم بتشغيل العينة الساخنة كما هو موضح في برنامج التسلسل الجزئي في مخطوطة النص.تحليل بيانات مراقبة الجودة عن طريق حساب النقاء الكيميائي والكيميائي الإشعاعي في القيمة الزائدة للأنانتيومريك والنشاط المولي. بعد تحديد قيمة الرقم الهيدروجيني ، حرر الجرعة إذا اجتازت جميع نتائج الاختبار النطاق المقبول. يتم عرض كروماتوغرام HPLC الممثل لمراقبة الجودة.تم الكشف عن القمم الضئيلة بين حجم الفراغ في 10 دقائق من البرنامج في كروماتوجرام فارغ. وأظهر المرجع القياسي غير الموسوم إشعاعيا L-fluoroethyl-trytophan وجود أيزومر واحد منفصل جيدا عن المرجع القياسي لنظيره D. أظهرت الجرعة النهائية من التربتوفان L-F18 نقاء كيميائيا عاليا ونقاء كيميائيا إشعاعيا.أظهر اختبار استقرار المنتج النهائي عند أعلى تركيز للجرعة لمدة تصل إلى ثماني ساعات أن التربتوفان L-F18 كان مستقرا من حيث النقاء الكيميائي والنقاء الكيميائي الإشعاعي وفائض enantiomeric وقيمة الرقم الهيدروجيني. تم تحقيق النقاء الكيميائي والكيميائي الإشعاعي أكبر من 95٪ باستخدام هذا البروتوكول. يتم استخدام عمودين لتنقية التتبع.تذكر التبديل إلى عمود C18 لإزالة الشوائب الكيميائية. يمكننا تكييف هذه الطريقة بسرعة مع الإنتاج السريري للمقتفي الإشعاعي التربتوفان المسمى بالفلور 18.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Radiosynthesis of 1-(2-[18F]Fluoroethyl)-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol

A Simple and Rapid Protocol for Measuring Neutral Lipids in Algal Cells Using Fluorescence

بسيط وبروتوكول السريع لقياس الدهون في خلايا الطحالب المحايدة عن طريق الإسفار

Algae are considered excellent candidates for renewable fuel sources due to their natural lipid storage capabilities. Robust monitoring of algal ...

The Bioconjugation and Radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled Antibodies

The Bioconjugation and Radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled Antibodies

وBioconjugation وRadiosynthesis من<sup&gt; 89</sup&gt; الأجسام المضادة عنصر الزركون-DFO المسمى

The exceptional affinity, specificity, and selectivity of antibodies make them extraordinarily attractive vectors for tumor-targeted PET ...

A Protocol for the Production of Gliadin-cyanoacrylate Nanoparticles for Hydrophilic Coating

بروتوكول لإنتاج الجسيمات النانوية غليادين-cyanoacrylate لمع الماء طلاء

This article presents a protocol for the production of protein-based nanoparticles that changes the hydrophobic surface to hydrophilic by a simple spray ...

A Protocol for Safe Lithiation Reactions Using Organolithium Reagents

بروتوكول لردود الفعل الآمن Lithiation عن طريق Organolithium الكواشف

Organolithium reagents are powerful tools in the synthetic chemist&#39;s toolbox. However, the extreme pyrophoric nature of the most reactive reagents ...

An Optimized Protocol for the Efficient Radiolabeling of Gold Nanoparticles by Using a 125I-labeled Azide Prosthetic Group

An Optimized Protocol for the Efficient Radiolabeling of Gold Nanoparticles by Using a 125I-labeled Azide Prosthetic Group

بروتوكول الأمثل لRadiolabeling كفاءة من جزيئات الذهب عن طريق استخدام<sup&gt; 125</sup&gt; أزيد المجموعة الترقيعي المسمى أنا

Here, we demonstrate a detailed protocol for the radiosynthesis of a 125I-labeled azide prosthetic group and its application to the efficient ...

A Protocol for Electrochemical Evaluations and State of Charge Diagnostics of a Symmetric Organic Redox Flow Battery

بروتوكول لالكهروكيميائية التقييمات والدولة من تهمة تشخيص ومتماثل العضوية الأكسدة والاختزال تدفق البطارية

Redox flow batteries have been considered as one of the most promising stationary energy storage solutions for improving the reliability of the power grid ...

One-pot Microwave-assisted Conversion of Anomeric Nitrate-esters to Trichloroacetimidates

وعاء واحد ساعدت الميكروويف التحويل من استرات النترات أنوميريك إلى تريتشلورواسيتيميداتيس

The goal of the following procedure is to provide a demonstration of the one-pot conversion of a 2-azido-1-nitrate-ester to a trichloroacetimidate ...

The MPLEx Protocol for Multi-omic Analyses of Soil Samples

بروتوكول مبليكس لمتعدد omic تحاليل عينات التربة

Mass spectrometry (MS)-based integrated metaproteomic, metabolomic, and lipidomic (multi-omic) studies are transforming our ability to understand and ...

Separation of Aldehydes and Reactive Ketones from Mixtures Using a Bisulfite Extraction Protocol

الفصل بين الألدهيدات والكيتونات رد الفعل من الخلائط استخدام بروتوكول استخراج بيكبريتيت

The purification of organic compounds is an essential component of routine synthetic operations. The ability to remove contaminants into an aqueous layer ...

A Two-Step Protocol for Umpolung Functionalization of Ketones Via Enolonium Species

بروتوكول خطوتين الروغان أومبولونج الكيتونات عن طريق الأنواع انولونيوم

&#945;-Functionalization of ketones via umpolung of enolates by hypervalent iodine reagents is an important concept in synthetic organic chemistry. ...