Name: radiosynthesis of 1-(2-[18f]fluoroethyl)-l-tryptophan using a one-pot, two-step protocol
Uploaded: 2021-09-21T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Radiosynthesis of 1-2-[18F]Fluoroethyl-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af Diagnostic & Research PET/MRI Center og af Afdelingerne for Biomedicinsk Forskning og Radiologi på Nemours/Alfred I. duPont Hospital for Børn.

FORSIGTIG: Protokollen involverer radioaktive materialer. Enhver yderligere dosis af radioaktive materialer kan føre til en forholdsmæssig stigning i risikoen for sundhedsskadelige virkninger såsom kræft. Forskere skal følge alara-dosispraksis (så lavt som rimeligt opnåeligt" (ALARA) for at styre radiosynteseprotokollen med tilstrækkelig beskyttelse i den varme celle eller blyhætten. Minimering af direkte kontakttid, brug af et blyskjold og holde maksimal afstand for ethvert strålingseksponeringstrin i radiosyn...

Tryptofan er en essentiel aminosyre for mennesker. Det spiller en vigtig rolle i reguleringen af humør, kognitiv funktion og adfærd. Radioaktivt mærkede tryptofanderivater, især de kulstof-11-mærkede [11C]AMT, er blevet grundigt undersøgt på grund af deres unikke rolle i kortlægningen af serotoninsyntese38,39, påvisning og klassificering af tumorer40, vejledning af epilepsikirurgi41,42...

Hos mennesker er tryptofan en væsentlig bestanddel af den daglige kost. Tryptofan metaboliseres primært via kynureninvejen (KP). KP katalyseres af to hastighedsbegrænsende enzymer, indoleamin 2, 3-dioxygenase (IDO) og tryptophan 2, 3-dioxygenase (TDO). Mere end 95% af tryptofan omdannes til kynurenin og dets nedstrøms metabolitter, hvilket i sidste ende genererer nikotinamid adenin dinukleotid, hvilket er afgørende for cellulær energitransduktion. KP er en vigtig regulator af immunsystemet og en vigtig regulator af neuroplasticitet og neurotoksiske virkninger1,2. Unormal tryptofanmetabolisme er impliceret i forskellige neurologiske, onkologiske, psykiatriske og metaboliske lidelser; derfor er radioaktivt mærkede tryptofananaloger blevet anvendt i vid udstrækning i klinisk afprøvning. De to mest almindelige klinisk undersøgte tryptophan radiotracere er 11C-α-methyl-L-tryptophan ([11C]AMT) og 11C-5-hydroxytryptophan (11C-5-HTP)3.
I 1990'erne, 11C-5-HTP blev brugt til at visualisere serotonin-udskillende neuroendokrine tumorer4 og til at diagnosticere og overvåge terapi af metastatisk hormon-ildfast prostata adenocarcinom5. Senere blev det brugt som et billeddannelsesværktøj til kvantificering af det serotonerge system i den endokrine bugspytkirtel6. 11 C-5-HTP har også været et lovende sporstof til ikke-invasiv påvisning af levedygtige øer i intraportal ø-transplantation og type 2-diabetes7,8. I løbet af de sidste to årtier er mange radioaktivt mærkede aminosyrer avanceret til klinisk afprøvning9,10. Især har den kulstof-11-mærkede tryptofananalog [11C]AMT fået omfattende opmærksomhed for kortlægning af hjernens serotoninsyntese11,12,13,14 og for lokalisering af epileptiske foci, epileptogene tumorer, tuberøs sklerosekompleks, gliomer og brystkræft15,16,17,18,19,20 ,21,22,23,24,25,26. [11C] AMT har også høj optagelse i forskellige lav- og højkvalitetstumorer hos børn27. Desuden er kinetisk sporstofanalyse af [11C]AMT hos mennesker blevet anvendt til at differentiere og klassificere forskellige tumorer og differentiere gliom fra strålingsinduceret vævsskade15. [11C] AMT-guidet billeddannelse viser betydelige kliniske fordele ved hjernesygdomme3,25. På grund af den korte halveringstid for kulstof-11 (20 min) og de besværlige radiosynteseprocedurer er [11C] AMT-brug imidlertid begrænset til de få PET-centre med en cyklotron på stedet og en radiokemisk facilitet.
Fluor-18 har en gunstig halveringstid på 109,8 min sammenlignet med 20 min halveringstiden for kulstof-11. I stigende grad har indsatsen været fokuseret på udvikling af fluor-18-mærkede radiotracere til tryptofanmetabolisme3,28. I alt 15 unikke fluor-18 radioaktivt mærkede tryptophan radioracere er blevet rapporteret med hensyn til radiomærkning, transportmekanismer, in vitro og in vivo stabilitet, biodistribution og tumoroptagelse i xenografts. Der blev imidlertid observeret hurtig in vivo-defluorination for flere sporstoffer, herunder 4-, 5- og 6-[18F]fluortryptofan, hvilket udelukker yderligere klinisk translation29. 5-[18F]Fluor-α-methyltryptophan (5-[18F]FAMT) og 1-(2-[18F]fluorethyl)-L-tryptophan (L-[18F]FETrp, også kendt som (S)-2-amino-3-(1-(2-[18F]fluoroethyl)-1H-indol-3-yl)propansyre, molekylvægt 249,28 g/mol), er de to mest lovende radiotracere med gunstig in vivo-kinetik i dyremodeller og stort potentiale til at overgå [11 C]AMT til evaluering af kliniske tilstande med dereguleret tryptofanmetabolisme28. 5-[18F]FAMT viste høj optagelse i IDO1-positive tumor xenografts af immunkompromitterede mus og er mere specifik for billeddannelse af KP end [11C] AMT28,30. In vivo-stabiliteten af 5-[18F]FAMT er dog fortsat et potentielt problem, da der ikke er rapporteret in vivo-defluorinationsdata ud over 30 minutter efter injektion af sporstoffet30.
En præklinisk undersøgelse i en genetisk manipuleret medulloblastommusmodel viste, at L-[18F]FETrp sammenlignet med 18F-fluorodeoxyglucose (18F-FDG) havde høj akkumulering i hjernetumorer, ubetydelig in vivo-defluornation og lav baggrundsoptagelse, hvilket viste et overlegen mål-til-ikke-mål-forhold31,32. Strålingsdosimetriundersøgelser hos mus viste, at L-[18F]FETrp havde en ca. 20% lavere gunstig dosimetrieksponering end det kliniske 18F-FDG PET-sporstof33. I overensstemmelse med andre forskeres resultater giver prækliniske undersøgelsesdata væsentlige beviser til støtte for den kliniske oversættelse af L-[18F]FETrp til undersøgelse af unormal tryptofanmetabolisme hos mennesker med hjernesygdomme som epilepsi, neuro-onkologi, autisme og tuberøs sklerose28,31,32,33,34,35,36 . En samlet sammenligning mellem de tre mest undersøgte sporstoffer til tryptofanmetabolisme, 11C-5-HTP, [11C]AMT og L-[18F]FETrp, er vist i tabel 1. Både 11C-5-HTP og [11C]AMT har en kort halveringstid og besværlige radiomærkningsprocedurer. En protokol til radiosyntese af L-[18F]FETrp ved hjælp af en en-pot, to-trins tilgang er beskrevet her. Protokollen indeholder anvendelse af en lille mængde radioaktivt mærkningsprækursor, et lille volumen reaktionsopløsningsmidler, lav belastning af giftig K222 og en miljøvenlig og injicerbar mobil fase til rensning og nem formulering.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>[18F]Fluoride in [18O]H2O</td>
			<td>PETNET Solutions Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4,7,13,16,21,24-hexaoxa-1,10-diazabicyclo[8.8.8]hexacosane</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>291950010</td>
			<td>Kryptofix 222 or K222, 98%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>222142500</td>
			<td>99.8%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>271004</td>
			<td>anhydrous, 99.8%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1260 HPLC system</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>Agilent 1260</td>
			<td>Agilent 1260 series</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytcial chiral HPLC column</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>12024AST</td>
			<td>Astec CHIROBIOTIC T, 25 cm &#215; 4.6 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide, 60 LBS</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>REFR744R200S</td>
			<td>99.99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-FETrp standard reference</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Empty sterile vial</td>
			<td>Jubilant HollisterStier</td>
			<td>7515</td>
			<td>20 mm closure, 10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>2716</td>
			<td>200 proof, USP grade. &#8805;99.9%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand 13 mm Syringe Filter, 0.22 &#181;m, PVDF, sterile</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-720-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30721</td>
			<td>&#8805;37%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>8316</td>
			<td>70%, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-[18F]FETrp radiolabeling precursor</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-FETrp standard reference</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light C8 cartridge</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT036770</td>
			<td>Sep-Pak&#160; C8 plus light cartridge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 20 G x 1</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 20 G x 1 &#189;</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 21 G x 2</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral aluminum oxide</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT023561</td>
			<td>Sep-Pak alumina N plus light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon membrane (0.20 &#181;m )</td>
			<td>MilliPore</td>
			<td>GNWP04700</td>
			<td>47 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pall Acrodisc 25 mm syringe sterile filter</td>
			<td>Pall Corporation</td>
			<td>4907</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PETCHEM radiochemistry synthesis system</td>
			<td>PETCHEM Solutions Inc. Pinckney, MI</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Radiosynthesizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH strips 2.0 - 9.0</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1.09584.0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium carbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>367877</td>
			<td>99.995%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quaternary methylammonium light cartridge</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186004051</td>
			<td>Sep-Pak QMA light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semi-preparative C18 HPLC column</td>
			<td>Phenomenex</td>
			<td>00D-4253-N0</td>
			<td>100 &#215; 10 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semi-preparative chiral HPLC column</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>12034AST</td>
			<td>Astec CHIROBIOTIC T, 25 cm &#215; 10 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride injection 23.4%</td>
			<td>APP Pharmaceutical, LLC</td>
			<td>18730</td>
			<td>USP grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloridei injection 0.9%</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NDC 0409-4888-10</td>
			<td>USP grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>306576</td>
			<td>99.99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinal needle, 20 G x 3 &#189;</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>405182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile alcohol prep pads</td>
			<td>BioMed Resource Inc.</td>
			<td>PC661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile empty vials, 2 mL</td>
			<td>Hollister Stier</td>
			<td>7505ZA</td>
			<td>13 mm closure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile empty vials, 30 mL</td>
			<td>Jubilant HollisterStier</td>
			<td>7520ZA</td>
			<td>20 mm closure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe PP/PE, 3 mL, Luer Lock</td>
			<td>Air-Tite</td>
			<td>4020-X00V0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe PP/PE, 5 mL, Luer Lock</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe,&#160; PP/PE, 10 mL, NORM-JECT</td>
			<td>Air-Tite</td>
			<td>4100-000V0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 1 mL, Luer Slip</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 3 mL, Luer-Lock</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra high purity argon</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>AR UHP300</td>
			<td>99.999%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>ZRQSVP300</td>
			<td>Direct-Q 3 tap to pure and ultrapure water purification system</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

radiosynthesis of 1-(2-[18f]fluoroethyl)-l-tryptophan using a one-pot, two-step protocol

Kynureninvejen (KP) er en primær vej til tryptofanmetabolisme. Beviser tyder stærkt på, at metabolitter af KP spiller en afgørende rolle i tumorproliferation, epilepsi, neurodegenerative sygdomme og psykiatriske sygdomme på grund af deres immunmodulerende, neuromodulatoriske og neurotoksiske virkninger. Det mest udbredte positronemissionstomografi (PET) middel til kortlægning af tryptofanmetabolisme, α-[11C]methyl-L-tryptophan ([11C]AMT), har en kort halveringstid på 20 minutter med besværlige radiosynteseprocedurer. En cyklotron på stedet er påkrævet for at radiosyntetisere [11C]AMT. Kun et begrænset antal centre producerer [11C]AMT til prækliniske undersøgelser og kliniske afprøvninger. Derfor er udviklingen af et alternativt billeddannelsesmiddel, der har en længere halveringstid, gunstig in vivo-kinetik og er let at automatisere, presserende nødvendig. Nytten og værdien af 1-(2-[18F]fluorethyle)-L-tryptophan, en fluor-18-mærket tryptofananalog, er blevet rapporteret i prækliniske anvendelser i cellelinjeafledte xenografts, patientafledte xenografter og transgene tumormodeller.
Dette papir præsenterer en protokol til radiosyntese af 1-(2-[18F]fluorethyl)-L-tryptophan ved hjælp af en en-pot, to-trins strategi. Ved hjælp af denne protokol kan radiotraceren produceres i et 20 ± 5% (henfald korrigeret ved syntesens afslutning, n > 20) radiokemisk udbytte med både radiokemisk renhed og enantiomert overskud på over 95%. Protokollen indeholder en lille prækursormængde med højst 0,5 ml reaktionsopløsningsmiddel i hvert trin, lav belastning af potentielt giftig 4,7,13,16,21,24-hexaoxa-1,10-diazabicyclo[8.8.8]hexacosan (K222) og en miljøvenlig og injicerbar mobil fase til rensning. Protokollen kan let konfigureres til at producere 1-(2-[18F]fluorethyle)-L-tryptophan til klinisk afprøvning i et kommercielt tilgængeligt modul.

Reaktionsskemaet er vist i figur 1. Radioaktiv mærkning omfatter følgende to trin: 1) reaktion af tosylatradiomærkningsprækursoren med [18F]fluorid tilvejebringer det 18F-mærkede mellemprodukt, og 2) debeskyttelse af tert-butyloxycarbonyl- og tert-butylbeskyttende grupper i mellemproduktet giver slutproduktet L-[18F]FETrp. Begge reaktionstrin fortsætter ved 100 °C i 10 minutter.
Før du modtager [18F</...

Watch this Scientific Journal Video about Radiosynthesis of 1-2-[18F]Fluoroethyl-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol at JoVE.com

Radiosynthesis of 1-2-[18F]Fluoroethyl-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol

Her beskriver vi radiosyntesen af 1-(2-[18F]Fluorethyle)-L-tryptophan, et positronemissionstomografibilleddannelsesmiddel til undersøgelse af tryptofanmetabolisme ved hjælp af en en-pot, to-trins strategi i et radiokemisk syntesesystem med gode radiokemiske udbytter, højt enantiomerisk overskud og høj pålidelighed.

Radiosyntese af 1-(2-[18F]Fluorethyle)-L-Tryptophan ved hjælp af en en-pot, to-trins protokol

The kynurenine pathway (KP) is a primary route for tryptophan metabolism. Evidence strongly suggests that metabolites of the KP play a vital role in tumor ...

Det overordnede mål med denne protokol er at radiosyntetisere en F18 radioaktivt mærket tryptophan sporstof ved en en-pot, to-trins tilgang. Radiotraceren kan finde udbredt anvendelse til billeddannelse tryptophan metabolisme. Teknikken bruger radioisotopen med en længere halveringstid, mindre reaktionsforløber og mindre reaktionsvolumen og en miljøvenlig fase til rensning.Radiotraceren kan anvendes til diagnosticering af forskellige lidelser, der påvirker hjernen, herunder, men ikke begrænset til, epilepsi, neuropsykiatriske lidelser og neuro-onkologi. Denne metode kan anvendes på andre kommercielt tilgængelige radiomærkningsmoduler. Når F18-fluoropløsningen er modtaget, skal du begynde med at undersøge blyboksen på overfladen og fra afstanden på en meter registrere de maksimale strålingseksponeringshastigheder.Når du har udført en aftørringstest for at sikre, at forsendelseskassen ikke er forurenet, skal du registrere F18-fluordosis og -tid. Overfør F18-fluoropløsningen til det radiokemiske syntesesystem. Forbind argonlinjen med en kort nål og F18-fluoroverførselslinjen med en lang nål til hætteglasset med F18-fluor.Luk derefter den varme celleglasdør og blydøren. Tænd for argonforsyningslinjen ved at klikke på Argon Supply. Forøg argontrykket, og tænd for F18-fluorskubleledningen for at skubbe det vandige F18-fluor gennem QMA-lyspatronen.Når al radioaktivitet er fanget i QMA-lyspatronen, og radioaktivitetsdetektoraflæsningen er stabil, skal du øge argontrykket og blæse argon gennem patronen i yderligere fem minutter for at fjerne overskydende vand. Når du har slukket for F18-fluorskublelinjen, skal du reducere argontrykket til nul og skifte den seks-port to-positionsventil fra F18-fluorfangstpositionen til elueringspositionen. Åbn reaktionshætteglasset, tænd input MVP-positionen en argonlinje, og skub K222- og kaliumcarbonatopløsningen ind i input MVP-position et hætteglas gennem QMA-lyspatronen for at eluere radioaktiviteten ud i reaktionshætteglasset.Skift F18-fluoreelueringspositionen til fangstpositionen. Klik på knappen Varme for at opvarme reaktoren ved 110 grader Celsius, tænd for output MVP-position-fire argonlinje, der forbinder til reaktoren, og fordamp opløsningsmidlet i output MVP-position fire hætteglas. Klik på knappen Cool for at afkøle reaktoren til stuetemperatur med komprimeret kuldioxid.Sluk for den fejende linje, skift input MVP-position et til position to, og tilsæt den vandfrie acetonitril i hætteglasset to. To tænder den fejende linje og varmelegemet for at azeotropisk tørre F18-fluor ved 110 grader Celsius. Når reaktoren når stuetemperatur, skal du slukke for den fejende linje, skifte indgangs-MVP-position to til position tre og tilføje tosylatradiomærkningsforløberen i hætteglasset tre.Luk reaktoren og opvarm reaktionsblandingerne ved 100 grader Celsius i 10 minutter. For at fordampe reaktionsopløsningsmidlet, når reaktoren er kølet af, skal du tænde for fejelinjen og fordampe reaktionsopløsningsmidlet ved 100 grader Celsius. Når reaktoren er kølet af, skal du slukke for den fejende linje og skifte input MVP-position tre til position fire.Når saltsyreacetonitrilblandingen tilsættes, opvarmes reaktionen ved 100 grader Celsius i 10 minutter for at beskytte tert-butyl- og tert-butyloxycarbonylbeskyttelsesgrupperne i radiomærkningsprækursoren. For at neutralisere reaktionen, når reaktoren når stuetemperatur, skal du skifte input MVP-position fire til position fem og tilsætte to molære natriumhydroxid til reaktionsblandingen og slukke for input MVP-argonlinjen. Start derefter med at overføre reaktionsblandingen til den mellemliggende fil ved at klikke på F-knappen i output MVP for at skifte output MVP fra udluftningsposition fire til position fem, og derefter ved at klikke på F-knappen i input MVP for at skifte input MVP fra position fem til position seks.Når du har tændt udgangs-MVP-argonlinjen, skal du skubbe reaktionsblandingen gennem de stablede neutrale aluminiumoxid- og C8-patroner til det mellemliggende hætteglas, der er installeret før HPLC-prøvesløjfen. Til skylning af reaktoren skal du skifte output MVP-position fem til position seks, skubbe skylleopløsningen i hætteglasset med output MVP-position seks gennem reaktionshætteglasset, patronerne og det mellemliggende hætteglas successivt. Start derefter rensning af blandingen ved at skifte HPLC-sløjfen fra injektionsposition til belastningsposition og tænde indgangen MVP argonlinje.Når blandingen lægges i HPLC-sløjfen på fem milliliter, skal du skifte knappen Indlæs til Indsprøjt, klikke på Injicer HPLC for at starte HPLC-kromatogrammet med en strømningshastighed på tre milliliter i minuttet og derefter klikke på knappen HPLC-skærm for at få adgang til HPLC-kromatogrammet i realtid. Klik på knappen Afledning MVP for at omdirigere mål-HPLC-fraktionen til den korte C18-kolonne på ca. 12 minutter. Når målradioaktiviteten er opsamlet i C18-kolonnen, skal du skifte omledningsventilen med to positioner med fire porte til affaldsopsamlingspositionen og skylle chiralsøjlen med en hastighed på fire ml i minuttet i seks minutter for at fjerne den mindre D F18 FETrp-enantiomer og andre ultraviolette urenheder.Klik på knappen Afledning MVP for at omdirigere HPLC-mobilfasen tilbage til formuleringen MVP-position en ved tre milliliter i minuttet. Bemærk, at den mobile fase passerer gennem chiralkolonnen og C18-kolonnen for at rense L-F18 FETrp, der er bevaret i C18-kolonnen. Efter ca. 32 til 34 minutter samles målfraktionen i formuleringen MVP-position to hætteglas.Skub derefter formuleringen MVP position to hætteglas opløsning gennem leveringslinjen og sterilt filter ind i den endelige dosis hætteglas. Analyser den endelige dosisaktivitet og volumen efter fjernelse af det sterile filter. Systemet skylles med ultrarent vand efterfulgt af ethanol med en strømningshastighed på fire ml pr. minut i mindst 15 minutter pr. vask.Sluk for HPLC-pumpen og PLC-boksen, luk programmet, luk det komprimerede flyselskab, argonlinjen, kuldioxidledningen og modulets hovedeffekt. Træk ca. 0,1 ml af den endelige dosis tilbage i en 0,2 milliliter indsats af et QC hætteglas. Kør den varme prøve, da det delvise sekvensprogram er beskrevet i tekstmanuskriptet.Analyser QC-dataene ved at beregne de kemiske og radiokemiske puriteter i enantiomerisk overskydende værdi og molær aktivitet. Efter bestemmelse af pH-værdien frigives dosis, hvis alle testresultater passerer det acceptable interval. De repræsentative HPLC-kromatogrammer for QC vises.De ubetydelige toppe mellem tomrumsvolumenet i 10 minutter af programmet blev detekteret i det tomme kromatogram. Den ikke-radioaktivt mærkede standardreference L-fluorethyl-trytophan viste tilstedeværelsen af en enkelt isomer adskilt godt fra standardreferencen for dens D-modstykke. Den endelige dosis af L-F18 tryptofan viste høj kemisk renhed og radiokemisk renhed.Stabilitetstesten af slutproduktet ved den højeste dosiskoncentration i op til otte timer viste, at L-F18 tryptofan var stabil med hensyn til kemisk renhed, radiokemisk renhed, enantiomerisk overskud og pH-værdi. De kemiske og radiokemiske puriteter større end 95% blev opnået ved hjælp af denne protokol. To kolonner bruges til sporrensning.Husk at skifte til C18-kolonnen for at fjerne de kemiske urenheder. Vi kan hurtigt tilpasse denne metode til klinisk produktion af den fluor-18-mærkede tryptophan radiotracer.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Radiosynthesis of 1-(2-[18F]Fluoroethyl)-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol

A Simple and Rapid Protocol for Measuring Neutral Lipids in Algal Cells Using Fluorescence

En enkel og hurtig protokol til måling af neutrale lipider i algeceller Brug Fluorescens

Algae are considered excellent candidates for renewable fuel sources due to their natural lipid storage capabilities. Robust monitoring of algal ...

The Bioconjugation and Radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled Antibodies

The Bioconjugation and Radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled Antibodies

Den Bioconjugation og Radiosynthesis af<sup&gt; 89</sup&gt; Zr-DFO-mærkede antistoffer

The exceptional affinity, specificity, and selectivity of antibodies make them extraordinarily attractive vectors for tumor-targeted PET ...

A Protocol for the Production of Gliadin-cyanoacrylate Nanoparticles for Hydrophilic Coating

En protokol for Produktion af Gliadin-cyanoacrylat Nanopartikler for hydrofile belægning

This article presents a protocol for the production of protein-based nanoparticles that changes the hydrophobic surface to hydrophilic by a simple spray ...

A Protocol for Safe Lithiation Reactions Using Organolithium Reagents

En protokol for sikker lithiering Reaktioner Brug organolithiumreagenser

Organolithium reagents are powerful tools in the synthetic chemist&#39;s toolbox. However, the extreme pyrophoric nature of the most reactive reagents ...

An Optimized Protocol for the Efficient Radiolabeling of Gold Nanoparticles by Using a 125I-labeled Azide Prosthetic Group

An Optimized Protocol for the Efficient Radiolabeling of Gold Nanoparticles by Using a 125I-labeled Azide Prosthetic Group

En optimeret protokollen om Effektiv Radioaktiv mærkning af Gold Nanopartikler ved hjælp af en<sup&gt; 125</sup&gt; I-mærket Azide prostetiske gruppe

Here, we demonstrate a detailed protocol for the radiosynthesis of a 125I-labeled azide prosthetic group and its application to the efficient ...

A Protocol for Electrochemical Evaluations and State of Charge Diagnostics of a Symmetric Organic Redox Flow Battery

En protokol til elektrokemiske Evalueringer og Staten Charge Diagnostik af en symmetrisk Økologisk Redox Flow Batteri

Redox flow batteries have been considered as one of the most promising stationary energy storage solutions for improving the reliability of the power grid ...

One-pot Microwave-assisted Conversion of Anomeric Nitrate-esters to Trichloroacetimidates

One-pot mikrobølgeovn-assisteret konvertering af anomere nitrat-estere til Trichloroacetimidates

The goal of the following procedure is to provide a demonstration of the one-pot conversion of a 2-azido-1-nitrate-ester to a trichloroacetimidate ...

The MPLEx Protocol for Multi-omic Analyses of Soil Samples

MPLEx protokol for Multi-omic analyser af jordprøver

Mass spectrometry (MS)-based integrated metaproteomic, metabolomic, and lipidomic (multi-omic) studies are transforming our ability to understand and ...

Separation of Aldehydes and Reactive Ketones from Mixtures Using a Bisulfite Extraction Protocol

Adskillelse af aldehyder og reaktive ketoner fra blandinger ved hjælp af en Bisulfite udvinding protokol

The purification of organic compounds is an essential component of routine synthetic operations. The ability to remove contaminants into an aqueous layer ...

A Two-Step Protocol for Umpolung Functionalization of Ketones Via Enolonium Species

En to-trins protokol til Umpolung Functionalization af ketoner Via Enolonium arter

&#945;-Functionalization of ketones via umpolung of enolates by hypervalent iodine reagents is an important concept in synthetic organic chemistry. ...