Name: radiosynthesis of 1-(2-[18f]fluoroethyl)-l-tryptophan using a one-pot, two-step protocol
Uploaded: 2021-09-21T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Radiosynthesis of 1-2-[18F]Fluoroethyl-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door het Diagnostic & Research PET/MRI Center en door de afdelingen Biomedisch Onderzoek en Radiologie van Nemours/Alfred I. duPont Hospital for Children.

LET OP: Het protocol heeft betrekking op radioactieve materialen. Elke extra dosis radioactief materiaal kan leiden tot een evenredige toename van de kans op nadelige gezondheidseffecten zoals kanker. Onderzoekers moeten de dosispraktijken 'zo laag als redelijkerwijs haalbaar' (ALARA) volgen om het radiosyntheseprotocol te begeleiden met voldoende bescherming in de hete cel of loden kap. Het minimaliseren van directe contacttijd, het gebruik van een loden schild en het houden van maximale afstand voor elke stralingsbloot...

Tryptofaan is een essentieel aminozuur voor de mens. Het speelt een belangrijke rol bij de regulatie van stemming, cognitieve functie en gedrag. Radioactief gelabelde tryptofaanderivaten, met name de koolstof-11-gelabelde [11C] AMT, zijn uitgebreid bestudeerd vanwege hun unieke rol bij het in kaart brengen van serotoninesynthese38,39, het detecteren en beoordelen van tumoren40, het begeleiden van epilepsiechirurgie41,42 en het evalueren van de behandel...

Bij mensen is tryptofaan een essentieel onderdeel van de dagelijkse voeding. Tryptofaan wordt voornamelijk gemetaboliseerd via de kynurenine route (KP). De KP wordt gekatalyseerd door twee snelheidsbeperkende enzymen, indoolamine 2, 3-dioxygenase (IDO) en tryptofaan 2, 3-dioxygenase (TDO). Meer dan 95% van tryptofaan wordt omgezet in kynurenine en zijn stroomafwaartse metabolieten, waardoor uiteindelijk nicotinamide adenine dinucleotide wordt gegenereerd, wat essentieel is voor cellulaire energietransductie. De KP is een belangrijke regulator van het immuunsysteem en een belangrijke regulator van neuroplasticiteit en neurotoxische effecten1,2. Abnormaal tryptofaanmetabolisme is betrokken bij verschillende neurologische, oncologische, psychiatrische en metabole stoornissen; daarom zijn radioactief gelabelde tryptofaan analogen uitgebreid gebruikt in klinisch onderzoek. De twee meest voorkomende klinisch onderzochte tryptofaan radiotracers zijn 11C-α-methyl-L-tryptofaan ([11C]AMT) en 11C-5-hydroxytryptophan (11C-5-HTP)3.
In de jaren 1990, 11C-5-HTP werd gebruikt om serotonine-afscheidende neuro-endocriene tumoren4 te visualiseren en om de behandeling van gemetastaseerd hormoon-refractair prostaat adenocarcinoom5 te diagnosticeren en te controleren. Later werd het gebruikt als een beeldvormingsinstrument voor de kwantificering van het serotonerge systeem in de endocriene pancreas6. 11 C-5-HTP is ook een veelbelovende tracer voor niet-invasieve detectie van levensvatbare eilandjes in intraportal eilandjestransplantatie en type 2 diabetes7,8. In de afgelopen twee decennia zijn veel radioactief gelabelde aminozuren gevorderd tot klinisch onderzoek9,10. In het bijzonder heeft het koolstof-11-gelabelde tryptofaan analoog [11C] AMT uitgebreide aandacht gekregen voor het in kaart brengen van de serotoninesynthese in de hersenen11,12,13,14 en voor het lokaliseren van epileptische foci, epileptogene tumoren, tubereuze sclerosecomplex, gliomen en borstkanker15,16,17,18,19,20 ,21,22,23,24,25,26. [11C] AMT heeft ook een hoge opname in verschillende laag- en hooggradige tumoren bij kinderen27. Bovendien is kinetische traceranalyse van [11C]AMT bij menselijke proefpersonen gebruikt om verschillende tumoren te differentiëren en te rangschikken en glioom te onderscheiden van door straling geïnduceerd weefselletsel15. [11C] AMT-geleide beeldvorming toont significante klinische voordelen bij hersenaandoeningen3,25. Vanwege de korte halfwaardetijd van koolstof-11 (20 min) en de moeizame radiosyntheseprocedures is [11C] AMT-gebruik echter beperkt tot de weinige PET-centra met een cyclotron op locatie en een radiochemische faciliteit.
Fluor-18 heeft een gunstige halfwaardetijd van 109,8 min, vergeleken met de 20 min halfwaardetijd van koolstof-11. In toenemende mate zijn de inspanningen gericht op de ontwikkeling van fluor-18-gelabelde radiotracers voor tryptofaanmetabolisme3,28. Een totaal van 15 unieke fluor-18 radioactief gelabelde tryptofaan radiotracers zijn gemeld in termen van radiolabeling, transportmechanismen, in vitro en in vivo stabiliteit, biodistributie en tumoropname in xenografts. Snelle in vivo defluorinatie werd echter waargenomen voor verschillende tracers, waaronder 4-, 5- en 6-[18F]fluorotryptofaan, wat verdere klinische translatie uitsloot29. 5-[18F]Fluoro-α-methyltryptophan (5-[18F]FAMT) en 1-(2-[18F]fluoroethyl)-L-tryptofaan (L-[18F]FETrp, ook bekend als (S)-2-amino-3-(1-(2-[18F]fluoroethyl)-1H-indol-3-yl)propaanzuur, molecuulgewicht 249,28 g/mol), zijn de twee meest veelbelovende radiotracers met gunstige in vivo kinetiek in diermodellen en een groot potentieel om [111] te overtreffen C]AMT voor de evaluatie van klinische aandoeningen met gedereguleerd tryptofaanmetabolisme28. 5-[18F]FAMT toonde een hoge opname in IDO1-positieve tumor xenografts van immuungecompromitteerde muizen en is specifieker voor het in beeld brengen van de KP dan [11C]AMT28,30. De in vivo stabiliteit van 5-[18F]FAMT blijft echter een potentieel punt van zorg, aangezien er geen in vivo defluorinatiegegevens zijn gemeld na 30 minuten na injectie van de tracer30.
Een preklinische studie in een genetisch gemanipuleerd medulloblastoommuismodel toonde aan dat in vergelijking met 18F-fluorodeoxyglucose (18F-FDG), L-[18F]FETrp een hoge accumulatie had in hersentumoren, verwaarloosbare in vivo defluorinatie en lage achtergrondopname, wat een superieure target-to-nontarget ratio aantoont31,32. Stralingsdosimetriestudies bij muizen gaven aan dat L-[18F]FETrp een ongeveer 20% lagere gunstige dosimetrieblootstelling had dan de klinische 18F-FDG PET-tracer33. In overeenstemming met de bevindingen van andere onderzoekers leveren preklinische studiegegevens substantieel bewijs ter ondersteuning van de klinische vertaling van L-[18F]FETrp voor het onderzoek naar abnormaal tryptofaanmetabolisme bij mensen met hersenaandoeningen zoals epilepsie, neuro-oncologie, autisme en tubereuze sclerose28,31,32,33,34,35,36 . Een algemene vergelijking tussen de drie meest onderzochte tracers voor tryptofaanmetabolisme, 11C-5-HTP, [11C] AMT, en L-[18F] FETrp, wordt weergegeven in tabel 1. Zowel 11C-5-HTP en [11C] AMT hebben een korte halfwaardetijd en moeizame radiolabelprocedures. Een protocol voor de radiosynthese van L-[18F]FETrp met behulp van een eenpotige, tweestapsbenadering wordt hier beschreven. Het protocol omvat het gebruik van een kleine hoeveelheid radiolabelprecursor, een klein volume reactie-oplosmiddelen, lage belasting van toxische K222 en een milieuvriendelijke en injecteerbare mobiele fase voor zuivering en eenvoudige formulering.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>[18F]Fluoride in [18O]H2O</td>
			<td>PETNET Solutions Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4,7,13,16,21,24-hexaoxa-1,10-diazabicyclo[8.8.8]hexacosane</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>291950010</td>
			<td>Kryptofix 222 or K222, 98%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>222142500</td>
			<td>99.8%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>271004</td>
			<td>anhydrous, 99.8%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1260 HPLC system</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>Agilent 1260</td>
			<td>Agilent 1260 series</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytcial chiral HPLC column</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>12024AST</td>
			<td>Astec CHIROBIOTIC T, 25 cm &#215; 4.6 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide, 60 LBS</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>REFR744R200S</td>
			<td>99.99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-FETrp standard reference</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Empty sterile vial</td>
			<td>Jubilant HollisterStier</td>
			<td>7515</td>
			<td>20 mm closure, 10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>2716</td>
			<td>200 proof, USP grade. &#8805;99.9%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand 13 mm Syringe Filter, 0.22 &#181;m, PVDF, sterile</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-720-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30721</td>
			<td>&#8805;37%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>8316</td>
			<td>70%, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-[18F]FETrp radiolabeling precursor</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-FETrp standard reference</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light C8 cartridge</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT036770</td>
			<td>Sep-Pak&#160; C8 plus light cartridge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 20 G x 1</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 20 G x 1 &#189;</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 21 G x 2</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral aluminum oxide</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT023561</td>
			<td>Sep-Pak alumina N plus light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon membrane (0.20 &#181;m )</td>
			<td>MilliPore</td>
			<td>GNWP04700</td>
			<td>47 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pall Acrodisc 25 mm syringe sterile filter</td>
			<td>Pall Corporation</td>
			<td>4907</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PETCHEM radiochemistry synthesis system</td>
			<td>PETCHEM Solutions Inc. Pinckney, MI</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Radiosynthesizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH strips 2.0 - 9.0</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1.09584.0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium carbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>367877</td>
			<td>99.995%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quaternary methylammonium light cartridge</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186004051</td>
			<td>Sep-Pak QMA light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semi-preparative C18 HPLC column</td>
			<td>Phenomenex</td>
			<td>00D-4253-N0</td>
			<td>100 &#215; 10 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semi-preparative chiral HPLC column</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>12034AST</td>
			<td>Astec CHIROBIOTIC T, 25 cm &#215; 10 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride injection 23.4%</td>
			<td>APP Pharmaceutical, LLC</td>
			<td>18730</td>
			<td>USP grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloridei injection 0.9%</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NDC 0409-4888-10</td>
			<td>USP grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>306576</td>
			<td>99.99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinal needle, 20 G x 3 &#189;</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>405182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile alcohol prep pads</td>
			<td>BioMed Resource Inc.</td>
			<td>PC661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile empty vials, 2 mL</td>
			<td>Hollister Stier</td>
			<td>7505ZA</td>
			<td>13 mm closure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile empty vials, 30 mL</td>
			<td>Jubilant HollisterStier</td>
			<td>7520ZA</td>
			<td>20 mm closure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe PP/PE, 3 mL, Luer Lock</td>
			<td>Air-Tite</td>
			<td>4020-X00V0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe PP/PE, 5 mL, Luer Lock</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe,&#160; PP/PE, 10 mL, NORM-JECT</td>
			<td>Air-Tite</td>
			<td>4100-000V0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 1 mL, Luer Slip</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 3 mL, Luer-Lock</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra high purity argon</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>AR UHP300</td>
			<td>99.999%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>ZRQSVP300</td>
			<td>Direct-Q 3 tap to pure and ultrapure water purification system</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

radiosynthesis of 1-(2-[18f]fluoroethyl)-l-tryptophan using a one-pot, two-step protocol

De kynurenine route (KP) is een primaire route voor tryptofaan metabolisme. Er zijn sterke aanwijzingen dat metabolieten van de KP een vitale rol spelen bij tumorproliferatie, epilepsie, neurodegeneratieve ziekten en psychiatrische ziekten vanwege hun immuunmodulerende, neuromodulerende en neurotoxische effecten. Het meest gebruikte positronemissietomografiemiddel (PET) voor het in kaart brengen van tryptofaanmetabolisme, α-[11C]methyl-L-tryptofaan ([11C]AMT), heeft een korte halfwaardetijd van 20 minuten met moeizame radiosyntheseprocedures. Een cyclotron op locatie is nodig om [11C]AMT radiosynthetiseren. Slechts een beperkt aantal centra produceert [11C]AMT voor preklinische studies en klinische onderzoeken. Daarom is de ontwikkeling van een alternatief beeldvormingsmiddel met een langere halfwaardetijd, gunstige in vivo kinetiek en gemakkelijk te automatiseren dringend nodig. Het nut en de waarde van 1-(2-[18F]fluoroethyl)-L-tryptofaan, een fluor-18-gelabeld tryptofaan analoog, is gemeld in preklinische toepassingen in cellijn-afgeleide xenografts, patiënt-afgeleide xenografts en transgene tumormodellen.
Dit artikel presenteert een protocol voor de radiosynthese van 1-(2-[18F]fluoroethyl)-L-tryptofaan met behulp van een eenpotstrategie in twee stappen. Met behulp van dit protocol kan de radiotracer worden geproduceerd in een radiochemische opbrengst van 20 ± 5% (verval gecorrigeerd aan het einde van de synthese, n > 20), met zowel radiochemische zuiverheid als enantiomeer van meer dan 95%. Het protocol bevat een kleine hoeveelheid precursor met niet meer dan 0,5 ml reactieoplosmiddel in elke stap, een lage belasting van potentieel toxisch 4,7,13,16,21,24-hexaoxa-1,10-diazabicyclo[8.8.8]hexacosaan (K222) en een milieuvriendelijke en injecteerbare mobiele fase voor zuivering. Het protocol kan eenvoudig worden geconfigureerd om 1-(2-[18F]fluoroethyl)-L-tryptofaan te produceren voor klinisch onderzoek in een commercieel verkrijgbare module.

Het reactieschema is weergegeven in figuur 1. De radiolabeling omvat de volgende twee stappen: 1) reactie van de tosylaatradiolabelprecursor met [18F]fluoride levert het 18F-gelabelde tussenproduct, en 2) deprotectie van de tert-butyloxycarbonyl- en tert-butyl-beschermende groepen in het tussenproduct biedt het eindproduct L-[18F]FETrp. Beide reactiestappen gaan door bij 100 °C gedurende 10 minuten.
Voordat u [<s...

Watch this Scientific Journal Video about Radiosynthesis of 1-2-[18F]Fluoroethyl-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol at JoVE.com

Radiosynthesis of 1-2-[18F]Fluoroethyl-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol

Hier beschrijven we de radiosynthese van 1-(2-[18F]Fluoroethyl)-L-tryptofaan, een positronemissietomografiebeeldvormingsmiddel voor het bestuderen van tryptofaanmetabolisme, met behulp van een eenpotstrategie in twee stappen in een radiochemisch synthesesysteem met goede radiochemische opbrengsten, hoge enantiomeerovermaat en hoge betrouwbaarheid.

Radiosynthese van 1-(2-[18F]Fluoroethyl)-L-tryptofaan met behulp van een eenpot, tweestapsprotocol

The kynurenine pathway (KP) is a primary route for tryptophan metabolism. Evidence strongly suggests that metabolites of the KP play a vital role in tumor ...

Het algemene doel van dit protocol is om een F18 radioactief gelabelde tryptofaan tracer te radiosynthetiseren door middel van een eenpot, tweestapsbenadering. De radiotracer kan een wijdverspreide toepassing vinden voor het afbeelden van tryptofaanmetabolisme. De techniek maakt gebruik van de radio-isotoop met een langere halfwaardetijd, minder reactievoorloper en minder reactievolume, en een milieuvriendelijke fase voor zuivering.De radiotracer kan worden gebruikt voor de diagnose van verschillende aandoeningen die de hersenen beïnvloeden, waaronder maar niet beperkt tot epilepsie, neuropsychiatrische stoornissen en neuro-oncologie. Deze methode kan worden toegepast op andere in de handel verkrijgbare radiolabelmodules. Zodra de F18-fluorideoplossing is ontvangen, begint u met het onderzoeken van de loodkast op het oppervlak en registreert u vanaf de afstand van één meter de maximale blootstelling aan straling.Na het uitvoeren van een veegtest om ervoor te zorgen dat de verzenddoos niet verontreinigd is, registreert u de dosis en tijd F18 fluoride. Breng de F18-fluorideoplossing over naar het radiochemische synthesesysteem. Verbind de argonlijn met een korte naald en de F18-fluoridetransferlijn met een lange naald met de F18-injectieflacon met fluoride.Sluit vervolgens de glazen deur en de loden deur van de hete cel. Schakel de argontoevoerregel in door op Argon Supply te klikken. Verhoog de argondruk en schakel de F18 fluoride duwleiding in om het waterige F18 fluoride door de QMA light cartridge te duwen.Zodra alle radioactiviteit is opgesloten in de QMA-lichtcartridge en de aflezing van de radioactiviteitsdetector stabiel is, verhoogt u de argondruk en blaast u argon nog vijf minuten door de cartridge om overtollig water te verwijderen. Nadat u de F18 fluoride duwleiding hebt uitgeschakeld, verlaagt u de argondruk tot nul en schakelt u de zespoorts tweekleps van de F18 fluoride vangpositie naar de elutiepositie. Open de reactieflacon, zet de ingangs-MVP-positie één argonlijn aan en duw de K222- en kaliumcarbonaatoplossing in de ingangs-MVP-positie één injectieflacon door de QMA-lichtcartridge om de radioactiviteit in de reactieflacon te elueren.Schakel de F18-fluoride-elutiepositie in de vangpositie. Klik op de knop Warmte om de reactor op 110 graden Celsius te verwarmen, schakel de uitgangs-MVP-positie-vier argonlijn in die op de reactor is aangesloten en verdamp het oplosmiddel in de uitgaande MVP-positie vier injectieflacon. Klik op de knop Koelen om de reactor af te koelen tot kamertemperatuur met gecomprimeerde koolstofdioxide.Schakel de veeglijn uit, schakel de ingangs-MVP-positie één naar positie twee en voeg de watervrije acetonitril toe in de injectieflacon twee. Twee zetten de veegleiding en verwarming aan om F18 fluoride azeotroop te drogen bij 110 graden Celsius. Zodra de reactor op kamertemperatuur is, schakelt u de veeglijn uit, schakelt u de ingangs-MVP-positie twee naar positie drie en voegt u de voorloper van de tosylaatradiolabel toe aan de injectieflacon drie.Sluit de reactor en verwarm de reactiemengsels gedurende 10 minuten op 100 graden Celsius. Om het reactieoplosmiddel te verdampen, zet u, zodra de reactor is afgekoeld, de veegleiding aan en verdampt u het reactieoplosmiddel bij 100 graden Celsius. Zodra de reactor is afgekoeld, schakelt u de veeglijn uit en schakelt u de ingangs-MVP-positie drie naar positie vier.Wanneer het zoutzuuracetonitrilmengsel wordt toegevoegd, verwarmt u de reactie gedurende 10 minuten bij 100 graden Celsius om de tert-butyl- en tert-butyloxycarbonylbeschermende groepen in de radiolabelvoorloper te de-beschermen. Om de reactie te neutraliseren, schakelt u, wanneer de reactor kamertemperatuur bereikt, de ingangs-MVP-positie vier naar positie vijf en voegt u twee molaire natriumhydroxide toe aan het reactiemengsel en schakelt u de ingangs-MVP-argonlijn uit. Begin vervolgens met het overbrengen van het reactiemengsel naar het tussenliggende bestand door op de F-knop in de uitvoer-MVP te klikken om de uitgangs-MVP van de ontluchtingspositie vier naar positie vijf te schakelen en vervolgens door op de F-knop in de ingangs-MVP te klikken om de ingangs-MVP van positie vijf naar positie zes te schakelen.Nadat u de uitgaande MVP-argonlijn hebt ingeschakeld, duwt u het reactiemengsel door de gestapelde neutrale aluminiumoxide- en C8-cartridges naar de tussenflacon die vóór de HPLC-monsterlus is geïnstalleerd. Voor het spoelen van de reactor schakelt u de uitgangs-MVP-positie vijf naar positie zes, duwt u de spoeloplossing in de injectieflacon met uitgang MVP-positie zes achtereenvolgens door de reactieflacon, patronen en de tussenflacon. Begin vervolgens met het zuiveren van het mengsel door de HPLC-lus van de injectiepositie naar de belastingspositie te schakelen en de ingangs-MVP-argonlijn in te schakelen.Wanneer het mengsel in de HPLC-lus van vijf milliliter is geladen, schakelt u de knop Laden over op Injecteren, klikt u op HPLC injecteren om het HPLC-chromatogram te starten met een stroomsnelheid van drie milliliter per minuut en klikt u vervolgens op de knop HPLC-monitor om toegang te krijgen tot het realtime HPLC-chromatogram. Klik op de knop Afleiding MVP om de doel-HPLC-fractie na ongeveer 12 minuten om te leiden naar de korte C18-kolom. Nadat de doelradioactiviteit in de C18-kolom is verzameld, schakelt u de vierpoorts tweekleps omleidingsklep naar de afvalinzamelingspositie en spoelt u de chirale kolom gedurende zes minuten met een snelheid van vier milliliter per minuut om het kleine D F18 FETrp-enantiomeer en andere ultraviolette onzuiverheden te verwijderen.Klik op de knop Afleiding MVP om de HPLC mobiele fase terug te leiden naar de formulering MVP-positie één met drie milliliter per minuut. Merk op dat de mobiele fase door de chirale kolom en C18-kolom gaat om L-F18 FETrp te zuiveren die in de C18-kolom wordt behouden. Verzamel na ongeveer 32 tot 34 minuten de doelfractie in de formulering MVP-positie twee injectieflacon.Duw vervolgens de MVP-positie van de formulering twee injectieflaconoplossing door de toedieningslijn en het steriele filter in de uiteindelijke dosisflacon. Test de uiteindelijke dosisactiviteit en het volume na het verwijderen van het steriele filter. Spoel het systeem met ultrazuiver water gevolgd door ethanol met een debiet van vier milliliter per minuut gedurende ten minste 15 minuten per wasbeurt.Schakel de HPLC-pomp en PLC-box uit, sluit het programma, schakel de gecomprimeerde luchtvaartmaatschappij, argonlijn, kooldioxidelijn en het hoofdvermogen van de module uit. Zuig ongeveer 0,1 milliliter van de uiteindelijke dosis op in een injectieflacon van 0,2 milliliter van een QC-injectieflacon. Voer het hete voorbeeld uit terwijl het partiële sequentieprogramma wordt beschreven in het tekstmanuscript.Analyseer de QC-gegevens door de chemische en radiochemische zuiverheid in enantiomere overwaarde en molaire activiteit te berekenen. Geef na het bepalen van de pH-waarde de dosis vrij als alle testresultaten het aanvaardbare bereik overschrijden. De representatieve HPLC-chromatogrammen voor QC worden getoond.De onbeduidende pieken tussen het leegtevolume in 10 minuten van het programma werden gedetecteerd in het blanco chromatogram. De niet-radioactief gelabelde standaardreferentie L-fluoroethyl-trytophan toonde de aanwezigheid van een enkel isomeer dat goed gescheiden was van de standaardreferentie van zijn D-tegenhanger. De uiteindelijke dosis L-F18 tryptofaan vertoonde een hoge chemische zuiverheid en radiochemische zuiverheid.De stabiliteitstests van het eindproduct bij de hoogste dosisconcentratie gedurende maximaal acht uur toonden aan dat L-F18 tryptofaan stabiel was in termen van chemische zuiverheid, radiochemische zuiverheid, enantiomeeroverschot en pH-waarde. De chemische en radiochemische zuiverheid van meer dan 95% werd bereikt met behulp van dit protocol. Twee kolommen worden gebruikt voor tracerzuivering.Vergeet niet om over te schakelen naar de C18-kolom om de chemische onzuiverheden te verwijderen. We kunnen deze methode snel aanpassen aan de klinische productie van de fluor-18-gelabelde tryptofaan radiotracer.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Radiosynthesis of 1-(2-[18F]Fluoroethyl)-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol

A Simple and Rapid Protocol for Measuring Neutral Lipids in Algal Cells Using Fluorescence

Een eenvoudige en snelle protocol voor het meten van neutrale lipiden in algencellen met behulp van fluorescentie

Algae are considered excellent candidates for renewable fuel sources due to their natural lipid storage capabilities. Robust monitoring of algal ...

The Bioconjugation and Radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled Antibodies

The Bioconjugation and Radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled Antibodies

De bioconjugatie en radiosynthese van<sup&gt; 89</sup&gt; Zr-DFO-gemerkte antilichamen

The exceptional affinity, specificity, and selectivity of antibodies make them extraordinarily attractive vectors for tumor-targeted PET ...

A Protocol for the Production of Gliadin-cyanoacrylate Nanoparticles for Hydrophilic Coating

Een protocol voor de productie van Gliadin-cyanoacrylaat nanopartikels voor hydrofiele coating

This article presents a protocol for the production of protein-based nanoparticles that changes the hydrophobic surface to hydrophilic by a simple spray ...

A Protocol for Safe Lithiation Reactions Using Organolithium Reagents

Een protocol voor veilige lithiering Reacties Met behulp van organolithiumchemie

Organolithium reagents are powerful tools in the synthetic chemist&#39;s toolbox. However, the extreme pyrophoric nature of the most reactive reagents ...

An Optimized Protocol for the Efficient Radiolabeling of Gold Nanoparticles by Using a 125I-labeled Azide Prosthetic Group

An Optimized Protocol for the Efficient Radiolabeling of Gold Nanoparticles by Using a 125I-labeled Azide Prosthetic Group

Een geoptimaliseerde protocol voor de efficiënte Radioactief merken van Gold Nanodeeltjes met behulp van een<sup&gt; 125</sup&gt;-Gemerkte azide prosthetische groep

Here, we demonstrate a detailed protocol for the radiosynthesis of a 125I-labeled azide prosthetic group and its application to the efficient ...

A Protocol for Electrochemical Evaluations and State of Charge Diagnostics of a Symmetric Organic Redox Flow Battery

Een protocol voor elektrochemische Evaluaties en State of Charge Diagnose van een Symmetric Organic Redox Flow Battery

Redox flow batteries have been considered as one of the most promising stationary energy storage solutions for improving the reliability of the power grid ...

One-pot Microwave-assisted Conversion of Anomeric Nitrate-esters to Trichloroacetimidates

One-pot magnetron-bijgewoonde conversie van anomere nitraat-esters naar Trichloroacetimidates

The goal of the following procedure is to provide a demonstration of the one-pot conversion of a 2-azido-1-nitrate-ester to a trichloroacetimidate ...

The MPLEx Protocol for Multi-omic Analyses of Soil Samples

Het MPLEx-Protocol voor Multi-dienst Analyses van bodemmonsters

Mass spectrometry (MS)-based integrated metaproteomic, metabolomic, and lipidomic (multi-omic) studies are transforming our ability to understand and ...

Separation of Aldehydes and Reactive Ketones from Mixtures Using a Bisulfite Extraction Protocol

Scheiding van aldehyden en ketonen reactieve van mengsels met een bisulfiet extractie Protocol

The purification of organic compounds is an essential component of routine synthetic operations. The ability to remove contaminants into an aqueous layer ...

A Two-Step Protocol for Umpolung Functionalization of Ketones Via Enolonium Species

Een tweestaps Protocol voor Umpolung Functionalization van ketonen Via Enolonium soorten

&#945;-Functionalization of ketones via umpolung of enolates by hypervalent iodine reagents is an important concept in synthetic organic chemistry. ...