Name: radiosynthesis of 1-(2-[18f]fluoroethyl)-l-tryptophan using a one-pot, two-step protocol
Uploaded: 2021-09-21T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Radiosynthesis of 1-2-[18F]Fluoroethyl-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מרכז האבחון והמחקר PET /MRI, ועל ידי המחלקות למחקר ורדיולוגיה ביו-רפואיים בבית החולים נמורס/אלפרד דופונט לילדים.

אזהרה: הפרוטוקול כרוך בחומרים רדיואקטיביים. כל מנה נוספת של חומרים רדיואקטיביים עלולה להוביל לעלייה פרופורציונלית בסיכוי להשפעות בריאותיות שליליות כגון סרטן. החוקרים חייבים לעקוב אחר "נמוך ככל בר השגה סביר" (ALARA) מינון שיטות כדי להנחות את פרוטוקול radiosynthesis עם הגנה נאותה בתא החם או מכסה המנ?...

טריפטופן היא חומצת אמינו חיונית לבני אדם. הוא ממלא תפקיד חשוב בוויסות מצב הרוח, התפקוד הקוגניטיבי וההתנהגות. נגזרות טריפטופן Radiolabeled, במיוחד פחמן-11-שכותרתו [11C]AMT, נחקרו בהרחבה בשל תפקידם הייחודי במיפוי סינתזת סרוטונין38,39, גילוי ודירוג גידולים...

אצל בני אדם, טריפטופן הוא מרכיב חיוני של הדיאטה היומית. טריפטופן הוא בעיקר מטבוליזם באמצעות מסלול kynurenine (KP). ה- KP מזורז על ידי שני אנזימים מגבילי שיעור, אינדולאמין 2, 3-דיאוקסיגנאז (IDO) וטריפטופן 2, 3-דיאוקסיגנאז (TDO). יותר מ 95% של טריפטופן מומר קינורנין ואת המטבוליטים במורד הזרם שלה, בסופו של דבר יצירת ניקוטינאמיד אדנין dinucleotide, אשר חיוני טרנסדוקציה אנרגיה תאית. KP הוא רגולטור מרכזי של המערכת החיסונית ורגולטור חשוב של נוירופלסטיות ואפקטים neurotoxic1,2. חילוף חומרים טריפטופן חריג מעורב בהפרעות נוירולוגיות, אונקולוגיות, פסיכיאטריות ומטבוליות שונות; לכן, אנלוגים טריפטופן radiolabeled שימשו בהרחבה בחקירה קלינית. שני רדיוטריקטורים טריפטופן הנחקרים קלינית הנפוצים ביותר הם 11C-α-מתיל-L-טריפטופן ([11C]AMT) ו 11C-5-hydroxytryptophan (11C-5-HTP)3.
בשנות ה-90, 11C-5-HTP שימש לדמיין גידולים נוירואנדוקריניים הפרשת סרוטונין4 וכדי לאבחן ולנטר טיפול של אדנוקרצינומה הורמון עקשן גרורתי5. מאוחר יותר, הוא שימש ככלי הדמיה לכימות של מערכת תכולה בלבלב האנדוקריני6. 11 C-5-HTP היה גם מעקב מבטיח לגילוי לא פולשני של איים קיימא בהשתלת איים תוך-פורטיים וסוג 2 סוכרת7,8. במהלך שני העשורים האחרונים, חומצות אמינו רבות עם תווית רדיו-בתים התקדמו לחקירה קלינית9,10. בפרט, אנלוגי טריפטופן פחמן-11 שכותרתו [11C]AMT קיבל תשומת לב נרחבת למיפוי סינתזת סרוטונין המוח11,12,13,14 ולוקליזציה של מוקדים אפילפטיים, גידולים אפילפטוגניים, קומפלקס טרשת טרשת פקעתית, גליומות וסרטן השד15,16,17,18,19,20 21,22,23,24,25,26. [11C] AMT יש גם ספיגה גבוהה בגידולים שונים ברמה נמוכה וגבוהה אצל ילדים27. יתר על כן, ניתוח מעקב קינטי של [11C]AMT בנבדקים אנושיים שימש כדי להבדיל ולדרג גידולים שונים ולהבדיל glioma מפגיעה ברקמה הנגרמת על ידי קרינה15. [11C] הדמיה מונחית AMT מראה יתרונות קליניים משמעותיים בהפרעות מוחיות3,25. עם זאת, בשל זמן מחצית החיים הקצר של פחמן-11 (20 דקות) והליכי הרדיוסינתזה המייגעת, [11C]AMT השימוש מוגבל למרכזי PET המעטים עם ציקלוטרון באתר ומתקן רדיוכימיה.
פלואור-18 יש מחצית חיים חיובית של 109.8 דקות, לעומת 20 דקות מחצית החיים של פחמן-11. יותר ויותר, המאמצים התמקדו בפיתוח של רדיוטריינרים פלואור-18 תווית עבור חילוף החומרים טריפטופן3,28. בסך הכל דווח על 15 רדיוטריקני טריפטופן ייחודיים פלואור-18 רדיוליטיים במונחים של רדיובלינג, מנגנוני תחבורה, אין ויטרו ויציבות ויוו, ייחוס ביולוגי וספיגת גידולים בקסנוגרפטים. עם זאת, מהיר ב vivo defluorination נצפתה עבור מספר עוקבים, כולל 4-, 5-, ו 6-[18F]פלואורוטריפופטופן, מניעת תרגום קליני נוסף29. 5-[18F]פלואורו-α-מתילטריפטופן (5-[18F]FAMT) ו-1-(2-[18F]פלואורואתיל)-L-טריפטופן (L-[18F]FETrp, הידוע גם בשם (S)-2-2-אמינו-3-(1-(2-[18F]פלואורואתיל)-1H-indol-3-yl)חומצה פרופנואית, משקל מולקולרי 249.28 גרם/שומה), הם שני הרדיוטרקטורים המבטיחים ביותר עם חיוביות בקינטיקה של ויוו במודלים של בעלי חיים ופוטנציאל גדול להתעלות על [111 C]AMT להערכת מצבים קליניים עם חילוף החומרים טריפטופן deregulated28. 5-[18F]FAMT הראה ספיגה גבוהה של קסנוגרפטים של גידול חיובי IDO1 של עכברים immunocompromised והוא ספציפי יותר להדמיית KP מאשר [11C]AMT28,30. עם זאת, יציבות in vivo של 5-[18F]FAMT נשאר דאגה פוטנציאלית כמו אין נתוני defluorination vivo דווחו מעבר 30 דקות לאחר הזרקה של tracer30.
מחקר פרה-קליני במודל עכבר medulloblastoma מהונדס גנטית הראה כי בהשוואה 18F-fluorodeoxyglucose (18F-FDG), L-[18F]FETrp היה הצטברות גבוהה בגידולים במוח, זניח ב vivo defluorination, וספיגת רקע נמוכה, מדגים יחס יעד-non-target מעולה31,32. מחקרים דו-מימיים של קרינה בעכברים הצביעו על כך של-L-[18F]FETrp הייתה חשיפה לדומימטריה חיובית נמוכה בכ-20% מזו של ה-18F-FDG PET( Tracer) הקלינית 18F-FDG PET33. בהסכמה עם ממצאים של חוקרים אחרים, נתוני מחקר פרה-קליניים מספקים ראיות משמעותיות התומכות בתרגום הקליני של L-[18F]FETrp לחקר חילוף חומרים טריפטופן חריג בבני אדם עם הפרעות מוחיות כגון אפילפסיה, נוירו-אונקולוגיה, אוטיזם וטרשת פקעתית28,31,32,33,34,35,36 . השוואה כוללת בין שלושת העוקבים הנחקרים ביותר עבור חילוף החומרים טריפטופן, 11C-5-HTP, [11C]AMT, ו L-[18F]FETrp, מוצג בטבלה 1. הן 11C-5-HTP ו [11C]AMT יש קצר מחצית חיים, הליכי radiolabeling מייגע. פרוטוקול עבור radiosynthesis של L-[18F]FETrp באמצעות סיר אחד, גישה דו-שלבית מתואר כאן. הפרוטוקול כולל את השימוש בכמות קטנה של מבשר radiolabeling, נפח קטן של ממסים תגובה, טעינה נמוכה של K222 רעיל, ושלב נייד שפיר להזרקה לסביבה לטיהור וניסוח קל.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>[18F]Fluoride in [18O]H2O</td>
			<td>PETNET Solutions Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4,7,13,16,21,24-hexaoxa-1,10-diazabicyclo[8.8.8]hexacosane</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>291950010</td>
			<td>Kryptofix 222 or K222, 98%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>222142500</td>
			<td>99.8%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>271004</td>
			<td>anhydrous, 99.8%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1260 HPLC system</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>Agilent 1260</td>
			<td>Agilent 1260 series</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytcial chiral HPLC column</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>12024AST</td>
			<td>Astec CHIROBIOTIC T, 25 cm &#215; 4.6 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide, 60 LBS</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>REFR744R200S</td>
			<td>99.99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-FETrp standard reference</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Empty sterile vial</td>
			<td>Jubilant HollisterStier</td>
			<td>7515</td>
			<td>20 mm closure, 10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>2716</td>
			<td>200 proof, USP grade. &#8805;99.9%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand 13 mm Syringe Filter, 0.22 &#181;m, PVDF, sterile</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-720-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30721</td>
			<td>&#8805;37%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>8316</td>
			<td>70%, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-[18F]FETrp radiolabeling precursor</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-FETrp standard reference</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light C8 cartridge</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT036770</td>
			<td>Sep-Pak&#160; C8 plus light cartridge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 20 G x 1</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 20 G x 1 &#189;</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 21 G x 2</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral aluminum oxide</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT023561</td>
			<td>Sep-Pak alumina N plus light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon membrane (0.20 &#181;m )</td>
			<td>MilliPore</td>
			<td>GNWP04700</td>
			<td>47 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pall Acrodisc 25 mm syringe sterile filter</td>
			<td>Pall Corporation</td>
			<td>4907</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PETCHEM radiochemistry synthesis system</td>
			<td>PETCHEM Solutions Inc. Pinckney, MI</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Radiosynthesizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH strips 2.0 - 9.0</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1.09584.0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium carbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>367877</td>
			<td>99.995%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quaternary methylammonium light cartridge</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186004051</td>
			<td>Sep-Pak QMA light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semi-preparative C18 HPLC column</td>
			<td>Phenomenex</td>
			<td>00D-4253-N0</td>
			<td>100 &#215; 10 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semi-preparative chiral HPLC column</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>12034AST</td>
			<td>Astec CHIROBIOTIC T, 25 cm &#215; 10 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride injection 23.4%</td>
			<td>APP Pharmaceutical, LLC</td>
			<td>18730</td>
			<td>USP grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloridei injection 0.9%</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NDC 0409-4888-10</td>
			<td>USP grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>306576</td>
			<td>99.99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinal needle, 20 G x 3 &#189;</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>405182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile alcohol prep pads</td>
			<td>BioMed Resource Inc.</td>
			<td>PC661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile empty vials, 2 mL</td>
			<td>Hollister Stier</td>
			<td>7505ZA</td>
			<td>13 mm closure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile empty vials, 30 mL</td>
			<td>Jubilant HollisterStier</td>
			<td>7520ZA</td>
			<td>20 mm closure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe PP/PE, 3 mL, Luer Lock</td>
			<td>Air-Tite</td>
			<td>4020-X00V0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe PP/PE, 5 mL, Luer Lock</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe,&#160; PP/PE, 10 mL, NORM-JECT</td>
			<td>Air-Tite</td>
			<td>4100-000V0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 1 mL, Luer Slip</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 3 mL, Luer-Lock</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra high purity argon</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>AR UHP300</td>
			<td>99.999%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>ZRQSVP300</td>
			<td>Direct-Q 3 tap to pure and ultrapure water purification system</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

radiosynthesis of 1-(2-[18f]fluoroethyl)-l-tryptophan using a one-pot, two-step protocol

מסלול kynurenine (KP) הוא מסלול עיקרי לחילוף חומרים טריפטופן. הראיות מצביעות בחום על כך שמטבוליטים של KP ממלאים תפקיד חיוני בהתפשטות הגידול, אפילפסיה, מחלות ניווניות ומחלות פסיכיאטריות בשל ההשפעות החיסוניות-מווסתות, הנוירו-אפנון והנוירטוקסיות שלהם. טומוגרפיה פליטת פוזיטרונים בשימוש הנרחב ביותר (PET) סוכן למיפוי חילוף החומרים טריפטופן, α-[11C]מתיל-L-טריפטופן ([11C]AMT), יש מחצית חיים קצרה של 20 דקות עם הליכי רדיוסינתזה מייגעים. ציקלוטרון באתר נדרש כדי לסנתז רדיו [11C]AMT. רק מספר מצומצם של מרכזים מייצרים [11C]AMT למחקרים פרה-קליניים ולחקירות קליניות. לפיכך, פיתוח של סוכן הדמיה חלופי שיש לו מחצית חיים ארוכה יותר, חיובית בקינטיקה vivo , וקל להפוך לאוטומטי יש צורך דחוף. התועלת והערך של 1-(2-[18F]פלואורואתיל)-L-טריפטופן, אנלוגי טריפטופן פלואור-18 עם תווית טריפטופן, דווח ביישומים פרה-קליניים בקסנוגרפטים שמקורם בקו התא, קסנוגרפטים שמקורם במטופל, ומודלים של גידול מהונדס.
מאמר זה מציג פרוטוקול עבור רדיוסינתזה של 1-(2-[18F]פלואורואתיל)-L-טריפטופן באמצעות סיר אחד, אסטרטגיה דו-שלבית. באמצעות פרוטוקול זה, radiotracer ניתן לייצר 20 ± 5% (ריקבון מתוקן בסוף הסינתזה, n > 20) תשואה רדיוכימית, עם טוהר רדיוכימי ועודף אננטיומרי של מעל 95%. הפרוטוקול כולל כמות מבשרת קטנה עם לא יותר מ 0.5 מ"ל של ממס תגובה בכל שלב, טעינה נמוכה של רעיל פוטנציאלי 4,7,13,16,21,24-hexaoxa-1,10-diazabicyclo[8.8.8]hexacosane (K222), ושלב נייד שפיר להזרקה לסביבה לטיהור. הפרוטוקול יכול להיות מוגדר בקלות לייצר 1-(2-[18F]פלואורואתיל)-L-טריפטופן לחקירה קלינית במודול זמין מסחרית.

ערכת התגובה מוצגת באיור 1. ה- radiolabeling כולל את שני השלבים הבאים: 1) תגובה של הקדמת ה- radiolabeling tosylate עם [18F]fluoride מספק את הביניים המסומן ב- 18F, ו - 2) דה-הגנה של קבוצות tert-butyloxycarbonyl ו- tert-butyl-להגן על הקבוצות המתווכות על בוטיל בטווח הביניים מעניקות את המוצר הסופי L-[18F]FE...

Watch this Scientific Journal Video about Radiosynthesis of 1-2-[18F]Fluoroethyl-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol at JoVE.com

Radiosynthesis of 1-2-[18F]Fluoroethyl-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol

כאן, אנו מתארים את radiosynthesis של 1-(2-[18F]Fluoroethyl)-L-טריפטופן, סוכן הדמיה טומוגרפיה פליטת פוזיטרונים לחקר חילוף החומרים טריפטופן, באמצעות סיר אחד, אסטרטגיה דו-שלבית במערכת סינתזה רדיוכימיה עם תשואות רדיוכימיות טובות, עודף אננטיומרי גבוה, ואמינות גבוהה.

רדיוסינתזה של 1-(2-[18F]פלואורואתיל)-L-טריפטופן באמצעות סיר אחד, פרוטוקול דו-שלבי

The kynurenine pathway (KP) is a primary route for tryptophan metabolism. Evidence strongly suggests that metabolites of the KP play a vital role in tumor ...

המטרה הכללית של פרוטוקול זה היא radiosynthesize F18 radiolabeled טריפטופן מעקב על ידי סיר אחד, גישה דו-שלבית. רדיוטראקר עשוי למצוא יישום נרחב עבור חילוף החומרים טריפטופן הדמיה. הטכניקה משתמשת ברדיואיזוטופ עם זמן מחצית חיים ארוך יותר, פחות הקדמת תגובה, ופחות נפח תגובה, ושלב שפיר לסביבה לטיהור.הרדיוטראקר עשוי לשמש לאבחון הפרעות שונות המשפיעות על המוח, כולל אך לא מוגבל לאפילפסיה, הפרעות נוירופסיכיאטריות ונוירו-אונקולוגיה. שיטה זו יכולה להיות מיושמת על מודולים אחרים הזמינים מסחרית radiolabeling. לאחר קבלת פתרון הפלואוריד F18, התחילו בסקר תיבת ההובלה על פני השטח, ובמרחק של מטר אחד, תיעדו את שיעורי החשיפה המרביים לקרינה.לאחר ביצוע בדיקת ניגוב כדי להבטיח את תיבת המשלוח אינו מזוהם, להקליט את המינון F18 פלואוריד וזמן. העבר את פתרון פלואוריד F18 למערכת סינתזת רדיוכימיה. חבר את קו הארגון עם מחט קצרה ואת קו ההעברה פלואוריד F18 עם מחט ארוכה לבקבוקון פלואוריד F18.לאחר מכן, סגור את דלת הזכוכית של התא החם ודלת העופרת. הפעל את קו האספקה של ארגון על-ידי לחיצה על ארגון אספקה. הגדל את לחץ הארגון והפעל את קו הדחיפה של פלואוריד F18 כדי לדחוף את פלואוריד F18 מימי דרך מחסנית האור QMA.לאחר שכל הרדיואקטיביות לכודה במחסנית האור QMA, וקריאה של גלאי הרדיואקטיביות יציבה, הגבר את לחץ הארגון ופוצץ ארגון דרך המחסנית למשך חמש דקות נוספות כדי להסיר עודפי מים. לאחר כיבוי קו הדחיפה פלואוריד F18, להקטין את לחץ הארגון לאפס ולהחליף את שסתום שתי עמדות שש יציאות מעמדת השמנת פלואוריד F18 למצב ההמלטה. פתח את בקבוקון התגובה, הפעל את מיקום MVP הקלט קו ארגון אחד, ולדחוף את פתרון K222 ואשלגן פחמתי למיקום MVP הקלט בקבוקון אחד דרך מחסנית האור QMA כדי לחמוק הרדיואקטיביות לתוך בקבוקון התגובה.החלף את מיקום ההמלטה פלואוריד F18 לתנוחת ההשמנה. לחץ על כפתור החום כדי לחמם את הכור ב 110 מעלות צלזיוס, להפעיל את הפלט MVP מיקום ארבע קו ארגון המתחבר לכור, ולאדות את הממס לתוך MVP הפלט עמדה ארבע בקבוקון. לחץ על כפתור Cool כדי לקרר את הכור לטמפרטורת החדר עם פחמן דו חמצני דחוס.כבה את הקו הגורף, החלף את מיקום ה- MVP של הקלט 1 למיקום 2, והוסף את האצטוניטריל נטול המים בבקבוקון 2. שניים מפעילים את הקו הגורף ואת התנור לפלואוריד F18 יבש אזאוטרופית ב 110 מעלות צלזיוס. ברגע שהכור מגיע לטמפרטורת החדר, כבו את הקו הגורף, החליפו את מיקום ה-MVP של הקלט 2 למיקום שלוש, והוסיפו את סימן ההיכר של ה-tosylate radiolabeling בבקבוקון 3.סגור את הכור וחום את תערובות התגובה ב 100 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות. כדי לאדות את ממס התגובה, ברגע שהכור מתקרר, להפעיל את הקו הגורף ולאדות את ממס התגובה ב 100 מעלות צלזיוס. ברגע שהכור מתקרר, כבה את הקו הגורף והעבר את מיקום ה-MVP של הקלט שלוש למיקום 4.כאשר מוסיפים את תערובת האצטוניטריile חומצה הידרוכלורית, לחמם את התגובה ב 100 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות כדי להסיר את ההגנה על tert-butyl ו tert-butyloxycarbonyl הגנה על קבוצות מבשר radiolabeling. כדי לנטרל את התגובה, כאשר הכור מגיע לטמפרטורת החדר, החלף את מיקום ה- MVP של הקלט ארבע למיקום חמש והוסף שני נתרן הידרוקסיד טוחן לתערובת התגובה וכבה את קו ארגון MVP הקלט. לאחר מכן, התחל להעביר את תערובת התגובה לקובץ הביניים על ידי לחיצה על לחצן F ב- MVP הפלט כדי להחליף את ה- MVP של הפלט ממצב האוורור ארבע למיקום חמש, ולאחר מכן על ידי לחיצה על לחצן F ב- MVP של הקלט כדי להחליף את ה- MVP של הקלט ממיקום חמש למיקום שש.לאחר הפעלת קו ארגון ה- MVP של הפלט, דחוף את תערובת התגובה דרך תחמוצת האלומיניום הניטרלית הערומה ומחסניות C8 לבקבוקון הביניים המותקן לפני לולאת הדגימה של HPLC. לשטיפת הכור, החליפו את מיקום ה-MVP של הפלט חמש למיקום שש, דחפו את פתרון השטיפה בבקבוקון של מיקום ה-MVP של היציאה שש דרך בקבוקון התגובה, המחסניות והבקבוקון הבינוני, ברציפות. לאחר מכן, התחל בטיהור התערובת על-ידי החלפת לולאת HPLC מעמדת הזרקה למיקום טעינה והפעלת קו ארגון ה- MVP של הקלט.כאשר התערובת נטענת ללולאת HPLC של חמישה מיליליטר, העבר את לחצן טען להזרקה, לחץ על הזרק HPLC כדי להפעיל את כרומטוגרמה של HPLC בקצב זרימה של שלושה מיליליטר לדקה ולאחר מכן לחץ על לחצן צג HPLC כדי לגשת לכרומטוגרמה של HPLC בזמן אמת. לחץ על לחצן MVP של הסחת דעת כדי להסיט את שבר HPLC היעד לעמודת C18 הקצרה כ- 12 דקות. לאחר שהרדיואקטיביות של היעד נאספה בעמודה C18, החלף את שסתום ההסחה הדו-מצבי בעל ארבע היציאות לתנוחת איסוף הפסולת, ושטוף את עמודת הכיראליות בקצב של ארבעה מיליליטרים לדקה למשך שש דקות כדי להסיר את enantiomer D F18 FETrp המשני וזיהומים אולטרה סגולים אחרים.לחץ על לחצן MVP של הסחת דעת כדי להסיט את שלב ה- HPLC למכשירים ניידים בחזרה למיקום ה- MVP של הניסוח אחד בשלושה מיליליטר לדקה. שים לב שהשלב הנייד עובר דרך העמודה כיראלית ועמודת C18 כדי לטהר את L-F18 FETrp שנשמר בעמודה C18. בערך 32 עד 34 דקות, לאסוף את שבר היעד לתוך מיקום MVP ניסוח שני בקבוקון.לאחר מכן לדחוף את MVP ניסוח מיקום שני פתרון בקבוקון דרך קו המסירה מסנן סטרילי לתוך בקבוקון המינון הסופי. בדוק את פעילות המינון הסופי ואת נפח לאחר הסרת המסנן הסטרילי. לשטוף את המערכת עם מים טהורים במיוחד ואחריו אתנול בקצב זרימה של ארבעה מיליליטר לדקה לפחות 15 דקות לכל שטיפה.כבה את משאבת HPLC ואת תיבת PLC, סגור את התוכנית, כבה את חברת התעופה הדחוסה, קו ארגון, קו דו תחמוצת הפחמן, ואת הכוח העיקרי של המודול. למשוך כ 0.1 מיליליטר של המנה הסופית לתוך 0.2 מיליליטר להוסיף של בקבוקון QC. הפעל את המדגם החם כפי שתוכנית הרצף החלקי מתוארת בכתב היד של הטקסט.נתח את נתוני QC על ידי חישוב הטוהר הכימי והרדיוכימי בערך עודף enantiomeric ופעילות טוחנות. לאחר קביעת ערך ה- pH, שחררו את המינון אם כל תוצאות הבדיקה עוברות את הטווח המקובל. הכרומטוגרמה הייצוגית של HPLC עבור QC מוצגת.הפסגות חסרות המשמעות בין נפח הריק ב 10 דקות של התוכנית זוהו בכרומטוגרמה הריקה. ההתייחסות הסטנדרטית ללא רדיוליבל L-פלואורואתיל-טריטופן הראתה את נוכחותו של איזומר יחיד מופרד היטב מן ההתייחסות הסטנדרטית של עמיתו D. המינון הסופי של L-F18 טריפטופן הראה טוהר כימי גבוה וטוהר רדיוכימי.בדיקת היציבות של המוצר הסופי בריכוז המינון הגבוה ביותר במשך עד שמונה שעות הראתה כי L-F18 טריפטופן היה יציב במונחים של טוהר כימי, טוהר רדיוכימי, עודף enantiomeric, וערך pH. הטוהר הכימי והרדיוכימי הגדול מ-95% הושגו באמצעות פרוטוקול זה. שתי עמודות משמשות לטיהור נותב.זכור לעבור לעמודה C18 כדי להסיר את זיהומים כימיים. אנו יכולים להתאים במהירות שיטה זו לייצור קליני של רדיוטרייקר טריפטופן פלואור-18 תווית.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Radiosynthesis of 1-(2-[18F]Fluoroethyl)-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol

A Simple and Rapid Protocol for Measuring Neutral Lipids in Algal Cells Using Fluorescence

פשוט ומהיר פרוטוקול למדידת שומנים ניטרלי בתאי אצות באמצעות הקרינה

Algae are considered excellent candidates for renewable fuel sources due to their natural lipid storage capabilities. Robust monitoring of algal ...

The Bioconjugation and Radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled Antibodies

The Bioconjugation and Radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled Antibodies

Bioconjugation וRadiosynthesis של<sup&gt; 89</sup&gt; נוגדנים שכותרתו ZR-DFO

The exceptional affinity, specificity, and selectivity of antibodies make them extraordinarily attractive vectors for tumor-targeted PET ...

A Protocol for the Production of Gliadin-cyanoacrylate Nanoparticles for Hydrophilic Coating

פרוטוקול עבור ההפקה של חלקיקי גליאדין-cyanoacrylate לציפוי הידרופיליות

This article presents a protocol for the production of protein-based nanoparticles that changes the hydrophobic surface to hydrophilic by a simple spray ...

A Protocol for Safe Lithiation Reactions Using Organolithium Reagents

פרוטוקול תגובות בטוח Lithiation באמצעות ריאגנטים Organolithium

Organolithium reagents are powerful tools in the synthetic chemist&#39;s toolbox. However, the extreme pyrophoric nature of the most reactive reagents ...

An Optimized Protocol for the Efficient Radiolabeling of Gold Nanoparticles by Using a 125I-labeled Azide Prosthetic Group

An Optimized Protocol for the Efficient Radiolabeling of Gold Nanoparticles by Using a 125I-labeled Azide Prosthetic Group

פרוטוקול אופטימיזציה עבור Radiolabeling היעיל של חלקיקי זהב על ידי שימוש<sup&gt; 125</sup&gt; שכותרתו לי אזיד תותבת קבוצה

Here, we demonstrate a detailed protocol for the radiosynthesis of a 125I-labeled azide prosthetic group and its application to the efficient ...

A Protocol for Electrochemical Evaluations and State of Charge Diagnostics of a Symmetric Organic Redox Flow Battery

פרוטוקול הערכות אלקטרוכימיות ומדינת האבחון הממונה על סוללת חמזור תזרים אורגנית סימטרי

Redox flow batteries have been considered as one of the most promising stationary energy storage solutions for improving the reliability of the power grid ...

One-pot Microwave-assisted Conversion of Anomeric Nitrate-esters to Trichloroacetimidates

סיר אחד בסיוע מיקרוגל ההמרה של חנקת Anomeric-אסטרים Trichloroacetimidates

The goal of the following procedure is to provide a demonstration of the one-pot conversion of a 2-azido-1-nitrate-ester to a trichloroacetimidate ...

The MPLEx Protocol for Multi-omic Analyses of Soil Samples

פרוטוקול MPLEx עבור ניתוחים מולטי-omic של דגימות אדמה

Mass spectrometry (MS)-based integrated metaproteomic, metabolomic, and lipidomic (multi-omic) studies are transforming our ability to understand and ...

Separation of Aldehydes and Reactive Ketones from Mixtures Using a Bisulfite Extraction Protocol

פרידה של Aldehydes, קטונים תגובתי תערובות באמצעות פרוטוקול החילוץ ביסולפאט

The purification of organic compounds is an essential component of routine synthetic operations. The ability to remove contaminants into an aqueous layer ...

A Two-Step Protocol for Umpolung Functionalization of Ketones Via Enolonium Species

פרוטוקול דו-שלבי עבור Umpolung Functionalization של קטונים ויה Enolonium מינים

&#945;-Functionalization of ketones via umpolung of enolates by hypervalent iodine reagents is an important concept in synthetic organic chemistry. ...