Name: radiosynthesis of 1-(2-[18f]fluoroethyl)-l-tryptophan using a one-pot, two-step protocol
Uploaded: 2021-09-21T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Radiosynthesis of 1-2-[18F]Fluoroethyl-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol at JoVE.com

Questo lavoro è stato supportato dal Diagnostic & Research PET/MRI Center e dai Dipartimenti di Ricerca Biomedica e Radiologia del Nemours/Alfred I. duPont Hospital for Children.

ATTENZIONE: Il protocollo coinvolge materiali radioattivi. Qualsiasi dose aggiuntiva di materiali radioattivi potrebbe portare ad un aumento proporzionale della possibilità di effetti avversi sulla salute come il cancro. I ricercatori devono seguire le pratiche di dose "il più basso ragionevolmente ottenibile" (ALARA) per guidare il protocollo di radiosintesi con un'adeguata protezione nella cella calda o nel cappuccio di piombo. Ridurre al minimo il tempo di contatto diretto, utilizzare uno scudo di piombo e mantenere...

Il triptofano è un aminoacido essenziale per l'uomo. Svolge un ruolo importante nella regolazione dell'umore, della funzione cognitiva e del comportamento. I derivati del triptofano radiomarcati, in particolare il carbon-11-labeled [11C]AMT, sono stati ampiamente studiati grazie al loro ruolo unico nella mappatura della sintesi della serotonina38,39, nel rilevamento e nella classificazione dei tumori40, nella guida della chirur...

Nell'uomo, il triptofano è un componente essenziale della dieta quotidiana. Il triptofano viene metabolizzato principalmente attraverso la via della chinurenina (KP). Il KP è catalizzato da due enzimi limitanti la velocità, indoleamina 2, 3-diossigenasi (IDO) e triptofano 2, 3-diossigenasi (TDO). Più del 95% del triptofano viene convertito in chinurenina e nei suoi metaboliti a valle, generando in definitiva nicotinamide adenina dinucleotide, che è essenziale per la trasduzione dell'energia cellulare. Il KP è un regolatore chiave del sistema immunitario e un importante regolatore della neuroplasticità e degli effetti neurotossici1,2. Il metabolismo anormale del triptofano è implicato in vari disturbi neurologici, oncologici, psichiatrici e metabolici; pertanto, gli analoghi del triptofano radiomarcati sono stati ampiamente utilizzati nelle indagini cliniche. I due radiotraccianti di triptofano clinicamente studiati più comuni sono 11C-α-metil-L-triptofano ([11C]AMT) e 11C-5-idrossitriptofano (11C-5-HTP)3.
Nel 1990, 11C-5-HTP è stato utilizzato per visualizzare i tumori neuroendocrini secernenti serotonina4 e per diagnosticare e monitorare la terapia dell'adenocarcinoma prostatico refrattario all'ormone metastatico5. Successivamente, è stato utilizzato come strumento di imaging per la quantificazione del sistema serotoninergico nel pancreas endocrino6. 11 anni C-5-HTP è stato anche un tracciante promettente per il rilevamento non invasivo di isole vitali nel trapianto di isole intraportali e diabete di tipo 27,8. Negli ultimi due decenni, molti amminoacidi radiomarcati sono passati all'indagine clinica9,10. In particolare, l'analogo del triptofano marcato con carbonio-11 [11C]AMT ha ricevuto ampia attenzione per la mappatura della sintesi della serotonina cerebrale11,12,13,14 e per la localizzazione di focolai epilettici, tumori epilettogeni, complesso di sclerosi tuberosa, gliomi e tumori al seno15,16,17,18,19,20 ,21,22,23,24,25,26. [11C] L'AMT ha anche un elevato assorbimento in vari tumori di basso e alto grado nei bambini27. Inoltre, l'analisi cinetica del tracciante di [11C]AMT in soggetti umani è stata utilizzata per differenziare e classificare vari tumori e differenziare il glioma dal danno tissutale indotto dalle radiazioni15. [11C] L'imaging guidato da AMT mostra significativi benefici clinici nei disturbi cerebrali3,25. Tuttavia, a causa della breve emivita del carbonio-11 (20 min) e delle laboriose procedure di radiosintesi, l'uso di [11C]AMT è limitato ai pochi centri PET con un ciclotrone in loco e una struttura di radiochimica.
Fluorine-18 ha un'emivita favorevole di 109,8 min, rispetto all'emivita di 20 min del carbonio-11. Sempre più spesso, gli sforzi si sono concentrati sullo sviluppo di radiotraccianti marcati con fluoro-18 per il metabolismo del triptofano3,28. Un totale di 15 unici radiotraccianti di triptofano con fluoro-18 sono stati riportati in termini di radioetichettatura, meccanismi di trasporto, stabilità in vitro e in vivo, biodistribuzione e assorbimento tumorale negli xenotrapianti. Tuttavia, è stata osservata una rapida defluorurazione in vivo per diversi traccianti, tra cui 4-, 5-, e 6-[18F]fluorotriptofano, precludendo un'ulteriore traduzione clinica29. 5-[18F]Fluoro-α-metiltriptofano (5-[18F]FAMT) e 1-(2-[18F]fluoroetil)-L-triptofano (L-[18F]FETrp, noto anche come acido (S)-2-ammino-3-(1-(2-[18F]fluoroetil)-1H-indol-3-il)propanoico, peso molecolare 249,28 g/mole), sono i due radiotraccianti più promettenti con cinetica in vivo favorevole nei modelli animali e grande potenziale di superamento [11 C]AMT per la valutazione delle condizioni cliniche con metabolismo del triptofano deregolato28. 5-[18F]FAMT ha mostrato un elevato assorbimento negli xenotrapianti tumorali IDO1-positivi di topi immunocompromessi ed è più specifico per l'imaging del KP rispetto a [11C]AMT28,30. Tuttavia, la stabilità in vivo di 5-[18F]FAMT rimane una potenziale preoccupazione in quanto non sono stati riportati dati di defluorurazione in vivo oltre 30 minuti dopo l'iniezione del tracer30.
Uno studio preclinico in un modello murino di medulloblastoma geneticamente modificato ha mostrato che, rispetto al 18F-fluorodesossiglucosio (18F-FDG), L-[18F]FETrp aveva un elevato accumulo nei tumori cerebrali, una defluorizzazione in vivo trascurabile e un basso assorbimento di fondo, dimostrando un rapporto target-non target superiore31,32. Gli studi di dosimetria delle radiazioni nei topi hanno indicato che L-[18F]FETrp aveva un'esposizione dosimetrica favorevole inferiore di circa il 20% rispetto al tracciante clinico 18F-FDG PET33. In accordo con le scoperte di altri ricercatori, i dati degli studi preclinici forniscono prove sostanziali a sostegno della traduzione clinica di L-[18F]FETrp per lo studio del metabolismo anormale del triptofano negli esseri umani con disturbi cerebrali come epilessia, neuro-oncologia, autismo e sclerosi tuberosa28,31,32,33,34,35,36 . Un confronto complessivo tra i tre traccianti più ampiamente studiati per il metabolismo del triptofano, 11C-5-HTP, [11C]AMT e L-[18F]FETrp, è mostrato nella Tabella 1. Sia 11C-5-HTP e [11C]AMT hanno una breve emivita e laboriose procedure di radioelabazione. Un protocollo per la radiosintesi di L-[18F]FETrp utilizzando un approccio one-pot, two-step è descritto qui. Il protocollo prevede l'uso di una piccola quantità di precursore di radioetichettatura, un piccolo volume di solventi di reazione, un basso carico di K222 tossico e una fase mobile ecologicamente benigna e iniettabile per la purificazione e la facile formulazione.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>[18F]Fluoride in [18O]H2O</td>
			<td>PETNET Solutions Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4,7,13,16,21,24-hexaoxa-1,10-diazabicyclo[8.8.8]hexacosane</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>291950010</td>
			<td>Kryptofix 222 or K222, 98%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>222142500</td>
			<td>99.8%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>271004</td>
			<td>anhydrous, 99.8%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1260 HPLC system</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>Agilent 1260</td>
			<td>Agilent 1260 series</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytcial chiral HPLC column</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>12024AST</td>
			<td>Astec CHIROBIOTIC T, 25 cm &#215; 4.6 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide, 60 LBS</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>REFR744R200S</td>
			<td>99.99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-FETrp standard reference</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Empty sterile vial</td>
			<td>Jubilant HollisterStier</td>
			<td>7515</td>
			<td>20 mm closure, 10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>2716</td>
			<td>200 proof, USP grade. &#8805;99.9%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand 13 mm Syringe Filter, 0.22 &#181;m, PVDF, sterile</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-720-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30721</td>
			<td>&#8805;37%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>8316</td>
			<td>70%, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-[18F]FETrp radiolabeling precursor</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-FETrp standard reference</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light C8 cartridge</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT036770</td>
			<td>Sep-Pak&#160; C8 plus light cartridge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 20 G x 1</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 20 G x 1 &#189;</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 21 G x 2</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral aluminum oxide</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT023561</td>
			<td>Sep-Pak alumina N plus light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon membrane (0.20 &#181;m )</td>
			<td>MilliPore</td>
			<td>GNWP04700</td>
			<td>47 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pall Acrodisc 25 mm syringe sterile filter</td>
			<td>Pall Corporation</td>
			<td>4907</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PETCHEM radiochemistry synthesis system</td>
			<td>PETCHEM Solutions Inc. Pinckney, MI</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Radiosynthesizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH strips 2.0 - 9.0</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1.09584.0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium carbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>367877</td>
			<td>99.995%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quaternary methylammonium light cartridge</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186004051</td>
			<td>Sep-Pak QMA light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semi-preparative C18 HPLC column</td>
			<td>Phenomenex</td>
			<td>00D-4253-N0</td>
			<td>100 &#215; 10 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semi-preparative chiral HPLC column</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>12034AST</td>
			<td>Astec CHIROBIOTIC T, 25 cm &#215; 10 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride injection 23.4%</td>
			<td>APP Pharmaceutical, LLC</td>
			<td>18730</td>
			<td>USP grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloridei injection 0.9%</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NDC 0409-4888-10</td>
			<td>USP grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>306576</td>
			<td>99.99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinal needle, 20 G x 3 &#189;</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>405182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile alcohol prep pads</td>
			<td>BioMed Resource Inc.</td>
			<td>PC661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile empty vials, 2 mL</td>
			<td>Hollister Stier</td>
			<td>7505ZA</td>
			<td>13 mm closure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile empty vials, 30 mL</td>
			<td>Jubilant HollisterStier</td>
			<td>7520ZA</td>
			<td>20 mm closure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe PP/PE, 3 mL, Luer Lock</td>
			<td>Air-Tite</td>
			<td>4020-X00V0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe PP/PE, 5 mL, Luer Lock</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe,&#160; PP/PE, 10 mL, NORM-JECT</td>
			<td>Air-Tite</td>
			<td>4100-000V0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 1 mL, Luer Slip</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 3 mL, Luer-Lock</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra high purity argon</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>AR UHP300</td>
			<td>99.999%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>ZRQSVP300</td>
			<td>Direct-Q 3 tap to pure and ultrapure water purification system</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

radiosynthesis of 1-(2-[18f]fluoroethyl)-l-tryptophan using a one-pot, two-step protocol

La via della chinurenina (KP) è una via primaria per il metabolismo del triptofano. L'evidenza suggerisce fortemente che i metaboliti del KP svolgono un ruolo vitale nella proliferazione tumorale, nell'epilessia, nelle malattie neurodegenerative e nelle malattie psichiatriche a causa dei loro effetti immunomodulatori, neuromodulatori e neurotossici. L'agente più ampiamente utilizzato per la tomografia ad emissione di positroni (PET) per la mappatura del metabolismo del triptofano, α-[11C]metil-L-triptofano ([11C]AMT), ha una breve emivita di 20 minuti con laboriose procedure di radiosintesi. È necessario un ciclotrone in loco per radiosintetizzare [11C]AMT. Solo un numero limitato di centri produce [11C]AMT per studi preclinici e indagini cliniche. Quindi, è urgentemente necessario lo sviluppo di un agente di imaging alternativo che abbia un'emivita più lunga, una cinetica in vivo favorevole ed è facile da automatizzare. L'utilità e il valore di 1-(2-[18F]fluoroetil)-L-triptofano, un analogo del triptofano marcato con fluoro-18, è stato riportato in applicazioni precliniche in xenotrapianti derivati dalla linea cellulare, xenotrapianti derivati dal paziente e modelli tumorali transgenici.
Questo documento presenta un protocollo per la radiosintesi di 1-(2-[18F]fluoroetil)-L-triptofano utilizzando una strategia one-pot, two-step. Utilizzando questo protocollo, il radiotracciante può essere prodotto in una resa radiochimica del 20 ± 5% (decadimento corretto al termine della sintesi, n > 20), con purezza radiochimica ed eccesso enantiomerico di oltre il 95%. Il protocollo presenta una piccola quantità di precursore con non più di 0,5 mL di solvente di reazione in ogni fase, un basso carico di 4,7,13,16,21,24-esaooxa-1,10-diazabiciclo potenzialmente tossico[8.8.8]esacosano (K222) e una fase mobile ecologicamente benigna e iniettabile per la purificazione. Il protocollo può essere facilmente configurato per produrre 1-(2-[18F]fluoroetil)-L-triptofano per l'indagine clinica in un modulo disponibile in commercio.

Lo schema di reazione è mostrato nella Figura 1. La radioetichettatura comprende le seguenti due fasi: 1) la reazione del precursore della radioetichettatura tosilato con il fluoruro [18F] fornisce l'intermedio marcato 18F e 2) la deprotezione dei gruppi terz-butilossicarbonile e terz-butil-protettivo nell'intermedio offre il prodotto finale L-[18F]FETrp. Entrambe le fasi di reazione continuano a 100 °C per 10 minuti.
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Radiosynthesis of 1-2-[18F]Fluoroethyl-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol

Qui, descriviamo la radiosintesi di 1-(2-[18F]Fluoroetil)-L-triptofano, un agente di imaging tomografico ad emissione di positroni per studiare il metabolismo del triptofano, utilizzando una strategia one-pot, in due fasi in un sistema di sintesi radiochimica con buone rese radiochimiche, alto eccesso enantiomerico e alta affidabilità.

Radiosintesi di 1-(2-[18F]Fluoroetil)-L-triptofano utilizzando un protocollo One-pot, Two-step

The kynurenine pathway (KP) is a primary route for tryptophan metabolism. Evidence strongly suggests that metabolites of the KP play a vital role in tumor ...

L'obiettivo generale di questo protocollo è quello di radiosintetizzare un tracciante di triptofano radiomarcato F18 con un approccio one-pot, two-step. Il radiotracciante può trovare un'applicazione diffusa per l'imaging del metabolismo del triptofano. La tecnica utilizza il radioisotopo con un'emivita più lunga, meno precursore di reazione e meno volume di reazione e una fase ecologicamente benigna per la purificazione.Il radiotracciante può essere utilizzato per la diagnosi di vari disturbi che colpiscono il cervello, tra cui, ma non solo, epilessia, disturbi neuropsichiatrici e neuro-oncologia. Questo metodo può essere applicato ad altri moduli di radioetichettatura disponibili in commercio. Una volta ricevuta la soluzione di fluoro F18, iniziare esaminando la scatola di piombo sulla superficie e, dalla distanza di un metro, registrare i tassi massimi di esposizione alle radiazioni.Dopo aver eseguito un test di pulizia per garantire che la scatola di spedizione non sia contaminata, registrare la dose e il tempo di fluoro F18. Trasferire la soluzione di fluoruro F18 al sistema di sintesi radiochimica. Collegare la linea di argon con un ago corto e la linea di trasferimento del fluoro F18 con un ago lungo al flaconcino di fluoruro F18.Quindi, chiudere la porta di vetro a celle calde e la porta di piombo. Attivare la linea di alimentazione dell'argon facendo clic su Argon Supply. Aumentare la pressione dell'argon e attivare la linea di spinta del fluoruro F18 per spingere il fluoruro F18 acquoso attraverso la cartuccia luminosa QMA.Una volta che tutta la radioattività è intrappolata nella cartuccia luminosa QMA e la lettura del rilevatore di radioattività è costante, aumentare la pressione dell'argon e soffiare l'argon attraverso la cartuccia per altri cinque minuti per rimuovere l'acqua in eccesso. Dopo aver spento la linea di spinta del fluoruro F18, ridurre la pressione dell'argon a zero e commutare la valvola a due posizioni a sei porte dalla posizione di intrappolamento del fluoruro F18 alla posizione di eluizione. Aprire il flaconcino di reazione, accendere la posizione MVP di ingresso una linea di argon e spingere la soluzione di K222 e carbonato di potassio nella posizione MVP di ingresso una fiala attraverso la cartuccia luminosa QMA per eluire la radioattività nel flaconcino di reazione.Impostare la posizione di eluizione del fluoruro F18 sulla posizione di intrappolamento. Fare clic sul pulsante Calore per riscaldare il reattore a 110 gradi Celsius, attivare la linea di argon in posizione MVP di uscita che si collega al reattore ed evaporare il solvente nella posizione MVP di uscita quattro fiale. Fare clic sul pulsante Freddo per raffreddare il reattore a temperatura ambiente con anidride carbonica compressa.Spegnere la linea di spazzamento, cambiare la posizione MVP di ingresso da uno a posizione due e aggiungere l'acetonitrile anidro nel flaconcino due. Due giri sulla linea di spazzamento e riscaldamento per asciugare azeotropicamente il fluoro F18 a 110 gradi Celsius. Una volta che il reattore raggiunge la temperatura ambiente, spegnere la linea di spazzamento, cambiare la posizione MVP di ingresso due in posizione tre e aggiungere il precursore di radioetichettatura tosilato nel flaconcino tre.Chiudere il reattore e riscaldare le miscele di reazione a 100 gradi Celsius per 10 minuti. Per evaporare il solvente di reazione, una volta che il reattore si raffredda, accendere la linea di spazzamento ed evaporare il solvente di reazione a 100 gradi Celsius. Una volta che il reattore si raffredda, spegnere la linea di spazzamento e cambiare la posizione MVP di ingresso tre in posizione quattro.Quando viene aggiunta la miscela di acetonitrile di acido cloridrico, riscaldare la reazione a 100 gradi Celsius per 10 minuti per deproteggere i gruppi protettivi terz-butile e terz-butilossicarbonile nel precursore della radioetichettatura. Per neutralizzare la reazione, quando il reattore raggiunge la temperatura ambiente, cambiare la posizione MVP di ingresso quattro in posizione cinque e aggiungere due idrossido di sodio molare alla miscela di reazione e spegnere la linea di argon MVP in ingresso. Quindi, iniziare a trasferire la miscela di reazione al file intermedio facendo clic sul pulsante F nell'MVP di uscita per passare l'MVP di uscita dalla posizione di sfiato quattro alla posizione cinque, quindi facendo clic sul pulsante F nell'MVP di ingresso per passare l'MVP di ingresso dalla posizione cinque alla posizione sei.Dopo aver acceso la linea di argon MVP in uscita, spingere la miscela di reazione attraverso le cartucce di ossido di alluminio neutro e C8 impilate fino al flaconcino intermedio installato prima del ciclo di campionamento HPLC. Per il risciacquo del reattore, commutare la posizione MVP di uscita cinque alla posizione sei, spingere la soluzione di risciacquo nel flaconcino della posizione MVP di uscita sei attraverso il flaconcino di reazione, le cartucce e il flaconcino intermedio, successivamente. Quindi, iniziare la purificazione della miscela commutando il loop HPLC dalla posizione di iniezione alla posizione di carico e accendendo la linea di argon MVP in ingresso.Quando la miscela viene caricata nel loop HPLC da cinque millilitri, impostare il pulsante Carica su Inietta, fare clic su Inietta HPLC per avviare il cromatogramma HPLC a una portata di tre millilitri al minuto, quindi fare clic sul pulsante Monitor HPLC per accedere al cromatogramma HPLC in tempo reale. Fare clic sul pulsante MVP di deviazione per deviare la frazione HPLC di destinazione sulla colonna C18 corta a circa 12 minuti. Dopo aver raccolto la radioattività target nella colonna C18, commutare la valvola di deviazione a due posizioni a quattro porte nella posizione di raccolta dei rifiuti e lavare la colonna chirale alla velocità di quattro millilitri al minuto per sei minuti per rimuovere l'enantiomero minore D F18 FETrp e altre impurità ultraviolette.Fare clic sul pulsante MVP di deviazione per deviare la fase mobile HPLC alla posizione MVP della formulazione uno a tre millilitri al minuto. Osservare che la fase mobile passa attraverso la colonna chirale e la colonna C18 per purificare L-F18 FETrp trattenuto nella colonna C18. A circa 32-34 minuti, raccogliere la frazione target nella formulazione MVP posizione due flaconcino.Quindi spingere la formulazione MVP posizione due flaconcino attraverso la linea di erogazione e il filtro sterile nel flaconcino della dose finale. Esaminare l'attività e il volume della dose finale dopo aver rimosso il filtro sterile. Lavare il sistema con acqua ultra pura seguita da etanolo a una portata di quattro millilitri al minuto per almeno 15 minuti per lavaggio.Spegnere la pompa HPLC e la scatola PLC, chiudere il programma, spegnere la compagnia aerea compressa, la linea di argon, la linea di anidride carbonica e l'alimentazione principale del modulo. Prelevare circa 0,1 millilitri della dose finale in un inserto da 0,2 millilitri di un flaconcino qc. Eseguire l'esempio a caldo come il programma di sequenza parziale è descritto nel manoscritto di testo.Analizzare i dati QC calcolando le purezze chimiche e radiochimiche in eccesso di valore enantiomerico e attività molare. Dopo aver determinato il valore del pH, rilasciare la dose se tutti i risultati dei test superano l'intervallo accettabile. Vengono mostrati i cromatogrammi HPLC rappresentativi per QC.I picchi insignificanti tra il volume del vuoto in 10 minuti del programma sono stati rilevati nel cromatogramma vuoto. Il riferimento standard non radiomarcato L-fluoroetil-triptofano ha mostrato la presenza di un singolo isomero ben separato dal riferimento standard della sua controparte D. La dose finale di triptofano L-F18 ha mostrato un'elevata purezza chimica e purezza radiochimica.I test di stabilità del prodotto finale alla massima concentrazione di dose per un massimo di otto ore hanno mostrato che il triptofano L-F18 era stabile in termini di purezza chimica, purezza radiochimica, eccesso enantiomerico e valore del pH. Le purezze chimiche e radiochimiche superiori al 95% sono state raggiunte utilizzando questo protocollo. Due colonne sono utilizzate per la purificazione del tracciante.Ricordarsi di passare alla colonna C18 per rimuovere le impurità chimiche. Possiamo adattare rapidamente questo metodo alla produzione clinica del radiotracciante triptofano marcato con fluoro-18.

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The purification of organic compounds is an essential component of routine synthetic operations. The ability to remove contaminants into an aqueous layer ...

A Two-Step Protocol for Umpolung Functionalization of Ketones Via Enolonium Species

Un protocollo in due fasi per Umpolung funzionalizzazione di chetoni Via Enolonium le specie

&#945;-Functionalization of ketones via umpolung of enolates by hypervalent iodine reagents is an important concept in synthetic organic chemistry. ...