Name: radiosynthesis of 1-(2-[18f]fluoroethyl)-l-tryptophan using a one-pot, two-step protocol
Uploaded: 2021-09-21T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Radiosynthesis of 1-2-[18F]Fluoroethyl-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av Diagnostic &Research PET/MRI Center, og av Institutt for biomedisinsk forskning og radiologi ved Nemours/Alfred I. duPont Hospital for Children.

FORSIKTIG: Protokollen involverer radioaktive materialer. Enhver ekstra dose radioaktive materialer kan føre til en proporsjonal økning i sjansen for negative helseeffekter som kreft. Forskere må følge dosepraksisen "så lavt som rimelig oppnåelig" (ALARA) for å veilede radiosynteseprotokollen med tilstrekkelig beskyttelse i varmecellen eller blyhetten. Det er viktig å minimere direkte kontakttid, bruke et blyskjold og holde maksimal avstand for strålingseksponeringstrinn i radiosynteseprosessen. Bruk et strålin...

Tryptofan er en essensiell aminosyre for mennesker. Det spiller en viktig rolle i reguleringen av humør, kognitiv funksjon og oppførsel. Radiomerkede tryptofanderivater, spesielt karbon-11-merket [11C]AMT, har blitt grundig studert på grunn av deres unike rolle i kartlegging av serotoninsyntese38,39, detektering og gradering av svulster40, guiding epilepsikirurgi41,42, og evaluering av behandlingsrespons i</...

Hos mennesker er tryptofan en viktig komponent i det daglige kostholdet. Tryptofan metaboliseres primært via kynureninbanen (KP). KP er katalysert av to hastighetsbegrensende enzymer, indoleamin 2, 3-dioksygenase (IDO) og tryptofan 2, 3-dioksygenase (TDO). Mer enn 95% av tryptofan konverteres til kynurenin og dens nedstrøms metabolitter, og til slutt genererer nikotinamid adenin dinucleotide, som er avgjørende for cellulær energitransduksjon. KP er en sentral regulator av immunsystemet og en viktig regulator av nevroplastisitet og nevrotoksiske effekter1,2. Unormal tryptofan metabolisme er involvert i ulike nevrologiske, onkologiske, psykiatriske og metabolske forstyrrelser; Derfor har radiomerkede tryptofananaloger blitt mye brukt i klinisk undersøkelse. De to vanligste klinisk undersøkte tryptofan radiotracers er 11C-α-metyl-L-tryptofan ([11C]AMT) og 11C-5-hydroxytryptophan (11C-5-HTP)3.
På 1990-tallet ble 11C-5-HTP brukt til å visualisere serotonin-utskillende nevroendokrine svulster4 og for å diagnostisere og overvåke terapi av metastatisk hormon-refraktær prostata adenokarsinom5. Senere ble det brukt som et bildeverktøy for kvantifisering av det serotonergiske systemet i den endokrine bukspyttkjertelen6. 11 C-5-HTP har også vært en lovende sporstoff for ikke-invasiv påvisning av levedyktige holmer i intraportal holmetransplantasjon og type 2 diabetes7,8. I løpet av de siste to tiårene har mange radiomerkede aminosyrer gått videre til klinisk undersøkelse9,10. Spesielt har den karbon-11-merkede tryptofan-analogen [11C]AMT fått omfattende oppmerksomhet for kartlegging av hjernens serotoninsyntese11,12,13,14 og for lokalisering av epileptisk foci, epileptogene svulster, tuberøs sklerosekompleks, gliomer og brystkreft15,16,17,18,19,19,19 ,21,22,23,24,25,26. [11C] AMT har også høyt opptak i ulike lav- og høyverdige svulster hos barn27. Videre har kinetisk traceranalyse av [11C]AMT hos mennesker blitt brukt til å differensiere og gradere ulike svulster og skille glioma fra strålingsindusert vevsskade15. [11C] AMT-veiledet avbildning viser betydelige kliniske fordeler ved hjernesykdommer3,25. På grunn av den korte halveringstiden til karbon-11 (20 min) og de arbeidskrevende radiosynteseprosedyrene, er [11C]AMT-bruk begrenset til de få PET-sentrene med et syklotron- og radiokjemianlegg på stedet.
Fluor-18 har en gunstig halveringstid på 109,8 min, sammenlignet med 20 min halveringstid på karbon-11. I økende grad har det vært fokusert innsats på utvikling av fluor-18-merkede radiotracers for tryptofan metabolisme3,28. Totalt 15 unike fluor-18 radiomerkede tryptofan radiotracers har blitt rapportert når det gjelder radiomerking, transportmekanismer, in vitro og in vivo stabilitet, biodistribusjon og tumoropptak i xenografts. Imidlertid ble rask in vivo-defluorinasjon observert for flere sporstoffer, inkludert 4-, 5- og 6-[18F]fluorotryptofan, som utelukker ytterligere klinisk oversettelse29. 5-[18F]Fluor-α-metyltryptofan (5-[18F]FAMT) og 1-(2-[18F]fluoroetyl)-L-tryptofan (L-[18F]FETrp, også kjent som (S)-2-amino-3-(1-(2-[18F]fluoroethyl)-1H-indol-3-yl)propanoinsyre, molekylvekt 249,28 g/mole), er de to mest lovende radiotracers med gunstig in vivo kinetikk i dyremodeller og stort potensial til å overgå [11 C]AMT for evaluering av kliniske tilstander med deregulert tryptofan metabolisme28. 5-[18F]FAMT viste høyt opptak i IDO1-positive tumor xenografter av immunkompromitterte mus og er mer spesifikk for avbildning av KP enn [11C]AMT28,30. In vivo-stabiliteten til 5-[18F]FAMT er imidlertid fortsatt en potensiell bekymring ettersom ingen in vivo-defluoreringsdata er rapportert utover 30 min etter injeksjon av tracer30.
En preklinisk studie i en genmodifisert medulloblastommusmodell viste at sammenlignet med 18F-fluorodeoksyglucose (18F-FDG), L-[18F]FETrp hadde høy akkumulering i hjernesvulster, ubetydelig in vivo-defluornasjon og lavt bakgrunnsopptak, noe som viste et overlegent mål-til-ikke-mål-forhold31,32. Strålingsdosimetristudier hos mus indikerte at L-[18F]FETrp hadde en omtrent 20% lavere gunstig dosimetrieksponering enn den kliniske 18F-FDG PET tracer33. I samsvar med andre forskeres funn gir prekliniske studiedata betydelige bevis for å støtte den kliniske oversettelsen av L-[18F]FETrp for undersøkelse av unormal tryptofan metabolisme hos mennesker med hjernesykdommer som epilepsi, nevro-onkologi, autisme og tuberøs sklerose28,31,32,33,34,35,36 . En samlet sammenligning mellom de tre mest undersøkte sporstoffene for tryptofanmetabolisme, 11C-5-HTP, [11C]AMT og L-[18F]FETrp, er vist i tabell 1. Både 11C-5-HTP og [11C]AMT har en kort halveringstid og arbeidskrevende radiomerkingsprosedyrer. En protokoll for radiosyntesen til L-[18F]FETrp ved hjelp av en en-pott, to-trinns tilnærming er beskrevet her. Protokollen har bruk av en liten mengde radiomerkingsforløper, et lite volum reaksjonsløsningsmidler, lav lasting av giftig K222 og en miljømessig godartet og injiserbar mobil fase for rensing og enkel formulering.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>[18F]Fluoride in [18O]H2O</td>
			<td>PETNET Solutions Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4,7,13,16,21,24-hexaoxa-1,10-diazabicyclo[8.8.8]hexacosane</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>291950010</td>
			<td>Kryptofix 222 or K222, 98%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>222142500</td>
			<td>99.8%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>271004</td>
			<td>anhydrous, 99.8%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1260 HPLC system</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>Agilent 1260</td>
			<td>Agilent 1260 series</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytcial chiral HPLC column</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>12024AST</td>
			<td>Astec CHIROBIOTIC T, 25 cm &#215; 4.6 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide, 60 LBS</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>REFR744R200S</td>
			<td>99.99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-FETrp standard reference</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Empty sterile vial</td>
			<td>Jubilant HollisterStier</td>
			<td>7515</td>
			<td>20 mm closure, 10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>2716</td>
			<td>200 proof, USP grade. &#8805;99.9%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand 13 mm Syringe Filter, 0.22 &#181;m, PVDF, sterile</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-720-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30721</td>
			<td>&#8805;37%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>8316</td>
			<td>70%, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-[18F]FETrp radiolabeling precursor</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-FETrp standard reference</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light C8 cartridge</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT036770</td>
			<td>Sep-Pak&#160; C8 plus light cartridge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 20 G x 1</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 20 G x 1 &#189;</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 21 G x 2</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral aluminum oxide</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT023561</td>
			<td>Sep-Pak alumina N plus light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon membrane (0.20 &#181;m )</td>
			<td>MilliPore</td>
			<td>GNWP04700</td>
			<td>47 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pall Acrodisc 25 mm syringe sterile filter</td>
			<td>Pall Corporation</td>
			<td>4907</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PETCHEM radiochemistry synthesis system</td>
			<td>PETCHEM Solutions Inc. Pinckney, MI</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Radiosynthesizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH strips 2.0 - 9.0</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1.09584.0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium carbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>367877</td>
			<td>99.995%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quaternary methylammonium light cartridge</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186004051</td>
			<td>Sep-Pak QMA light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semi-preparative C18 HPLC column</td>
			<td>Phenomenex</td>
			<td>00D-4253-N0</td>
			<td>100 &#215; 10 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semi-preparative chiral HPLC column</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>12034AST</td>
			<td>Astec CHIROBIOTIC T, 25 cm &#215; 10 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride injection 23.4%</td>
			<td>APP Pharmaceutical, LLC</td>
			<td>18730</td>
			<td>USP grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloridei injection 0.9%</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NDC 0409-4888-10</td>
			<td>USP grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>306576</td>
			<td>99.99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinal needle, 20 G x 3 &#189;</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>405182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile alcohol prep pads</td>
			<td>BioMed Resource Inc.</td>
			<td>PC661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile empty vials, 2 mL</td>
			<td>Hollister Stier</td>
			<td>7505ZA</td>
			<td>13 mm closure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile empty vials, 30 mL</td>
			<td>Jubilant HollisterStier</td>
			<td>7520ZA</td>
			<td>20 mm closure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe PP/PE, 3 mL, Luer Lock</td>
			<td>Air-Tite</td>
			<td>4020-X00V0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe PP/PE, 5 mL, Luer Lock</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe,&#160; PP/PE, 10 mL, NORM-JECT</td>
			<td>Air-Tite</td>
			<td>4100-000V0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 1 mL, Luer Slip</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 3 mL, Luer-Lock</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra high purity argon</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>AR UHP300</td>
			<td>99.999%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>ZRQSVP300</td>
			<td>Direct-Q 3 tap to pure and ultrapure water purification system</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

radiosynthesis of 1-(2-[18f]fluoroethyl)-l-tryptophan using a one-pot, two-step protocol

Kynurenine banen (KP) er en primær rute for tryptofan metabolisme. Bevis tyder sterkt på at metabolitter av KP spiller en viktig rolle i tumorproliferasjon, epilepsi, nevrodegenerative sykdommer og psykiatriske sykdommer på grunn av deres immunmodulerende, nevromodulerende og nevrotoksiske effekter. Den mest brukte positronutslippstomografien (PET) agent for kartlegging av tryptofan metabolisme, α-[11C]metyl-L-tryptofan ([11C]AMT), har en kort halveringstid på 20 min med arbeidskrevende radiosynteseprosedyrer. En syklotron på stedet er nødvendig for å radiosyntetisere [11C]AMT. Bare et begrenset antall sentre produserer [11C]AMT for prekliniske studier og kliniske undersøkelser. Derfor er utviklingen av et alternativt bildebehandlingsmiddel som har en lengre halveringstid, gunstig in vivo kinetikk, og er lett å automatisere, nødvendig. Verktøyet og verdien av 1-(2-[18F]fluoroethyl)-L-tryptofan, en fluor-18-merket tryptofan analog, har blitt rapportert i prekliniske applikasjoner i cellelinje-avledede xenografter, pasientavledede xenografter og transgene tumormodeller.
Dette dokumentet presenterer en protokoll for radiosyntesen av 1-(2-[18F]fluoroethyl)-L-tryptofan ved hjelp av en en-pott, to-trinns strategi. Ved hjelp av denne protokollen kan radiotraceren produseres i et 20 ± 5% (forfall korrigert på slutten av syntesen, n > 20) radiokjemisk utbytte, med både radiokjemisk renhet og enantiomerisk overskudd på over 95%. Protokollen har en liten forløpermengde med ikke mer enn 0,5 ml reaksjonsløsningsmiddel i hvert trinn, lav belastning av potensielt giftig 4,7,13,16,21,24-hexaoxa-1,10-diazabicyclo[8.8.8]heksakosan (K222), og en miljømessig godartet og injiserbar mobilfase for rensing. Protokollen kan enkelt konfigureres til å produsere 1-(2-[18F]fluoroethyl)-L-tryptofan for klinisk undersøkelse i en kommersielt tilgjengelig modul.

Reaksjonsskjemaet er vist i figur 1. Radiomerkingen inkluderer følgende to trinn: 1) reaksjon av tosylate radiolabeling forløper med [18F]fluorid gir 18F-merket mellomliggende, og 2) avbeskyttelse av tert-butyloxycarbonyl og tert-butyl-beskyttende grupper i mellomliggende gir sluttproduktet L-[18F]FETrp. Begge reaksjonstrinnene fortsetter ved 100 °C i 10 minutter.
Før du mottar [18F]fluorid fra den ...

Watch this Scientific Journal Video about Radiosynthesis of 1-2-[18F]Fluoroethyl-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol at JoVE.com

Radiosynthesis of 1-2-[18F]Fluoroethyl-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol

Her beskriver vi radiosyntesen til 1-(2-[18F]Fluoroethyl)-L-tryptofan, et positronutslippstomografiavbildningsmiddel for å studere tryptofan metabolisme, ved hjelp av en en-pott, to-trinns strategi i et radiokjemisk syntesesystem med gode radiokjemiske utbytter, høyt enantiomerisk overskudd og høy pålitelighet.

Radiosyntese av 1-(2-[18F]Fluoroethyl)-L-Tryptophan ved hjelp av en one-pot, to-trinns protokoll

The kynurenine pathway (KP) is a primary route for tryptophan metabolism. Evidence strongly suggests that metabolites of the KP play a vital role in tumor ...

Det overordnede målet med denne protokollen er å radiosyntetisere en F18-radiomerket tryptofan tracer med en en-pott, to-trinns tilnærming. Radiotraceren kan finne utbredt applikasjon for avbildning tryptofan metabolisme. Teknikken bruker radioisotopen med lengre halveringstid, mindre reaksjonsforløper og mindre reaksjonsvolum, og en miljømessig godartet fase for rensing.Radiotraceren kan brukes til diagnostisering av ulike lidelser som påvirker hjernen, inkludert, men ikke begrenset til epilepsi, nevropsykiatriske lidelser og nevro-onkologi. Denne metoden kan brukes på andre kommersielt tilgjengelige radiomerkingsmoduler. Når F18 fluoroppløsningen er mottatt, begynn med å kartlegge blyboksen på overflaten, og fra en meters avstand registrerer du maksimal strålingseksponering.Etter å ha utført en tørketest for å sikre at forsendelsesesken ikke er forurenset, registrer F18 fluordose og tid. Overfør F18 fluoroppløsningen til radiokjemisyntesesystemet. Koble argonlinjen med en kort nål og F18 fluoroverføringslinje med en lang nål til F18 fluor hetteglasset.Lukk deretter varmecelleglassdøren og blydøren. Slå på argonforsyningslinjen ved å klikke Argon Supply. Øk argontrykket og slå på F18 fluor skyvelinjen for å skyve den vandige F18 fluoren gjennom QMA-lyspatronen.Når all radioaktiviteten er fanget i QMA-lyspatronen, og radioaktivitetsdetektoravlesningen er jevn, øker du argontrykket og blåser argon gjennom patronen i ytterligere fem minutter for å fjerne overflødig vann. Etter at du har slått av F18 fluor skyvelinjen, reduser argontrykket til null og bytt seksports toposisjonsventilen fra F18 fluorfelleposisjon til elutionposisjon. Åpne reaksjonsekkullen, slå på inngangs-MVP-posisjonen en argonlinje, og skyv K222- og kaliumkarbonatløsningen inn i inngangs-MVP-posisjonen ett hetteglass gjennom QMA-lyspatronen for å unngå radioaktiviteten inn i reaksjonsvæsken.Sett F18 fluor elution posisjon til fangst posisjon. Klikk på Heat-knappen for å varme opp reaktoren ved 110 grader Celsius, slå på utgang MVP posisjon-fire argon linje som kobles til reaktoren, og fordampe løsningsmidlet inn i utgang MVP posisjon fire hetteglass. Klikk på Avkjøl-knappen for å kjøle ned reaktoren til romtemperatur med komprimert karbondioksid.Slå av feielinjen, sett inngang MVP-posisjonen en til posisjon to, og legg til den vannfrie acetonitrilen i hetteglasset to. To omdreining på feielinjen og varmeapparatet for å tørke F18 fluor ved 110 grader Celsius. Når reaktoren når romtemperatur, slår du av feielinjen, slår inn MVP-posisjon to til posisjon tre og legger til tosylate radiolabelingsforløperen i hetteglasset tre.Lukk reaktoren og varm opp reaksjonsblandingene ved 100 grader Celsius i 10 minutter. For å fordampe reaksjonsløsningsmidlet, når reaktoren avkjøles, slå på feielinjen og fordampe reaksjonsløsningsmidlet ved 100 grader Celsius. Når reaktoren er avkjølt, slår du av feielinjen og setter inn MVP-posisjon tre til posisjon fire.Når saltsyre acetonitrilblandingen tilsettes, varmes reaksjonen ved 100 grader Celsius i 10 minutter for å avbeskytte tert-butyl og tert-butyloksykarbonylbeskyttelsesgrupper i radiomerket forløper. For å nøytralisere reaksjonen, når reaktoren når romtemperatur, bytt inngangs-MVP-posisjon fire til posisjon fem og tilsett to molar natriumhydroksid til reaksjonsblandingen og slå av inngangen MVP argonlinje. Deretter begynner du å overføre reaksjonsblandingen til mellomliggende fil ved å klikke på F-knappen i utgangs-MVP for å bytte utgangs-MVP fra ventilasjonsposisjon fire til posisjon fem, og deretter ved å klikke på F-knappen i inngangs-MVP for å bytte inngangs-MVP fra posisjon fem til posisjon seks.Etter at du har slått på MVP-argonlinjen, skyver du reaksjonsblandingen gjennom de stablede nøytrale aluminiumsoksid- og C8-patronene til det mellomliggende hetteglasset som er installert før HPLC-prøveløkken. For å skylle reaktoren, bytt utgang MVP-posisjon fem til posisjon seks, skyv skylleløsningen i hetteglasset med utgang MVP-posisjon seks gjennom reaksjonskokeret, patronene og mellom hetteglasset, suksessivt. Deretter begynner du rensingen av blandingen ved å bytte HPLC-løkken fra injeksjonsposisjon til lasteposisjon og slå på INNGANGS-MVP-argonlinjen.Når blandingen er lastet inn i HPLC-løkken med fem milliliter, bytter du Last-knappen til Injiser, klikker injiser HPLC for å starte HPLC-kromatogrammet med en strømningshastighet på tre milliliter per minutt, og deretter klikker du hplc monitor-knappen for å få tilgang til HPLC-kromatogrammet i sanntid. Klikk på Avlednings-MVP-knappen for å avlede HPLC-målfraksjonen til den korte C18-kolonnen på omtrent 12 minutter. Når målradioaktiviteten er samlet inn i C18-kolonnen, bytter du den fire-porters toposisjons avledningsventilen til avfallsinnsamlingsposisjonen, og skyller chiralkolonnen med en hastighet på fire milliliter per minutt i seks minutter for å fjerne den mindre D F18 FETrp-enantiomeren og andre ultrafiolette urenheter.Klikk på Avledning MVP-knappen for å omdirigere HPLC-mobilfasen tilbake til formuleringen MVP posisjon en på tre milliliter per minutt. Vær oppmerksom på at den mobile fasen passerer gjennom chiralkolonnen og C18-kolonnen for å rense L-F18 FETrp som beholdes i C18-kolonnen. På omtrent 32 til 34 minutter, samle målfraksjonen inn i formuleringen MVP posisjon to hetteglass.Skyv deretter formuleringen MVP posisjon to hetteglassløsning gjennom leveringslinjen og sterilt filter inn i hetteglasset med sluttdose. Analyser den endelige doseaktiviteten og volumet etter at du har fjernet det sterile filteret. Skyll systemet med ultra rent vann etterfulgt av etanol med en strømningshastighet på fire milliliter per minutt i minst 15 minutter per vask.Slå av HPLC-pumpen og PLC-boksen, lukk programmet, slå av det komprimerte flyselskapet, argonlinjen, karbondioksidlinjen og hovedstrømmen til modulen. Trekk ca. 0,1 milliliter av den endelige dosen ut i en 0,2 milliliter innsats av et QC hetteglass. Kjør den varme prøven da det delvise sekvensprogrammet er beskrevet i tekstmanuskriptet.Analyser QC-dataene ved å beregne kjemiske og radiokjemiske renheter i enantiomerisk overskytende verdi og molaraktivitet. Etter å ha bestemt pH-verdien, slipp dosen hvis alle testresultatene består det akseptable området. De representative HPLC-kromatogrammene for QC vises.De ubetydelige toppene mellom det tomme volumet i 10 minutter av programmet ble oppdaget i det tomme kromatogrammet. Den ikke-radiomerkede standardreferansen L-fluoroetyl-trytophan viste tilstedeværelsen av en enkelt isomer separert godt fra standardreferansen til sin D-motpart. Den endelige dosen av L-F18 tryptofan viste høy kjemisk renhet og radiokjemisk renhet.Stabilitetstestingen av sluttproduktet ved høyeste dosekonsentrasjon i opptil åtte timer viste at L-F18 tryptofan var stabil når det gjelder kjemisk renhet, radiokjemisk renhet, enantiomerisk overskudd og pH-verdi. De kjemiske og radiokjemiske renhetene større enn 95% ble oppnådd ved hjelp av denne protokollen. To kolonner brukes til tracerrensing.Husk å bytte til C18-kolonnen for å fjerne de kjemiske urenheter. Vi kan raskt tilpasse denne metoden til klinisk produksjon av fluor-18-merket tryptofan radiotracer.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Radiosynthesis of 1-(2-[18F]Fluoroethyl)-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol

A Simple and Rapid Protocol for Measuring Neutral Lipids in Algal Cells Using Fluorescence

En enkel og rask protokoll for måling av nøytrale lipider i algecellene med fluoresens

Algae are considered excellent candidates for renewable fuel sources due to their natural lipid storage capabilities. Robust monitoring of algal ...

The Bioconjugation and Radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled Antibodies

The Bioconjugation and Radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled Antibodies

Den Bioconjugation og radiosynthesis av<sup&gt; 89</sup&gt; Zr-DFO-merkede antistoffer

The exceptional affinity, specificity, and selectivity of antibodies make them extraordinarily attractive vectors for tumor-targeted PET ...

A Protocol for the Production of Gliadin-cyanoacrylate Nanoparticles for Hydrophilic Coating

En protokoll for produksjon av Gliadin-cyanoakrylat Nanopartikler for hydrofile belegget

This article presents a protocol for the production of protein-based nanoparticles that changes the hydrophobic surface to hydrophilic by a simple spray ...

A Protocol for Safe Lithiation Reactions Using Organolithium Reagents

En protokoll for sikker litium Reaksjoner Bruke organolitiumreagenser

Organolithium reagents are powerful tools in the synthetic chemist&#39;s toolbox. However, the extreme pyrophoric nature of the most reactive reagents ...

An Optimized Protocol for the Efficient Radiolabeling of Gold Nanoparticles by Using a 125I-labeled Azide Prosthetic Group

An Optimized Protocol for the Efficient Radiolabeling of Gold Nanoparticles by Using a 125I-labeled Azide Prosthetic Group

En optimalisert Protokoll for effektiv Radiomerking av gull nanopartikler ved hjelp av en<sup&gt; 125</sup&gt; I-merket Azid Prosthetic Gruppe

Here, we demonstrate a detailed protocol for the radiosynthesis of a 125I-labeled azide prosthetic group and its application to the efficient ...

A Protocol for Electrochemical Evaluations and State of Charge Diagnostics of a Symmetric Organic Redox Flow Battery

En protokoll for Elektro Evalueringer og ladetilstand Diagnostikk av en Symmetric Organic Redox Flow Battery

Redox flow batteries have been considered as one of the most promising stationary energy storage solutions for improving the reliability of the power grid ...

One-pot Microwave-assisted Conversion of Anomeric Nitrate-esters to Trichloroacetimidates

One-pot mikrobølgeovn-assistert konvertering av Anomeric nitrat-estere til Trichloroacetimidates

The goal of the following procedure is to provide a demonstration of the one-pot conversion of a 2-azido-1-nitrate-ester to a trichloroacetimidate ...

The MPLEx Protocol for Multi-omic Analyses of Soil Samples

Omfattende protokoll for Multi-omic analyser av jordprøver

Mass spectrometry (MS)-based integrated metaproteomic, metabolomic, and lipidomic (multi-omic) studies are transforming our ability to understand and ...

Separation of Aldehydes and Reactive Ketones from Mixtures Using a Bisulfite Extraction Protocol

Separasjon av aldehyder og reaktive ketoner fra blandinger bruker en Bisulfite utvinning protokoll

The purification of organic compounds is an essential component of routine synthetic operations. The ability to remove contaminants into an aqueous layer ...

A Two-Step Protocol for Umpolung Functionalization of Ketones Via Enolonium Species

En to-trinns protokoll for Umpolung Functionalization av ketoner Via Enolonium arter

&#945;-Functionalization of ketones via umpolung of enolates by hypervalent iodine reagents is an important concept in synthetic organic chemistry. ...