Name: radiosynthesis of 1-(2-[18f]fluoroethyl)-l-tryptophan using a one-pot, two-step protocol
Uploaded: 2021-09-21T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Radiosynthesis of 1-2-[18F]Fluoroethyl-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol at JoVE.com

Este trabajo fue apoyado por el Centro de Diagnóstico e Investigación PET / MRI, y por los Departamentos de Investigación Biomédica y Radiología en Nemours / Alfred I. duPont Hospital for Children.

PRECAUCIÓN: El protocolo involucra materiales radiactivos. Cualquier dosis adicional de materiales radiactivos podría conducir a un aumento proporcional en la probabilidad de efectos adversos para la salud como el cáncer. Los investigadores deben seguir las prácticas de dosis "tan bajas como sea razonablemente posible" (ALARA) para guiar el protocolo de radiosíntesis con la protección adecuada en la celda caliente o la campana de plomo. Minimizar el tiempo de contacto directo, usar un escudo de plomo y mantener la ...

El triptófano es un aminoácido esencial para los seres humanos. Juega un papel importante en la regulación del estado de ánimo, la función cognitiva y el comportamiento. Los derivados del triptófano radiomarcados, en particular el [11C]AMT marcado con carbono-11, han sido ampliamente estudiados debido a su papel único en el mapeo de la síntesis de serotonina38,39, la detección y clasificación de tumores40, la guía de ...

En los seres humanos, el triptófano es un componente esencial de la dieta diaria. El triptófano se metaboliza principalmente a través de la vía de la quinurenina (KP). El KP es catalizado por dos enzimas limitantes de velocidad, indolamina 2, 3-dioxigenasa (IDO) y triptófano 2, 3-dioxigenasa (TDO). Más del 95% del triptófano se convierte en quinurenina y sus metabolitos aguas abajo, generando en última instancia nicotinamida adenina dinucleótido, que es esencial para la transducción de energía celular. El KP es un regulador clave del sistema inmune y un importante regulador de la neuroplasticidad y los efectos neurotóxicos1,2. El metabolismo anormal del triptófano está implicado en varios trastornos neurológicos, oncológicos, psiquiátricos y metabólicos; por lo tanto, los análogos de triptófano radiomarcados se han utilizado ampliamente en la investigación clínica. Los dos radiotrazadores de triptófano más comúnmente investigados clínicamente son 11C-α-metil-L-triptófano ([11C]AMT) y 11C-5-hidroxitriptófano (11C-5-HTP)3.
En la década de 1990, se utilizó 11C-5-HTP para visualizar tumores neuroendocrinos secretores de serotonina4 y para diagnosticar y monitorizar la terapia del adenocarcinoma prostático metastásico refractario a las hormonas5. Posteriormente, se utilizó como herramienta de imagen para la cuantificación del sistema serotoninérgico en el páncreas endocrino6. 11 C-5-HTP también ha sido un trazador prometedor para la detección no invasiva de islotes viables en el trasplante intraportal de islotes y diabetes tipo 27,8. En las últimas dos décadas, muchos aminoácidos radiomarcados han avanzado a la investigación clínica9,10. En particular, el análogo de triptófano marcado con carbono-11 [11C]AMT ha recibido una amplia atención por mapear la síntesis de serotonina cerebral11,12,13,14 y por localizar focos epilépticos, tumores epileptogénicos, complejo de esclerosis tuberosa, gliomas y cánceres de mama15,16,17,18,19,20 ,21,22,23,24,25,26. [11C] La AMT también tiene una alta captación en varios tumores de bajo y alto grado en niños27. Además, se ha utilizado el análisis de trazadores cinéticos de [11C]AMT en sujetos humanos para diferenciar y clasificar diversos tumores y diferenciar el glioma de la lesión tisular inducida por radiación15. [11C] Las imágenes guiadas por AMT muestran beneficios clínicos significativos en los trastornos cerebrales3,25. Sin embargo, debido a la corta vida media del carbono-11 (20 min) y los laboriosos procedimientos de radiosíntesis, el uso de [11C]AMT está restringido a los pocos centros de PET con un ciclotrón en el sitio y una instalación de radioquímica.
El flúor-18 tiene una vida media favorable de 109,8 min, en comparación con la vida media de 20 min del carbono-11. Cada vez más, los esfuerzos se han centrado en el desarrollo de radiotrazadores marcados con flúor-18 para el metabolismo del triptófano3,28. Se han reportado un total de 15 radiotrazadores de triptófano radiomarcados con flúor-18 únicos en términos de radiomarcado, mecanismos de transporte, estabilidad in vitro e in vivo, biodistribución y captación de tumores en xenoinjertos. Sin embargo, se observó una rápida defluoración in vivo para varios trazadores, incluidos el fluorotriptófano 4, 5 y 6-[18F], lo que impidió una mayor traducción clínica29. 5-[18F]Fluoro-α-metiltriptófano (5-[18F]FAMT) y 1-(2-[18F]fluoroetilo)-L-triptófano (L-[18F]FETrp, también conocido como (S)-2-amino-3-(1-(2-[18F]fluoroetilo)-1H-indol-3-il)ácido propanoico, peso molecular 249,28 g/mol), son los dos radiotrazadores más prometedores con cinética in vivo favorable en modelos animales y gran potencial para superar [111 C]AMT para la evaluación de condiciones clínicas con metabolismo de triptófano desregulado28. 5-[18F]FAMT mostró una alta captación en xenoinjertos tumorales IDO1 positivos de ratones inmunocomprometidos y es más específico para obtener imágenes del KP que [11C]AMT28,30. Sin embargo, la estabilidad in vivo de 5-[18F]FAMT sigue siendo una preocupación potencial ya que no se han reportado datos de defluoración in vivo más allá de los 30 minutos posteriores a la inyección del trazador30.
Un estudio preclínico en un modelo de ratón con meduloblastoma modificado genéticamente mostró que, en comparación con la 18F-fluorodesoxiglucosa (18F-FDG), L-[18F]FETrp tenía una alta acumulación en tumores cerebrales, una defluoración in vivo insignificante y una baja absorción de fondo, lo que demuestra una relación superior entre objetivos y no objetivos31,32. Los estudios de dosimetría de radiación en ratones indicaron que L-[18F]FETrp tenía una exposición a dosimetría favorable aproximadamente un 20% menor que el trazador clínico de PET 18F-FDG33. De acuerdo con los hallazgos de otros investigadores, los datos de los estudios preclínicos proporcionan evidencia sustancial para apoyar la traducción clínica de L-[18F]FETrp para la investigación del metabolismo anormal del triptófano en humanos con trastornos cerebrales como epilepsia, neurooncología, autismo y esclerosis tuberosa28,31,32,33,34,35,36 . En la Tabla 1 se muestra una comparación general entre los tres trazadores más ampliamente investigados para el metabolismo del triptófano, 11C-5-HTP, [11C]AMT y L-[18F]FETrp. Tanto 11C-5-HTP como [11C]AMT tienen una vida media corta y procedimientos de radioetiquetado laboriosos. Aquí se describe un protocolo para la radiosíntesis de L-[18F]FETrp utilizando un enfoque de un solo pot y dos pasos. El protocolo incluye el uso de una pequeña cantidad de precursor de radiomarcado, un pequeño volumen de disolventes de reacción, baja carga de K222 tóxico y una fase móvil ambientalmente benigna e inyectable para la purificación y la fácil formulación.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>[18F]Fluoride in [18O]H2O</td>
			<td>PETNET Solutions Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4,7,13,16,21,24-hexaoxa-1,10-diazabicyclo[8.8.8]hexacosane</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>291950010</td>
			<td>Kryptofix 222 or K222, 98%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>222142500</td>
			<td>99.8%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>271004</td>
			<td>anhydrous, 99.8%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1260 HPLC system</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>Agilent 1260</td>
			<td>Agilent 1260 series</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytcial chiral HPLC column</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>12024AST</td>
			<td>Astec CHIROBIOTIC T, 25 cm &#215; 4.6 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide, 60 LBS</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>REFR744R200S</td>
			<td>99.99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-FETrp standard reference</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Empty sterile vial</td>
			<td>Jubilant HollisterStier</td>
			<td>7515</td>
			<td>20 mm closure, 10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>2716</td>
			<td>200 proof, USP grade. &#8805;99.9%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand 13 mm Syringe Filter, 0.22 &#181;m, PVDF, sterile</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-720-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30721</td>
			<td>&#8805;37%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>8316</td>
			<td>70%, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-[18F]FETrp radiolabeling precursor</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-FETrp standard reference</td>
			<td>Affinity Research Chemicals Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light C8 cartridge</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT036770</td>
			<td>Sep-Pak&#160; C8 plus light cartridge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 20 G x 1</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 20 G x 1 &#189;</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, 21 G x 2</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>305129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral aluminum oxide</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT023561</td>
			<td>Sep-Pak alumina N plus light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon membrane (0.20 &#181;m )</td>
			<td>MilliPore</td>
			<td>GNWP04700</td>
			<td>47 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pall Acrodisc 25 mm syringe sterile filter</td>
			<td>Pall Corporation</td>
			<td>4907</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PETCHEM radiochemistry synthesis system</td>
			<td>PETCHEM Solutions Inc. Pinckney, MI</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Radiosynthesizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH strips 2.0 - 9.0</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1.09584.0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium carbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>367877</td>
			<td>99.995%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quaternary methylammonium light cartridge</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186004051</td>
			<td>Sep-Pak QMA light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semi-preparative C18 HPLC column</td>
			<td>Phenomenex</td>
			<td>00D-4253-N0</td>
			<td>100 &#215; 10 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semi-preparative chiral HPLC column</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>12034AST</td>
			<td>Astec CHIROBIOTIC T, 25 cm &#215; 10 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride injection 23.4%</td>
			<td>APP Pharmaceutical, LLC</td>
			<td>18730</td>
			<td>USP grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloridei injection 0.9%</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NDC 0409-4888-10</td>
			<td>USP grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>306576</td>
			<td>99.99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinal needle, 20 G x 3 &#189;</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>405182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile alcohol prep pads</td>
			<td>BioMed Resource Inc.</td>
			<td>PC661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile empty vials, 2 mL</td>
			<td>Hollister Stier</td>
			<td>7505ZA</td>
			<td>13 mm closure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile empty vials, 30 mL</td>
			<td>Jubilant HollisterStier</td>
			<td>7520ZA</td>
			<td>20 mm closure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe PP/PE, 3 mL, Luer Lock</td>
			<td>Air-Tite</td>
			<td>4020-X00V0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe PP/PE, 5 mL, Luer Lock</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe,&#160; PP/PE, 10 mL, NORM-JECT</td>
			<td>Air-Tite</td>
			<td>4100-000V0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 1 mL, Luer Slip</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 3 mL, Luer-Lock</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co.</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra high purity argon</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>AR UHP300</td>
			<td>99.999%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>ZRQSVP300</td>
			<td>Direct-Q 3 tap to pure and ultrapure water purification system</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

radiosynthesis of 1-(2-[18f]fluoroethyl)-l-tryptophan using a one-pot, two-step protocol

La vía de la quinurenina (KP) es una ruta primaria para el metabolismo del triptófano. La evidencia sugiere fuertemente que los metabolitos del KP desempeñan un papel vital en la proliferación de tumores, la epilepsia, las enfermedades neurodegenerativas y las enfermedades psiquiátricas debido a sus efectos inmunomoduladores, neuromoduladores y neurotóxicos. El agente de tomografía por emisión de positrones (PET) más utilizado para mapear el metabolismo del triptófano, α-[11C]metil-L-triptófano ([11C]AMT), tiene una vida media corta de 20 min con laboriosos procedimientos de radiosíntesis. Se requiere un ciclotrón in situ para radiosintetizar [11C]AMT. Solo un número limitado de centros produce [11C]AMT para estudios preclínicos e investigaciones clínicas. Por lo tanto, se necesita urgentemente el desarrollo de un agente de imagen alternativo que tenga una vida media más larga, una cinética in vivo favorable y que sea fácil de automatizar. La utilidad y el valor de 1-(2-[18F]fluoroetilo)-L-triptófano, un análogo de triptófano marcado con flúor-18, se ha reportado en aplicaciones preclínicas en xenoinjertos derivados de líneas celulares, xenoinjertos derivados de pacientes y modelos de tumores transgénicos.
Este artículo presenta un protocolo para la radiosíntesis de 1-(2-[18F]fluoroetilo)-L-triptófano utilizando una estrategia de una olla y dos pasos. Utilizando este protocolo, el radiotrazador se puede producir en un rendimiento radioquímico del 20 ± 5% (desintegración corregida al final de la síntesis, n > 20), con pureza radioquímica y exceso enantiomérico de más del 95%. El protocolo presenta una pequeña cantidad de precursor con no más de 0,5 ml de disolvente de reacción en cada paso, baja carga de 4,7,13,16,21,24-hexaoxa-1,10-diazabiciclo[8.8.8]hexacosano potencialmente tóxico (K222) y una fase móvil ambientalmente benigna e inyectable para la purificación. El protocolo se puede configurar fácilmente para producir 1-(2-[18F]fluoroetilo)-L-triptófano para la investigación clínica en un módulo disponible comercialmente.

El esquema de reacción se muestra en la Figura 1. El radioetiquetado incluye los dos pasos siguientes: 1) reacción del precursor de radiomarcado de tosilato con [18F]fluoruro proporciona el intermedio marcado con 18F, y 2) la desprotección de los grupos tert-butiloxicarbonilo y terc-butilo-protector en el intermedio proporciona el producto final L-[18F]FETrp. Ambos pasos de reacción continúan a 100 °C durante 10 min.
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Radiosynthesis of 1-2-[18F]Fluoroethyl-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol

Aquí, describimos la radiosíntesis de 1-(2-[18F]Fluoroethyl)-L-triptófano, un agente de imágenes por emisión de positrones para estudiar el metabolismo del triptófano, utilizando una estrategia de una olla y dos pasos en un sistema de síntesis de radioquímica con buenos rendimientos radioquímicos, alto exceso enantiomérico y alta confiabilidad.

Radiosíntesis de 1-(2-[18F]Fluoroetilo)-L-Triptófano usando un protocolo de una olla y dos pasos

The kynurenine pathway (KP) is a primary route for tryptophan metabolism. Evidence strongly suggests that metabolites of the KP play a vital role in tumor ...

El objetivo general de este protocolo es radiosintetizar un trazador de triptófano radiomarcado F18 mediante un enfoque de una olla y dos pasos. El radiotrazador puede encontrar una aplicación generalizada para la obtención de imágenes del metabolismo del triptófano. La técnica utiliza el radioisótopo con una vida media más larga, menos precursor de reacción y menos volumen de reacción, y una fase ambientalmente benigna para la purificación.El radiotrazador se puede utilizar para el diagnóstico de diversos trastornos que afectan al cerebro, incluyendo pero no limitado a la epilepsia, trastornos neuropsiquiátricos, y neuro-oncología. Este método se puede aplicar a otros módulos de radioetiquetado disponibles comercialmente. Una vez que se reciba la solución de fluoruro F18, comience inspeccionando la caja de plomo en la superficie y, desde la distancia de un metro, registre las tasas máximas de exposición a la radiación.Después de realizar una prueba de limpieza para asegurarse de que la caja de envío no esté contaminada, registre la dosis y el tiempo de fluoruro F18. Transfiera la solución de fluoruro F18 al sistema de síntesis de radioquímica. Conecte la línea de argón con una aguja corta y la línea de transferencia de fluoruro F18 con una aguja larga al vial de fluoruro F18.Luego, cierre la puerta de vidrio de la celda caliente y la puerta de plomo. Encienda la línea de suministro de argón haciendo clic en Suministro de argón. Aumente la presión del argón y encienda la línea de empuje de fluoruro F18 para empujar el fluoruro F18 acuoso a través del cartucho ligero QMA.Una vez que toda la radiactividad esté atrapada en el cartucho de luz QMA, y la lectura del detector de radiactividad sea constante, aumente la presión del argón y sople argón a través del cartucho durante otros cinco minutos para eliminar el exceso de agua. Después de apagar la línea de empuje de fluoruro F18, disminuya la presión del argón a cero y cambie la válvula de dos posiciones de seis puertos de la posición de captura de fluoruro F18 a la posición de elución. Abra el vial de reacción, encienda la posición MVP de entrada una línea de argón y empuje la solución de K222 y carbonato de potasio en la posición MVP de entrada un vial a través del cartucho de luz QMA para eliminar la radiactividad en el vial de reacción.Cambie la posición de elución de fluoruro F18 a la posición de atrapamiento. Haga clic en el botón Calor para calentar el reactor a 110 grados centígrados, encienda la línea de argón de salida MVP posición cuatro que se conecta al reactor y evapore el disolvente en el vial de salida MVP posición cuatro. Haga clic en el botón Enfriar para enfriar el reactor a temperatura ambiente con dióxido de carbono comprimido.Apague la línea de barrido, cambie la posición MVP de entrada uno a la posición dos y agregue el acetonitrilo anhidro en el vial dos. Dos enciendan la línea de barrido y el calentador para secar azeotropicalmente el fluoruro F18 a 110 grados centígrados. Una vez que el reactor alcance la temperatura ambiente, apague la línea de barrido, cambie la posición MVP de entrada dos a la posición tres y agregue el precursor de radiomarcado de tosilato en el vial tres.Cierre el reactor y caliente las mezclas de reacción a 100 grados centígrados durante 10 minutos. Para evaporar el disolvente de reacción, una vez que el reactor se enfríe, encienda la línea de barrido y evapore el disolvente de reacción a 100 grados centígrados. Una vez que el reactor se enfríe, apague la línea de barrido y cambie la posición MVP de entrada tres a la posición cuatro.Cuando se agrega la mezcla de ácido clorhídrico acetonitrilo, caliente la reacción a 100 grados Celsius durante 10 minutos para desproteger los grupos protectores terc-butilo y terc-butiloxicarbonilo en el precursor de radiomarcado. Para neutralizar la reacción, cuando el reactor alcance la temperatura ambiente, cambie la posición MVP de entrada cuatro a la posición cinco y agregue dos hidróxido de sodio molar a la mezcla de reacción y apague la línea de argón MVP de entrada. A continuación, comience a transferir la mezcla de reacción al archivo intermedio haciendo clic en el botón F en el MVP de salida para cambiar el MVP de salida de la posición de ventilación cuatro a la posición cinco, y luego haciendo clic en el botón F en el MVP de entrada para cambiar el MVP de entrada de la posición cinco a la posición seis.Después de encender la línea de argón MVP de salida, empuje la mezcla de reacción a través de los cartuchos de óxido de aluminio neutro apilado y C8 hasta el vial intermedio instalado antes del bucle de muestra de HPLC. Para enjuagar el reactor, cambie la posición MVP de salida cinco a la posición seis, empuje la solución de enjuague en el vial de salida MVP posición seis a través del vial de reacción, los cartuchos y el vial intermedio, sucesivamente. A continuación, comience la purificación de la mezcla cambiando el bucle HPLC de la posición de inyección a la posición de carga y encendiendo la línea de argón MVP de entrada.Cuando la mezcla se cargue en el bucle HPLC de cinco mililitros, cambie el botón Cargar a Inyectar, haga clic en Inyectar HPLC para iniciar el cromatograma HPLC a un caudal de tres mililitros por minuto y, a continuación, haga clic en el botón Monitor HPLC para acceder al cromatograma HPLC en tiempo real. Haga clic en el botón MVP de desviación para desviar la fracción de HPLC objetivo a la columna corta C18 en aproximadamente 12 minutos. Después de recolectar la radiactividad objetivo en la columna C18, cambie la válvula de desviación de cuatro puertos y dos posiciones a la posición de recolección de desechos y enjuague la columna quiral a una velocidad de cuatro mililitros por minuto durante seis minutos para eliminar el enantiómero menor D F18 FETrp y otras impurezas ultravioletas.Haga clic en el botón MVP de desviación para desviar la fase móvil de HPLC a la posición MVP de formulación uno a tres mililitros por minuto. Observe que la fase móvil pasa a través de la columna quiral y la columna C18 para purificar L-F18 FETrp retenido en la columna C18. Aproximadamente a los 32 a 34 minutos, recoja la fracción objetivo en la posición MVP de la formulación dos viales.A continuación, empuje la solución de dos viales de la posición MVP de la formulación a través de la línea de administración y el filtro estéril en el vial de dosis final. Evalúe la actividad y el volumen de la dosis final después de retirar el filtro estéril. Enjuague el sistema con agua ultra pura seguida de etanol a un caudal de cuatro mililitros por minuto durante al menos 15 minutos por lavado.Apague la bomba HPLC y la caja del PLC, cierre el programa, apague la línea aérea comprimida, la línea de argón, la línea de dióxido de carbono y la potencia principal del módulo. Retire aproximadamente 0,1 mililitros de la dosis final en un inserto de 0,2 mililitros de un vial de control de calidad. Ejecute la muestra caliente como se describe el programa de secuencia parcial en el manuscrito de texto.Analizar los datos de control de calidad calculando las purezas químicas y radioquímicas en el exceso de valor enantiomérico y la actividad molar. Después de determinar el valor de pH, suelte la dosis si todos los resultados de las pruebas pasan el rango aceptable. Se muestran los cromatogramas de HPLC representativos para el control de calidad.Los picos insignificantes entre el volumen vacío en 10 minutos del programa se detectaron en el cromatograma en blanco. La referencia estándar no radiomarcada L-fluoroetilo-triptófano mostró la presencia de un solo isómero bien separado de la referencia estándar de su contraparte D. La dosis final de triptófano L-F18 mostró alta pureza química y pureza radioquímica.Las pruebas de estabilidad del producto final a la concentración de dosis más alta durante hasta ocho horas mostraron que el triptófano L-F18 era estable en términos de pureza química, pureza radioquímica, exceso enantiomérico y valor de pH. Las purezas químicas y radioquímicas superiores al 95% se lograron utilizando este protocolo. Se utilizan dos columnas para la purificación del trazador.Recuerde cambiar a la columna C18 para eliminar las impurezas químicas. Podemos adaptar rápidamente este método a la producción clínica del radiotrazador de triptófano marcado con flúor-18.

Research

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